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    魚油重復(fù)給藥毒性試驗研究

    2024-03-15 07:17:26程顯淯張友庭江芝孫軍
    中國食品 2024年4期
    關(guān)鍵詞:明顯降低魚油溶媒

    程顯淯 張友庭 江芝 孫軍

    魚油是一種從多脂魚類中提取的油脂,具有較好的營養(yǎng)保健等功能,在我國屬于新資源食品。作為新型膳食補充劑,魚油在備受追捧的同時,其安全性也一直存在爭議。本試驗對大鼠重復(fù)給樣毒性試驗進行研究,對魚油的安全性進行再評價。

    一、材料與儀器

    1.供試品。魚油,1kg/瓶,批號:133082009001,人體推薦食用量為1.2g/日/人,山東新華制藥股份有限公司提供。根據(jù)該公司提供的質(zhì)檢報告,魚油中DHA(二十二碳六烯酸)含量為85%、EPA(二十碳五烯酸)含量為0.829%。

    2.實驗動物。SPF級SD大鼠(購自湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司),實驗動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(湘)2019-0013,飼養(yǎng)于湖南普瑞瑪藥物研究中心有限公司屏障環(huán)境,實驗動物使用許可證號:SYXK(湘)2020-0015。

    3.主要儀器。ME2002E/02型電子天平(梅特勒-托利多儀器);ME1002E型電子天平(梅特勒-托利多儀器);AR223CN型電子天平(奧豪斯儀器);KJ8B型直接檢眼鏡(蘇州工業(yè)園康捷醫(yī)療器械有限公司);BC-5000Vet獸用五分類血液細(xì)胞分析儀(深圳邁瑞公司);LABOSPECT003型自動生化分析儀(日本日立公司)。

    二、實驗與方法

    1.90天經(jīng)口毒性試驗方法。(1)劑量設(shè)置及分組給藥。選用檢疫合格的SD大鼠120只(SPF級),雌雄各半,按性別、體重隨機分為溶媒對照組和魚油低、中、高劑量組,溶媒對照組衛(wèi)星組、魚油高劑量組衛(wèi)星組,每組20只。受試樣品低、中、高劑量分別設(shè)為2.0、3.0、4.6g/kg·bw(分別相當(dāng)于成人推薦食用量的100、150、230倍)。每周稱重,并根據(jù)體重變化調(diào)整給樣量,溶媒對照組給予同等劑量花生油,每天一次,連續(xù)給樣90d。

    (2)一般臨床觀察。實驗期間所有動物單籠飼養(yǎng),自由攝食攝水,每天觀察并記錄大鼠的一般表現(xiàn)、行為活動和生長情況等。

    (3)體重及攝食量。所有大鼠前4周每周稱重兩次,4周后每周及解剖前稱重一次,每周加食兩次,記錄加食量、撒食量和剩余量,計算每周平均攝食量及總攝食量,根據(jù)體重增重計算大鼠每周及總食物利用率。食物利用率(%)=體重增重(g)/攝食量(g)×100%。

    (4)眼科檢查。在試驗前及試驗中期、末期、恢復(fù)期,分別對溶媒對照組及受試樣品高劑量組大鼠進行眼科檢查(角膜、晶狀體、球結(jié)膜、虹膜)。

    (5)尿液、血液學(xué)及血液生化學(xué)指標(biāo)。采集尿液,觀察尿液外觀,用尿液分析儀測定尿液相關(guān)指標(biāo);禁食不禁水16h后采用異氟烷吸入麻醉,腹主動脈采血,采用BC-5000Vet獸用五分類血液細(xì)胞分析儀測定血液學(xué)、凝血相關(guān)指標(biāo);非抗凝血分離血清,用LABOSPECT003型自動生化分析儀測定血液生化學(xué)相關(guān)指標(biāo)。

    (6)大體解剖觀察及組織病理學(xué)檢查。試驗中期(第46天)、末期(第90天)、恢復(fù)期(第118天)禁食不禁水16h后采血,然后處死動物,解剖并進行大體解剖觀察及組織病理學(xué)檢查。稱量各組織器官重量,計算臟/體比值。

    2.試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計。采用SPSS 22.0進行統(tǒng)計分析,P≤0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。用Levens test方法檢驗方差齊性,如果沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),用單因素方差分析(ANOVA)進行統(tǒng)計分析;如果有統(tǒng)計學(xué)意義(P≤0.05),用LSD-t或Dunnett-t檢驗進行比較分析。

    三、結(jié)果與分析

    1.一般臨床觀察及體重。試驗期間,各組動物生長發(fā)育良好,與溶媒對照組比較,試驗?zāi)┢谛坌源笫笫茉嚇悠犯邉┝拷M第1-7周體重均明顯減輕;其余各檢測時間點各劑量組平均體重均未見統(tǒng)計學(xué)差異。

    2.攝食量、體重增重及食物利用率。與溶媒對照組比較,雌性大鼠魚油高劑量組第4-8、10-13周攝食量及總攝食量明顯增加,中劑量組第10-11周攝食量明顯增加;雄性大鼠魚油高劑量第1周攝食量明顯降低,第10-13周攝食量明顯增加,中劑量組第11周攝食量明顯增加。高劑量衛(wèi)星組雌、雄性大鼠試驗中期第6周攝食量明顯增加;高劑量衛(wèi)星組雌性大鼠試驗?zāi)┢诘?、9、12、13周攝食量明顯增加,雄性大鼠第4、5、6、11周攝食量和總攝食量明顯增加;高劑量衛(wèi)星組雄性大鼠恢復(fù)期第1周攝食量明顯增加。

    與溶媒對照組比較,受試樣品高劑量組雄性大鼠第1、3周體重增重明顯降低;試驗中期受試樣品高劑量衛(wèi)星組雄性大鼠第6周體重增重明顯增加;試驗?zāi)┢谑茉嚇悠犯邉┝啃l(wèi)星組雌性大鼠第9周體重增重明顯增加,第1周體重增重明顯降低,雄性大鼠第3周體重增重明顯降低;恢復(fù)期受試樣品高劑量衛(wèi)星組雄性大鼠第3周體重增重與總體重增重均明顯增加。

    與溶媒對照組比較,雌性大鼠魚油高劑量組第1周食物利用率明顯降低;雄性大鼠高劑量組第1、3周食物利用率及總食物利用率均明顯降低,低劑量組第3周食物利用率明顯降低。試驗中期高劑量組衛(wèi)星組雄性大鼠總食物利用率明顯降低。試驗?zāi)┢诟邉┝拷M衛(wèi)星組雌性大鼠第1周食物利用率與總食物利用率均明顯降低,第9周食物利用率明顯增加,衛(wèi)星組雄性大鼠第3、4、6、13周食物利用率與總食物利用率均明顯降低?;謴?fù)期高劑量組衛(wèi)星組雄性大鼠第3周食物利用率與總食物利用率均明顯增加。

    3.血液學(xué)及血液生化學(xué)指標(biāo)。如表1、2所示,與溶媒對照組比較,試驗?zāi)┢诖菩源笫蟮蛣┝拷MNeu、PT明顯升高,Lym明顯降低。中劑量組Bas明顯升高;高劑量組Neu、Bas明顯升高,Lym明顯降低。雄性大鼠低、中、高劑量組Neu明顯升高;中劑量組RBC、Lym明顯降低;高劑量組Eos明顯升高、Lym明顯降低。試驗中期高劑量組衛(wèi)星組雌性大鼠Neu明顯升高、Lym明顯降低;恢復(fù)期高劑量組衛(wèi)星組雌性大鼠WBC、APTT明顯升高,雄性大鼠Bas明顯升高。

    如表3、4所示,與溶媒對照組比較,試驗?zāi)┢诖菩源笫蟮蛣┝拷MALP明顯升高、CHO明顯降低;中劑量組Na+明顯升高、CHO明顯降低;高劑量組CHO明顯降低。雄性大鼠低劑量組ALB明顯升高,CHO、TG、Cl-明顯降低;中劑量組AST明顯升高、CHO、TG、Na+明顯降低;高劑量組ALT、BUN、Cl-明顯升高,CHO、TG、Na+明顯降低。試驗中期高劑量衛(wèi)星組雌性大鼠CHO、Na+明顯降低,雄性大鼠TP、ALB、BUN明顯升高,CHO明顯降低?;謴?fù)期高劑量組衛(wèi)星組雌性大鼠ALB明顯升高、K+明顯降低、ALP明顯降低,雄性大鼠TP、GLU明顯降低。

    4.尿液指標(biāo)。與溶媒對照組比較,試驗?zāi)┢谛坌源笫笾?、高劑量組pH明顯升高、SG明顯降低,其余各劑量組各尿液指標(biāo)均未見統(tǒng)計學(xué)差異。

    5.眼科指標(biāo)。給樣前所有納入試驗的動物及試驗結(jié)束后試驗組和衛(wèi)星組(溶媒對照和高劑量)大鼠的眼瞼、結(jié)膜、角膜、虹膜、瞳孔、鞏膜、晶狀體、玻璃體及眼底等均未見明顯異常。

    6.臟器濕重及臟/體比值。如表5、6所示,與溶媒對照組比較,試驗中期雌性大鼠高劑量組衛(wèi)星組腦濕重明顯升高。試驗?zāi)┢诖菩源笫笫茉嚇悠返?、中劑量組卵巢濕重明顯升高,中劑量組胸腺濕重明顯降低;雄性大鼠受試樣品高劑量組心臟濕重明顯降低;其余各劑量組動物臟器濕重均未見統(tǒng)計學(xué)差異。

    如表7、8所示,與溶媒對照組比較,試驗?zāi)┢诖菩源笫笾袆┝拷M的卵巢臟/體比值明顯升高、胸腺臟/體比值明顯降低;雄性大鼠中劑量組的脾臟臟/體比值明顯升高。試驗中期雌性大鼠高劑量組衛(wèi)星組腎臟臟/體比值明顯升高?;謴?fù)期雌性大鼠高劑量組衛(wèi)星組腎上腺臟/體比值明顯升高。其余各劑量組動物臟/體比值均未見統(tǒng)計學(xué)差異。

    7.大體解剖觀察及組織病理學(xué)檢查。肉眼觀察各劑量組動物各送檢組織均未見明顯異常,各劑量組各解剖動物胸、腹腔無積液、無異物和腫瘤等,各臟器的解剖學(xué)位置正常。綜合大體解剖觀察及顯微鏡觀察結(jié)果,試驗中期、試驗?zāi)┢诤突謴?fù)期解剖的魚油高劑量組動物與溶媒對照組動物相比,病變數(shù)量與病變程度均未見明顯差異,故不考慮與受試樣品毒性相關(guān)。由此判定,本次檢查未發(fā)現(xiàn)魚油90天經(jīng)口給樣對SD大鼠有毒性意義的病理改變。其余各劑量組各臟器未見明顯異常病變。

    四、討論

    本實驗室條件下,魚油高、中、低劑量組連續(xù)給樣90天,試驗期間各組動物生長發(fā)育良好,未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)和死亡,各異常指標(biāo)數(shù)值均在本實驗室歷史參考值范圍內(nèi),且各異常指標(biāo)雌、雄性大鼠變化不一致,無明顯劑量關(guān)系,無臨床毒理學(xué)意義。大體解剖觀察和組織病理學(xué)檢查未見脾臟、腎臟等相關(guān)聯(lián)臟器有明顯異常病變,故認(rèn)為上述差異與受試樣品的毒性作用無關(guān),不具有臨床毒理學(xué)意義。綜上所述,魚油對SD大鼠的未觀察到有害作用劑量(NOAEL)為4.6g/kg(約相當(dāng)于人體推薦食用量的230倍)。

    同時在實驗數(shù)據(jù)中,實驗?zāi)┢诖菩源笫蟮?、中、高劑量組CHO均明顯降低;雄性大鼠低、中、高劑量組CHO、TG均明顯將低,且TG呈劑量依賴性,結(jié)合實驗過程中給樣組大鼠均有不同程度的體重降低,故本實驗結(jié)果認(rèn)為魚油對降低血脂確實有一定作用,其他研究者的實驗結(jié)果也證實了魚油的這一功效。

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