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    蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)量控制方法的研究進(jìn)展

    2024-03-14 03:48:18徐嘉璠韓子璇陶曉倩王提程嵐康廷國(guó)張純剛遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院遼寧大連6620長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系山西長(zhǎng)治046000祈蒙股份有限公司內(nèi)蒙古赤峰024330
    中南藥學(xué) 2024年2期
    關(guān)鍵詞:蒙藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)炮制

    徐嘉璠,韓子璇,陶曉倩,王提,程嵐,康廷國(guó)*,張純剛,2,3*(.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,遼寧 大連 6620;2.長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系,山西 長(zhǎng)治 046000;3.祈蒙股份有限公司,內(nèi)蒙古 赤峰 024330)

    蒙醫(yī)藥是我國(guó)四大民族醫(yī)藥之一,是蒙古族幾千年來(lái)的經(jīng)驗(yàn)積累與文化傳承,具有極強(qiáng)的民族特色,可分為萌芽、形成、發(fā)展和現(xiàn)代蒙藥四個(gè)階段[1]。蒙醫(yī)吸收漢、藏等民族的醫(yī)藥學(xué)經(jīng)驗(yàn)理論,尤善外傷、骨傷的治療,并創(chuàng)有獨(dú)特的灸療、馬奶療法等[2]。蒙醫(yī)學(xué)著作《認(rèn)藥白晶鑒》將藥物分為石類(lèi)、珍寶類(lèi)、本草類(lèi)等七大類(lèi),并記載每味藥物的產(chǎn)地、形態(tài)、性味、功能、炮制方法等,被譽(yù)為蒙藥的奠基篇[3]。

    近年來(lái),包括蒙藥在內(nèi)的民族藥學(xué)穩(wěn)步發(fā)展。蒙醫(yī)藥因其療效顯著逐漸被大眾認(rèn)可,目前生產(chǎn)配制的蒙藥制劑已達(dá)幾千種[4]。但由于蒙藥材基原混雜難溯源、發(fā)展的投入及人才儲(chǔ)備不足,現(xiàn)行的蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)仍處于較低的水平[5],阻礙了蒙醫(yī)藥的現(xiàn)代化、標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展。因此,本文分析蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)量控制方法的研究現(xiàn)狀,并討論目前蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中存在的問(wèn)題,以期為提高蒙藥材質(zhì)量控制水平、完善蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供思路。

    1 蒙藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究現(xiàn)狀

    藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定與實(shí)施,是一個(gè)醫(yī)藥體系質(zhì)量控制水平最直觀(guān)的體現(xiàn)。在蒙藥不斷發(fā)展的過(guò)程中,蒙藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也隨之更新與完善。截至目前,有關(guān)部門(mén)共頒布7版蒙藥材相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及炮制規(guī)范,歷版蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)總結(jié)見(jiàn)表1?,F(xiàn)行蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》蒙藥分冊(cè)、2020版《內(nèi)蒙古蒙藥飲片炮制規(guī)范》[6]和2021版《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》。

    表1 蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的歷史沿革Tab 1 Historical evolution of quality standards for Mongolian medicinal herbs

    縱觀(guān)蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)頒布時(shí)間可發(fā)現(xiàn),1998年至2015年蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂幾乎處于空白狀態(tài)。在此期間,市場(chǎng)流通的蒙藥飲片及蒙藥制劑原藥材多處于無(wú)法可依的狀態(tài)。許多工廠(chǎng)只能依靠經(jīng)驗(yàn)或老舊標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn),造成飲片及成方制劑質(zhì)量的不穩(wěn)定[7]。2015年后,在國(guó)家政策的推動(dòng)下,逐漸恢復(fù)對(duì)蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂,并首次頒布蒙藥材炮制規(guī)范,較好地規(guī)范了蒙藥材在市場(chǎng)的流通情況,為蒙藥制劑在原料層次的質(zhì)量控制提供參考。

    現(xiàn)行的3部標(biāo)準(zhǔn)已收載蒙藥材420種,炮制飲片720個(gè)品種規(guī)格,可在一定程度上滿(mǎn)足生產(chǎn)制備的需求。1986年頒布的第一部《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》只對(duì)藥材的外觀(guān)性狀進(jìn)行簡(jiǎn)單描述,幾乎沒(méi)有對(duì)藥材進(jìn)行定性、定量分析。而在《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》(2021版)中,近半數(shù)蒙藥專(zhuān)屬藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有定性分析,73種蒙藥專(zhuān)屬藥材有定量分析。由此可見(jiàn),雖然蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)發(fā)展緩慢,仍處于較低水平,但較前幾版已有很大提升。此外,蒙醫(yī)臨床常用原粉入藥,在最新版的炮制規(guī)范中,除包含了362個(gè)蒙醫(yī)特殊炮制飲片品種外,還收載了粉末飲片,使之更貼合蒙醫(yī)臨證調(diào)劑、靈活施藥的診療特點(diǎn)。

    2 蒙藥材的質(zhì)量控制方法研究現(xiàn)狀

    2.1 蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的質(zhì)量控制方法

    目前,蒙藥材的質(zhì)量控制采用傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)與化學(xué)成分分析相結(jié)合的質(zhì)量控制模式。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容分為“性狀-鑒別-檢查-(浸出物)-含量測(cè)定-性味歸經(jīng)-功能主治-用法用量-貯藏”幾部分,其中“鑒別-檢查-含量測(cè)定”與藥材質(zhì)量控制關(guān)系最為密切。蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收錄的質(zhì)量控制方法有關(guān)總結(jié)見(jiàn)表2。

    2.2 現(xiàn)代分析技術(shù)在蒙藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用

    在現(xiàn)代分析技術(shù)的發(fā)展與支持下,更多符合天然藥物特性、對(duì)樣品類(lèi)型限制小、靈敏度高的現(xiàn)代分析方法逐漸應(yīng)用到蒙藥材鑒定、含量測(cè)定、檢查等方面。

    2.2.1 指紋圖譜技術(shù)在蒙藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用

    中藥指紋圖譜技術(shù)是目前藥材質(zhì)量控制中最常見(jiàn)的分析技術(shù)??杀M可能多地表達(dá)蒙藥材的復(fù)雜化學(xué)體系,更加全面地反映蒙藥材的整體鑒別點(diǎn)[8]。目前指紋圖譜技術(shù)常與成分含量測(cè)定、一測(cè)多評(píng)法、化學(xué)模式識(shí)別、化學(xué)輪廓色譜法等分析統(tǒng)計(jì)方法結(jié)合??筛玫胤治鐾撇煌N、同種不同產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)周期藥材的特征成分與含量的差異,更加全面地評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的優(yōu)劣。指紋圖譜技術(shù)在蒙醫(yī)特色藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用案例見(jiàn)表3。

    表3 指紋圖譜技術(shù)在蒙醫(yī)特色藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用Tab 3 Fingerprint technology in quality control of Mongolian specialty medicine

    化學(xué)模式識(shí)別可幫助分析大量數(shù)據(jù),適用于不同批次間藥材的分類(lèi)與比對(duì),篩選差異色譜峰從而客觀(guān)評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量[36];化學(xué)輪廓色譜法則適用于混用、代用藥材的區(qū)分,通過(guò)對(duì)比同一色譜條件下不同種藥材指紋圖譜的相似度,分析兩者化學(xué)成分種類(lèi)及含量的差異。

    2.2.2 DNA條形碼鑒定技術(shù)在蒙藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用 一些同屬、種的植物藥或來(lái)源相近的動(dòng)物藥很難通過(guò)化學(xué)成分區(qū)分。DNA分子條形碼技術(shù)是以DNA等分子特征作為遺傳標(biāo)記開(kāi)發(fā)的各類(lèi)中藥分子鑒定的方法,不受樣品種類(lèi)、藥材部位、生長(zhǎng)階段的限制,樣品需求量低、準(zhǔn)確可靠,現(xiàn)已被納入2020年版《中國(guó)藥典》[37]。根據(jù)條形碼片段長(zhǎng)度的不同,可分為300 bp以下的微型條形碼、400~800 bp的標(biāo)準(zhǔn)條形碼及全基因組條形碼。微型條形碼可用于DNA發(fā)生嚴(yán)重降解的實(shí)驗(yàn)材料分析,更適用于炮制后藥材的鑒定;全基因組的宏條形碼則更適用于成分復(fù)雜的中成藥的鑒別[38]。

    目前蒙藥材鑒定中植物藥常用的DNA序列有ITS2序列[39-40]、rbcL序列[41-42]、psbA-trnH序列、matK序列;動(dòng)物藥常用的DNA序列有COI序列[43]、ITS2序列等。一種藥物可采用多種DNA序列鑒定,但不同序列的鑒別能力有差異,木其爾[44]對(duì)14種鐵線(xiàn)蓮屬植物的ITS2、rbcL、psbA-trnH、matK四種序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測(cè)序,比較不同序列的種間種內(nèi)的變異關(guān)系,發(fā)現(xiàn)ITS2序列適于探究鐵線(xiàn)蓮的同源關(guān)系,rbcL序列更適于鐵線(xiàn)蓮種間藥材的鑒別。

    2.2.3 光譜、波譜技術(shù)在蒙藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用 蒙醫(yī)藥是使用礦物藥種類(lèi)最多的民族醫(yī)藥體系之一[45],《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》(2021版)收錄的礦物藥約占收錄總數(shù)的11%。一種礦物常與其他礦物伴生,如雄黃、雌黃,僅依靠簡(jiǎn)單的外觀(guān)觀(guān)察,無(wú)法準(zhǔn)確區(qū)分[46]。近紅外光譜(NIR)、拉曼光譜可通過(guò)分析各元素的特征譜線(xiàn)來(lái)鑒別物質(zhì)的元素和化學(xué)組成,對(duì)于礦物藥這類(lèi)外形相似,但元素、晶型差異明顯的藥物來(lái)說(shuō)尤為適用[47-48]。

    X射線(xiàn)衍射法(XRD)利用射線(xiàn)通過(guò)晶體的衍射效應(yīng)形成衍射線(xiàn)圖譜,可反映藥材的物質(zhì)組成、晶型等方面的信息,達(dá)到鑒別藥材真?zhèn)蔚哪康腫49]。XRD具有較高的專(zhuān)屬性,相比于NIR和拉曼光譜,更適用于同品種或混淆品種間的礦物類(lèi)蒙藥鑒別。潘發(fā)波等[50]對(duì)不同產(chǎn)地的陽(yáng)起石生品與炮制品進(jìn)行XRD分析,建立了陽(yáng)起石的物相圖譜,分析市售不同產(chǎn)地陽(yáng)起石的內(nèi)在質(zhì)量及雜質(zhì)含量。藥用礦物屬于地質(zhì)學(xué)中的巖礦,可借鑒巖礦鑒定體系,將XRD技術(shù)與偏光顯微特征相結(jié)合,分別對(duì)麥飯石、白石英的偏光顯微特征、物相組成及其相對(duì)含量進(jìn)行分析,建立兩者的X射線(xiàn)衍射指紋圖譜[51-52]。

    2.2.4 高分辨色譜在蒙藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用 高分辨質(zhì)譜技術(shù)具有高通量、高選擇性、高靈敏度的分析特點(diǎn),可在單次分析中鑒別復(fù)雜混合物中的痕量級(jí)成分、篩查確認(rèn)未知化合物,在中藥化學(xué)成分鑒定、中藥代謝組學(xué)的研究及有害成分檢測(cè)等方面均有應(yīng)用[53]。毒性成分、農(nóng)藥殘留、重金屬等有害成分在藥材中的含量往往較低,檢測(cè)時(shí)可采用分辨率較高、檢測(cè)限較低的高分辨質(zhì)譜法[54]。

    電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)是一種元素檢測(cè)方法,可同時(shí)對(duì)多種元素和同位素進(jìn)行分析測(cè)定,適用于藥物中雜質(zhì)元素的分析,在多個(gè)國(guó)家的藥典中均有收錄[55]。閆婧等[56]利用ICP-MS技術(shù)檢測(cè)藤黃藥材中鉛、鎘、砷、汞、銅5種重金屬成分的含量,結(jié)果顯示藥材中5種重金屬元素的含量均在合格限度范圍內(nèi),銅檢測(cè)的質(zhì)量濃度范圍最大,在0~500 μg·L-1;汞檢出限最低為0.007 μg·L-1。另有研究對(duì)X射線(xiàn)熒光光譜法(XRF)和ICP-MS兩種技術(shù)在蒙藥重金屬含量檢測(cè)方面進(jìn)行對(duì)比研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種方法均能準(zhǔn)確測(cè)定樣品中8種重金屬元素含量,XRF比ICP-MS更加簡(jiǎn)單、快速、無(wú)損[57]。

    3 蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)存問(wèn)題分析

    3.1 蒙藥材基原復(fù)雜難統(tǒng)一

    蒙醫(yī)藥是一門(mén)以人用經(jīng)驗(yàn)與歷史記載為主要依據(jù)傳承發(fā)展的科學(xué)。早期蒙醫(yī)藥傳承多以口授、親緣相傳為主,使得蒙藥材同名異物、同物異名、同功不同源的情況十分常見(jiàn)[4]。如“甘達(dá)嘎日”本草考證以“薔薇科庫(kù)頁(yè)懸鉤子RubussachalinensisLévl.的干燥莖”為正品,但在內(nèi)蒙古部分地區(qū)及藥材市場(chǎng)中有將功效相似的忍冬科接骨木、毛接骨木作為“甘達(dá)嘎日”代用或?qū)⑼愇锏乃N薇科華北珍珠梅誤用為“甘達(dá)嘎日”的現(xiàn)象[58]。

    此外,部分藥材在中、蒙醫(yī)的用法及藥用部位也有一定差異。傳統(tǒng)中藥秦艽是龍膽科植物秦艽的干燥根,而蒙醫(yī)多使用秦艽的地上部分,如小秦艽花、基力哲等[59-60]。朱順娟等[61]對(duì)小秦艽不同入藥部位的指標(biāo)成分的含量進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)小秦艽的花和根在獐芽菜苷、異葒草苷、異牡荊苷3種指標(biāo)性成分的含量上有顯著差異。

    3.2 蒙藥材炮制方法多且混亂

    蒙藥臨床多為藥材原粉入藥,且動(dòng)物類(lèi)、礦物類(lèi)的藥物應(yīng)用較多,對(duì)于一些性猛、服用不便、功效不順或有毒的藥物,常需炮制后服用。蒙藥材炮制方法多樣,且有極具民族特色的奶制、酸奶制、訶子湯制、黃油制等[62]。同種藥材,因炮制目的、地區(qū)、時(shí)代的不同,炮制方法有差異;且當(dāng)炮制目的相同時(shí),同種藥材也有多種不同的炮制方法[63]。瑞香狼毒常見(jiàn)的減毒方法有醋制、訶子湯制、奶制、童便制等7種,雖都可達(dá)到減毒效果,卻尚未有明確說(shuō)明哪一種效果更好[64]。

    3.3 蒙藥材物質(zhì)基礎(chǔ)研究較淺

    目前蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍處于較低水平,尤其蒙藥專(zhuān)屬藥材的基礎(chǔ)研究有待提高。現(xiàn)行《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》(2021版)中236種為蒙藥專(zhuān)屬藥材,定性鑒別中采用薄層鑒別方法的約占專(zhuān)屬性藥材的29%;定量鑒別中采用HPLC檢測(cè)方法的約占專(zhuān)屬性藥材的17%。與《中國(guó)藥典》(2020年版)交叉部分相比(薄層鑒別占交叉總數(shù)的85%,HPLC檢測(cè)占交叉總數(shù)的46%),有較大差距。

    同時(shí),一些蒙藥專(zhuān)屬性藥材尚無(wú)表征其內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)性成分,而對(duì)于規(guī)定了指標(biāo)性成分的部分蒙藥材,指標(biāo)性成分的專(zhuān)屬性與生物活性較低[65]。根據(jù)《內(nèi)蒙古飲片炮制規(guī)范》(2020年版),蒙藥水柏枝、河柏、西河柳均為檉柳科不同種植物的干燥嫩枝,除河柏以沒(méi)食子酸為指標(biāo)成分外,其他兩種藥材暫無(wú)規(guī)定[6]。但沒(méi)食子酸存在于同科屬的多種植物中,以沒(méi)食子酸為指標(biāo)成分能否體現(xiàn)其種間差異還需進(jìn)一步研究探討[66]。目前蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)中多為單一指標(biāo)成分的檢驗(yàn),如黃花鐵線(xiàn)蓮在《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》(2021版)中含量測(cè)定指標(biāo)成分為槲皮素。但研究發(fā)現(xiàn),黃花鐵線(xiàn)蓮中的木犀草苷、金絲桃苷等其他黃酮類(lèi)成分也具有抗炎、鎮(zhèn)痛的效果,因此單一成分能否有效反映藥材質(zhì)量尚需進(jìn)一步研究驗(yàn)證[67]。

    4 中藥質(zhì)量控制思路在蒙藥材中的應(yīng)用

    4.1 質(zhì)量標(biāo)志物(quality marker,Q-marker)在蒙藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用

    Q-marker是指存在于中藥材和中藥產(chǎn)品(如中藥飲片、中藥煎劑、中藥提取物、中成藥制劑)中固有的或加工制備過(guò)程中形成的、與中藥的功能屬性密切相關(guān)的化學(xué)物質(zhì)[68]。當(dāng)前蒙藥材存在基礎(chǔ)研究薄弱、指標(biāo)成分缺乏特征性、質(zhì)控指標(biāo)單一、與藥效關(guān)聯(lián)度低等問(wèn)題。而蒙藥Q-marker要求在蒙醫(yī)理論指導(dǎo)下,以少量代表性成分的定性、定量表征蒙藥材的整體質(zhì)量及生物效應(yīng)[69]。在篩選過(guò)程中不僅要具有“特征性、專(zhuān)屬性、可傳遞性”,更應(yīng)保證其臨床的有效性。

    蒙藥材霞日森登為無(wú)患子科植物文冠木的干燥莖枝,楊洋等[69]采用HPLC指紋圖譜和一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定其中7種Q-marker的含量,并通過(guò)聚類(lèi)分析、主成分分析驗(yàn)證結(jié)果,發(fā)現(xiàn)兩種方法均可用于文冠木的含量測(cè)定。廖翠平等[70]在預(yù)測(cè)蓽茇Q-marker時(shí)從基原植物的特征成分、功效關(guān)聯(lián)成分、炮制前后變化差異成分、代謝組學(xué)特殊成分、復(fù)方藥物配伍等多方面進(jìn)行綜合分析,建議將生物堿類(lèi)和揮發(fā)油類(lèi)作為總成分Q-marker的備選物質(zhì)。也有學(xué)者[71]將新的臨床用途加入綜合分析中,使篩選的Q-marker更加具有代表性。

    4.2 代謝組學(xué)在蒙藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用

    代謝組學(xué)是指對(duì)生物在外界條件刺激下的代謝物整體進(jìn)行定性、定量分析。其“整體-動(dòng)態(tài)-綜合-分析”的理念與中醫(yī)藥的整體觀(guān)念具有一致性[72]。代謝組學(xué)借助質(zhì)譜技術(shù)表征藥材自身化學(xué)成分、入血活性成分的整體差異,將質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分與藥效作用相關(guān)聯(lián),提升指標(biāo)成分的專(zhuān)屬性。吳超[73]在篩選香青蘭Q-marker時(shí),應(yīng)用高靈敏度、高分辨率的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)藥材提取物及入血后不同時(shí)段血清中的化學(xué)成分進(jìn)行分析,結(jié)果顯示田薊苷、木犀草素、金合歡素等黃酮類(lèi)成分為香青蘭主要的化學(xué)成分及活性物質(zhì)。

    此外,代謝組學(xué)還可應(yīng)用于藥材不同產(chǎn)地、品種、藥用部位、炮制加工方法等的差異性分析。利用化學(xué)計(jì)量學(xué)等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,對(duì)代謝組學(xué)產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)進(jìn)行整理,篩選出重要的差異代謝物,可為藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)[74]。郭云[75]對(duì)3屬6種蒙古野生豆科藥用植物的根和葉中的酚類(lèi)化合物含量進(jìn)行測(cè)定,并對(duì)各種植物及不同部位的初級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行全面分析,不僅揭示了酚類(lèi)化合物與初級(jí)代謝產(chǎn)物間的關(guān)系,還詳盡分析出不同種及不同部位間化合物及代謝產(chǎn)物的差異,為多葉棘豆等野生豆科植物的開(kāi)發(fā)與利用提供依據(jù)。

    中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展形成了較為完善的質(zhì)量控制體系,形成“以整體觀(guān)為基礎(chǔ),成分-藥效-質(zhì)量為核心”的全過(guò)程質(zhì)量控制體系,將是蒙藥材質(zhì)量控制未來(lái)的發(fā)展方向。

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