妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦血清SULT2A1、GLUT1水平變化及臨床意義

李倩睿，束俊玫，唐娟，岳欣

1 南京市第二醫(yī)院質(zhì)控科，南京 210000；2 南京市第二醫(yī)院公共衛(wèi)生科；3 南京市第二醫(yī)院婦產(chǎn)科

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥（ICP）是妊娠期常見的肝膽系統(tǒng)疾病之一，其特征為肝內(nèi)膽汁的排泄障礙，導(dǎo)致膽汁酸在孕婦體內(nèi)積聚［1］。ICP的發(fā)生與孕婦體內(nèi)部分代謝相關(guān)的基因表達密切相關(guān)［2］。血清硫酸基轉(zhuǎn)移酶2A1（SULT2A1）參與膽酸的代謝和運輸過程，與子宮肌瘤的發(fā)生相關(guān)［3］。葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1（GLUT1）是參與葡萄糖轉(zhuǎn)運的膜蛋白，在維持能量供應(yīng)方面起著重要作用，其異常表達與妊娠期疾病的發(fā)生密切相關(guān)［4］。但是，目前針對ICP 孕婦血清SULT2A1、GLUT1水平變化的研究有限，尚缺乏大規(guī)模的臨床研究數(shù)據(jù)證明二者與ICP的關(guān)系。本研究旨在探究ICP 患者血清SULT2A1 和GLUT1 的水平變化，并進一步探討其與ICP 嚴(yán)重程度、妊娠結(jié)局的關(guān)系，以期為臨床ICP的診斷、治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2020 年1 月—2023 年3 月本院收治的ICP 孕婦97 例作為觀察組，年齡21～36（26.45 ± 5.29）歲，孕周12～38（28.29 ± 3.66）周。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18 歲；符合ICP 的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；首次確診ICP，尚未接受治療；單胎妊娠；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有肝炎、肝硬化病史；合并血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性系統(tǒng)疾??；合并嚴(yán)重的心、肺、腎等重要器官功能障礙；合并惡性腫瘤。同期另選健康產(chǎn)檢孕婦55例作為對照組，年齡（26.03 ± 6.39）歲，孕周12～38（28.03 ± 3.75）周。納入標(biāo)準(zhǔn)：產(chǎn)檢資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：高血脂遺傳史；并發(fā)肝病及ICP 疾病史。兩組年齡、孕周比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。兩組均簽署知情同意書，本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院院倫理委員會審批同意（倫理批件號：21329）。

1.2 ICP 病情嚴(yán)重程度評估 ICP 病情嚴(yán)重程度分級參照中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會產(chǎn)科組制定的“2015版妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥診療指南”［5］。根據(jù)ICP嚴(yán)重程度將ICP孕婦分為輕度ICP 40例（總膽汁酸＜40 μmol/L，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶＜200 U/L）、重度ICP 57 例（總膽汁酸≥40 μmol/L，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶≥200 U/L）。

1.3 妊娠結(jié)局評估 自發(fā)性早產(chǎn)、死產(chǎn)、羊水胎糞污染、胎兒宮內(nèi)發(fā)育不良、胎兒宮內(nèi)窘迫、新生兒窒息、產(chǎn)后出血為結(jié)局不良［6］。根據(jù)妊娠結(jié)局將ICP孕婦分為結(jié)局不良44例、結(jié)局良好53例。

1.4 血清SULT2A1、GLUT1檢測 采集各組空腹靜脈血5 mL，靜置1 h，以4 000 r/min離心5 min（離心半徑14.5 cm），分離血清，置于-80 ℃冷藏器中保存?zhèn)溆?。用雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清SULT2A1，試劑盒購于晶美生物技術(shù)有限公司。用實時熒光定量PCR 法檢測血清GLUT1，步驟：TRIzol 試劑提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA-PCR，PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s、60 ℃退火1 min及72 ℃延伸20 s循環(huán)40次。TRIzol試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購于吉凱基因技術(shù)有限公司（上海），GLUT1引物和β-actin內(nèi)參引物由美國BIM公司提供。GLUT1上游引物序列5'-TAAGGGCGTCACTCCCACT-3'、下游引物序列5'-CACAAACAGCGACACGACAGT-3'；β-actin 上游引物序列5'-GAAGATCAAGATCATTGCTCCT-3'、下游引物序列5'-TACTCCTGCTTGCTGATCCACA-3'。2-ΔΔCt法計算基因的相對表達量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0 統(tǒng)計軟件。符合正態(tài)分布的計量資料以±s表示，兩組比較采用t檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。用多因素Logistic回歸分析ICP 孕婦妊娠結(jié)局的影響因素；受試者工作特征（ROC）曲線評估SULT2A1、GLUT1 對ICP 孕婦結(jié)局的預(yù)測效能，曲線下面積比較采用Delong 檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清SULT2A1、GLUT1水平比較 見表1。

表1 兩組血清SULT2A1、GLUT1水平比較（± s）

表1 兩組血清SULT2A1、GLUT1水平比較（± s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與輕度比較，#P＜0.05。

組別對照組ICP組n輕度重度GLUT1 0.86 ± 0.17 1.75 ± 0.26*1.04 ± 0.19 2.25 ± 0.36#55 97 40 57 SULT2A1（μmol/L）46.29 ± 7.29 27.33 ± 4.78*41.58 ± 6.35 17.33 ± 3.27#

2.2 血清SULT2A1、GLUT1ICP 對孕婦妊娠結(jié)局的影響

2.2.1 單因素分析結(jié)果見表2。

表2 影響ICP孕婦妊娠結(jié)局的單因素分析結(jié)果

2.2.2 多因素分析結(jié)果 因變量（結(jié)局不良=1、結(jié)局良好=0）、自變量（SULT2A1、GLUT1 均為實測值，輕度ICP=0、重度ICP=1）。多因素Logistic 回歸分析顯示，高水平SULT2A1 是ICP 孕婦妊娠結(jié)局的保護因素（P＜0.05），高水平GLUT1、重度ICP 是ICP 孕婦妊娠結(jié)局的危險因素（P均＜0.05）。見表3。

表3 影響ICP孕婦妊娠結(jié)局的多因素分析結(jié)果

2.3 SULT2A1、GLUT1 對ICP 孕婦妊娠結(jié)局的預(yù)測效能 ROC 曲線分析顯示，SULT2A1、GLUT1二者單獨及聯(lián)合預(yù)測ICP 孕婦妊娠結(jié)局的曲線下面積分別為0.703、0.810、0.861，二者聯(lián)合預(yù)測的曲線下面積高于單獨預(yù)測（P均＜0.05）。見表4。

表4 SULT2A1、GLUT1對ICP孕婦結(jié)局的預(yù)測效能

3 討論

SULT2A1 是機體內(nèi)膽汁酸硫酸化代謝過程的關(guān)鍵酶，可增加膽汁酸水溶性，進而介導(dǎo)人體內(nèi)類固醇脂質(zhì)的硫酸化過程，促進膽汁排泄，同時降低膽汁對肝組織細胞的毒副反應(yīng)［7］。研究顯示，SULT2A1水平下降時，膽酸硫酸化過程受阻，進而導(dǎo)致膽汁淤積，損傷肝細胞及肝功能［8］。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)，SULT2A1 可在一定程度上抑制腫瘤細胞的侵襲、生長，其水平降低可促進腫瘤細胞增殖、轉(zhuǎn)移，可能與其催化激素的硫酸化使其失活有關(guān)［9］。SULT2A1的生理學(xué)效應(yīng)與其硫酸化催化酶特性密切相關(guān)，其與ICP 的發(fā)生、進展及新生兒結(jié)局可能具有一定的相關(guān)性，但現(xiàn)階段相關(guān)報道少見。本研究結(jié)果顯示，ICP 孕婦血清SULT2A1 顯著降低，且ICP 病情越重SULT2A1下降越明顯。這提示SULT2A1參與了ICP的發(fā)生、發(fā)展，其水平變化反映了ICP 的嚴(yán)重程度?？赡茉蛟谟赟ULT2A1 水平下降導(dǎo)致孕婦體內(nèi)膽汁酸硫酸化受阻，膽汁酸疏水性增強而排出受阻并淤滯積聚，引起孕婦肝組織細胞損害，最終引發(fā)ICP的發(fā)生、進展。ICP 導(dǎo)致孕婦肝功能受損，發(fā)生胎盤功能不全、胎兒血供循環(huán)不良，最終引起胎兒血液灌注不足、缺氧，增加死產(chǎn)、早產(chǎn)、胎兒急性缺氧、胎兒窘迫等不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險［10］。本研究結(jié)果顯示，妊娠結(jié)局不良孕婦血清SULT2A1 水平顯著下降，且SULT2A1 水平下降是ICP 孕婦妊娠結(jié)局的危險因素。提示SULT2A1 參與了ICP 的發(fā)生、發(fā)展，與ICP孕婦不良妊娠結(jié)局具有較好的量化關(guān)系，其可作為評估ICP 孕婦病情、預(yù)測不良妊娠結(jié)局可靠的生物學(xué)指標(biāo)之一。

ICP 孕婦胎兒宮內(nèi)缺血、血氧多為急性缺氧，主要原因在于ICP 孕婦體內(nèi)膽汁酸水平升高，其可直接對胎兒心臟產(chǎn)生損害之外，還可以促進胎盤血管異常收縮、影響胎盤功能［11］。基礎(chǔ)研究顯示，ICP 孕鼠體內(nèi)膽汁酸水平的升高，促進胎盤組織產(chǎn)生大量的活性氧物質(zhì)，破壞機體的抗氧化系統(tǒng)、造成氧化損傷。據(jù)此推測，ICP 孕婦胎盤組織功能受損，胎兒可能存在缺血缺氧，為適應(yīng)缺氧環(huán)境，體內(nèi)缺氧誘導(dǎo)因子應(yīng)激性升高，進而調(diào)控體內(nèi)動態(tài)氧平衡［12］。GLUT1 是缺氧誘導(dǎo)因子下游靶基因之一，正常情況下，組織細胞維持正常功能所需能量來源于葡萄糖的有氧磷酸化，此過程所需能量低，對葡萄糖轉(zhuǎn)運后的利用度高，所需GLUT1 介導(dǎo)的靶蛋白較低［13］。ICP 孕婦宮內(nèi)缺血缺氧，組織對葡萄糖的利用由有氧磷酸化轉(zhuǎn)為糖酵解，需要更多的GLUT1 靶蛋白進行葡萄糖轉(zhuǎn)運，組織細胞缺氧誘導(dǎo)因子應(yīng)激性升高，其下游靶基因GLUT1代償性升高，ICP 病情越重，宮內(nèi)缺血缺氧亦越重，GLUT1 代償性升高亦越明顯［14］。本研究結(jié)果證實，ICP 孕婦血清GLUT1 水平顯著升高，且隨著病情加重，其升高越明顯，且GLUT1升高是ICP 孕婦妊娠結(jié)局不良的獨立危險因素。提示GLUT1 可反映ICP 孕婦病情嚴(yán)重程度、預(yù)測妊娠結(jié)局不良，原因在于ICP 孕婦宮內(nèi)缺血缺氧，代償性引發(fā)GLUT1 表達增加，促使胎盤耗氧量較低的糖降解水平增加，而糖降解產(chǎn)生的酸性代謝產(chǎn)物導(dǎo)致血管異常收縮，使母體-胎兒交換面積降低，進一步加劇胎兒缺血缺氧，此惡性循環(huán)可能造成胎盤、胎兒損害，引發(fā)不良妊娠結(jié)局。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)SULT2A1 和GLUT1 對ICP孕婦妊娠結(jié)局均具有較好的預(yù)測效能，且二者聯(lián)合的預(yù)測效能進一步提升。

綜上所述，ICP 孕婦血清SULT2A1 水平下降、GLUT1 水平升高，二者水平變化是ICP 孕婦妊娠結(jié)局的影響因素，二者聯(lián)合檢測有助于早期評估ICP病情嚴(yán)重程度及妊娠結(jié)局。