卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達(dá)與患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

楊洋，胡娟，黃潤(rùn)強(qiáng)

1 十堰市太和醫(yī)院婦科，湖北 十堰 442000；2 三峽大學(xué)附屬仁和醫(yī)院婦科

卵巢癌是臨床常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，2022 年我國(guó)卵巢癌新發(fā)病例57 090 例，死亡39 306 例，嚴(yán)重威脅女性生命健康［1］。及時(shí)評(píng)估卵巢癌患者預(yù)后對(duì)促進(jìn)其預(yù)后改善很有必要。長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸（LncRNA）、微小核糖核酸（miRNA）等非編碼核糖核酸（ncRNA）是基因組的新興元素，雖不編碼蛋白質(zhì)，但參與腫瘤細(xì)胞增殖、分化、侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥、凋亡等的調(diào)控［2］。LncRNA小核仁核糖核酸宿主基因11（SNHG11）是新發(fā)現(xiàn)的LncRNA 成員，其在卵巢癌中異常表達(dá)［3］。LncRNA SNHG11 與食管鱗癌、肝細(xì)胞癌患者預(yù)后有關(guān)［4-5］。miR-184 是進(jìn)化高度保守的一種miRNA，在卵巢癌中異常表達(dá)［6］。miR-184 與舌鱗狀細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌患者預(yù)后有關(guān)［7-8］。本研究擬探討卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達(dá)與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，旨在為改善患者預(yù)后提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2019 年1 月—2020 年5 月在十堰市太和醫(yī)院手術(shù)切除的104 例份卵巢癌組織及其癌旁組織（距離癌組織邊緣≥2 cm 且經(jīng)病理檢查為正常組織）標(biāo)本，取樣后立即液氮速凍后保存于-80 ℃冰箱中?；颊吣挲g31～74（60.54 ± 5.68）歲；病理類型：漿液性癌83例、黏液性癌21例；腫瘤最大徑≥3 cm 41例、＜3 cm 63例；分化程度：低分化39例、中高分化65 例；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期［9］：Ⅰ～Ⅱ期41例、Ⅲ期63例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者或家屬知情同意；經(jīng)病理檢查確診為卵巢癌；初次確診，且入院前未接受化療、放療、免疫治療、靶向治療等。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡＜18 歲；臨床資料不完整；繼發(fā)性卵巢癌；合并其他部位惡性腫瘤；合并自身免疫性疾??；合并精神疾病。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法。將凍存組織剪碎后，用RNA 提取試劑盒［天根生化科技（北京）有限公司］提取組織總RNA，分光度計(jì)測(cè)定吸光度。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京百邁客生物科技有限公司）將RNA 轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)RNA 后，用熒光定量PCR 試劑盒（北京百邁客生物科技有限公司），以互補(bǔ)RNA 為模板進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)體系：互補(bǔ)RNA 5 μL、2×SYBR Green PCRmix 12.5 μL、上游引物1.0 μL、下游引物1.0 μL，ddH2O 加至總體積25 μL。反應(yīng)條件：95 ℃加熱10 min，95 ℃變性10 s、64 ℃退火10 s、延伸72 ℃ 30 s 循環(huán)35 次。LncRNA SNHG11 上游引物5'-TGGGAGTTGTCATGTTGGGA-3'，下游引物5'-ACTCGTCACTCTTGGTCTGT-3'；內(nèi)參GAPDH 上游引物5'-ATGTTCGTCATGGGTGTGAA-3'，下游引物5'-CAGTGATGGCATGGACTGT-3'。 miR-184 上游引物5'-TGGACGGAGAACTGAUAAGGGT-3'，下游引物5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'；內(nèi)參U6 上游引物5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。用2-ΔΔCT法計(jì)算組織中LncRNA SNHG11、miR-184相對(duì)表達(dá)量。

1.3 預(yù)后隨訪 通過電話或門診對(duì)卵巢癌患者隨訪3 年，第1 年每3 個(gè)月隨訪1 次，之后2 年每6個(gè)月隨訪1 次。隨訪至患者死亡或2023 年5 月，統(tǒng)計(jì)患者生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS28.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以-x±s表示，比較采用配對(duì)或獨(dú)立t檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)法分析卵巢癌組織中LncRNA SNHG11與miR-184表達(dá)的相關(guān)性；用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，用Log-rank 檢驗(yàn)比較生存率；用多因素Cox回歸分析卵巢癌患者預(yù)后的影響因素。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌組織與癌旁組織中LncRNA SNHG11、miR-184表達(dá)比較 卵巢癌組織中LncRNA SNHG11表達(dá)高于癌旁組織，miR-184 表達(dá)低于癌旁組織（P均＜0.05）。見表1。

表1 卵巢癌組織與癌旁組織中LncRNA SNHG11、miR-184相對(duì)表達(dá)量比較（-x ± s）

2.2 卵巢癌組織中LncRNA SNHG11 與miR-184 表達(dá)的相關(guān)性 用StarBase 軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，LncRNA SNHG11 與miR-184 存在結(jié)合位點(diǎn)。Pearson 相關(guān)分析顯示，卵巢癌組織中LncRNA SNHG11 表達(dá)與miR-184表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r＝-0.711，P＜0.05）。

2.3 LncRNA SNHG11、miR-184表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系 不同分化程度、FIGO 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），不同年齡、病理類型、腫瘤最大徑的卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。見表2。

表2 LncRNA SNHG11、miR-184表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系（-x ± s）

2.4 LncRNA SNHG11、miR-184表達(dá)與卵巢癌患者預(yù)后的關(guān)系 104 例卵巢癌患者隨訪3 年，死亡45例，總生存率為56.73%（59/104）。根據(jù)卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達(dá)均值分為高/低表達(dá)組。LncRNA SNHG11 高表達(dá)組（≥2.27，53 例）總生存率45.28%（24/53）低于LncRNA SNHG11 低表達(dá)組（＜2.27，51 例）的68.63%（35/51）；miR-184高表達(dá)組（≥1.02，54 例）總生存率68.52%（37/54）高于miR-184 低表達(dá)組（＜1.02，50 例）的44.44%（22/50）；比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

2.5 卵巢癌患者預(yù)后的單因素和多因素Cox 回歸分析 以隨訪時(shí)間為時(shí)間變量，臨床病理特征和LncRNA SNHG11、miR-184 為自變量，生存狀態(tài)（死亡/存活=1/0）為因變量。多因素Cox 回歸分析顯示，F(xiàn)IGO 分期Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、LncRNA SNHG11≥2.27 為卵巢癌患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，miR-184≥1.02為獨(dú)立保護(hù)因素（P＜0.05）。見表3。

表3 影響卵巢癌患者預(yù)后的單因素和多因素Cox回歸分析結(jié)果

3 討論

卵巢癌是起源于輸卵管或卵巢上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，根治性切除是早期卵巢癌最有效的治療方法，但由于卵巢深處盆腔且卵巢癌早期無特異性癥狀，導(dǎo)致70%左右的患者在初診時(shí)即為晚期，失去最佳切除時(shí)機(jī)［10］。盡管近年來腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和化療、放療、免疫、靶向等治療技術(shù)或藥物取得較大進(jìn)展，但仍難以獲得滿意的療效，且隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，耐藥和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移愈發(fā)常見，導(dǎo)致卵巢癌患者總體預(yù)后仍然較差［11-13］。分析卵巢癌患者預(yù)后相關(guān)因素，對(duì)指導(dǎo)臨床干預(yù)和改善患者預(yù)后意義重大。

卵巢癌是多種因素和機(jī)制導(dǎo)致的一種實(shí)體腫瘤，細(xì)胞內(nèi)外的ncRNA 能通過轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等方式調(diào)控細(xì)胞多種病理生理功能，進(jìn)而參與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展［14］。LncRNA 是長(zhǎng)度＞200 個(gè)核苷酸的ncRNA，該類ncRNA雖然缺乏典型的開放閱讀框，但能通過海綿miRNA競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合信使核糖核酸或直接調(diào)控信使核糖核酸，參與蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、表觀遺傳調(diào)控等過程，進(jìn)而參與腫瘤進(jìn)程［15］。LncRNA SNHG11 是定位于人染色體20q11.23 上的一種LncRNA，參與多種惡性腫瘤過程。如LncRNA SNHG11 能靶向miR-324-3p 上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移和血管生成［16］；LncRNA SNHG11能靶向下調(diào)miR-193a-5p表達(dá)促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移［17］。上述研究提示，LncRNA SNHG11 是一種促癌基因。研究顯示，LncRNA SNHG11 表達(dá)升高與結(jié)直腸癌、前列腺癌患者預(yù)后不良有關(guān)［18-19］。有研究報(bào)道，LncRNA SNHG11 在卵巢癌中呈高表達(dá)［3］。然而關(guān)于LncRNA SNHG11 與卵巢癌患者的關(guān)系尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組織中LncRNA SNHG11高表達(dá)，與分化程度、FIGO 分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示LncRNA SNHG11 高表達(dá)參與卵巢癌發(fā)生發(fā)展。分析原因可能是LncRNA SNHG11 表達(dá)升高能結(jié)合β-連環(huán)蛋白激活Wnt/β-連環(huán)蛋白途徑，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和血管生成，導(dǎo)致卵巢癌惡性進(jìn)展［20］。

miRNA是長(zhǎng)度約22個(gè)核苷酸的單鏈ncRNA，能通過與靶標(biāo)基因完全或不完全互補(bǔ)結(jié)合，抑制蛋白質(zhì)翻譯而負(fù)向調(diào)控信使核糖核酸表達(dá)，參與腫瘤進(jìn)程［21］。miR-184是定位于人染色體7q32.2上的一種以miR-183/96/182 基因簇形式存在的miRNA。近年多項(xiàng)研究證實(shí)miR-184 可參與腫瘤進(jìn)程，如miR-184能靶向下調(diào)鋅指蛋白3表達(dá)，調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲［22］；miR-184能靶向下調(diào)補(bǔ)體1和腫瘤壞死因子受體6 表達(dá)，抑制肺腺癌細(xì)胞惡性進(jìn)展［23］。上述研究提示，miR-184 在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮促癌或抑癌作用。實(shí)驗(yàn)報(bào)道，miR-184 在卵巢癌中呈低表達(dá)［6］。且相關(guān)研究顯示，miR-184 異常表達(dá)與胃癌、肝細(xì)胞癌患者預(yù)后不良有關(guān)［24-25］。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組織中miR-184 低表達(dá)，與卵巢癌分化程度、FIGO 分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示miR-184 低表達(dá)參與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展。分析原因可能是miR-184 表達(dá)降低會(huì)導(dǎo)致類Sm 蛋白4 表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂，使卵巢癌細(xì)胞不受控制的增殖、分化、遷移和侵襲，促進(jìn)卵巢癌惡性進(jìn)展［6］。

本研究通過StarBase 軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，LncRNA SNHG11與miR-184存在結(jié)合位點(diǎn)，相關(guān)性分析也發(fā)現(xiàn)二者在卵巢癌組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示LncRNA SNHG11 和miR-184 可能共同參與卵巢癌進(jìn)程。李少儒等［3］通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)也證實(shí)LncRNA SNHG11 與miR-184 存在靶向關(guān)系，下調(diào)LncRNA SNHG11 表達(dá)能靶向上調(diào)miR-184 表達(dá)，降低卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移與侵襲能力。本研究結(jié)果還顯示，LncRNA SNHG11高表達(dá)患者總生存率較低表達(dá)患者低，是卵巢癌患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；miR-184 高表達(dá)患者總生存率較低表達(dá)患者高，是卵巢癌患者死亡的獨(dú)立保護(hù)因素。這說明卵巢癌組織中LncRNA SNHG11、miR-184 表達(dá)與患者預(yù)后有關(guān)，可能成為卵巢癌預(yù)后評(píng)估新的標(biāo)志物。

綜上所述，卵巢癌組織中LncRNA SNHG11 高表達(dá)，miR-184 低表達(dá)，二者表達(dá)變化與分化程度、FIGO 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)。但本研究結(jié)果還需多中心研究進(jìn)行驗(yàn)證。