腦血流儲備參數(shù)及血清miR-331-5p 水平與老年帕金森病患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙的關(guān)系研究

張曉杰，艾偉平，趙義凡，陳素艷

作者單位：1.075000 河北省張家口市第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)一科 2.075000 河北省張家口市第一醫(yī)院神經(jīng)外一科 3.075000 河北省張家口市第一醫(yī)院電生理科

近年越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，除運(yùn)動癥狀外，自主神經(jīng)功能障礙、認(rèn)知障礙、睡眠障礙等非運(yùn)動癥狀在帕金森?。≒arkinson's disease，PD）患者中也十分常見，其甚至早于運(yùn)動癥狀出現(xiàn)［1］。其中自主神經(jīng)功能障礙貫穿PD始終，可引起消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等多系統(tǒng)功能障礙，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，同時其也是直接或間接導(dǎo)致患者死亡的重要原因［2］。目前，臨床多采用量表診斷PD患者自主神經(jīng)功能障礙，主觀性較強(qiáng)，且此時患者自主神經(jīng)功能障礙常已出現(xiàn)較長時間，神經(jīng)系統(tǒng)損傷較嚴(yán)重，不利于早期防治措施的制定［3］。因此，尋找可客觀評估早期PD患者自主神經(jīng)功能障礙的指標(biāo)尤為必要。有研究指出，PD患者腦血流儲備功能下降，可造成腦內(nèi)多種神經(jīng)遞質(zhì)水平降低，進(jìn)而影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能［4］。另有研究發(fā)現(xiàn)，PD起病隱匿，早期癥狀不明顯，但此時外泌體的表達(dá)已出現(xiàn)明顯變化［5］。其中miR-331-5p已被證實在早期PD患者中即呈高表達(dá)，且與神經(jīng)元代謝存在一定關(guān)系［6］。基于上述研究結(jié)果，本研究探討了腦血流儲備參數(shù)及血清miR-331-5p水平與老年P(guān)D患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙的關(guān)系，以期為老年P(guān)D患者自主神經(jīng)功能障礙的評估與防治提供新的思路與干預(yù)靶點。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2022年3月—2023年6月張家口市第一醫(yī)院收治的老年P(guān)D患者40例為PD組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《中國帕金森病治療指南（第四版）》［7］中PD的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）年齡60～80歲；（3）患者和/或家屬對本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有顱腦損傷或腦血管疾病者；（2）存在重要臟器功能障礙者；（3）伴有其他精神或神經(jīng)障礙性疾病，如抑郁癥、精神分裂癥、阿爾茨海默病者；（4）存在明顯認(rèn)知障礙，無法完成相關(guān)檢查者。另納入同時期在張家口市第一醫(yī)院進(jìn)行體檢的健康者40例為對照組。PD組中男22例，女18例；年齡62～77歲，平均（69.6±3.2）歲；受教育程度：初中及以下21例，高中及以上19例。對照組中男20例，女20例；年齡63～77歲，平均（69.8±3.2）歲；受教育程度：初中及以下23例，高中及以上17例。兩組性別、年齡及受教育程度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.201，P=0.654；t=0.245，P=0.807；χ2=0.202，P=0.653）。本研究獲得張家口市第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)（倫審編號：2022105）。

1.2 臨床資料收集

收集對照組與PD組性別、年齡、受教育程度及PD組病程、皮膚交感反應(yīng)（sympathetic skin response，SSR）異常（SSR波形缺失；上肢SSR起始潛伏期＞1 512 ms，下肢SSR起始潛伏期＞2 230 ms；上肢峰-峰波幅＜184 μV，下肢峰-峰波幅＜364 μV［8］）情況、H-Y分期、PD家族史、合并癥（糖尿病、高血壓）。

1.3 腦血流儲備參數(shù)檢測

對照組體檢時及PD組入院后次日采用多參數(shù)心腦血流監(jiān)測系統(tǒng)（深圳市德力凱醫(yī)療設(shè)備股份有限公司生產(chǎn)，型號：SD2型）檢測腦血流儲備參數(shù)。檢查前24 h避免接觸酒精、尼古丁及咖啡因，檢查前2 h禁食，PD組患者檢查前停藥24 h及以上。檢查前確保環(huán)境安靜，室溫控制在22～26 ℃。受試者取仰臥位，平靜休息10～15 min后，使用電子血壓計（深圳市捷美瑞科技有限公司生產(chǎn)，型號：F1701L）測量受試者右側(cè)上臂肱動脈基線血壓值，將2 MHz監(jiān)護(hù)探頭用頭架固定于受試者雙側(cè)顳窗處，并分別在40～65 mm、50～75 mm深度處監(jiān)測大腦中動脈、大腦后動脈，持續(xù)監(jiān)測5 min；再將2 MHz監(jiān)護(hù)探頭用頭架固定于受試者枕窗部位，在80～110 mm深度處監(jiān)測基底動脈，持續(xù)監(jiān)測5 min。采集受試者雙側(cè)大腦中動脈、大腦后動脈、基底動脈的腦血流速度（cerebral blood flow velocity，CBFV）及相位差、增益。

1.4 血清miR-331-5p水平檢測

對照組體檢時及PD組入院后次日清晨采集空腹肘靜脈血10 ml，在4 ℃溫度下1 000 r/min離心15 min（離心半徑5 cm），收集上清液。以3 000 r/min離心15 min（離心半徑10 cm），消除細(xì)胞碎片，利用TRI試劑分離血漿核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）；然后添加1 ng總RNA，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（上海聯(lián)邁生物工程有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：50次）反向合成染色體RNA（chromosmal RNA，cRNA）；采用7900實時聚合酶鏈反應(yīng)機(jī)、SYBP GreenⅡ核酸染料（上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：100 μl）檢測血清miR-331-5p。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火1 min，進(jìn)行40個循環(huán)；GADPH上游引物：5'-GTCAACGGATTG-GTCTGTATT-3'，下游引物：5'-AGTCTTCTGG-GTGGCAGTAT-3'；miR-331-5p上游引物：5'-AUACCUA-3'，下游引物：5'-CGCAACA-3'。采用2-ΔΔCt法計算miR-331-5p相對表達(dá)量。

1.5 自主神經(jīng)功能障礙判定標(biāo)準(zhǔn)

于PD組患者入院后次日清晨采用PD自主神經(jīng)癥狀量表（Scale for Outcomes in PD for Autonomic Symptoms，SCOPA-AUT）［9］評估其自主神經(jīng)功能障礙發(fā)生情況，量表包含6個自主神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，分別為胃腸道（7個條目）、心血管（3個條目）、體溫調(diào)節(jié)（4個條目）、泌尿（6個條目）、瞳孔活動（1個條目）及性功能（2個條目），共23個條目，每個條目分別計0～3分，0分為從不，1分為有時，2分為時常，3分為頻繁，總分69分，評分越高表明患者自主神經(jīng)功能障礙程度越嚴(yán)重。本研究以患者至少1個自主神經(jīng)系統(tǒng)癥狀條目均分≥1分判定為發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料以相對數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗；計量資料經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗均符合正態(tài)分布，以（±s）表示，兩組間比較采用成組t檢驗；采用多因素Logistic回歸分析探討老年P(guān)D患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙的影響因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對照組與PD組腦血流儲備參數(shù)及血清miR-331-5p水平比較

對照組與P D 組增益比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；PD組大腦中動脈、大腦后動脈、基底動脈CBFV慢于對照組，相位差小于對照組，血清miR-331-5p水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 對照組與PD組腦血流儲備參數(shù)及血清miR-331-5p水平比較（±s）Table 1 Comparison of cerebral blood flow reserve parameters and serum miR-331-5p level between the control group and the PD group

表1 對照組與PD組腦血流儲備參數(shù)及血清miR-331-5p水平比較（±s）Table 1 Comparison of cerebral blood flow reserve parameters and serum miR-331-5p level between the control group and the PD group

注：PD=帕金森病，CBFV=腦血流速度。

組別例數(shù)大腦中動脈CBFV（cm/s）大腦后動脈CBFV（cm/s）基底動脈CBFV（cm/s）相位差（°）增益（cm·s-1·mmHg-1） 血清miR-331-5p對照組4089.26±3.3153.75±3.2545.19±3.0350.83±1.450.53±0.090.51±0.04 PD組4072.48±3.6545.99±2.8341.61±2.4246.79±2.690.50±0.111.12±0.30 t值21.52811.3905.8198.3561.21712.779 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.0010.227＜0.001

2.2 自主神經(jīng)功能障礙與非自主神經(jīng)功能障礙者臨床資料及腦血流儲備參數(shù)、血清miR-331-5p水平比較

40例老年P(guān)D患者中13例（32.5%）發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙。自主神經(jīng)功能障礙與非自主神經(jīng)功能障礙者性別、年齡、受教育程度、病程、PD家族史、合并糖尿病者占比、合并高血壓者占比、增益比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；自主神經(jīng)功能障礙與非自主神經(jīng)功能障礙者H-Y分期比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；自主神經(jīng)功能障礙者SSR異常發(fā)生率高于非自主神經(jīng)功能障礙者，大腦中動脈、大腦后動脈、基底動脈CBFV慢于非自主神經(jīng)功能障礙者，相位差小于非自主神經(jīng)功能障礙者，血清miR-331-5p水平高于非自主神經(jīng)功能障礙者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 自主神經(jīng)功能障礙與非自主神經(jīng)功能障礙者臨床資料及腦血流儲備參數(shù)、血清miR-331-5p水平比較Table 2 Comparison of clinical information，cerebral blood flow reserve parameters，and serum miR-331-5p levels between patients with autonomic nerve dysfunction and patients without autonomic nerve dysfunction

2.3 老年P(guān)D患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙影響因素的多因素Logistic回歸分析

以老年P(guān)D患者是否發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙為因變量（賦值：否=0，是=1），以表2中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的項目〔SSR異常（賦值：否=0，是=1）、H-Y分期（賦值：Ⅰ期=0，Ⅱ期=1，Ⅲ期=2，Ⅳ期=3）、大腦中動脈CBFV（實測值）、大腦后動脈CBFV（實測值）、基底動脈CBFV（實測值）、相位差（實測值）、血清miR-331-5p水平（實測值）〕為自變量，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，SSR異常、H-Y分期和大腦中動脈、大腦后動脈、基底動脈CBFV及相位差、血清miR-331-5p水平是老年P(guān)D患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙的獨(dú)立影響因素（P＜0.05），見表3。

表3 老年P(guān)D患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙影響因素的多因素Logistic回歸分析Table 3 Multivariate Logistic regression analysis of influencing factors of autonomic nerve dysfunction in elderly PD patients

3 討論

自主神經(jīng)功能障礙是PD發(fā)生率最高的非運(yùn)動癥狀［10］，有資料顯示，70%～80%的PD患者存在自主神經(jīng)功能障礙，且隨著社會人口老齡化的不斷加劇，PD及PD患者自主神經(jīng)功能障礙發(fā)生率不斷攀升，給醫(yī)療體系帶來沉重負(fù)擔(dān)［11］。本研究結(jié)果顯示，40例老年P(guān)D患者中13例發(fā)生了自主神經(jīng)功能障礙，自主神經(jīng)功能障礙發(fā)生率達(dá)32.5%。因此，加強(qiáng)對老年P(guān)D患者自主神經(jīng)功能障礙的關(guān)注，尋找與之相關(guān)的指標(biāo)以早期識別自主神經(jīng)功能障礙并及時進(jìn)行針對性干預(yù)是目前臨床治療老年P(guān)D的重點。

腦血流儲備指腦內(nèi)微小動脈在機(jī)體動脈血壓出現(xiàn)波動時通過舒縮保持腦血流量相對穩(wěn)定的能力，其在維持正常腦代謝及中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能方面具有重要作用［12］。miR-331-5p是外泌體的一種，具有穩(wěn)定性好、不易降解等優(yōu)點，能穿透血腦屏障并進(jìn)入外周循環(huán)，故可通過檢測血清miR-331-5p水平監(jiān)測中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生情況［13］。傅曼等［14］通過比較PD患者與健康人群血漿miR-331-5p水平發(fā)現(xiàn)，PD患者血漿miR-331-5p水平更高。本研究比較了健康體檢者與PD患者腦血流儲備參數(shù)與血清miR-331-5p水平，結(jié)果顯示，PD組大腦中動脈、大腦后動脈、基底動脈CBFV慢于對照組，相位差小于對照組，血清miR-331-5p水平高于對照組，提示腦血流儲備及血清miR-331-5p水平與PD有關(guān)。同時，本研究結(jié)果顯示，自主神經(jīng)功能障礙者大腦中動脈、大腦后動脈、基底動脈CBFV慢于非自主神經(jīng)功能障礙者，相位差小于非自主神經(jīng)功能障礙者，血清miR-331-5p水平高于非自主神經(jīng)功能障礙者，提示腦血流儲備及血清miR-331-5p水平也可能與PD患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙有關(guān)，但既往相關(guān)報道較少，仍需進(jìn)一步研究加以明確。

本研究多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，大腦中動脈CBFV、大腦后動脈CBFV、基底動脈CBFV、相位差、血清miR-331-5p水平是老年P(guān)D患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙的獨(dú)立影響因素，與SHIN等［15］研究結(jié)果相似，說明腦血流儲備、血清miR-331-5p水平與PD患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙相關(guān)。分析原因可能為，大腦中動脈、大腦后動脈、基底動脈CBFV可反映腦組織不同部位血流速度，其值較小時提示PD患者腦組織血流量較小，可能導(dǎo)致雙側(cè)枕葉及頂葉后皮質(zhì)灌注不足、多巴胺能神經(jīng)元減少，從而降低自主神經(jīng)功能，增加自主神經(jīng)功能障礙發(fā)生風(fēng)險［16］。相位差可反映一段時間內(nèi)腦血流速度隨血壓變化而波動的幅度，其值越大表明腦血流自動調(diào)節(jié)能力越好。當(dāng)相位差較小時，提示腦血流自動調(diào)節(jié)能力較差，局部動脈舒縮功能較差，導(dǎo)致局部毛細(xì)血管因血流量變化幅度過大而受損，從而降低血腦屏障對神經(jīng)毒性物質(zhì)的清除能力，誘發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)代謝障礙，增加炎癥遞質(zhì)的合成，進(jìn)而加劇神經(jīng)炎癥反應(yīng)及其對神經(jīng)元的損傷［17］。而神經(jīng)元的炎癥損傷會影響中樞神經(jīng)自主調(diào)節(jié)功能，進(jìn)而增加患者自主神經(jīng)功能障礙發(fā)生風(fēng)險。miR-331-5p是miRNA家族的重要成員，可介導(dǎo)細(xì)胞交流及信息傳遞，可參與炎癥反應(yīng)、免疫系統(tǒng)變化等多種生物學(xué)行為［18］。正常情況下，血清miR-331-5p可通過釋放熱休克蛋白來提高神經(jīng)元的應(yīng)激能力，減少神經(jīng)元凋亡，保護(hù)神經(jīng)功能［19］。但當(dāng)血清miR-331-5p水平較高時，會促進(jìn)淀粉樣前體蛋白、α-突觸核蛋白等毒性蛋白低聚狀態(tài)的形成并促使其在神經(jīng)元之間傳播，激活小膠質(zhì)細(xì)胞的內(nèi)吞作用，并誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的發(fā)生，導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡。而凋亡的神經(jīng)元又會釋放大量突觸核蛋白，進(jìn)一步誘發(fā)并擴(kuò)散神經(jīng)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)一步被破壞，增加自主神經(jīng)功能障礙的發(fā)生風(fēng)險［20］。YU等［21］研究報道，外泌體可參與PD患者多個神經(jīng)系統(tǒng)萎縮過程，其涉及的機(jī)制可能為α-突觸核蛋白在膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)聚集并介導(dǎo)其凋亡。但miR-331-5p涉及的生物學(xué)行為較多，本研究僅發(fā)現(xiàn)了其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與自主神經(jīng)功能障礙發(fā)生的關(guān)系，其他相關(guān)機(jī)制還需大量前瞻性研究探索。

另外，本研究結(jié)果還顯示，SSR異常、H-Y分期也是老年P(guān)D患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙的獨(dú)立影響因素，分析原因為，SSR屬于皮膚催汗系統(tǒng)的一種反射活動，主要由腦與脊髓聯(lián)合完成，SSR異常提示下丘腦后部及中腦網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可能存在異常，神經(jīng)系統(tǒng)存在一定程度的破壞，患者自主神經(jīng)功能障礙風(fēng)險較高［22］。H-Y分期可反映PD嚴(yán)重程度，H-Y分期越高的患者病情越嚴(yán)重。有研究指出，PD患者病情越嚴(yán)重，其多巴胺能神經(jīng)元損傷越嚴(yán)重，累及范圍越廣，故自主神經(jīng)功能障礙發(fā)生風(fēng)險越高［23］。

4 結(jié)論

綜上所述，大腦中動脈、大腦后動脈、基底動脈CBFV及相位差、血清miR-331-5p水平是老年P(guān)D患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙的獨(dú)立影響因素，腦血流儲備功能下降、血清miR-331-5p水平升高可增加老年P(guān)D患者發(fā)生自主神經(jīng)功能障礙的風(fēng)險。但本研究納入的研究對象較少，且未進(jìn)一步分析腦血流儲備及血清miR-331-5p水平與老年P(guān)D患者臨床特征的關(guān)系。

作者貢獻(xiàn)：張曉杰進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計，論文撰寫及修訂，統(tǒng)計學(xué)處理，負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校，對文章整體負(fù)責(zé)、監(jiān)督管理；張曉杰、艾偉平進(jìn)行研究的實施與可行性分析；趙義凡、陳素艷進(jìn)行資料收集、整理。

本文無利益沖突。