采前氨基乙氧基乙烯甘氨酸處理對(duì)‘黃冠’梨長期冷藏后果實(shí)品質(zhì)和果心褐變的影響

何近剛，馮云霄，程玉豆，關(guān)軍鋒,*

（1.河北省農(nóng)林科學(xué)院生物技術(shù)與食品科學(xué)研究所，河北 石家莊 050051；2.河北省植物轉(zhuǎn)基因中心，河北 石家莊 050051）

‘黃冠’梨（Pyrus bretschneideriRehd.cv.Huangguan）是我國主栽的中早熟梨品種之一，因其果形端正、果肉細(xì)嫩多汁、品質(zhì)上乘而深受消費(fèi)者喜愛，市場(chǎng)上銷售期可達(dá)12 個(gè)月[1]。黃冠梨成熟期一般在每年的7月底至8月上旬，由于采收時(shí)氣溫較高，果實(shí)呼吸旺盛，而因市場(chǎng)需求貯藏期較長，因此該品種在低溫冷藏過程中易發(fā)生果面褐斑和果心褐變現(xiàn)象，極大降低了其商品價(jià)值，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[1-2]。

乙烯是啟動(dòng)和加速果實(shí)成熟衰老的重要植物激素[3-4]。氨基乙氧基乙烯甘氨酸（aminoethoxyvinylglycine，AVG）為乙烯抑制劑，能夠通過阻斷S-腺苷甲硫氨酸向氨基環(huán)丙烷羧酸的轉(zhuǎn)化過程而減少乙烯的生成[5]。研究證明，采前噴施AVG可延緩果實(shí)成熟衰老[6-7]，延長果實(shí)的貯藏時(shí)間和貨架期。梨采前噴施AVG，可抑制乙烯生成，延長果實(shí)貯藏期[8-9]，提高果實(shí)品質(zhì)[10]。采前使用250 mg/L的AVG噴施‘Jersey Mac’蘋果，可有效降低果實(shí)采后內(nèi)源乙烯生成、延緩果實(shí)軟化，并且AVG處理蘋果含有更高的可滴定酸含量、總酚含量和抗氧化能力[11]；‘McIntosh’蘋果采前噴施AVG，可顯著降低落果率，推遲呼吸躍變，延長果實(shí)采收期[12]；采前AVG處理‘Cripps Pink’蘋果相對(duì)于1-甲基環(huán)丙烯處理來說，延遲乙烯產(chǎn)生和果實(shí)轉(zhuǎn)色效果更為明顯[13]；采前AVG處理可使‘金冠’蘋果推遲轉(zhuǎn)色，并降低果實(shí)貯藏時(shí)酯類和醛類揮發(fā)性物質(zhì)含量[14]。桃[6]、油桃[15]采前噴施AVG均可有效降低落果率，降低乙烯生成速率和延緩果實(shí)軟化。李子采前噴施AVG，可有效維持果實(shí)硬度，減少果實(shí)乙烯生成，維持果實(shí)色澤[16-17]。研究發(fā)現(xiàn)，AVG采前處理的獼猴桃果實(shí)較對(duì)照含有更高的總酚含量和抗氧化能力[18]，而AVG采前處理的蘋果[7]和李子在貯藏期總酚含量下降[17]。

果實(shí)褐變與組織內(nèi)酚代謝和多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）密切相關(guān)[19-21]。綠原酸是梨中的一種初級(jí)酚類化合物，被普遍認(rèn)為是導(dǎo)致PPO催化酶促褐變的關(guān)鍵底物[22-23]，苯丙氨酸解氨酶（phenylalnine ammonialyase，PAL）是綠原酸生物合成途徑的主要酶[23]。此外，果實(shí)褐變還與細(xì)胞膜的破裂密切相關(guān)，磷脂酶D（phospholipase D，PLD）和脂氧合酶（lipoxygenase，LOX）的活性影響著脂膜的完整與正常功能[24-28]。

然而，近年來關(guān)于AVG調(diào)節(jié)梨果貯藏性能，尤其是對(duì)于果實(shí)內(nèi)部組織褐變的影響研究較少，關(guān)于AVG調(diào)節(jié)組織褐變的機(jī)制尚不清楚。本研究采用采前AVG噴施處理方法，研究了‘黃冠’梨果實(shí)長期貯藏后品質(zhì)變化，并采用實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）技術(shù)研究果心褐變相關(guān)基因表達(dá)規(guī)律，以闡明AVG調(diào)控‘黃冠’梨果心褐變的作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試材料‘黃冠’梨種植于河北省趙縣梨果示范基地，樹齡20 a生。

AVG（商品名ReTain?）美國Valent生物科學(xué)有限責(zé)任公司；正己烷（色譜純）美國賽默飛世爾公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（PrimescriptTMRT reagent Kit）、TB Green? Premix ExTaqII qPCR試劑盒 寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

GY-4型硬度計(jì) 浙江托普儀器有限公司；PAL-1型手持?jǐn)?shù)字糖度儀 日本ATAGO公司；HITACHI L-2000高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀 日本日立科學(xué)儀器有限公司；UV-2100型紫外-可見分光光度計(jì) 尤尼柯（上海）儀器有限公司；7500定量PCR儀 美國ABI公司。

1.3 方法

1.3.1 處理

‘黃冠’梨于采前2 周與1 周分別噴施50、100 mg/L以及200 mg/L的AVG，以噴施清水作為對(duì)照，每個(gè)處理3 株果樹。果實(shí)于2016年8月11日采收并當(dāng)天運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，過夜放置散去田間熱。選取8～9 成熟，無機(jī)械損傷、無病蟲害、大小一致的AVG和對(duì)照果實(shí)置于溫度（0±0.5）℃、相對(duì)濕度（90±5）%下冷藏180 d后出庫，貨架（20±1）℃貯藏7 d。于采收當(dāng)天（0 d）、冷藏180 d以及貨架7 d（（180+7）d）測(cè)定果實(shí)硬度、可溶性固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)（soluble solid content，SSC）以及可滴定酸（titratable acid，TA）質(zhì)量分?jǐn)?shù)，統(tǒng)計(jì)果皮褐斑及果心褐變情況后，取果心于液氮中速凍、并在液氮中研磨為粉末后放置于-80 ℃，以備后續(xù)分析。

1.3.2 果實(shí)硬度、SSC以及TA質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

硬度采用GY-4型硬度計(jì)，沿果實(shí)赤道部位相對(duì)兩點(diǎn)測(cè)定果實(shí)去皮硬度，單位為kg/cm2；SSC使用PAL-1型手持?jǐn)?shù)字糖度儀測(cè)定，單位為%；采用酸堿滴定法測(cè)定TA質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以蘋果酸計(jì)，單位為%。

1.3.3 果皮褐斑指數(shù)及果心褐變指數(shù)統(tǒng)計(jì)

按照果皮褐斑面積占果面總面積比率分為4 級(jí)：0級(jí)，無褐斑；1級(jí)，0%＜褐斑面積≤25%；2級(jí)，25%＜褐斑面積≤50%；3級(jí)，褐斑面積＞50%。果皮褐斑指數(shù)按公式（1）計(jì)算[2]：

按照褐變面積占果心總面積比率分為4級(jí)：0級(jí)，無褐變；1級(jí)，0%＜褐變面積≤25%；2級(jí)，25%＜褐變面積≤50%；3級(jí)，褐變面積＞50%。果心褐變指數(shù)按公式（2）計(jì)算[20]：

1.3.4 綠原酸、熊果苷及總酚含量的測(cè)定

綠原酸和熊果苷含量采用HPLC法測(cè)定[29]。稱取果心1.0 g，加入6 mL 80%甲醇，20 ℃超聲提取15 min，10000×g、20 ℃離心10 min，取上清液過固相C18萃取小柱，以甲醇淋洗，經(jīng)直徑為0.45 μm的濾膜過濾后，進(jìn)行HPLC檢測(cè)，單位為mg/g（以鮮質(zhì)量計(jì)）。HPLC條件：HITACHI L-2000 HPLC儀自帶的反相Lachrom C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），檢測(cè)波長280 nm，柱溫30 ℃，洗脫程序?yàn)锳相5%冰醋酸水溶液、B相為水、C相為乙腈（0～6 min，A∶B∶C＝19∶76∶5（V/V，下同）；7～19 min，A∶B∶C＝95∶0∶5；20～24 min，A∶B∶C＝85∶0∶15；25 min，A∶B∶C＝55∶0∶45；26～30 min，A∶B∶C＝15∶0∶85；31 min，A∶B∶C＝15∶0∶85；32 min，A∶B∶C＝19∶76∶5），流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣體積為10 μL。

采用福林-酚法測(cè)定總酚含量[30]。稱取0.3 g果心，加入體積分?jǐn)?shù)為50%乙醇溶液5 mL，室溫下超聲30 min，4 ℃、10000×g離心10 min，得上清液。取1 mL樣液加入3.5 mL蒸餾水，加入0.5 mol/L福林-酚試劑0.5 mL，加入70% Na2CO3溶液 1 mL，混勻，30 ℃避光水浴2 h，760 nm處測(cè)定吸光度。根據(jù)沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總酚含量，結(jié)果以每克樣品中沒食子酸含量表示（mg/g，以鮮質(zhì)量計(jì)）。

1.3.5 PPO活力的測(cè)定

PPO活力測(cè)定參考Cheng Yudou等[30]方法。稱取果心凍樣1 g，加入3 mL的0.1 mol/L（pH 7.0）磷酸緩沖液（含6%聚乙烯吡咯烷酮），4 ℃、12000×g離心15 min，取上清液用于測(cè)定PPO活力。將200 μL酶提取液加入到25 ℃預(yù)熱反應(yīng)液中（含25 mmol/L鄰苯二酚的磷酸鹽緩沖液，pH 6.0），使終體積為4 mL。在420 nm波長下測(cè)定OD變化值，以每分鐘吸光度增加0.01時(shí)為1 個(gè)PPO活力單位（U），單位為U/kg（以鮮質(zhì)量計(jì)）。

1.3.6 RNA提取與基因表達(dá)分析

采用改良CTAB法[31]提取果心總RNA。總RNA經(jīng)DNase清除DNA后，用PrimescriptTMRT reagent Kit進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。real-time PCR使用TB Green? Premix ExTaqII qPCR試劑盒。以PbActin2為內(nèi)參基因[20]，其余基因參照GenBank上登記序列，使用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)基因引物，所有引物委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成（表1）。通過2-ΔΔCt法計(jì)算出待測(cè)基因相對(duì)表達(dá)量。

表1 real-time PCR特異性引物序列Table 1 Specific primer sequences used for real-time PCR

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

每個(gè)實(shí)驗(yàn)處理設(shè)3 個(gè)重復(fù)，測(cè)定時(shí)每個(gè)重復(fù)5 個(gè)果實(shí)。數(shù)據(jù)采用Excel 2007和SPSS 18.0數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和相關(guān)性分析，結(jié)果用3 次重復(fù)的平均值表示，方差分析采用Duncan法。使用GraphPad Prism 9軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同質(zhì)量濃度AVG處理對(duì)黃冠梨冷藏和貨架品質(zhì)及果實(shí)褐變的影響

如圖1A所示，采前噴施不同質(zhì)量濃度AVG對(duì)果實(shí)采收硬度無顯著影響；冷藏180 d后，各處理果實(shí)硬度較采收時(shí)顯著下降，其中200 mg/L AVG處理果實(shí)硬度最大，為5.98 kg/cm2，50 mg/L和100 mg/L處理果實(shí)硬度與對(duì)照果實(shí)無明顯差別；經(jīng)過貨架7 d（（180+7）d），果實(shí)硬度有所下降，不同質(zhì)量濃度AVG處理果實(shí)硬度無明顯差別，其中100 mg/L和200 mg/L AVG處理果實(shí)硬度顯著高于對(duì)照果實(shí)，說明質(zhì)量濃度為200 mg/L的AVG維持‘黃冠’梨果實(shí)冷藏和貨架硬度效果最好。

圖1 采前AVG處理對(duì)‘黃冠’梨果實(shí)冷藏和貨架期硬度（A）、SSC（B）以及TA含量（C）的影響Fig.1 Effect of preharvest AVG treatment on firmness (A),SSC (B) and TA content (C) of ‘Huangguan’ pear during cold storage and shelf-life periods

經(jīng)180 d貯藏，‘黃冠’梨果實(shí)采后SSC呈升高趨勢(shì)（圖1B）。采收時(shí)，200 mg/L AVG處理果實(shí)SSC最高，而50 mg/L和100 mg/L AVG處理果實(shí)與對(duì)照SSC無明顯差別；冷藏180 d，200 mg/L AVG處理果實(shí)SSC顯著高于50 mg/L和100 mg/L AVG處理和對(duì)照；（180+7）d時(shí)，200 mg/L以及100 mg/L AVG處理與對(duì)照果實(shí)SSC無明顯差別，而50 mg/LAVG處理果實(shí)SSC最低。

在整個(gè)貯藏期間，‘黃冠’梨果實(shí)TA含量降低（圖1C）。采收時(shí)，50 mg/L AVG處理果實(shí)TA含量最高，200 mg/L AVG處理和對(duì)照果實(shí)無明顯差別，100 mg/L AVG處理果實(shí)TA含量最低；冷藏180 d時(shí)，100 mg/L和200 mg/L AVG處理果實(shí)TA含量顯著高于對(duì)照和50 mg/L AVG處理果實(shí)；（180+7）d，200 mg/L AVG果實(shí)TA含量最高，而50 mg/L和100 mg/L AVG與對(duì)照無明顯差別。

采前噴施不同質(zhì)量濃度AVG可有效抑制‘黃冠’梨貯藏期果皮褐斑及果心褐變的發(fā)生（圖2）。冷藏180 d時(shí)，對(duì)照果皮褐斑指數(shù)最高，不同質(zhì)量濃度AVG處理果皮褐斑指數(shù)均低于對(duì)照果實(shí)，其中200 mg/L AVG處理的果實(shí)褐斑指數(shù)最低（圖2A）?！S冠’梨冷藏180 d時(shí)果心發(fā)生褐變，不同質(zhì)量濃度AVG處理果實(shí)褐變指數(shù)在冷藏180 d和貨架期間（（180+7）d）顯著低于對(duì)照果實(shí)，其中200 mg/L AVG處理下果心褐變指數(shù)最低（圖2B）。

圖2 采前AVG處理對(duì)‘黃冠’梨冷藏和貨架期果皮褐斑指數(shù)（A）和果心褐變指數(shù)（B）的影響Fig.2 Effect of preharvest AVG treatment on peel browning index (A)and core browning index (B) of ‘Huangguan’ pear during cold storage and shelf-life periods

2.2 AVG處理對(duì)‘黃冠’梨果心酚類物質(zhì)含量及PAL基因表達(dá)的影響

‘黃冠’梨果心中含量較高的2 種單酚物質(zhì)為熊果苷和綠原酸，這兩種酚類物質(zhì)以及總酚在貯藏期含量均升高（圖3）。AVG處理對(duì)采收時(shí)（0 d）和冷藏180 d果心熊果苷和總酚含量無顯著影響，（180+7）d時(shí)200 mg/L AVG處理果心熊果苷和總酚含量顯著高于對(duì)照（圖3A、C）。然而，從采收時(shí)（0 d）到貯藏期（180 d、（180+7）d），200 mg/L AVG處理的果心綠原酸含量均顯著高于對(duì)照果實(shí)（圖3B），說明AVG處理對(duì)于‘黃冠’梨果心綠原酸含量的影響更為明顯。這也說明采前AVG處理對(duì)采后生物體內(nèi)次生代謝物質(zhì)的合成與降解起到了一定的調(diào)控作用。

圖3 采前AVG處理對(duì)‘黃冠’梨冷藏和貨架期果心熊果苷（A）、綠原酸（B）和總酚（C）含量的影響Fig.3 Effect of preharvest AVG treatment on contents of arbutin (A),cholorogenic acid (B) and total phenolics (C) in ‘Huangguan’ pear core during cold storage and shelf-life periods

PbPAL1在整個(gè)貯藏期間表達(dá)量升高（圖4A），（180+7）d時(shí)該基因表達(dá)量達(dá)到峰值，而采前AVG處理顯著抑制了PbPAL1在‘黃冠’梨果心中的表達(dá)。在冷藏180 d時(shí)，PbPAL2達(dá)到表達(dá)峰值（圖4B），200 mg/L AVG處理果心中該基因表達(dá)量顯著低于對(duì)照果實(shí)；采收時(shí)（0 d）和貨架期（（180+7）d）時(shí)，AVG處理果實(shí)PbPAL2相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照無明顯差別。

圖4 采前AVG處理對(duì)‘黃冠’梨冷藏和貨架期果心PbPAL1（A）和PbPAL2（B）相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.4 Effect of preharvest AVG treatment on the relative expression levels of PbPAL1 (A) and PbPAL2 (B) in ‘Huangguan’ pear core during cold storage and shelf-life periods

2.3 AVG處理對(duì)‘黃冠’梨果心PPO活性及基因表達(dá)的影響

與采收時(shí)（0 d）相比，‘黃冠’梨冷藏180 d時(shí)果心PPO活性變化不大，而貨架期PPO活性顯著升高（圖5）。與對(duì)照相比，AVG處理顯著降低了‘黃冠’梨果心PPO活性。

圖5 采前AVG處理對(duì)‘黃冠’梨冷藏和貨架期果心PPO活性的影響Fig.5 Effect of preharvest AVG treatment on PPO activity of‘Huangguan’ pear core during cold storage and shelf-life periods

兩個(gè)PbPPO基因在‘黃冠’梨冷藏期間（180 d）表達(dá)量明顯升高，而貨架期（（180+7）d）表達(dá)量降低，采前AVG處理對(duì)于這兩個(gè)基因采收時(shí)表達(dá)量無明顯影響不大，但可有效抑制它們?cè)谫A藏期的表達(dá)（圖6）。

圖6 采前AVG處理對(duì)‘黃冠’梨冷藏和貨架期果心PbPPO1（A）和PbPPO5（B）相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.6 Effect of preharvest AVG treatment on relative expression levels of PbPPO1 (A) and PbPPO5 (B) in ‘Huangguan’ pear core during cold storage and shelf-life periods

2.4 AVG處理對(duì)‘黃冠’梨果心LOX和PLD基因表達(dá)的影響

180 d時(shí)，‘黃冠’梨果心中PbLOX1和PbLOX5表達(dá)量達(dá)到峰值，貨架期表達(dá)量隨之下降（圖7）。采前AVG處理對(duì)PbLOX1的表達(dá)無明顯影響，但可有效抑制PbLOX5在180 d和（180+7）d時(shí)的表達(dá)。PbPLD4在貯藏期表達(dá)量降低，AVG處理顯著抑制了采收時(shí)（0 d）和冷藏期（180 d）‘黃冠’梨果心PbPLD4的表達(dá)，但對(duì)貨架期（（180+7）d）該基因的表達(dá)無明顯作用（圖8）。

圖7 采前AVG處理對(duì)‘黃冠’梨冷藏和貨架期果心PbLOX1（A）和PbLOX5（B）相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.7 Effect of preharvest AVG treatment on relative expression levels of PbLOX1 (A) and PbLOX5 (B) in ‘Huangguan’ pear core during cold storage and shelf-life periods

圖8 采前AVG處理對(duì)‘黃冠’梨冷藏和貨架期果心PbPLD4相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.8 Effect of preharvest AVG treatment on relative expression level of PbPLD4 in ‘Huangguan’ pear core during cold storage and shelf-life periods

2.5 ‘黃冠’梨果心褐變指數(shù)與酚類物質(zhì)以及相關(guān)基因表達(dá)量相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示（表2），‘黃冠’梨果心褐變指數(shù)與綠原酸含量顯著正相關(guān)（r＝0.475）、與熊果苷（r＝0.650）以及總酚（r＝0.714）含量極顯著正相關(guān)；與PPO活性顯著正相關(guān)（r＝0.502），與PbPAL1（r＝0.775）、PbPAL2（r＝0.786）、PbPPO1（r＝0.827）、PbPPO5（r＝0.806）、PbLOX1（r＝0.655）和PbLOX5（r＝0.813）表達(dá)量極顯著正相關(guān)；與PbPLD4（r＝-0.590）表達(dá)量極顯著負(fù)相關(guān)。

表2 ‘黃冠’梨果心褐變指數(shù)與酚類物質(zhì)以及相關(guān)基因表達(dá)量的相關(guān)系數(shù)Table 2 Correlation coefficients of core browning index with phenol contents and related gene expression

3 討論

乙烯在促進(jìn)果實(shí)的成熟、形成特有的色澤和風(fēng)味具有重要的作用，但同時(shí)又引起果實(shí)衰老和品質(zhì)劣變[3-4]。AVG作為一種乙烯生成抑制劑，采前處理果實(shí)不僅可以減少落果、延長采收期，還可維持果實(shí)貯藏期品質(zhì)[6-18]。本實(shí)驗(yàn)通過在‘黃冠’梨采前噴施不同濃度AVG，延緩了‘黃冠’梨在長期貯藏后硬度的下降、保持了較高的SSC以及TA含量，并可有效抑制果皮褐斑和果心褐變的發(fā)生（圖2），其中以200 mg/L AVG處理效果最為明顯。說明采前噴施AVG對(duì)于維持‘黃冠’梨貯藏品質(zhì)、延緩果實(shí)衰老具有良好作用。

研究認(rèn)為，果實(shí)組織酶促褐變的原因之一是細(xì)胞的膜系統(tǒng)受到損傷，細(xì)胞區(qū)隔化被打破，細(xì)胞中的酚類物質(zhì)被PPO氧化為褐色的醌類物質(zhì)[32-34]。梨果實(shí)中綠原酸被認(rèn)為是PPO酶促褐變的底物之一[19,32]，而‘黃冠’梨果心中含量最高的兩種酚類物質(zhì)為熊果苷和綠原酸[35]。本研究中，200 mg/L AVG處理的‘黃冠’梨果心熊果苷和總酚含量在貨架期（（180+7）d）顯著高于對(duì)照果實(shí)（圖3A、C）；200 mg/L AVG處理下果心綠原酸含量在整個(gè)貯藏期都顯著高于對(duì)照果實(shí)（圖3B）。說明酚類物質(zhì)在‘黃冠’梨果心褐變時(shí)作為底物被消耗，而AVG處理在一定程度上減少了酚類物質(zhì)被氧化。PAL是苯丙氨酸途徑的限速酶，也是催化苯丙烷類代謝途徑第一步反應(yīng)的酶[36-37]。本研究中發(fā)現(xiàn)PbPAL1、PbPAL2基因相對(duì)表達(dá)量與果心褐變指數(shù)極顯著相關(guān)（表2），這與Cheng Yudou[20]以及韓艷文[38]等在鴨梨果心褐變中的研究結(jié)果一致。

PPO廣泛存在于生物體內(nèi)，能夠催化酚類物質(zhì)氧化形成醌，醌再進(jìn)一步聚合成黑色素[19]。PPO活性的升高以及PPO基因表達(dá)的上調(diào)與梨果心褐變密切相關(guān)[20-21,30]。在本研究中，AVG顯著降低了PPO活性（圖5）以及PbPPO1與PbPPO5的轉(zhuǎn)錄水平（圖6）。特別是PbPPO1和PbPPO5表達(dá)量的變化與果心褐變的發(fā)生同步（圖2B、圖6），表明這兩個(gè)基因可能在‘黃冠’梨果心褐變的引發(fā)中起著相對(duì)重要的作用。此外，AVG處理果實(shí)熊果苷、綠原酸以及總酚含量僅在（180+7）d時(shí)均顯著高于對(duì)照果心（圖3）；而果心褐變更加嚴(yán)重的對(duì)照果實(shí)PPO活性在整個(gè)貯藏期間均高于AVG處理果實(shí)（圖5）。這一結(jié)果可能與酚類物質(zhì)的生物合成和氧化過程的整體效應(yīng)有關(guān)，進(jìn)一步表明在梨果心褐變過程中PPO可能具有更為重要的作用。

LOX和PLD是兩種與細(xì)胞膜損傷有關(guān)的重要酶，可通過氧化游離的二烯和三烯脂肪酸，導(dǎo)致活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生[24-28]。ROS啟動(dòng)脂質(zhì)分解以及果實(shí)衰老和褐變過程[39-41]。有研究發(fā)現(xiàn)，AVG可以通過抑制PLD活性進(jìn)而減少細(xì)胞編程性凋亡[42]。在蘋果[43]和桃[44]中發(fā)現(xiàn)采前AVG處理可抑制LOX活性。但AVG對(duì)于細(xì)胞膜損傷在基因水平的調(diào)控鮮有報(bào)道。在本研究中，采前AVG處理下調(diào)了PbLOX5和PbPLD4的表達(dá)（圖7B、圖8），說明AVG處理可以避免膜功能的喪失，并有可能保護(hù)膜脂免受氧化損傷。PbLOX5在‘黃冠’梨冷藏時(shí)表達(dá)量顯著升高，與果心褐變變化趨勢(shì)一致；而PbPLD4在貯藏期表達(dá)量下降，說明了PbLOX5是‘黃冠’梨果心褐變過程中與膜損傷相關(guān)的關(guān)鍵基因。

總之，采前噴施AVG可維持‘黃冠’梨長期貯藏品質(zhì)，有效抑制果面褐斑和果心褐變的發(fā)生，其中以200 mg/L AVG效果最好。‘黃冠’梨果實(shí)在長期貯藏時(shí)果心發(fā)生褐變，同時(shí)熊果苷、綠原酸以及總酚含量增加，PPO活性升高；PbPAL1、PbPAL2、PbPPO1、PbPPO5、PbLOX1以及PbLOX5在冷藏期間表達(dá)量升高，貨架期表達(dá)量隨之下降，AVG可顯著抑制PbPAL1、PbPAL2、PbPPO1、PbPPO5以及PbLOX5的表達(dá)。