藤石松的生物堿類成分研究

陳燁琪，潘亞茹，卓 越，張一帆 ，顧繼洪*

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技創(chuàng)新中心，廣東 廣州 510405

2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510405

3.廣東省中醫(yī)臨床研究院，廣東 廣州 510405

藤石松Lycopodiastrumcasuarinoides(Spring)Holub 又名“舒筋草”，為石松科藤石松屬的單種屬植物，生于海拔100～3 100 m 的林下、林緣、灌叢下或溝邊，主要分布于熱帶與亞熱帶地區(qū)，在我國華東、華南、華中及西南大部分省區(qū)廣泛分布，能祛風(fēng)除濕、舒筋活血，主治跌打損傷、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、月經(jīng)不調(diào)等[1-2]。石松堿類化合物是從石松科、石杉科及其近緣親屬植物中分離得到的一類具有生源相同、結(jié)構(gòu)相似且骨架豐富多樣的生物堿，其基本骨架結(jié)構(gòu)一般由16 個碳原子的吡啶環(huán)或吡啶酮環(huán)構(gòu)成[3]。近年來，石松生物堿因其具有奇特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和豐富多樣的生物活性（如乙酰膽堿酯酶抑制活性、細胞毒性和神經(jīng)保護活性等）而受到眾多化學(xué)家和藥理學(xué)家的廣泛關(guān)注[4-12]。其中，石杉堿甲作為石松堿家族的明星分子，具有強效、可逆的乙酰膽堿酯酶抑制活性，已被美國食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)為改善記憶力的膳食補充劑，在國內(nèi)則用于重癥肌無力和中輕度阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）患者的臨床治療，是目前較有前景的AD 治療藥物[3]。為了進一步闡明藤石松的生物堿類成分，本課題組對該植物的總生物堿部位進行研究，從中分離得到11 個石松堿類化合物，分別鑒定為6-羥基-β-玉柏堿（6-hydroxy-β-obscurine，1）、去-N-甲基- β-玉柏堿（des-N-methyl-β-obscurine，2）、casuarine B（3）、石杉堿乙（huperzine B，4）、casuarinine B（5）、β-玉柏堿（β-obscurine，6）、蛇足石杉堿（huperzinine，7）、N-demethylhuperzinine（8）、石杉堿丙（ huperzine C，9）、8,15-dihydrohuperzinine（10）、casuarinine I（11）。其中，化合物1 為新化合物，結(jié)構(gòu)式見圖1。

1 儀器與材料

Ascend 400 型核磁共振波譜儀（德國Bruker 公司）；JASCO V-550 型紫外/可見光譜儀（北京佳斯科儀器有限公司）；JASCO FT/IR-4600 Plus Fourier Transform IR 光譜儀（北京佳斯科儀器有限公司）；N-1300 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）；LC-2030C 分析型高效液相（日本Shimadzu 公司）；G1361A 1200 型半制備型高效液相（美國安捷倫科技有限公司）；5600 LC-MS 質(zhì)譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；Agilent Gemini S 單晶衍射儀（美國安捷倫科技有限公司）；JASCO P-1020 旋光儀（北京佳斯科儀器有限公司）；柱色譜硅膠（青島海洋化工有限公司）；HSGF254 型TLC 用硅膠GF254高效預(yù)制板（煙臺化學(xué)工業(yè)研究所）；柱色譜用Sephadex LH-20 填料（Amershanm Biosciences 公司）；Xbridge BEH C18制備柱（250 mm×10 mm，5 μm，美國Waters 公司）；核磁用氘代試劑（美國CIL 公司）；乙醇、石油醚、醋酸乙酯、二氯甲烷等均為分析純（天津富宇公司和山東禹王公司）；乙腈、甲醇為色譜純（北京邁瑞達科技有限公司）。

實驗用藤石松樣品于2020 年11 月購買自廣東省揭陽市，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技創(chuàng)新中心王文彩博士鑒定為藤石松L.casuarinoides(Spring) Holub，憑證標(biāo)本（2020100201）存放于廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技創(chuàng)新中心。

2 提取與分離

將藤石松的地上部分（50.0 kg）干燥后粉碎，并在室溫下用95%乙醇（140 L）提取3 次，每次72 h。乙醇提取物（7.55 kg）加水混懸，用10%鹽酸酸化至pH 3，并用二氯甲烷萃取除去中性組分。酸水層用NH3·H2O 調(diào)節(jié)至pH 9～10 后，用二氯甲烷萃取，減壓濃縮以獲得總生物堿部位（54.63 g）?？偵飰A部位經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢測合并相同部分，得到10 個流分（Fr.1～10）。

Fr.1（7.35 g）經(jīng)ODS 柱，甲醇-水（10∶90→100∶0）溶劑系統(tǒng)進行梯度洗脫，得到5 個組分（Fr.1-1～1-5）。Fr.1-2（0.24 g）經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜（甲醇）純化，得到3 個流分Fr.1-2-1～1-2-3。Fr.1-2-2 以乙腈-堿水（77∶23，堿水為0.02%二乙胺水溶液）為流動相，經(jīng)半制備HPLC 分離得到化合物1（3.56 mg，tR＝39.5 min）、11（8.31 mg，tR＝40.1 min）。Fr.1-2-3 以乙腈-堿水（75∶25）為流動相，經(jīng)半制備HPLC 分離得到化合物4（3.74 mg，tR＝15.7 min）。Fr.1-3 以乙腈-堿水（70∶30）為流動相，經(jīng)半制備HPLC 分離得到化合物10（5.93 mg，tR＝30.4 min）。

Fr.2（1.5 g）經(jīng)ODS 柱，甲醇-水（10∶90→100∶0）溶劑系統(tǒng)進行梯度洗脫，得到3 個組分Fr.2-1～2-3。Fr.2-1（0.13 g）經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜分離，甲醇洗脫得到3 個流分Fr.2-1-1～2-1-3。Fr.2-1-1 以乙腈-堿水（70∶30）為流動相，經(jīng)半制備HPLC 分離得到化合物6（4.30 mg，tR＝36.0 min）。Fr.2-2（0.16 g）經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇1∶1）和半制備HPLC（乙腈-堿水75∶25）分離得到化合物9（43.33 mg，tR＝9.9 min）。

Fr.3（1.23 g）經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜分離，以甲醇為溶劑進行洗脫，得到3 個流分Fr.3-1～3-3。Fr.3-1（0.31 g）經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇1∶1）和半制備HPLC（乙腈-堿水75∶25）分離得到化合物2（4.17 mg，tR＝10.9 min）。Fr.3-2（0.29 g）經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜（甲醇）和半制備HPLC（乙腈-堿水75∶25）分離得到化合物3（9.79 mg，tR＝12.8 min）、5（5.17 mg，tR＝22.3 min）、7（9.79 mg，tR＝22.0 min）、8（2.9 mg，tR＝24.3 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色針晶（甲醇）。[α]25D＋78.0 (c0.10,CH3CN)；mp 269～270 ℃。HR-ESI-MS 譜給出準(zhǔn)分子離子峰m/z: 289.190 1 [M＋H]+（計算值289.191 1），確定化合物1 的分子式為C17H24N2O2，計算其不飽和度為7。紫外光譜（UV）顯示在232、318 nm 處有特征性吸收。紅外光譜（IR）顯示其結(jié)構(gòu)中存在羥基（3 411 cm?1）、羰基（1 667 cm?1）和雙鍵（1 607 cm?1）等特征信號峰。

化合物1 的1H-NMR (400 MHz, CD3OD) 譜顯示2 個烯烴質(zhì)子信號δH7.85 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3),6.46 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2)；1 個連氧次甲基氫信號δH4.75 (1H, d,J= 6.0 Hz, H-6) 和2 個甲基氫信號δH2.59 (3H, s, N-Me), 0.84 (3H, d,J= 6.3 Hz, H-16)。13C-NMR 結(jié)合DEPT-135 譜顯示出17 個碳信號，包括4 個季碳信號（δC59.9, 146.1, 121.7, 165.1）、6 個次甲基碳信號（δC27.6, 38.1, 41.7, 66.5, 119.5,142.2）、5 個亞甲基碳信號（δC20.3, 27.3, 36.3, 47.5,51.6）和2 個甲基碳信號（δC22.5, 36.3）?；衔?的碳氫信號歸屬見表1。

表1 化合物1 的1H-NMR 和13C-NMR 數(shù)據(jù) (400/100 MHz, CD3OD)Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 1(400/100 MHz, CD3OD)

將化合物1 與β-玉柏堿[13]的1H-NMR 和13CNMR 數(shù)據(jù)進行對比，發(fā)現(xiàn)兩者的化學(xué)位移相似，不同之處在于化合物1 的C-6 位化學(xué)位移明顯向低場移動（δC66.5），提示其C-6 位連有氧原子。1H-1H COSY 譜顯示化合物1 的結(jié)構(gòu)中存在如圖2 所示的兩組自旋體系。在HMBC 譜中，H-2 與C-1/C-4，H-3 與C-1/C-5/C-13，H-6 與C-4/C-5/C-8/ C-12，H-16 與C-8/C-14/C-15，N-CH3與C-9/C-13 之間分別有遠程相關(guān)（圖2），證實了上述推論，從而建立了化合物1 的平面結(jié)構(gòu)。

圖2 化合物1 的關(guān)鍵1H-1H COSY 和HMBC 相關(guān)信號Fig.2 Key 1H-1H COSY and HMBC correlations of compound 1

為了確定化合物1 的絕對構(gòu)型，在其甲醇溶液中培養(yǎng)出單晶，并通過單晶X-射線衍射實驗獲得了其單晶結(jié)構(gòu)（圖3）。由于其Flack 常數(shù)為0.05(10)，因此確定化合物的絕對構(gòu)型為6R,7R,12R,13R,15R命名為6-羥基-β-玉柏堿（6-hydroxy-β-obscurine）。

圖3 化合物1 的單晶ORTEP 圖Fig.3 X-ray ORTEP drawing of compound 1

化合物1 的晶體學(xué)數(shù)據(jù)存于在英國劍橋晶體學(xué)數(shù)據(jù)中心（Cambridge Crystallographic Data Centre，CCDC），該數(shù)據(jù)可通過CCDC 網(wǎng)站www.ccdc.cam.ac.uk 進行索取,發(fā)表號為CCDC-2315044?；衔?的晶體學(xué)參數(shù)：分子式C17H24N2O2，相對分子質(zhì)量Mr= 288.38，斜方晶系，P212121空間群；晶胞參數(shù)a= 7.770 80(10) nm，b= 12.859 0(2) nm，c= 14.565 8(2)nm，α=β=γ= 90°；V= 1 455.48(4) nm3，T=149.99(10) K，晶胞內(nèi)分子數(shù)Z= 4，計算單晶密度（ρcalc）= 1.316 g/cm3，F(xiàn)(000) = 624。收集的衍射點數(shù)為11 403（9.17≤θ≤147.89），可觀測的衍射點數(shù)為2 822 [I＞2σ(I)]。可觀測的衍射點的R為0.031 5，可觀測的衍射點的最終R指數(shù)（RW）為0.082 7，擬合優(yōu)度（S）為1.060，F(xiàn)lack 常數(shù)是0.05(10)。

化合物2：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 259.181 3[M＋H]+（計算值259.180 5），分子式為C16H22N2O。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.64 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.43 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2), 2.88 (1H, dd,J= 19.0, 7.1 Hz, H-6a), 2.80 (1H, m, H-9a), 2.49 (1H,m, H-9b), 2.35 (1H, d,J= 19.0 Hz, H-6b), 2.08 (1H, m,H-7), 1.76 (1H, brd,J= 9.0 Hz, H-8a), 1.70～1.51 (5H,overlapped, H-10a, 10b, 12, 14a, 15), 1.36～1.20 (4H,overlapped, H-8b, 11a, 11b, 14b), 0.86 (3H, d,J= 5.8 Hz,H-16)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 165.2 (C-1),118.4 (C-2), 140.9 (C-3), 118.5 (C-4), 146.6 (C-5), 30.6(C-6), 34.2 (C-7), 44.1 (C-8), 42.0 (C-9), 26.9 (C-10), 26.5(C-11), 44.2 (C-12), 56.8 (C-13), 49.4 (C-14), 27.0 (C-15),22.2 (C-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[14]，故鑒定化合物2 為去-N-甲基-β-玉柏堿。

化合物3：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 287.176 3[M＋H]+（計算值287.175 4），分子式為C17H22N2O2。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.83 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.32 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2), 5.41 (1H, brd,J= 4.9 Hz, H-8), 3.34 (1H, td,J= 10.9, 5.1 Hz, H-11),2.91 (1H, overlapped, H-7), 2.87 (1H, overlapped, H-6a), 2.62 (1H, m, H-9a), 2.59 (1H, overlapped, H-14a),2.57 (3H, s,N-Me), 2.49 (1H, m, H-9b), 2.27 (1H, d,J= 16.7 Hz, H-6b), 1.79 (1H, dd,J= 10.4, 3.3 Hz, H-12), 1.70 (1H, m, H-14b), 1.67 (1H, m, H-10b), 1.49(3H, s, H-16), 1.43 (1H, m, H-10a)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 165.7 (C-1), 118.2 (C-2), 142.8 (C-3), 122.6 (C-4), 144.5 (C-5), 30.0 (C-6), 30.7 (C-7),125.5 (C-8), 50.3 (C-9), 29.9 (C-10), 68.6 (C-11), 41.3(C-12), 59.3 (C-13), 44.1 (C-14), 133.8 (C-15), 23.2 (C-16), 37.7 (N-Me)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[15]，故鑒定化合物3 為casuarine B。

化合物4：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 257.164 9[M＋H]+（計算值257.164 8），分子式為C16H20N2O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 7.70 (1H, d,J= 9.4 Hz,H-3), 6.45 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2), 5.45 (1H, brd,J=5.5 Hz, H-8), 2.86 (1H, dd,J= 17.8, 5.5 Hz, H-6a), 2.76(1H, d,J= 13.3 Hz, H-9b), 2.44 (1H, d,J= 17.8 Hz, H-6b), 2.34 (1H, m, H-7), 2.30 (1H, dd,J= 13.0, 3.3 Hz,H-9a), 2.05 (1H, d,J= 16.9 Hz, H-14b), 1.85 (1H, d,J= 16.9 Hz, H-14a), 1.69 (1H, dt,J= 12.4, 3.8 Hz, H-12),1.61～1.54 (2H, overlapped, H-10a, 11b), 1.52 (3H, s, H-16), 1.45 (1H, m, H-10b), 1.24 (1H, m, H-11a)；13C-NMR(100 MHz, CDCl3)δ: 165.5 (C-1), 117.8 (C-2), 140.6 (C-3), 118.2 (C-4), 143.5 (C-5), 29.4 (C-6), 34.3 (C-7),126.1 (C-8), 47.8 (C-9), 25.2 (C-10), 27.9 (C-11), 40.4(C-12), 53.3 (C-13), 41.7 (C-14), 132.3 (C-15), 23.0 (C-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[16]，故鑒定化合物4為石杉堿乙。

化合物5：淡黃色粉末。HR-ESI-MSm/z: 301.191 8[M＋H]+（計算值301.191 1），分子式為C18H24N2O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 13.17 (1H, s, N-H),7.82 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.42 (1H, d,J=9.4 Hz,H-2), 5.41 (1H, brd,J= 4.8 Hz, H-8), 3.33 (3H, s,OMe), 3.04 (1H, td,J= 10.7, 4.8 Hz, H-11), 2.95 (1H, m,H-7), 2.93 (1H, m, H-6a), 2.70（1H, m, H-9a), 2.60 (3H,s,N-Me), 2.59 (1H, overlapped, H-14a), 2.58 (1H,overlapped, H-9b), 2.45 (1H, d,J= 17.2 Hz, H-6b),1.88 (1H, dd,J= 10.6, 3.4 Hz, H-12), 1.71 (2H,overlapped, H-10a, 14b), 1.58 (1H, td,J= 12.3, 3.4 Hz,H-10b), 1.53 (3H, s, H-16)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 165.5 (C-1), 117.8 (C-2), 141.3 (C-3), 121.0 (C-4),143.2 (C-5), 30.3 (C-6), 30.8 (C-7), 124.7 (C-8), 49.1 (C-9), 24.1 (C-10), 77.4 (C-11), 38.5 (C-12), 58.1 (C-13),43.3 (C-14), 132.3 (C-15), 23.2 (C-16), 37.5 (N-Me), 56.1(O-Me)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[12]，故鑒定化合物5 為casuarinine B。

化合物6：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 273.195 3[M＋H]+（計算值273.196 1），分子式為C17H24N2O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 13.12 (1H, s, N-H),7.81 (1H, d,J= 9.3 Hz, H-3), 6.43 (1H, d,J= 9.3 Hz,H-2), 2.95 (1H, dd,J= 18.6, 6.9 Hz, H-6a), 2.69 (1H,t,J= 13.4 Hz, H-9a), 2.56 (1H, overlapped, H-9b), 2.56(3H, s,N-Me), 2.40 (1H, d,J= 18.6 Hz, H-6b), 2.01(1H, brs, H-7), 1.84 (2H, m, H-8), 1.78 (1H, m, H-10a),1.67 (1H, d,J= 12.8 Hz, H-14a), 1.47～1.10 (6H,overlapped, H-10b, 11a, 11b, 12, 14b, 15), 0.81 (3H, d,J= 5.2 Hz, H-16)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ:165.1 (C-1), 117.3 (C-2), 141.2 (C-3), 120.0 (C-4),144.4 (C-5), 29.8 (C-6), 33.4 (C-7), 34.6 (C-8), 50.5 (C-9), 19.4 (C-10), 26.6 (C-11), 46.5 (C-12), 58.1 (C-13),43.3 (C-14), 26.6 (C-15), 22.3 (C-16), 36.3 (N-Me)?；衔锝Y(jié)構(gòu)與文獻報道一致[13]，故鑒定化合物6 為β-玉柏堿。

化合物7：白色針晶（甲醇）。HR-ESI-MSm/z:271.180 6 [M＋H]+（計算值271.180 5），分子式為C17H22N2O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 13.28 (1H,s, N-H), 7.64 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.43 (1H, d,J=9.4 Hz, H-2), 5.93 (1H, dt,J= 17.0, 10.1 Hz, H-11),5.33 (1H, brd,J= 5.4 Hz, H-8), 5.17 (1H, dd,J=17.0, 2.0 Hz, H-10a), 5.02 (1H, dd,J= 10.1, 2.0 Hz, H-10b), 2.95 (1H, dd,J= 17.7, 5.2 Hz, H-6a), 2.83 (1H,dd,J= 10.1, 4.0 Hz, H-12), 2.76 (1H, d,J= 17.3 Hz,H-14b), 2.39 (6H, s, 2N-Me), 2.41 ～2.36 (2H,overlapped, H-6b, 7), 1.59 (1H, d,J= 17.3 Hz, H-14a),1.51 (3H, s, H-16)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ:165.3 (C-1), 117.6 (C-2), 140.3 (C-3), 118.8 (C-4),143.0 (C-5), 29.2 (C-6), 38.8 (C-7), 124.6 (C-8), 116.4(C-10), 142.5 (C-11), 45.9 (C-12), 59.9 (C-13), 44.5 (C-14), 134.3 (C-15), 23.0 (C-16), 39.6 (2N-Me)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[17]，故鑒定化合物7 為蛇足石杉堿。

化合物 8：淡黃色粉末。HR-ESI-MSm/z:257.165 1 [M＋H]+（計算值257.164 8），分子式為C16H20N2O。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.78 (1H,d,J= 9.5 Hz, H-3), 6.38 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-2), 5.81(1H, ddd,J= 17.0, 10.3, 9.4 Hz, H-11), 5.47 (1H, brd,J= 5.3 Hz, H-8), 5.34 (1H, dd,J= 17.0, 2.0 Hz, H-10a),5.20 (1H, dd,J= 10.3, 2.0 Hz, H-10b), 2.83 (1H, dd,J= 17.8, 5.4 Hz, H-6a), 2.76 (1H, dd,J= 9.4, 4.2 Hz,H-12), 2.65 (1H, d,J= 17.1 Hz, H-14a), 2.55 (1H, m,H-7), 2.36 (3H, s,N-Me), 2.31 (1H, d,J= 17.8 Hz, H-6b), 1.69 (1H, d,J= 17.1 Hz, H-14b), 1.57 (3H, s, H-16)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 165.5 (C-1),118.6 (C-2), 142.2 (C-3), 119.4 (C-4), 144.4 (C-5), 30.2(C-6), 38.2 (C-7), 126.1 (C-8), 118.6 (C-10), 138.2 (C-11), 45.5 (C-12), 57.1 (C-13), 42.6 (C-14), 134.5 (C-15), 22.9 (C-16), 28.5 (N-Me)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[18]，故鑒定化合物8 為N-demethylhuperzinine。

化合物9：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 243.150 1[M＋H]+（計算值243.149 2），分子式為C15H18N2O。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.79 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.36 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2), 5.69 (1H, dt,J= 16.9, 9.9 Hz, H-11), 5.48 (1H, br d,J= 5.5 Hz, H-8), 5.27 (1H, dd,J= 16.9, 2.2 Hz, H-10a), 5.17 (1H, dd,J= 10.2, 2.2 Hz, H-10b), 2.83 (1H, dd,J= 17.9, 5.3 Hz,H-6a), 2.52 (1H, m, H-7), 2.45 (1H, dd,J= 9.4, 4.0 Hz, H-12), 2.30 (1H, d,J= 17.9 Hz, H-6b), 2.25 (1H,d,J= 17.1 Hz, H-14a), 1.96 (1H, d,J= 17.1 Hz, H-14b), 1.53 (3H, s, Me-16)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 165.6 (C-1), 120.0 (C-2), 142.5 (C-3), 122.2(C-4), 143.5 (C-5), 30.2 (C-6), 37.3 (C-7), 126.6 (C-8),118.4 (C-10), 137.8 (C-11), 50.8 (C-12), 52.3 (C-13),48.2 (C-14), 134.3 (C-15), 22.9 (C-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[12]，故鑒定化合物9 為石杉堿丙。

化合物10：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 273.195 2[M＋H]+（計算值273.196 1），分子式為C17H24N2O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 13.18 (1H, s, N-H),7.64 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.45 (1H, d,J= 9.4 Hz,H-2), 5.94 (1H, dt,J= 17.0, 10.0 Hz, H-11), 5.16 (1H,dd,J= 17.0, 2.0 Hz, H-10a), 4.95 (1H, dd,J= 10.0, 2.0 Hz, H-10b), 3.05 (1H, dd,J= 18.5, 6.6 Hz, H-6a), 2.73(1H, dd,J= 10.0, 3.2 Hz, H-12), 2.41 (6H, s, 2N-Me),2.26 (1H, d,J= 18.5 Hz, H-6b), 2.05 (1H, m, H-7), 1.65(1H, m, H-8b), 1.57 (1H, m, H-14a), 1.33～1.29 (1H,m, H-14b), 1.28～1.16 (2H, overlapped, H-8a, 15), 0.81(3H, d,J= 5.9 Hz, Me-16)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 164.9 (C-1), 117.4 (C-2), 142.0 (C-3), 118.9 (C-4),144.7 (C-5), 29.8 (C-6), 37.9 (C-7), 42.5 (C-8), 115.2 (C-10), 141.6 (C-11), 47.8 (C-12), 61.1 (C-13), 47.5 (C-14),27.3 (C-15), 22.2 (C-16), 39.7 (2N-Me)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[17]，故鑒定化合物 10 為 8,15-dihydrohuperzinine。

化合物 11：淡黃色粉末。HR-ESI-MSm/z:271.181 1 [M＋H]+（計算值271.180 5），提示其分子式為C17H22N2O。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ:7.68 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.36 (1H, d,J= 9.4 Hz,H-2), 5.53 (1H, m, H-8), 2.90 (1H, dd,J= 9.6, 8.2 Hz,H-9a), 2.80 (1H, dd,J= 17.6, 5.1 Hz, H-6a), 2.71 (1H,m, H-7), 2.62 (3H, s,N-Me), 2.47 (1H, d,J= 16.4 Hz,H-14a), 2.36 (1H, d,J= 17.9 Hz, H-6b), 2.33 (1H, dd,J= 9.4, 7.5 Hz, H-9b), 2.13 (1H, d,J= 16.4 Hz, H-14b),1.89 (1H, m, H-11), 1.64 (1H, overlapped, H-12), 1.64(3H, s, Me-16), 1.07 (1H, d,J= 6.5 Hz, H-10)；13C-NMR(100 MHz, CD3OD)δ: 165.6 (C-1), 117.8 (C-2), 144.0 (C-3), 121.9 (C-4), 142.4 (C-5), 29.3 (C-6), 31.5 (C-7), 126.5(C-8), 63.5 (C-9), 17.7 (C-10), 33.0 (C-11), 52.6 (C-12),64.0 (C-13), 42.8 (C-14), 135.6 (C-15), 23.4 (C-16), 38.5(N-Me)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[12]，故鑒定化合物11 為casuarinine I。

4 討論

本研究綜合運用多種色譜和波譜技術(shù)，對藤石松總生物堿部位進行了化學(xué)成分研究，共分離鑒定了11 個化合物，均為石松生物堿類化合物。其中，化合物1 為新化合物，命名為6-羥基-β-玉柏堿?，F(xiàn)代藥理研究表明，石杉堿甲具有高效低毒、可逆并選擇性抑制乙酰膽堿酯酶的活性[3]，這類生物堿已引起了國內(nèi)外科學(xué)家注意。據(jù)文獻報道，石松生物堿類成分表現(xiàn)出良好的抗膽堿酯酶活性[19]，casuarine B（3）、N-demethylhuperzinine（8）和casuarinine I（11）對乙酰膽堿酯酶表現(xiàn)出一定的的抑制作用，IC50值分別為46.40[15]、15.0、12.1 μmol/L[12]；石杉堿丙（9）和石杉堿甲兩者在抗膽堿酯酶作用方面可能有一定的交互協(xié)同作用[20]。以上研究結(jié)果進一步豐富了藤石松的化學(xué)成分內(nèi)涵，對闡明其藥效物質(zhì)提供了數(shù)據(jù)支持，也為其后續(xù)的開發(fā)應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突