長鞭紅景天中脂肪族類化合物及抗瘧活性研究

茍 亮 ，卯 錦 ，劉博超 ，雷 丹 ，孫 河 ，劉 蓉 ，肖朝江 ，姜 北 *

1.云南省滇西抗病原植物資源篩選研究重點實驗室，云南 大理 671000

2.大理大學藥學院&藥物研究所，云南 大理 671000

長鞭紅景天Rhodiolafastigiata(Hook.f.et Thoms.) S.H.Fu，別名寬葉紅景天、豎枝景天、大理景天，屬于紅景天屬植物，為多年生草本，產(chǎn)于我國西藏、云南、四川等地，生于海拔2 500～5 400 m 的高山石礫中，在克什米爾地區(qū)、尼泊爾、錫金和不丹也有分布[1]。在《四川省藏藥材標準（2020 年版）》中記載長鞭紅景天味澀、甘、苦，性涼；有清熱、利肺的功能，用于治療感冒引起的肺熱、氣管炎、口臭。在《云南中藥資源名錄》中記載其有治療跌打的效用，亦能夠治療血瘀、腫脹和創(chuàng)傷[2]。近年來，有關(guān)長鞭紅景天的化學成分研究較少，大多是利用質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對化學成分進行分析，其藥理研究亦少見。本課題組前期對該植物進行抗瘧活性篩選發(fā)現(xiàn)長鞭紅景天具有一定抗瘧活性，且該植物主要生長于西南高海拔寒冷地區(qū)，由于脂肪族化合物是高寒地區(qū)植物所含有的特征性成分之一，具有保護植物防止凍害等多種重要生理功能，具有一定的研究價值。為此，本研究針對長鞭紅景天中的脂肪族類化合物進行系統(tǒng)研究，從長鞭紅景天醇提物中分離得到15 個化合物，分別鑒定為10α-葫蘆-7,24二烯醇（10α-cucurbita-7,24-diene-3β-ol，1）、β-香樹脂醇乙酸酯（β-amyrin acetate，2）、豆甾烷-3-酮（stigmastan-3-one，3）、豆甾-4-烯-3-酮（stigmast-4-en-3-one，4）、β-谷甾醇（β-sitosterol，5）、schleicheol 1（6）、豆甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮[stigmast-4,6,8(14),22-tetraen-3-one，7]、(22E,24R)-5α,8αepidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol（8）、豆甾-4-烯-6β-醇-3-酮（stigmast-4-en-6β-ol-3-one，9）、3β-羥基豆甾-5-烯-7-酮（7-oxositosterol，10）、6α-羥基豆甾-4-烯-3-酮（stigmast-4-ene-6α-ol-3-one，11）、豆甾烷-3,6-二醇（stigmastane-3,6-diol，12）、正二十二烷醇（1-docosanol，13）、二十四烷醇（tetracosanol，14）、去氫木香內(nèi)酯（dehydrocostus lactone，15）。其中化合物1 為新化合物，命名為表葫蘆二烯醇；化合物2、13 和14 為首次從該植物中分離得到，化合物3、4 和6～15 均為首次從紅景天屬中分離得到。利用本課題組資源，采用SYBR Green I 法對化合物的抗瘧活性進行篩選，發(fā)現(xiàn)化合物15 在50 μmol/L 下對惡性瘧原蟲3D7 株有一定抗瘧活性，抑制率達65.24%。

1 儀器與材料

Bruker Avance Ⅲ-400 核磁共振儀（德國布魯克公司，TMS 為內(nèi)標）；Dionex Ultimate 3000 型超高效液相色譜儀（美國戴安公司）；Bruker Daltonics MS系統(tǒng)（德國布魯克公司）；生物光學顯微鏡EX30（寧波舜宇儀器有限公司）；BSC-1000 II A2 型生物安全柜（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；varioskan LUX 多功能酶標儀（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；超純水機（上海和泰儀器有限公司）；5510E 型二氧化碳培養(yǎng)箱（美國NuAire 公司）；柱色譜用硅膠和GF254薄層色譜硅膠板（青島海洋化工廠）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；AL204 型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；MCI gel CHP-20/P120（75～150 μm，日本三菱公司）；Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠（瑞典 Amersham Biosciences 公司）；RP-18（40～75 μm，日本Fuji 公司）；環(huán)己烷（分析純，西隴科技有限公司）；異丙醇（分析純，上海強順化學試劑有限公司）；石油醚、氯仿、醋酸乙酯、丙酮、甲醇均為工業(yè)級重蒸后使用；DMSO（天津市科密歐化學試劑有限公司）；氯喹二磷酸鹽（美國Sigma 公司，批號BCBK7067V）；SYBR Green I（美國Molecular Probes 公司）。

本實驗所用惡性瘧原蟲（3D7 株）為中國科學院上海免疫與感染研究所江陸斌課題組贈予；所用植物樣品于2020 年9 月采自云南德欽，由大理大學藥學院張永增博士鑒定為長鞭紅景天Rhodiola fastigiata(Hook.f.& Thomson) S.H.Fu，植物標本（20200922-7）保存于大理大學云南省滇西抗病原植物資源篩選研究重點實驗室。

2 提取與分離

長鞭紅景天干燥全株9.17 kg，95%乙醇冷浸提取4 次，每次24 h，合并濾液，減壓濃縮得總浸膏1 792 g，經(jīng)硅膠柱依次用石油醚、醋酸乙酯、丙酮、甲醇進行固相萃取，得石油醚、醋酸乙酯、丙酮及甲醇4 個萃取部位，石油醚部位經(jīng)硅膠柱色譜以石油醚-醋酸乙酯（100∶1～0∶1）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并相同流分，得9 個組分Frs.1～9。組分Fr.4 用硅膠柱色譜分離，石油醚-醋酸乙酯（100∶1）洗脫，得化合物2（95 mg）；Fr.7 經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（100∶1）洗脫，薄層色譜檢識合并相同流分，得3 個流分Fr.7-1～7-3，F(xiàn)r.7-2 經(jīng)硅膠柱色譜（環(huán)己烷-醋酸乙酯90∶1、環(huán)己烷-丙酮60∶1）反復(fù)洗脫，得化合物3（12 mg）；Fr.8 經(jīng)硅膠柱色譜以石油醚-丙酮（100∶1）洗脫，得（Fr.8-1～8-5）5 個亞組分，F(xiàn)r.8-4 經(jīng)硅膠柱色譜（環(huán)己烷-丙酮140∶1）洗脫，得組分Fr.8-4-1～Fr.8-4-6，F(xiàn)r.8-4-6 再經(jīng)硅膠柱色譜（環(huán)己烷-異丙醇100∶1）洗脫，得Fr.8-4-6-1～8-4-6-3，F(xiàn)r.8-4-6-3又以環(huán)己烷-丙酮（100∶1～0∶1）多次硅膠柱色譜，得化合物13（10 mg）；組分Fr.8-3 經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮140∶1）洗脫，得Fr.8-3-1～Fr.8-3-8 這8 個亞組分，F(xiàn)r.8-3-4 再經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮32∶1）洗脫，得3 個組分Fr.8-3-4-1～8-3-4-3，F(xiàn)r.8-3-4-1 用石油醚-丙酮系統(tǒng)（32∶1）洗脫得（Fr.8-3-4-1-1～8-3-4-1-4）4 個流分，F(xiàn)r.8-3-4-1-1 再經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（氯仿-甲醇1∶1）洗脫，得化合物1（20 mg）。醋酸乙酯固相萃取部位經(jīng)硅膠柱色譜以氯仿-丙酮系統(tǒng)（1∶0～0∶1）梯度洗脫，得（Fr.A～H）8 個組分。組分Fr.A 用硅膠柱色譜分離，石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)（80∶1）洗脫，薄層色譜檢識并合并相同流分，得（Fr.A-1～A-9），9 個亞流分；Fr.A-7 經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯70∶1）及Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1）反復(fù)洗脫得化合物14（25 mg）；Fr.A-8 經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1）洗脫，薄層色譜法檢識合并相同組分，得到6 個流分（Fr.A-8-1～A-8-6），F(xiàn)r.A-8-4 經(jīng)硅膠柱色譜（純氯仿系統(tǒng)，石油醚-丙酮系統(tǒng)55∶1）反復(fù)洗脫得化合物4（64 mg），F(xiàn)r.A-8-5 經(jīng)硅膠柱色譜（純氯仿系統(tǒng)）洗脫得（Fr.A-8-5-1～Fr.A-8-5-5）5 個流分，F(xiàn)r.A-8-5-1 再經(jīng)RP-18 柱色譜（60%甲醇-水）洗脫得化合物15（27 mg）；Fr.B 用MCI 柱色譜（甲醇-水10%～100%）梯度洗脫得（Fr.B-1～B-9），9 個亞組分，F(xiàn)r.B-9 經(jīng)硅膠柱色譜石油醚-丙酮洗脫（6∶1）洗脫，得化合物5（500 mg）；Fr.B-8 經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮60∶1）洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識合并相同組分得（Fr.B-8-1～Fr.B-8-13）13 個亞組分，F(xiàn)r.B-8-8 經(jīng)多次硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)5∶1，氯仿-醋酸乙酯系統(tǒng)60∶1）洗脫，得化合物6（23 mg）；Fr.B-8-3 經(jīng)硅膠柱色譜以純氯仿系統(tǒng)洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識合并得（Fr.B-8-3-1～B-8-3-7），7 個流分，F(xiàn)r.B-8-3-2 再經(jīng)硅膠柱色譜（氯仿-丙酮80∶1）洗脫，得化合物7（14 mg）；Fr.B-9 經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜（氯仿-甲醇1∶1）洗脫，薄層色譜檢識合并相同組分得（Fr.B-9-1～B-9-3）3 個流分，F(xiàn)r.B-9-2 經(jīng)硅膠柱色譜（氯仿-丙酮系統(tǒng)30∶1）洗脫，薄層色譜檢識合并，得（Fr.B-9-2-1～B-9-2-5），5 個流分，F(xiàn)r.B-9-2-2 再經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（4∶1）洗脫，得化合物8（34 mg）；Fr.B-9-2-3 經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯4∶1、氯仿-醋酸乙酯10∶1）多次柱色譜分離，得化合物9（11 mg）、10（12 mg）、11（7 mg）。Fr.C 用硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮系統(tǒng)（80∶1～0∶1）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并相同流分，得13 個流分（Fr.C-1～C-13），F(xiàn)r.C-7 經(jīng)Sephadex LH-20（丙酮）洗脫，得化合物12（10 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 新化合物的鑒定

表1 化合物1 的1H-NMR 和13C-NMR 數(shù)據(jù) (400/100 MHz, CDCl3)Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 1 (400/100 MHz, CDCl3)

圖1 化合物1 的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structure of compound 1

3.2 已知化合物的鑒定

化合物2：無色針晶（氯仿），C32H52O2。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 5.17 (1H, t,J= 3.7 Hz, H-12),4.49 (1H, m, H-3), 2.04 (3H, s, -CH3CO), 1.93 (1H, m,H-8), 1.88 (1H, m, H-2a), 1.85 (1H, m, H-11a), 1.81(1H, m, H-2b), 1.78 (1H, m, H-16a), 1.76 (1H, m, H-15a), 1.75 (1H, m, H-11b), 1.70 (1H, m, H-1a), 1.69(1H, m, H-15b), 1.68 (1H, m, H-16b), 1.54 (1H, m, H-19a), 1.52 (2H, m, H-6), 1.50 (1H, m, H-7a), 1.44 (2H,m, H-22), 1.41 (1H, m, H-7b), 1.38 (1H, m, H-1b), 1.31(1H, m, H-21a), 1.27 (1H, m, H-9), 1.22 (1H, m, H-21b), 1.12 (3H, s, H-27), 1.10 (1H, m, H-19b), 1.08(1H, m, H-5), 0.96, 0.95 (each 3H, overlapped, H-25,26), 0.86, 0.86, 0.86, 0.86 (12H, overlapped, 4×CH3,H-23, 24, 29, 30), 0.82 (3H, s, H-28)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 38.3 (C-1), 23.6 (C-2), 80.9 (C-3), 37.7(C-4), 55.2 (C-5), 18.3 (C-6), 32.6 (C-7) 39.8 (C-8),47.6 (C-9), 37.1 (C-10), 23.5 (C-11), 121.6 (C-12),145.2 (C-13), 41.7 (C-14), 26.1 (C-15), 26.9 (C-16),32.5 (C-17), 47.2 (C-18), 46.8 (C-19), 31.1 (C-20), 34.7(C-21), 37.1 (C-22), 28.1 (C-23), 15.6 (C-24), 16.7 (C-25), 16.8 (C-26), 26.0 (C-27), 28.4 (C-28), 33.4 (C-29),23.7 (C-30), 171.0 (-CH3CO), 21.4 (-CH3CO)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[4]，故鑒定化合物2 為β-香樹脂醇乙酸酯。

化合物3：白色粉末（氯仿），C29H50O。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 2.35 (2H, m, H-2), 2.24 (2H, m,H-4), 1.82 (2H, m, H-1), 1.81 (1H, m, H-5), 1.76 (1H,m, H-12a), 1.67 (1H, m, H-16a), 1.66 (1H, m, H-7a),1.63 (1H, m, H-25), 1.60 (1H, m, H-16b), 1.55 (1H, m,H-14), 1.54 (1H, m, H-9), 1.43 (1H, m, H-7b), 1.42(1H, m, H-15a), 1.41 (1H, m, H-11a), 1.39 (1H, m, H-20), 1.36 (1H, m, H-11b), 1.34 (1H, m, H-22a), 1.31(1H, m, H-6a), 1.26 (2H, m, H-23), 1.23 (2H, m, H-28),1.20 (1H, m, H-6b), 1.17 (1H, m, H-22b), 1.14 (1H, m,H-17), 1.06 (1H, m, H-24), 1.00 (3H, s, H-19), 0.90(3H, d,J= 6.4 Hz, H-21), 0.82～0.85 (6H, m, H-26,29), 0.80 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-27), 0.67 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 38.7 (C-1), 38.4 (C-2),210.2 (C-3), 44.9 (C-4), 46.8 (C-5), 29.1 (C-6), 31.9 (C-7), 35.5 (C-8), 53.9 (C-9), 35.8 (C-10), 21.6 (C-11),40.0 (C-12), 42.7 (C-13), 56.3 (C-14), 24.4 (C-15), 28.4(C-16), 56.4 (C-17), 12.2 (C-18), 11.6 (C-19), 36.3 (C-20), 18.9 (C-21), 34.0 (C-22), 26.1 (C-23), 45.9 (C-24),29.2 (C-25), 19.9 (C-26), 19.1 (C-27), 23.2 (C-28), 12.1(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[5]，故鑒定化合物3 為豆甾烷-3-酮。

化合物4：白色粉末（氯仿），C29H48O。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 5.72 (1H, s , H-4) , 2.41 (2H, m,H-2), 2.35 (2H, m, H-6), 1.83 (2H, m, H-1), 1.67 (1H,m, H-16a), 1.62 (1H, m, H-25), 1.61 (1H, m, H-8), 1.60(1H, m, H-12a), 1.59 (1H, m, H-16b), 1.57 (1H, m, H-11a), 1.53 (2H, m, H-7), 1.52 (1H, m, H-12b), 1.50 (1H,m, H-14), 1.42 (1H, m, H-15a), 1.42 (1H, m, H-11b),1.39 (1H, m, H-20), 1.34 (1H, m, H-22a), 1.26 (2H, m,H-23), 1.25 (1H, m, H-15b), 1.23 (2H, m, H-28), 1.15(1H, m, H-22b), 1.17 (3H, s, H-19), 1.14 (1H, m, H-17),1.05 (1H, m, H-24), 1.01 (1H, m, H-9), 0.91 (3H, d,J=6.5 Hz, H-21), 0.83 (3H, t,J= 7.2 Hz, H-29), 0.82 (3H,d,J= 6.5 Hz, H-26), 0.80 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-27),0.70 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ:35.8 (C-1), 33.9 (C-2), 199.9 (C-3), 123.8 (C-4), 171.9(C-5), 33.0 (C-6), 32.1 (C-7), 35.7 (C-8), 53.9 (C-9),38.7 (C-10), 21.1 (C-11), 39.7 (C-12), 42.4 (C-13), 55.9(C-14), 24.3 (C-15), 28.3 (C-16), 56.1 (C-17), 12.0 (C-18), 17.5 (C-19), 36.2 (C-20), 18.8 (C-21), 34.1 (C-22),26.1 (C-23), 45.8 (C-24), 29.2 (C-25), 19.9 (C-26), 19.1(C-27), 23.1 (C-28), 12.1 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[6]，故鑒定化合物4 為豆甾-4-烯-3-酮。

化合物5：白色粉末（氯仿），C29H50O。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 5.35 (1H, d,J= 5.3 Hz, H-6),3.51 (1H, m, H-3), 2.27 (2H, m, H-4), 1.94 (1H, m, H-1a), 1.83 (2H, m, H-7), 1.77 (1H, m, H-11a), 1.76 (1H,m, H-1b), 1.70 (2H, m, H-2), 1.65 (1H, m, H-16a), 1.63(1H, m, H-25), 1.61 (1H, m, H-12a), 1.55 (1H, m, H-15a), 1.54 (1H, m, H-11b), 1.51 (1H, m, H-12b), 1.43(1H, m, H-8), 1.42 (1H, m, H-17), 1.40 (1H, m, H-20),1.36 (1H, m, H-16a), 1.34 (1H, m, H-22a), 1.32 (1H, m,H-15b), 1.27 (2H, m, H-23), 1.24 (2H, m, H-28), 1.17(1H, m, H-22b), 1.15 (1H, m, H-14), 1.06 (1H, m, H-24), 1.00 (3H, s, H-19), 0.96 (1H, m, H-9), 0.91 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-21), 0.84 (3H, t,J= 7.5 Hz, H-29), 0.83(3H, d,J= 7.1 Hz, H-27), 0.80 (3H, d,J= 7.1 Hz, H-26), 0.67 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 37.3 (C-1), 32.0 (C-2), 71.94 (C-3), 42.4 (C-4), 140.8(C-5), 121.8 (C-6), 31.7 (C-7), 32.0 (C-8), 50.2 (C-9),36.6 (C-10), 21.2 (C-11), 39.9 (C-12), 42.4 (C-13), 56.8(C-14), 24.4 (C-15), 28.4 (C-16), 56.1 (C-17), 12.0 (C-18), 19.9 (C-19), 36.3 (C-20), 19.55 (C-21), 34.0 (C-22), 26.1 (C-23), 45.9 (C-24), 29.2 (C-25), 18.7 (C-26),19.2 (C-27) , 23.2 (C-28), 12.1 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[7]，故鑒定化合物5 為β-谷甾醇。

化合物6：無色油狀液體（氯仿），C30H52O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42 (1H, s, H-6), 3.52(1H, m, H-7), 3.34 (1H, m, H-3), 3.27 (3H, s, 7-OMe),2.30 (2H, m, H-4), 1.83 (1H, m, H-14), 1.76 (1H, m, H-1a), 1.70 (1H, m, H-2a), 1.68 (1H, m, H-8), 1.66 (1H,m, H-2b), 1.63 (1H, m, H-25), 1.60 (1H, m, H-12a),1.59 (1H, m, H-15a), 1.55 (1H, m, H-12b), 1.53 (1H,m, H-11a), 1.44 (1H, m, H-1b), 1.42 (1H, m, H-11b),1.39 (1H, m, H-16a), 1.38 (1H, m, H-20), 1.37 (1H, m,H-15b), 1.35 (1H, m, H-22a), 1.32 (1H, m, H-16b), 1.28(2H, m, H-23), 1.26 (1H, m, H-9), 1.24 (2H, m H-28),1.19 (1H, m, H-17), 1.17 (1H, m, H-22b), 1.04 (1H, m,H-24), 1.02 (3H, s, H-19), 0.91 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-21), 0.83 (3H, t,J= 7.2 Hz, H-29), 0.82 (3H, d,J= 7.0 Hz, H-27), 0.79 (3H, d,J= 6.9 Hz, H-26), 0.67 (3H, s,H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 37.0 (C-1), 31.7(C-2), 71.5 (C-3), 42.0 (C-4), 144.1 (C-5), 121.5 (C-6),82.0 (C-7), 37.2 (C-8), 48.5 (C-9), 36.5 (C-10), 21.3 (C-11), 39.7 (C-12), 42.9 (C-13), 56.5 (C-14), 25.8 (C-15),28.6 (C-16), 55.6 (C-17), 11.9 (C-18), 19.1 (C-19), 36.2(C-20), 18.9 (C-21), 34.0 (C-22), 26.0 (C-23), 45.9 (C-24), 29.2 (C-25), 19.1 (C-26), 19.9 (C-27), 23.1 (C-28),12.1 (C-29), 54.9 (7-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[8]，故鑒定化合物6 為schleicheol 1。

化合物7：油狀液體（氯仿），C29H42O。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 6.60 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-7),6.02 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-6), 5.73 (1H, s, H-4), 5.22(2H, dd,J= 10.9, 7.4 Hz, H-22, 23), 2.53 (1H, m, H-9),2.51 (1H, m, H-2a), 2.42 (1H, m, H-2b), 2.12 (2H, m,H-15), 2.05 (1H, m, H-20), 1.79 (2H, m, H-1), 1.73(1H, m, H-11a), 1.64 (1H, m, H-16a), 1.63 (1H, m, H-12a), 1.60 (1H, m, H-11b), 1.59 (1H, m, H-12b), 1.58(1H, m, H-24), 1.57 (1H, m, H-25), 1.52 (1H, m, H-16b), 1.36 (1H, m, H-28a), 1.28 (1H, m ,H-17), 1.22(1H, m, H-28b), 1.05 (3H, d,J= 6.7 Hz, H-21), 0.98(3H, s, H-19), 0.95 (3H, s, H-18), 0.92 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-26), 0.85 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-27), 0.83 (3H, t,J= 6.8 Hz, H-29)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 34.2(C-1, 2), 199.7 (C-3), 123.1 (C-4), 164.6 (C-5), 124.5(C-6), 134.2 (C-7), 124.5 (C-8), 44.4 (C-9), 36.8 (C-10), 22.8 (C-11), 35.6 (C-12), 44.1 (C-13), 156.3 (C-14), 25.4 (C-15), 27.8 (C-16), 55.7 (C-17), 19.7 (C-18),16.7 (C-19), 39.5 (C-20), 21.3 (C-21), 135.1 (C-22),132.6 (C-23), 42.9 (C-24), 33.2 (C-25), 17.8 (C-26),20.1 (C-27), 19.1 (C-28), 14.3 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[9]，故鑒定化合物7 為stigmast-4,6,8(14),22-tetraen-3-one。

化合物8：白色粉末（氯仿），C28H44O3。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 6.49 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-7),6.21 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-6), 5.11～5.23 (2H, m, H-22, 23), 3.95 (1H, m, H-3), 2.10 (1H, m, H-20), 2.07(1H, m, H-4a), 1.99 (1H, m, H-4b), 1.88 (1H, m, H-24),1.83 (1H, m, H-12a), 1.81 (1H, m, H-1a), 1.79 (1H, m,H-2a), 1.67 (1H, m, H-14), 1.58 (1H, m, H-1b), 1.57(1H, m, H-2b), 1.54 (1H, m, H-25), 1.53 (1H, m, H-9),1.52 (1H, m, H-15a), 1.51 (1H, m, H-16a), 1.50 (1H, m,H-11a), 1.48 (1H, m, H-15b), 1.46 (1H, m, H-16b), 1.44(1H, m, H-17), 1.23 (1H, m, H-11b), 1.20 (1H, m, H-12b), 0.98 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-21), 0.88 (3H, d,J=6.9 Hz, H-28), 0.86 (3H, s, H-19), 0.82 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-27), 0.81 (3H, s, H-18), 0.79 (3H, d,J= 6.3 Hz,H-26)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 34.7 (C-1), 30.1(C-2) 66.4 (C-3), 36.9 (C-4), 82.3 (C-5), 135.5 (C-6),130.8 (C-7), 79.5 (C-8), 51.1 (C-9), 37.0 (C-10), 23.4(C-11), 39.4 (C-12), 44.6 (C-13), 51.7 (C-14), 20.7 (C-15), 28.7 (C-16), 56.2 (C-17), 12.9 (C-18), 18.2 (C-19),39.8 (C-20), 20.9 (C-21), 135.3 (C-22), 132.3 (C-23),42.8 (C-24), 33.1 (C-25), 19.6 (C-26), 19.9 (C-27), 17.6(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[10]，故鑒定化合物 8 為(22E,24R)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol。

化合物9：白色粉末（氯仿），C29H48O2。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 5.78 (1H, s, H-4), 4.32 (1H, t,J= 2.8 Hz, H-6), 2.48 (2H, m, H-2), 2.02 (1H, m, H-1a), 2.00 (1H, m, H-7a), 1.97 (1H, m, H-1b), 1.71 (1H,m, H-8), 1.69 (1H, m, H-16a), 1.63 (1H, m, H-25), 1.61(1H, m, H-12a), 1.59 (1H, m, H-16b), 1.56 (1H, m, H-11a), 1.55 (1H, m, H-14), 1.53 (1H, m, H-12b), 1.46(1H, m, H-11b), 1.39 (1H, m, H-7b), 1.38 (1H, m, H-20), 1.36 (2H, m, H-15), 1.35 (3H, s, H-19), 1.31 (1H,m, H-22a), 1.30 (1H, m, H-23a), 1.25 (1H, m, H-23b),1.23 (2H, m, H-28), 1.16 (1H, m, H-22b), 1.13 (1H, m,H-17), 1.06 (1H, m, H-24), 1.02 (1H, m, H-9), 0.90(3H, d,J= 6.5 Hz, H-21), 0.83 (3H, t,J= 7.8 Hz, H-29), 0.81 (3H, d,J= 7.3 Hz, H-26), 0.78 (3H, d,J= 7.0 Hz, H-27), 0.72 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ: 37.1 (C-1), 34.3 (C-2), 200.9 (C-3), 126.2(C-4), 169.1 (C-5), 73.1 (C-6), 38.6 (C-7), 29.8 (C-8),53.6 (C-9), 38.1 (C-10), 21.1 (C-11), 39.6 (C-12), 42.5(C-13), 55.9 (C-14), 24.2 (C-15), 28.3 (C-16), 56.1 (C-17), 12.1 (C-18), 19.9 (C-19), 36.2 (C-20), 18.8 (C-21),33.9 (C-22), 26.0 (C-23), 45.8 (C-24), 29.1 (C-25), 19.5(C-26), 19.1 (C-27), 23.1 (C-28), 12.0 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[11]，故鑒定化合物9 為豆甾-4-烯-6β-醇-3-酮。

化合物10：白色粉末（氯仿），C29H48O2。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.68 (1H, s, H-6), 3.66 (1H,m, H-3), 2.39 (2H, m, H-4), 2.23 (1H, t,J= 7.6 Hz, H-8), 1.90 (1H, m, H-9), 1.85 (1H, m, H-1a), 1.75 (1H, m,H-2a), 1.72 (1H, m, H-14), 1.71 (1H, m, H-16a), 1.68(1H, m, H-2b), 1.63 (1H, m, H-27), 1.62 (1H, m, H-11a), 1.57 (2H, m, H-12), 1.50 (1H, m, H-11b), 1.48(1H, m, H-15a), 1.47 (1H, m, H-20), 1.42 (1H, m, H-16b), 1.40 (1H, m.H-15b), 1.35 (1H, m, H-22a), 1.34(1H, m, H-1b), 1.26 (2H, m, H-23), 1.24 (2H, m, H-28),1.19 (3H, s, H-19), 1.17 (1H, m, H-17), 1.16 (1H, m, H-22b), 1.06 (1H, m, H-24), 0.92 (3H, d,J= 6.5 Hz, H-21), 0.84 (3H, t,J= 7.5 Hz, H-29), 0.82 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-26), 0.80 (3H, d,J= 6.9 Hz, H-27), 0.67 (3H, s,H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 36.4 (C-1), 31.2(C-2), 70.5 (C-3), 41.9 (C-4), 165.4 (C-5), 126.1 (C-6),202.6 (C-7), 45.5 (C-8), 49.9 (C-9), 38.4 (C-10), 21.3(C-11), 38.7 (C-12), 43.1 (C-13), 50.0 (C-14), 26.4 (C-15), 28.6 (C-16), 54.7 (C-17), 12.1 (C-18), 17.4 (C-19),36.2 (C-20), 19.1 (C-21), 34.0 (C-22), 26.1 (C-23), 45.8(C-24), 29.2 (C-25), 19.1 (C-26), 19.9 (C-27), 23.1 (C-28), 12.1 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[12]，故鑒定化合物10 為3β-羥基豆甾-5-烯-7-酮。

化合物11：白色粉末（氯仿），C29H48O2。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 6.17 (1H, s, H-4), 4.31 (1H,m, H-6), 2.38 (2H, m, H-2), 1.97 (2H, m, H-1), 1.89(1H, m, H-7a), 1.65 (1H, m, H-16a), 1.62 (1H, m, H-7b), 1.60 (1H, m, H-8), 1.59 (1H, m, H-16b), 1.58 (1H,m, H-25), 1.57 (2H, m, H-12), 1.55 (1H, m, H-14), 1.47(2H, m, H-11), 1.35 (1H, m, H-20), 1.34 (2H, m, H-15),1.33 (1H, m, H-22a), 1.24 (2H, m, H-23), 1.21 (2H, m,H-28), 1.17 (3H, s, H-19), 1.14 (1H, m, H-22b), 1.09(1H, m, H-17), 1.03 (1H, m, H-24), 1.01 (1H, m, H-9),0.91 (3H, d,J= 6.5 Hz, H-21), 0.84 (3H, t,J= 6.5 Hz,H-29), 0.83 (3H, d,J= 7.3 Hz, H-27), 0.81 (3H, d,J=7.3 Hz, H-26), 0.69 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ: 36.3 (C-1), 33.9 (C-2), 199.8 (C-3), 119.7 (C-4), 171.1 (C-5), 68.7 (C-6), 41.5 (C-7), 34.2 (C-8), 53.8(C-9), 39.0 (C-10), 21.1 (C-11), 39.5 (C-12), 42.5 (C-13), 55.6 (C-14), 24.2 (C-15), 28.2 (C-16), 56.0 (C-17),12.1 (C-18), 18.8 (C-19), 36.2 (C-20), 18.4 (C-21), 33.9(C-22), 26.1 (C-23), 45.8 (C-24), 29.1 (C-25), 19.9 (C-26), 19.0 (C-27), 23.1 (C-28), 12.1 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[6]，故鑒定化合物11 為6α-羥基豆甾-4-烯-3-酮。

化合物12：白色粉末（氯仿），C29H52O2。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 3.57 (1H, m, H-3), 3.42(1H, dt,J= 11.0 Hz, 4.0 Hz, H-6), 1.96 (1H, m,H-5),1.80 (1H, m, H-4a), 1.78 (1H, m, H-12a), 1.70 (1H, m,H-7a), 1.68 (1H, m, H-16a), 1.65 (2H, m, H-2), 1.64(1H, m, H-8), 1.63 (1H, m, H-4b), 1.62 (1H, m, H-25),1.59 (1H, m, H-16b), 1.58 (1H, m, H-7b), 1.46 (2H, m,H-1), 1.44 (1H, m, H-15a), 1.41 (2H, m, H-11), 1.40(1H, m, H-12b), 1.40 (1H, m, H-20), 1.39 (1H, m, H-17), 1.35 (1H, m, H-22a), 1.27 (1H, m, H-23a), 1.24(2H, m, H-28), 1.23 (1H, m, H-23b), 1.23 (1H, m, H-15b), 1.17 (1H, m, H-22b), 1.12 (1H, m, H-14), 1.06(1H, m, H-24), 0.91 (1H, m, H-9), 0.90 (3H, d,J= 6.3 Hz, H-21), 0.79～0.85 (12H, overlapped, H-19, 26, 27,29), 0.64 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 37.3 (C-1), 31.1 (C-2), 71.3 (C-3), 32.3 (C-4), 51.7(C-5), 69.6 (C-6), 41.7 (C-7), 34.3 (C-8), 53.8 (C-9),36.3 (C-10), 21.2 (C-11), 39.9 (C-12), 42.6 (C-13), 56.2(C-14), 24.3 (C-15), 28.3 (C-16), 56.1 (C-17), 12.1 (C-18), 13.5 (C-19), 36.2 (C-20), 18.8 (C-21), 33.9 (C-22),26.1 (C-23), 45.8 (C-24), 29.2 (C-25), 19.9 (C-26), 19.3(C-27), 23.1 (C-28), 12.1 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[13]，故鑒定化合物12 為豆甾烷-3,6-二醇。

化合物13：白色粉末（氯仿），C22H46O。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 3.63 (2H, t,J= 6.6 Hz, H-1), 1.55 (2H, m, H-2), 1.24 (38H, brs, H-3～21), 0.87(3H, t,J= 6.8 Hz, H-22)。EI-MSm/z: 325 (M-H), 308(M-H2O), 280 (M-H2O-CH2=CH2)，以后出現(xiàn)的系列質(zhì)量數(shù)遞減14 (CH2) 的碎片峰，其裂解規(guī)律完全符合高級直鏈脂肪醇的特征。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[14]，故鑒定化合物13 為正二十二烷醇。

化合物14：白色粉末（氯仿），C24H50O。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 3.63 (2H, t,J= 6.7 Hz, H-1), 1.55 (2H, m , H-2), 1.24 (42H, brs, H-3～23), 0.87(3H, t,J= 6.7 Hz, H-24)。EI-MSm/z: 336 (M-H2O),308 (M-H2O-CH2=CH2)，以后出現(xiàn)的系列質(zhì)量數(shù)遞減14 (CH2) 的碎片峰，其裂解規(guī)律完全符合高級直鏈脂肪醇的特征。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[15]，故鑒定化合物14 為二十四烷醇。

化合物15：油狀液體（氯仿），C15H18O2。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 6.20 (1H, d,J= 3.3 Hz, H-13a), 5.48 (1H, d,J= 3.3 Hz, H-13b), 5.25 (1H, d,J=2.3 Hz, H-15a), 5.05 (1H, d,J= 2.3 Hz, H-15b), 4.88(1H, s, H-14a), 4.79 (1H, s, H-14b), 3.95 (1H, t,J=9.2Hz, H-6), 2.82～2.93 (3H, m, H-1, 5, 7), 2.44～2.54(3H, m, H-3a, 3b, 9a), 2.10～2.27 (2H, m, H-8a, 9b),1.81～1.97 (2H, m, H-2a, H-2b), 1.34～1.45 (1H, m,H-8b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 45.1 (C-1), 32.6(C-2), 30.3 (C-3), 151.4 (C-4), 52.0 (C-5), 85.4 (C-6),47.6 (C-7), 31.0 (C-8), 36.4 (C-9), 149.3 (C-10),139.7(C-11), 170.4 (C-12), 120.3 (C-13), 109.6 (C-14),112.6 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[16]，故鑒定化合物15 為去氫木香內(nèi)酯。

4 生物活性研究

利用本課題組資源，對分離得到的化合物進行抗瘧活性篩選。采用SYBR Green I 法[17]，篩選化合物的抗瘧活性。樣品均用DMSO 配制為10 mmol/L儲備液，最終檢測體系中瘧原蟲感染率為1%，紅細胞壓積2%。實驗設(shè)置空白組（配制的無蟲血和1%DMSO 溶液），陽性對照組（配制的含蟲血和陽性藥氯喹二磷酸鹽溶液），陰性對照組（配制的含蟲血和1% DMSO 溶液）及樣品組（配制的含蟲血和樣品溶液），各組中所需母液按1∶1 加入96 孔板，各給藥組均設(shè)50、5 μmol/L 2 個檢測濃度，每個濃度做3 次技術(shù)重復(fù)。鋪板完成后在CO2孵育箱孵育72 h，孵育結(jié)束后按照SYBR Green I 法測定熒光，計算抑制率。通過初步篩選，發(fā)現(xiàn)化合物15 在50 μmol/L下對惡性瘧原蟲3D7 株有一定抑制作用，抑制率達（65.24±13.21）%，而在5 μmol/L 濃度下對惡性瘧原蟲3D7 株無抑制作用 [陽性對照藥氯喹二磷酸鹽在0.5 μmol/L 下對惡性瘧原蟲3D7 株抑制率為（95.12±0.37）%]。

5 討論

本實驗采用多種柱色譜分離手段以及單體化合物鑒定方法，從長鞭紅景天干燥全株的醇提物中分離鑒定出15 個脂肪族類化合物，其中包含2 個三萜類成分（化合物1 和2）、1 個倍半萜類化合物（化合物15）、10 個甾體類化合物（化合物3～12）以及2 個脂肪醇（化合物13 和14），其中以甾體類成分居多。倍半萜類化合物15 在50 μmol/L 濃度下表現(xiàn)出較好的抗瘧活性。根據(jù)文獻[18-20]報道，一些甾體和萜類化合物具有優(yōu)異的抗菌、抗炎、抗癌、抗瘧和免疫抑制等生物活性，包括本實驗分離得到的化合物β-香樹脂醇乙酸酯（2）具有高抗炎活性[21]、β-谷甾醇（5）具有抗真菌和抗菌活性[22]。因此，本實驗對長鞭紅景天物質(zhì)基礎(chǔ)的研究使得對該植物中脂肪族類化學成分和抗瘧活性物質(zhì)有了基本的認識，同時在一定程度上揭示了長鞭紅景天在傳統(tǒng)用藥中具有治療氣管炎、口臭和創(chuàng)傷等的物質(zhì)來源，進一步為該植物的深入研究與開發(fā)利用創(chuàng)造了條件。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突