治療麥穗魚扁彎口吸蟲病藥物對比試驗

姜漢軍，賈秀秀，田海軍，2*

（1.信陽農(nóng)林學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，河南 信陽 464007；2.信陽市水生動物病害工程技術(shù)研究中心，河南 信陽 464007）

麥穗魚（Pseudorasbora parva），屬鯉形目，鯉科，亞科，為雜食性的鯉科小型魚類，多分布于淡水中，魚背部呈灰黑色，腹部白色，體側(cè)鱗有一黑色縱帶似麥穗狀，因此稱為麥穗魚[1-2]。隨著人們消費的多樣化及對水產(chǎn)品需求量的增加，麥穗魚逐漸進入水產(chǎn)養(yǎng)殖的行業(yè)。文獻[3]研究表明，麥穗魚對環(huán)境的適應(yīng)能力強，尤其適宜在底質(zhì)肥沃、底棲生物豐富的水體中生活，在冰封的水體及水溫38 ℃時，也能正常生活。

扁彎口吸蟲（Clinostomum complanatum），屬扁彎動物門，吸蟲綱，復(fù)殖吸蟲目，彎口科，彎口屬[4]?？筛腥静蒴~、鰱、鳙、鯉、鯽、麥穗魚、青鳉和斗魚等大部分淡水魚類，一旦感染，會造成較大的損失，甚至全軍覆滅。近年來，扁彎口吸蟲病在全國各地均有發(fā)現(xiàn)，流行季節(jié)為5—8月。

目前，對麥穗魚患扁彎口吸蟲病的研究主要集中在形態(tài)學(xué)、生物學(xué)等方面，有關(guān)麥穗魚扁彎口吸蟲病藥物防治方面的研究報道較少，其主要集中在敵百蟲等化學(xué)藥物方面[4-10]。周工健等[9]先采用硫酸銅潑灑殺滅中間宿主螺類，后用90%晶體敵百蟲全池潑灑，對殺滅扁彎口吸蟲包囊內(nèi)的囊蚴有明顯效果，通過反復(fù)對比試驗，最后采用0.3 mg/L 濃度的敵百蟲溶液全池潑灑，連潑2 次（中間間隔24 h），發(fā)病特別嚴重的連潑3 次，可有效控制扁彎口吸蟲病。楊慧英等[10]開展扁彎口吸蟲對淡水魚種的危害及防治試驗，結(jié)果表明，輕微感染扁彎口吸蟲且可攝食的魚種，內(nèi)服阿苯達唑粉，使用90%晶體敵百蟲0.3 g/m3全池潑灑1 次，病情嚴重可隔天連用3 次，能有效控制扁彎口吸蟲病。

魚類寄生蟲的防治藥物，主要包括化學(xué)藥物和中草藥物2 大類。目前，隨著人們對食品安全的重視，追求綠色食品，中草藥對魚類常見寄生蟲的治療，已經(jīng)成為漁業(yè)養(yǎng)殖生產(chǎn)新的研究方向?，F(xiàn)選擇化學(xué)藥物甲苯咪唑、氯化銅、90%晶體敵百蟲，中草藥選用了雷丸和檳榔，檢測對比其對麥穗魚扁彎口吸蟲病的殺滅效果，擬為麥穗魚患扁彎口吸蟲病的藥物防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 時間與地點

2018年10—12月，試驗地位于信陽農(nóng)林學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院病理實驗室。

1.2 材料

1.2.1 試驗魚

試驗魚來自信陽農(nóng)林學(xué)院楚韻湖。2018年10月中旬，在學(xué)校楚韻湖中發(fā)現(xiàn)有大量麥穗魚患扁彎口吸蟲病，麥穗魚體長3～5 cm。用板罾分批次捕撈約500 尾麥穗魚，經(jīng)檢測，采捕的麥穗魚45%個體都有扁彎口吸蟲的寄生。

1.2.2 器材

6 個魚缸（40 cm×30 cm×20 cm）、體視顯微鏡、雙凹玻片、載玻片、蓋玻片、加熱棒、增氧器、燒杯、電爐、解剖針等。

1.2.3 藥物

治療扁彎口吸蟲的藥物為中草藥和化學(xué)藥物2 類，中草藥為雷丸和檳榔；化學(xué)藥品為甲苯咪唑、氯化銅和90%晶體敵百蟲。

采用煎煮提取的方法，提取雷丸和檳榔的有效成分。分別稱取雷丸4 g、檳榔2 g，粉碎后，過孔徑0.25 mm 的網(wǎng)篩；加蒸餾水1 L，熬制30 min 過濾；將過濾的藥物殘渣再熬制2 次，將2 次熬制的藥液混合在一起，密封冷卻保存?zhèn)溆谩Ｔ撛囼炛胁菟帩舛染鶠樯帗Q算的濃度。例如稱取檳榔2 g，經(jīng)過2 次熬制的藥液，加入盛有20 L 水的魚缸里，則檳榔的濃度為100 mg/L。

1.3 試驗方法

6 個魚缸分別盛有原池塘水20 L，ρ（溶解氧）為6.2～7.8 mg/L，水溫為（26±0.5）℃。選取體長3～5 cm患有扁彎口吸蟲的麥穗魚，隨機分為6 個試驗缸，其中1 組為空白對照缸，進行3 次重復(fù)試驗，在相同環(huán)境下的魚缸內(nèi)，分別投放被扁彎口吸蟲病感染的麥穗魚20 尾，讓其適應(yīng)72 h 后，參照中草藥提取濃度的標準濃度及殺寄生蟲藥的標準給藥劑量，在其中5 口魚缸分別加入5 種藥物，對照缸不加藥，進行給藥試驗，中草藥和化學(xué)藥物標準用藥量見表1。用2 倍量（藥物標準計量的2 倍）和5 倍量（藥物標準計量的5 倍）分別給藥；分別在12，24，48，72 h，鏡檢患病魚體表和鰓上的扁彎口吸蟲孢囊，記錄各組藥物的殺蟲率及死亡率。殺蟲率（%）=（對照組的扁彎口吸蟲孢囊數(shù)量－試驗組扁彎口吸蟲孢囊數(shù)量）/對照組的扁彎口吸蟲孢囊數(shù)量×100%；死亡率（%）=（投放的魚數(shù)量－鏡檢時魚存活數(shù)量）/投放魚數(shù)量×100%。

表1 中草藥和化學(xué)藥物標準用藥量①

在干凈無劃痕的雙凹玻片上，分別懸滴0.25 mL檳榔煎煮提取液（200 mg/L）及0. 25 mL 雷丸煎煮提取液（400 mg/L），隨機取病魚10 尾，用2 枚小解剖針，挑開病魚肌肉、尾柄等處形成淡黃色的小包囊，用吸管將蟲體吸至凹玻片上，將扁彎口吸蟲置于雙凹玻片上，在體視顯微鏡下觀察蟲體變化情況。記錄試驗開始時間，并隨時觀察扁彎口吸蟲體的反應(yīng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 中草藥及化學(xué)藥物對麥穗魚扁彎口吸蟲病治療效果

雷丸、檳榔2 種中草藥對扁彎口吸蟲病的治療效果見表2。由表2 可見，檳榔在48 h 時殺蟲率最高，為60%；超過48 h 后補充藥物，麥穗魚扁彎口吸蟲的數(shù)量保持不變，殺蟲率下降；雷丸對麥穗魚扁彎口吸蟲病沒有殺滅效果；氯化銅、甲苯咪唑、敵百蟲對扁彎口吸蟲在6 h 具有較明顯的殺滅效果，其中甲苯咪唑殺蟲率達到80%，敵百蟲殺蟲率達到78%，氯化銅的殺蟲率在70%。

表2 中藥及化學(xué)藥物對扁彎口吸蟲病的治療%

2.2 不同藥物濃度對扁彎口吸蟲病的治療效果

不同濃度的藥物對扁彎口吸蟲的殺滅率及試驗魚情況見表3。由表3 可見，在使用2 倍劑量（標準藥物使用劑量的二倍）、5 倍劑量（標準藥物使用劑量的5 倍）條件下，中草藥殺蟲沒有化學(xué)藥物殺蟲率高。在2 倍劑量下，檳榔的殺蟲濃度為200 mg/L，藥物作用時間在48 h 時，殺蟲效果最好，殺蟲率為60%；雷丸在治療麥穗魚扁彎口吸蟲病中無效果；且兩者在5 倍劑量時，檳榔會導(dǎo)致麥穗魚出現(xiàn)中毒現(xiàn)象。中草藥在殺蟲濃度標準劑量時，給藥均未出現(xiàn)中毒及死亡現(xiàn)象?；瘜W(xué)藥物在標準劑量下，甲苯咪唑的殺蟲濃度為0.2 mg/L，殺蟲率為80%；90%晶體敵百蟲在殺蟲濃度0.3 mg/L時，殺蟲率為78%；氯化銅的殺蟲濃度為0.2 mg/L，殺蟲率為75%?；瘜W(xué)藥物在2 倍、5 倍劑量下用藥均會出現(xiàn)中毒現(xiàn)象；表明甲苯咪唑?qū)溗媵~扁彎口吸蟲病的治療效果最佳；中草藥作用時間較長，殺蟲率不高。

表3 不同濃度的藥物對扁彎口吸蟲的殺滅率及試驗魚情況

2.3 檳榔和雷丸對離體扁彎口吸蟲的殺蟲活性

于體視顯微鏡下觀察扁彎口吸蟲體的變化。濃度為400 mg/L 的雷丸藥液，對扁彎口吸蟲的殺蟲作用較弱，30 min 后，未發(fā)現(xiàn)死亡蟲體，活力不減弱。在濃度為200 mg/L 的檳榔藥液中的蟲體，剛開始，作蛭狀劇烈伸縮運動；5 min 后扁彎口吸蟲擠成一團；20 min 后，蟲體停止擺動，顯微結(jié)構(gòu)開始模糊；30 min 后，蟲體結(jié)構(gòu)完全被破壞，胞質(zhì)流出，凝固。

3 討論

目前，治療扁彎口吸蟲病的藥物，主要有敵百蟲和阿苯噠唑。但長時間使用這些化學(xué)藥物，不僅會使扁彎口吸蟲產(chǎn)生耐藥性，而且會殺滅水體中大量的有益菌，從而影響生態(tài)平衡。與化學(xué)藥物相比，中草藥屬于天然環(huán)保藥物，使用后不僅對魚病的治療有顯著效果，而且不易產(chǎn)生抗藥性，殘留低。扁彎口吸蟲病殺蟲率的確定，是根據(jù)扁彎口吸蟲孢囊脫落數(shù)量計算。本試驗中，因為發(fā)現(xiàn)對照組麥穗魚扁彎口吸蟲孢囊在試驗周期內(nèi)，沒有出現(xiàn)自然脫落的現(xiàn)象，所以可以確定，試驗組出現(xiàn)扁彎口吸蟲孢囊的脫落，是由于藥物殺蟲引起。

本試驗中，除化學(xué)藥物外，中草藥采用了煮沸提取法，方便、簡單易行，檳榔對扁彎口吸蟲的殺蟲率接近于化學(xué)藥物的殺蟲率。檳榔的主要化學(xué)成分為生物堿，含量為0.3%～0.7%，其中主要為檳榔堿（0.1%～0.5%）和檳榔次堿（0.31%～0.66%），還含有鞣質(zhì)，主要起殺蟲、抑蟲作用的是生物堿中的檳榔堿，作用于蟲體的神經(jīng)系統(tǒng)[11-12]。甲苯咪唑、氯化銅、敵百蟲等高頻率的使用，導(dǎo)致寄生蟲產(chǎn)生抗藥性，降低藥效，同時對水質(zhì)的破壞不可逆，化學(xué)藥物在魚體內(nèi)殘留期長，對魚類的毒副作用大，會直接影響水產(chǎn)品的品質(zhì)。

試驗結(jié)果顯示，檳榔相對于甲苯咪唑、氯化銅等化學(xué)藥物，具有高效、低殘留的優(yōu)勢。中草藥超聲波提取物的殺滅效果，優(yōu)于常溫浸泡提取物和煮沸提取物[13]。如果能采用超聲波提取、萃取等更為科學(xué)的提取方法，檳榔的殺蟲效果會更好。因此對于中草藥有效成分的提取及劑型方面，將是中草藥治療扁彎口吸蟲病的研究重點。