甘草渣發(fā)酵產(chǎn)非淀粉多糖酶菌株篩選及產(chǎn)酶的動(dòng)態(tài)變化

摘"要：【目的】""從4株真菌中篩選出產(chǎn)非淀粉多糖酶水平較強(qiáng)的菌株，為甘草渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)非淀粉多糖酶工藝奠定基礎(chǔ)。

【方法】""設(shè)計(jì)剛果紅法及濾紙條崩解試驗(yàn)，對(duì)4種真菌（黑曲霉、里氏木霉、黃孢原毛平革菌、康寧木霉）進(jìn)行初篩，采用甘草渣搖瓶發(fā)酵進(jìn)行復(fù)篩，測(cè)定纖維素酶（CMC酶、濾紙酶）及木聚糖酶活力。將產(chǎn)酶水平最高的菌株與甘草渣進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，驗(yàn)證其產(chǎn)酶效果。

【結(jié)果】""4株真菌均具有產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶的能力。黑曲霉與其他3種菌株間存在拮抗作用。黃孢原毛平革菌和康寧木霉較其他2株真菌產(chǎn)纖維素酶較高，在發(fā)酵第4 d時(shí)CMC酶活力分別達(dá)到2.10、2.31 IU/mL。黑曲霉搖瓶復(fù)篩發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶活力最高可達(dá)97.46 IU/mL，而黃孢原毛平革菌與康寧木霉混菌發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶活力最高可達(dá)131.707 IU/mL。

【結(jié)論】""甘草渣與黃孢原毛平革菌、康寧木霉混合固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)出的非淀粉多糖酶活力增長(zhǎng)周期更穩(wěn)定，產(chǎn)量更高。甘草渣作為農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品有潛質(zhì)成為未來(lái)生產(chǎn)酶的低成本底物。

關(guān)鍵詞：""甘草渣；纖維素酶；木聚糖酶；固態(tài)發(fā)酵

中圖分類號(hào)："S182""""文獻(xiàn)標(biāo)志碼："A""""文章編號(hào)："1001-4330（2024）11-2733-09

0"引 言

【研究意義】截止2021年新疆甘草種植面積達(dá)2.6×104 hm2（40余萬(wàn)畝），年產(chǎn)100×104 t，其中70%以上分布在喀什地區(qū)、阿克蘇地區(qū)和巴音郭楞蒙古自治州（簡(jiǎn)稱巴州）等地（州）［1］。甘草渣是甘草酸提取后所剩余的固體廢棄物，甘草渣中仍含有如黃酮類、多糖和甙類、氨基酸和酚類等10 余種藥用成分，其對(duì)于促進(jìn)動(dòng)物育肥、提升免疫力具有潛在的效果，因此其具有轉(zhuǎn)化為功能性飼料添加劑的潛力［2-3］。合理運(yùn)用生物發(fā)酵技術(shù)對(duì)實(shí)現(xiàn)中藥渣生態(tài)化再利用具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】甘草渣飼料化研究目前相對(duì)較少，已有的研究主要集中在甘草渣直接飼喂應(yīng)用，雖然在一定程度上能提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能等指標(biāo)，但總體應(yīng)用效果并不顯著。吳華等［4］在肉雞飼糧中添加 3%、4%、5%的甘草藥渣可顯著提高肉雞的日增重，降低料肉比，并且能夠提高肉雞粗蛋白表觀代謝率；發(fā)酵甘草渣及動(dòng)物飼喂，主要利用乳酸菌、酵母菌、芽孢類菌種發(fā)酵提高粗蛋白，或者利用黑曲霉，白腐菌等發(fā)酵產(chǎn)酶。甘草渣經(jīng)發(fā)酵后其細(xì)胞和纖維結(jié)構(gòu)被破壞，活性物質(zhì)更有利于溶出。呂麗靜等［5］利用釀酒酵母菌與植物乳桿菌發(fā)酵甘草渣，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵后藥渣中總黃酮、甘草素及異甘草素等有效成分含量有所升高。非淀粉多糖酶包括纖維素酶、β-葡聚糖酶、果膠酶和木聚糖酶等，可以降解飼料中非淀粉多糖（NSP）的多聚體、使NSP的抗?fàn)I養(yǎng)性降低，進(jìn)而使飼料利用率提高［6］。曾飛等［7］利用從腐爛的甘草中分離的草酸青霉 G2菌，液體發(fā)酵甘草藥渣可以產(chǎn)生活力較高的纖維素酶；李曼曼等［8］利用綠色木霉菌對(duì)丹皮提取殘?jiān)M(jìn)行固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶，且發(fā)酵后殘?jiān)梢灾苯舆M(jìn)行糖化發(fā)酵。【本研究切入點(diǎn)】目前多數(shù)文獻(xiàn)主要圍繞農(nóng)業(yè)生物質(zhì)生產(chǎn)一種酶的研究，需通過(guò)篩選4株真菌篩選出甘草渣發(fā)酵生產(chǎn)多糖酶?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)剛果紅法及濾紙條崩解試驗(yàn)對(duì)4種真菌（黑曲霉、里氏木霉、黃孢原毛平革菌、康寧木霉）進(jìn)行初篩，篩選出可高效利用甘草渣生產(chǎn)非淀粉多糖酶菌株并且分析其酶活動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，為甘草渣資源化再利用奠定理論基礎(chǔ)。

1"材料與方法

1.1"材 料

1.1.1"甘 草

甘草渣來(lái)自新疆阿拉爾新農(nóng)甘草產(chǎn)業(yè)有限責(zé)任公司，在實(shí)驗(yàn)室洗凈烘干后經(jīng)過(guò)粉碎過(guò)5目篩。其中有機(jī)質(zhì)95.2%、氮含量0.67%、鉀含量0.08%、磷含量0.447%、自然風(fēng)干水分2.3%。麩皮購(gòu)自新疆泰昆股份有限公司。

1.1.2"菌株

黑曲霉（HQ）、黃孢原毛平革菌（HB）、康寧木霉（KN）購(gòu)自國(guó)家菌種保藏中心；里氏木霉（LS）由新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所菌種保藏室提供。

1.1.3"培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA（g/L）：馬鈴薯浸粉6.0 、葡萄糖20.0 、瓊脂20.0、pH （5.6±0.2）、水1 000 mL；

馬鈴薯葡萄糖水培養(yǎng)基PDB（g/L）：馬鈴薯浸粉6.0 、葡萄糖20.0 、pH （5.6±0.2）、水1 000 mL；

纖維素酶初篩培養(yǎng)基（g/L）：（NH4）2SO42.0，MgSO4·7H2O 0.5，K2HPO4 1.0，NaCl 0.5，CMC-Na 2.0，剛果紅0.2，瓊脂20.0，蒸餾水1 000 mL，pH 自然。

木聚糖酶初篩培養(yǎng)基（g/L）：木聚糖10.0，蛋白胨1.0，KH2PO41.0，（NH4）2SO4 4.0，MgSO4·7H2O 0.5，瓊脂20.0，剛果紅0.2，蒸餾水1 000 mL。

濾紙條崩解培養(yǎng)基（g/L）：（NH4）2SO4 1.0，MgSO4·7H2O 0.5，K2HPO4 1.0，酵母粉0.1 蒸餾水1 000 mL，濾紙條（1 cm×6 cm）3條/三角瓶。

藥渣培養(yǎng)基（g/L）：中藥渣20、NaCl 5.0、（NH4）2SO4 "3.0、MgSO4·7H2O "3.0、去離子水1 000 mL、pH自然，120℃滅菌20 min。

固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基（g/L）：甘草渣15.0、麩皮15.0、K2HPO4 0.5、料水比1∶"0.8。

1.2"方 法

1.2.1"菌種生長(zhǎng)曲線

菌株連續(xù)活化3次后按一定量接種于PDB培養(yǎng)基中，每12 h取樣后8 000 r/min離心5 min，然后105℃烘干至恒重后稱重，每次3個(gè)平行，以培養(yǎng)時(shí)間為X軸、菌體干重為Y軸，繪制生長(zhǎng)曲線［9］。

1.2.2"菌種產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶初篩

用10 mm打孔器在長(zhǎng)滿菌絲體的平板上取下兩塊菌餅，拿無(wú)菌鑷子接在羧甲基纖維素鈉剛果紅平板及初篩木聚糖酶培養(yǎng)基上，在28℃下培養(yǎng)至3～5 d觀察透明圈出現(xiàn)情況，分別測(cè)量透明圈直徑D（cm）和菌體直徑d（cm）大小，并計(jì)算透明圈與菌體直徑的比值D/d。計(jì)算酶的相對(duì)比活力（A），A=透明圈的直徑/天數(shù)（4 d）。

1.2.3"濾紙條崩解試驗(yàn)及失重率測(cè)定

將無(wú)菌的濾紙條烘干，裝入高溫滅菌后的濾紙條培養(yǎng)基中，接入一定量的菌液，在28℃，180 r/min下培養(yǎng)，每天觀察濾紙條的變化，并于第7 d記錄最終降解狀態(tài)。

濾紙條失重率測(cè)定［10］：培養(yǎng)7 d 后，在4 000 r/min離心10 min，倒掉上清液，洗掉濾紙上的菌體，反復(fù)沖洗，105℃烘干稱重。

X="m-m0"m".

式中，m：接種前濾紙質(zhì)量（g），m0：接種后濾紙質(zhì)量（g）。

1.2.4"菌種間對(duì)峙試驗(yàn)

將活化后的各供試菌種取菌餅兩兩組合進(jìn)行平皿培養(yǎng)，倒置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至菌絲基本鋪滿皿底，觀察菌絲接觸區(qū)有無(wú)對(duì)峙反應(yīng)［11］。

1.2.5"菌種的復(fù)篩

將菌株平板活化至三代，待其長(zhǎng)滿整個(gè)平板后，用打孔器取3個(gè)菌餅（10 mm）接種至藥渣培養(yǎng)基（100 mL/250 mL）中進(jìn)行酶活測(cè)定，28℃、 180 r/min 恒溫培養(yǎng)，每天測(cè)定其產(chǎn)酶動(dòng)態(tài)變化。

1.2.6"固態(tài)發(fā)酵甘草渣產(chǎn)酶

固態(tài)發(fā)酵：將篩選出的菌種按10%接種量接種于固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，28℃下靜置培養(yǎng)一段時(shí)間，每24 h翻曲1次。連續(xù)觀察并記錄1周培養(yǎng)基產(chǎn)酶形態(tài)變化。

粗酶液的制備：發(fā)酵結(jié)束后，瓶?jī)?nèi)均勻3點(diǎn)各取樣1 g，用10倍的蒸餾水稀釋，在8 000 r/min，4℃ 離心5 min后取上清液即為粗酶液。

產(chǎn)酶：發(fā)酵產(chǎn)物中纖維素酶活［12］、木聚糖酶活［13］測(cè)定方法。

1.3"數(shù)據(jù)處理

采用 Excel 2019軟件整理歸納及Origin 2021制圖，采用 SPSS20.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)進(jìn)行 3 次重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）”表示。

2"結(jié)果與分析

2.1"生長(zhǎng)曲線的繪制

研究表明，LS、HB、KN在 20～72 h期間干重持續(xù)上升，生長(zhǎng)速度較快，為菌株對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；72～84 h菌株干重基本無(wú)變化，進(jìn)入生長(zhǎng)平穩(wěn)期。HQ在12～60 h干重上升較快，為菌株對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；60～84 h干重基本無(wú)變化，進(jìn)入生長(zhǎng)平穩(wěn)期。圖1

2.2"菌種產(chǎn)纖維素酶初篩

研究表明，KN的透明圈直徑最大為3.00 cm，HQ的菌落直徑最大為1.67 cm，而KN的透明圈直徑與菌落直徑比值最大為2.286；各菌株的纖維素酶的相對(duì)比活力分別為0.606、0.762、0.599和0.564，其中KN的纖維素酶的相對(duì)比活力最大。表1

2.3"濾紙條崩解試驗(yàn)及失重率變化

研究表明，KN、HB降解濾紙條程度較完全，濾紙條從長(zhǎng)方形降解成短狀碎圓片；HQ也同樣將濾紙條分解成碎紙片但破碎程度較弱；LS降解紙條邊緣彎曲且有少絮狀物。KN、HB兩株菌株降解濾紙條后濾紙的失重率顯著遠(yuǎn)高于另外2株菌，其失重率分別為43.37%、47.35%。KN、HB具有較好的纖維素降解能力。圖2～3

2.4"菌種產(chǎn)木聚糖酶初篩

研究表明，KN的透明圈直徑最大為6.1 cm，LS的菌落直徑最大為1.85 cm，而HQ的透明圈直徑與菌落直徑比值最大為4.029；各菌株的木聚糖酶的相對(duì)比活力分別為0.643、0.945、1.007和0.555，其中HQ產(chǎn)木聚糖酶的相對(duì)比活力最大。表2"

2.5"菌種間對(duì)峙試驗(yàn)

研究表明，KN、HB和LS之間可以很好的相融合不存在拮抗作用，而HQ與KN、HB和LS之間均產(chǎn)生拮抗，其中與LS的拮抗反應(yīng)最為強(qiáng)烈。圖4

2.6"4株真菌產(chǎn)非淀粉多糖酶比較

2.6.1"葡萄糖和木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

研究表明，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 Y = 0.003 5X - 0.018，R2 為 0.999 7；木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 Y = 0.710 5X + 0.010 2，R2 = 0.999 6。R2值表征適合用于葡萄糖、木糖含量的測(cè)定。圖5

2.6.2"菌株搖瓶復(fù)篩產(chǎn)纖維素酶

研究表明，4株真菌單獨(dú)發(fā)酵，在發(fā)酵第4 d 時(shí)，CMC酶、濾紙酶活性達(dá)到最大值，其中CMC酶活性最高的是KN，為2.305 IU/mL。LS產(chǎn)CMC酶及濾紙酶的水平顯著低于另外3株菌，分別為1.703、0.177 IU/mL，與初篩結(jié)果基本吻合。圖6"

2.6.3"4株菌株搖瓶復(fù)篩產(chǎn)木聚糖酶

研究表明，與HB、KN、LS相比，發(fā)酵前期 HQ產(chǎn)木聚糖酶能力最好，搖瓶發(fā)酵第4 d時(shí)木聚糖酶活性最高可達(dá)89.881 IU/mL，產(chǎn)酶時(shí)間較其他3株菌更早，但產(chǎn)酶穩(wěn)定期短暫，達(dá)到最高峰后又開(kāi)始逐步下降。曲霉產(chǎn)孢速度以及生長(zhǎng)速度較木霉屬更快。KN從發(fā)酵第4 d 酶活力開(kāi)始迅速增長(zhǎng)，直至發(fā)酵第8 d酶活達(dá)到穩(wěn)定期，微生物轉(zhuǎn)而利用藥渣需要適應(yīng)的過(guò)程，一旦適應(yīng)生長(zhǎng)，合成酶的速度會(huì)明顯提高。將KN與HB進(jìn)行組合發(fā)酵木聚糖酶活力最高可達(dá)131.707 IU/mL。 圖7

2.7"甘草渣固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶

2.7.1"單菌與混菌固態(tài)發(fā)酵甘草渣產(chǎn)酶變化形態(tài)學(xué)"

研究表明，黑曲霉固態(tài)發(fā)酵甘草渣產(chǎn)酶速度較混菌產(chǎn)酶速度更快，當(dāng)黑曲霉發(fā)酵第4 d時(shí)，培養(yǎng)基內(nèi)容物基本變成純黑色，而混菌發(fā)酵直至第7 d時(shí)，培養(yǎng)基內(nèi)容物才能完全變成純綠色。表3，表4

2.7.2"單菌與混菌固態(tài)發(fā)酵甘草渣產(chǎn)非淀粉多糖酶對(duì)比"

研究表明，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，無(wú)論是單菌還是混菌組合，產(chǎn)纖維素酶活力到第8 d開(kāi)始下降。HB與KN混菌組合發(fā)酵產(chǎn)酶效果明顯優(yōu)于HQ單獨(dú)發(fā)酵。表5

單菌在發(fā)酵第5 d時(shí)產(chǎn)木聚糖酶活力可達(dá)77.056 U/g，混菌發(fā)酵產(chǎn)酶結(jié)果略低于HQ發(fā)酵，HQ對(duì)半纖維素有較強(qiáng)降解能力，其單獨(dú)發(fā)酵時(shí)產(chǎn)木聚糖酶效果良好。表6

3"討 論

3.1

中藥藥渣中含有大量的木質(zhì)素、纖維素和功能性成分，具有較大的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值［14，15］。研究利用平板對(duì)峙試驗(yàn)將不具有拮抗作用的菌株進(jìn)行組合，并通過(guò)初篩與搖瓶復(fù)篩，篩選出產(chǎn)酶性能較強(qiáng)的真菌，采用甘草渣固態(tài)發(fā)酵形式，為微生物提供合適碳源，藥渣有潛力實(shí)現(xiàn)其高值化利用，成為生產(chǎn)復(fù)合酶的低成本底物。菌株對(duì)酶有誘導(dǎo)能力，試驗(yàn)研究得出康寧木霉與黃孢原毛平革組合固態(tài)發(fā)酵甘草渣產(chǎn)酶能力優(yōu)于黑曲霉單獨(dú)固態(tài)發(fā)酵甘草渣。說(shuō)明混菌發(fā)酵產(chǎn)各自優(yōu)勢(shì)酶系的同時(shí)可實(shí)現(xiàn)酶系互補(bǔ)，提高甘草渣生物質(zhì)利用率。纖維素降解需要3種酶協(xié)調(diào)配合才能將其轉(zhuǎn)化為葡萄糖，在降解過(guò)程中發(fā)揮作用的先是內(nèi)切酶，產(chǎn)物多為纖維二糖、纖維三糖，最終β-葡聚糖苷酶將纖維二糖和水溶性纖維素降解為葡萄糖［16］。半纖維素降解能夠增加其他酶與底物的接觸機(jī)會(huì)，而含量較多的半纖維素主要為木聚糖，因此有效水解木聚糖有利于木質(zhì)纖維類物質(zhì)的高效利用［17］。目前研究較多的產(chǎn)纖維素酶或半纖維素酶是真菌，真菌比細(xì)菌更受青睞，因?yàn)槠錆B透能力和通用的底物消耗能力更強(qiáng)［18-20］。單麗君［21］以干燥柑橘皮為原料生產(chǎn)酶制劑，篩選黑曲、康寧木霉以及里氏木霉的產(chǎn)酶能力，發(fā)現(xiàn)木霉生長(zhǎng)速度較曲霉和青霉慢，與研究基本一致。田杰［22］以藤茶為基質(zhì)，通過(guò)培養(yǎng)基優(yōu)化發(fā)現(xiàn)黑曲霉在藤茶基質(zhì)上的產(chǎn)酶特性良好，其中產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶最高可達(dá)373.76IU/g、120.33 IU/g。錢靜亞等［23］將玉米芯粉和水進(jìn)行復(fù)配，接入黃孢原毛平革菌固態(tài)發(fā)酵得到的纖維素酶和木聚糖酶分別為2.54、10.86 U/ g，其中在發(fā)酵第6 d 時(shí)纖維素酶活性迅速上升。邱首哲等［24］利用分離出的擴(kuò)展青霉與不同類型的藥渣進(jìn)行發(fā)酵，其中甘草搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)的濾紙酶可達(dá)1.788 IU/mL，CMC酶為10.935 IU/mL。把真菌混合發(fā)酵后，其降解藥渣的速率明顯高于任何一個(gè)單一菌株。夏強(qiáng)［25］發(fā)現(xiàn)地衣芽孢桿菌、黑曲霉和綠色木霉組成的細(xì)菌-真菌復(fù)合菌系產(chǎn)纖維素酶的能力優(yōu)于單一菌株，復(fù)合菌系顯著提高了降解水稻、玉米和小麥秸稈的能力，與研究一致。

3.2

復(fù)合菌系的構(gòu)建增加了酶的環(huán)境適應(yīng)性和功能穩(wěn)定性，彌補(bǔ)了單一菌種的纖維素酶種類不全和纖維素酶配比不協(xié)調(diào)等缺點(diǎn)，從而提升降解速度［26］。白腐真菌與木霉屬可利用自身產(chǎn)酶特性，降解富含豐富綜纖維素的農(nóng)業(yè)生物質(zhì)。例如，張仲卿等［27］擬康寧木霉與黃孢原毛平革菌混合發(fā)酵玉米秸稈的效果顯著優(yōu)于單菌發(fā)酵玉米秸稈，纖維素和木質(zhì)素降解率最高分別為36.80%和 28.87%。王志等［28］用擬康氏木霉和白腐菌混合發(fā)酵秸稈，發(fā)現(xiàn)秸稈的纖維素降解率和木質(zhì)素降解率分別為40.38%、31.52%，比單獨(dú)使用擬康氏木霉或白腐菌處理秸稈的效果顯著提高。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)酵第8 d開(kāi)始，菌體可能逐漸老化，產(chǎn)酶能力逐漸下降，所產(chǎn)酶部分失活，從而影響了纖維素和木質(zhì)素的降解率。甘草渣中纖維素含量48.6%、半纖維素含量可達(dá)18.1%［3］。

4"結(jié) 論

4株真菌均具有產(chǎn)纖維素酶、木聚糖酶的能力，但產(chǎn)酶速度、能力均有差異。HB、KN 2株菌產(chǎn)酶能力不相上下且相互不存在拮抗作用，可進(jìn)行混菌發(fā)酵降解甘草渣中的木質(zhì)素和纖維素。HQ單獨(dú)發(fā)酵降解半纖維素能力較強(qiáng)，固態(tài)發(fā)酵工藝優(yōu)化還是選用混菌發(fā)酵效果更佳。

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Screening of strains producing non-starch polysaccharide enzyme"""by fermentation of licorice residue and its dynamic changes

YANG Yifan1， GAO Yan2， LIU Yanan3， HUO Xiangdong2，""LOU Kai2， GUAN Bo3， CHEN Kaixu1， ZENG Jun2

（1. "College of Animal Science， Xinjiang Agricultural University， Urumqi 830052，China; 2. Institute of Microbial Applications， Xinjiang Academy of Agricultural Sciences/ Xinjiang Special Environment Microbial Laboratory， Urumqi 830091， China; 3. College of Food Science， Shihezi University， Shihezi Xinjiang 832000， China）

Abstract：【Objective】 ""To screen a strain with high yield of non-starch polysaccharide enzyme four fungi in the hope of laying a foundation for the production of non-starch polysaccharide enzyme by solid-state fermentation of licorice residue.

【Methods】 ""Four kinds of fungi （Aspergillus niger， Trichoderma reesei， Phanerochaete chrysosporium and Trichoderma koningii） were primarily screened by Congo red method and filter paper strip disintegration test， and the CMC enzyme， filter paper enzyme and xylanase activities were determined by shake flask fermentation of residue.The strain with the highest enzyme activity was fermented with licorice residue in solid state to verify its enzyme production effect.

【Results】 ""Through the preliminary screening， it was found that all four strains of fungi had the ability to produce cellulase and xylanase.The antagonistic effects between Aspergillus Niger and other three strains was found by plate confrontation test.According to the results of enzyme activity determination， Phanerochaete chrysosporium and Trichoderma koningii produced the highest cellulase than the other two fungi， and the CMC enzyme activity reached 2.10 and 2.31 IU/mL on the fourth day of fermentation.The highest xylanase activity produced by Aspergillus Niger through shake flask re-screening fermentation could reach 97.46 IU/mL. However， the xylanase activity of Phanerochaete chrysosporium and Trichoderma koningii could reach 131.707 IU/mL at the highest.

【Conclusion】 ""The growth cycle of non-starch polysaccharide activity produced by mixed solid-state fermentation of licorice residue with Phanerochaete chrysosporium and Trichoderma koningii is more stable and the yield is higher， therefore， licorice residue， as an agricultural by-product， has the potential to become a low-cost substrate for enzyme production in the future.

Key words：""licorice residue; cellulase; xylanase; solid state fermentation

Fund projects：""Xinjiang Uygur Autonomous Region key research and development plan project sub-topic （2022B02057-1）;The Science and Technology Action Project for the Development of Rural Industries in Xinjiang Uygur Autonomous Region （2022NC073）

Correspondence author：""CHEN Kaixu（1983-）， male，Lecturer， Ph.D.， Master's Supervisor， specializing in livestock and poultry genetic breeding and animal nutrition，（E-mail）chenkaixu@126.com

ZENG Jun（1982-）， male，Associate Researcher， Ph.D.， Master's Supervisor， specializing in the exploration and application of special environmental microbial resources in Xinjiang，（E-mail）leo924.student@sina.com

收稿日期（Received）：

2024-03-27

基金項(xiàng)目：

新疆維吾爾自治區(qū)重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目子課題（2022B02057-1）;新疆維吾爾自治區(qū)鄉(xiāng)村振興產(chǎn)業(yè)發(fā)展科技行動(dòng)項(xiàng)目（2022NC073）

作者簡(jiǎn)介：

楊奕凡（1999-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料，（E-mail）623802746@qq.com

通訊作者：

陳開(kāi)旭（1983-），男，講師，博士，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樾笄葸z傳育種及動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)，（E-mail）chenkaixu@126.com

曾軍（1982-），男，副研究員，博士，研究方向?yàn)樾陆厥猸h(huán)境微生物資源挖掘及應(yīng)用，（E-mail）leo924.student@sina.com