基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)探究三棱-莪術(shù)配伍在卵巢癌輔助治療中的作用機(jī)制*

李鴻博，石丹寧，張杜娟，張 璐，李 翡△

1 陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712000； 2 陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046；3 北京中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，北京 100029

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的三大腫瘤之一，由于其發(fā)病早期多無(wú)典型臨床癥狀，約70%的患者在確診時(shí)已屬晚期［1-2］。針對(duì)卵巢癌，臨床上常采用手術(shù)聯(lián)合放、化療的方案進(jìn)行治療，不幸的是，雖然進(jìn)行了及時(shí)的干預(yù)，但晚期卵巢患者的5 年生存率仍不足50%［3-4］。一項(xiàng)關(guān)于中國(guó)癌癥的統(tǒng)計(jì)顯示，在2015 年，中國(guó)女性中卵巢癌患者達(dá)到5.21 萬(wàn)例，死亡人數(shù)達(dá)到2.25 萬(wàn)例［5］。此外，全球每年新發(fā)卵巢癌約為22.5 萬(wàn)例，且發(fā)病年齡趨于年輕化［6］。怎樣降低卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)，提高患者5 年生存率，成為卵巢癌治療的研究重點(diǎn)。盡管新輔助化療、靶向治療等方法在臨床上得到重視，但患者耐受性程度不同或由于靶向單一，以至于無(wú)法滿足所有類型卵巢癌患者的治療需求，使得上述療法在臨床上的應(yīng)用有一定局限性。

近年來(lái)，中醫(yī)藥以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，在腫瘤的輔助治療中發(fā)揮著重要作用。中醫(yī)學(xué)古籍中雖無(wú)對(duì)“卵巢癌”一詞的記載，但其臨床癥狀和體征與《黃帝內(nèi)經(jīng)》中描述的“腸覃”相似，概屬中醫(yī)婦科“癥瘕”范疇。治療該類病證，中醫(yī)多采用活血化瘀，消積化癥之法。通過(guò)研究臨床常用于輔助治療卵巢的中藥復(fù)方，發(fā)現(xiàn)常用方劑理沖生髓飲、益氣活血解毒湯、復(fù)方大七氣湯等，均屬臨床中輔助治療卵巢癌的常用方劑［7-9］。分析其組方發(fā)現(xiàn)，以上方劑中均含有“三棱-莪術(shù)”藥對(duì)。三棱，味苦，性平，歸肝、脾經(jīng)。其功效為破血行氣，消積止痛，常用于治療癥瘕痞塊，瘀血經(jīng)閉，胸痹心痛等證；莪術(shù)，味辛、苦，性溫，歸肝、脾經(jīng)，亦有破血行氣，消積止痛之效，常用于治療血瘀腹痛、積聚、婦女血瘀經(jīng)閉等。臨床上，該藥亦廣泛應(yīng)用于其他婦科腫瘤的治療中，可發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫等作用。

為了探究三棱-莪術(shù)藥對(duì)治療卵巢癌的潛在機(jī)制，本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，篩選三棱-莪術(shù)的有效成分及其作用靶點(diǎn)，通過(guò)生物功能及通路富集等分析其潛在的作用機(jī)制，此外，使用分子對(duì)接技術(shù)深入研究核心成分及關(guān)鍵靶點(diǎn)的相互作用，以期為三棱-莪術(shù)配伍的臨床應(yīng)用提供新的理論依據(jù)，為臨床輔助治療卵巢癌以及開(kāi)發(fā)新藥提供新的參考。

1 資料與方法

1.1 “三棱-莪術(shù)”藥對(duì)的活性成分及作用靶點(diǎn)的篩選基于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP）［10］，檢索三棱及莪術(shù)兩味中藥的化學(xué)成分，篩選生物口服利用度（oral availability，OB）≥30%，且類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18 的化合物，同時(shí)收集其作用靶點(diǎn)。利用R軟件，并基于Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)將化合物作用靶點(diǎn)轉(zhuǎn)換為規(guī)范基因名。

1.2 卵巢癌相關(guān)基因的篩選并獲取“藥物-疾病”交集基因通過(guò)Genecard 數(shù)據(jù)庫(kù)，以“ovarian cancer”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，得到7946 個(gè)與卵巢癌相關(guān)的基因，根據(jù)相關(guān)性評(píng)分，篩選評(píng)分≥10 的基因進(jìn)行后續(xù)研究。將得到的1541 個(gè)與卵巢癌相關(guān)的基因與三棱-莪術(shù)藥對(duì)的靶基因取交集，得到27 個(gè)“藥物-疾病”交集基因，并繪制韋恩圖以展示二者的聯(lián)系。

1.3 構(gòu)建“藥物-疾病”交集基因蛋白互作網(wǎng)絡(luò)以獲取關(guān)鍵基因?qū)ⅰ八幬?疾病”交集基因?qū)隨TRING 11.0［11］，獲取該27 個(gè)靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)互相作用網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)運(yùn)用Cluster 功能將交集靶點(diǎn)進(jìn)行聚類分析，進(jìn)一步闡述交集靶點(diǎn)間的緊密關(guān)系。此后，將PPI 網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)入Cytoscape 3.6 軟件中，利用Cytohuba插件對(duì)PPI進(jìn)行進(jìn)一步的分析以確定關(guān)鍵基因。

1.4 基因本體論（gene ontology，GO）與京都基因和基因組百科全書(shū)（kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析應(yīng)用在線富集分析軟件（WEB-based GEne SeT AnaLysis Toolkit，http：//www.webgestalt.org/）對(duì)“疾病-藥物”重合基因進(jìn)行GO 富集分析，富集內(nèi)容主要包括生物過(guò)程（biological process，BP）、細(xì)胞組成（cellular component，CC）及分子功能（molecular function，MF）三個(gè)部分，并以P＜0.01 為獲取標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)其富集程度及顯著性，對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行可視化處理。此外，應(yīng)用R 軟件進(jìn)行KEGG 通路富集分析，并通用Cytoscape 軟件中的ClueGo 富集分析插件以P＜0.01 為篩選標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)通路富集結(jié)果進(jìn)行聚類分析。

1.5 構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖應(yīng)用Cytoscape 3.6.0 軟件，分別構(gòu)建“中藥-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)及“靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)一步分析三棱-莪術(shù)配伍在治療卵巢癌過(guò)程中發(fā)揮作用的核心成分、關(guān)鍵基因及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，以闡釋其作用的潛在機(jī)制。

1.6 核心成分與關(guān)鍵基因的分子對(duì)接根據(jù)“中藥-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)及PPI 互作網(wǎng)絡(luò)的分析結(jié)果，將活性成分及作用靶點(diǎn)按degree 高低進(jìn)行排序，選擇排序前兩位的化合物以及核心靶點(diǎn)，在RSCB PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇相應(yīng)的靶點(diǎn)蛋白結(jié)構(gòu)并下載pdb 格式文件。根據(jù)TCMSP 中化合物分子的結(jié)構(gòu)圖，在ChemDraw 3D 軟件中繪制核心成分結(jié)構(gòu)圖。通過(guò)AutoDockTools 軟件將靶點(diǎn)蛋白和化合物分子配體進(jìn)行處理，再通過(guò)AutoDock-Vina計(jì)算結(jié)合能，輸出對(duì)接結(jié)果，應(yīng)用Pymol 及Discovery Studio進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化。

2 結(jié)果

2.1 三棱-莪術(shù)的活性成分與作用靶點(diǎn)的篩選通過(guò)TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)篩選，共得到三棱活性成分30個(gè)及莪術(shù)活性成分81個(gè)。符合篩選條件OB≥30%，DL≥0.18 的活性成分分別為三棱5 個(gè)，莪術(shù)3 個(gè)。在TCMSP中分別輸入這8個(gè)活性成分，獲取其潛在的作用靶點(diǎn)，去重后得到60個(gè)靶點(diǎn)。見(jiàn)表1。

2.2 卵巢癌相關(guān)靶點(diǎn)及“疾病-藥物”重合靶點(diǎn)的獲取通過(guò)Genecard 數(shù)據(jù)庫(kù)，以“ovarian cancer”為關(guān)鍵詞，檢索到人類相關(guān)基因共7946 個(gè)，根據(jù)基因與疾病相關(guān)性評(píng)分，篩選評(píng)分≥10 的基因，得到1540 個(gè)與卵巢癌相關(guān)的基因。三棱-莪術(shù)作用于卵巢癌的潛在靶點(diǎn)，見(jiàn)表2。將三棱-莪術(shù)靶點(diǎn)與卵巢癌相關(guān)基因取交集，共得到27 個(gè)“疾病-藥物”交集基因。見(jiàn)圖1。

圖1 三棱-莪術(shù)與卵巢癌交集靶點(diǎn)Venn圖

表2 三棱-莪術(shù)藥對(duì)治療卵巢癌核心靶點(diǎn)

2.3 蛋白互作（Protein-Protein Interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析通過(guò)STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建這27 個(gè)重合基因的PPI 網(wǎng)絡(luò)，分析顯示該網(wǎng)絡(luò)中共有27 個(gè)節(jié)點(diǎn)（nodes），124 條邊（edges），其中PRSS1 基因與其他各基因之間無(wú)互相作用，見(jiàn)圖2。選取剩余26 個(gè)基因?qū)隒ytoscape 3.6.0 軟件中，應(yīng)用Cytohubba插件，分析上述26個(gè)基因中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)。其中JUN，CASP3，ESR1，PTGS2 等基因互作頻次最高，靶點(diǎn)之間的相互作用強(qiáng)，degree值大，在該互作網(wǎng)絡(luò)中具有重要作用，說(shuō)明上述基因可能為三棱、莪術(shù)活性成分在卵巢癌治療中的潛在作用靶點(diǎn)。見(jiàn)圖3。

圖2 通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖3 PPI網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 “中藥-活性成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建將獲得的中藥、活性成分、疾病、靶點(diǎn)等相關(guān)信息通過(guò)R 軟件進(jìn)行分析，其結(jié)果通過(guò)Cytoscape 3.6.0軟件進(jìn)行可視化處理，獲得“中藥-活性成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)共包括節(jié)點(diǎn)35 個(gè)，其中中藥2個(gè)，活性成分5個(gè)，靶點(diǎn)27個(gè)，疾病1個(gè)。結(jié)果充分提示三棱、莪術(shù)中活性成分與卵巢癌多靶點(diǎn)作用的特點(diǎn)。通過(guò)分析網(wǎng)絡(luò)發(fā)現(xiàn)，在三棱諸成分中，與治療卵巢癌這一作用相關(guān)性最高的前三位活性成分依次為：芒柄花黃素，β-谷甾醇，豆甾醇，而在莪術(shù)諸成分中，發(fā)揮主要作用的成分為常春藤皂苷元。見(jiàn)圖4。

圖4 中藥-活性成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 GO 功能注釋與KEGG 信號(hào)通路富集分析通過(guò)在線富集分析軟件進(jìn)行GO 富集后，得到結(jié)果如圖5所示。結(jié)果顯示，藥物-疾病重合基因參與的生物過(guò)程主要包括代謝過(guò)程、刺激反應(yīng)、生物調(diào)節(jié)等；參與的細(xì)胞組成主要包括膜包圍的內(nèi)腔、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)等；參與的分子功能主要包括蛋白質(zhì)結(jié)合、離子絡(luò)合、核酸結(jié)合等。通過(guò)R軟件進(jìn)行KEGG通路富集分析，共得到104條相關(guān)通路（P＜0.05）。根據(jù)其富集程度排序后篩選前20 條通路進(jìn)行可視化處理得到如圖6 所示的氣泡圖，結(jié)果顯示疾病-藥物重合基因主要神經(jīng)退行性病變、乙肝、HIV病毒感染、卡波濟(jì)肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、人巨細(xì)胞病毒感染、IL-17 信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路等相關(guān)。此外，應(yīng)用Cytoscape/Clue Go 軟件對(duì)重合基因以P＜0.01，Kappa 系數(shù)=0.4 為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行KEGG通路聚類分析，結(jié)果如圖7所示，進(jìn)一步提示三棱、莪術(shù)在卵巢癌的治療中可能主要通過(guò)調(diào)控IL-17 信號(hào)通路、凋亡信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路等來(lái)達(dá)到治療目的。

圖5 GO富集分析

圖6 KEGG通路富集分析

圖7 KEGG通路聚類分析

2.6 “三棱-莪術(shù)”核心活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接綜合“中藥-活性成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)”及PPI 互作網(wǎng)絡(luò)，選取三棱的核心成分芒柄花黃素（formononetin）、β-谷甾醇（beta-sitosterol）與莪術(shù)的核心活性成分常春藤皂苷元（hederagenin）分別與PPI網(wǎng)絡(luò)排名前十且與核心成分相關(guān)聯(lián)的靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接模擬研究。對(duì)接結(jié)果如表3所示，各分子間親和力均小于-7 kcal/mol，說(shuō)明分子間具有良好的對(duì)接活性。其中，芒柄花黃素、β-谷甾醇及常春藤皂苷元與PTGS2 對(duì)接時(shí)，親和力均小于-9.0 kcal/mol，對(duì)接活性極佳，這表明PTGS2 很可能是三棱-莪術(shù)藥對(duì)治療卵巢癌的潛在靶點(diǎn)。使用Pymol及Discovery Studio軟件分析對(duì)接結(jié)果并將結(jié)果進(jìn)行可視化，分子間作用力由2D 圖展示，見(jiàn)圖8-10，其中PTGS2 與β-谷甾醇相互作用的Vina Score（即結(jié)合能）最佳，為-9.3 kcal/mol。結(jié)合圖9 可以看出，β-谷甾醇與PTGS2蛋白之間通過(guò)豐富的π-烷基疏水鍵形成較為穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。其次，芒柄花黃素與PTGS2（結(jié)合能為-9.1 kcal/mol）依靠氫鍵、π-烷基疏水鍵、π-陰離子鍵等形成較為穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。

圖8 芒柄花黃素與對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)對(duì)接結(jié)果

圖9 β-谷甾醇與對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)對(duì)接結(jié)果

圖10 常春藤皂苷元與對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)對(duì)接結(jié)果

表3 三棱-莪術(shù)中活性成分與其對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的結(jié)合能kcal/mol

3 討論

手術(shù)及術(shù)后放化療依然是目前臨床治療卵巢癌的主要手段。長(zhǎng)期以來(lái)，中醫(yī)藥在婦科各類疾病的治療中具有舉足輕重的地位，尤其在惡性腫瘤的治療過(guò)程中，手術(shù)及放化療后配合中醫(yī)藥輔助治療，可明顯緩解副作用給患者帶來(lái)的痛苦［12］。此外，堅(jiān)持口服湯藥的患者，5 年生存率明顯高于未經(jīng)中醫(yī)藥治療的患者［13-14］。卵巢癌在中醫(yī)婦科學(xué)中屬“癥瘕”范疇，其證成因多為瘀血凝滯。三棱、莪術(shù)二藥均有破血行氣、消積止痛之效，善緩結(jié)消癥，可治血瘀腹痛及婦女血瘀經(jīng)閉等，但由于中藥本身多成分、多靶點(diǎn)的特性，使其作用機(jī)制的詳盡闡述頗為困難。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是近年來(lái)基于系統(tǒng)生物學(xué)的一種新興研究方法，能夠較為系統(tǒng)地探討中藥及其復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)的作用機(jī)制［15-16］，為研究中藥帶來(lái)全新的思路。

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合分子對(duì)接技術(shù)的研究方法，較為全面地探究了治療卵巢癌常見(jiàn)配伍三棱-莪術(shù)的活性成分及其潛在靶點(diǎn)。通過(guò)構(gòu)建并分析“中藥-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果發(fā)現(xiàn)芒柄花黃素、β-谷甾醇、常春藤皂苷元是三棱-莪術(shù)藥對(duì)發(fā)揮治療卵巢癌作用的關(guān)鍵活性成分。芒柄花黃素（formononetin），又稱刺芒柄花素或芒柄花素，是一種生物活性異黃酮，是常用中藥當(dāng)歸、黃芪、三棱等的活性成分之一。研究表明，芒柄花黃素具有保護(hù)血管、抗炎、抗焦慮、抗腫瘤［17］等多種活性。其中，抗腫瘤活性，尤其是其抗卵巢癌的活性，近年來(lái)備受研究者們關(guān)注。古彩茹等［18］通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，芒柄花黃素能夠抑制卵巢癌細(xì)胞SKOV-3 的遷移和侵襲，其作用機(jī)制可能是通過(guò)芒柄花黃素增加了E-cadherin 并降低MMP-9 的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。顧萬(wàn)等［19］同樣利用SKOV-3細(xì)胞進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果顯示芒柄花黃素能夠通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡蛋白Bax 及抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)卵巢癌SKOV-3 細(xì)胞的凋亡。常春藤皂苷元（Hederagenin）是一種五環(huán)三帖酸類化合物，具有抗腫瘤［20］、抗抑郁［21］等藥理作用和生物活性。左方等［22］通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，常春藤皂苷元能夠抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7 的增殖，誘導(dǎo)凋亡和減少侵襲，其作用機(jī)制分別涉及調(diào)節(jié)PCNA、Bcl-2/Bax 及MMP-9 的表達(dá)；此外，研究表明常春藤皂苷元表現(xiàn)出對(duì)宮頸癌細(xì)胞［23］、胃癌細(xì)胞［24］等多種腫瘤細(xì)胞明顯的抑制作用，然而，其在卵巢癌中的藥理作用尚未見(jiàn)報(bào)道。β-谷甾醇是一種植物甾醇，存在于包括天麻在內(nèi)的多種中草藥之中，可在人體內(nèi)發(fā)揮多種有益的作用，其所表現(xiàn)出的抗腫瘤作用逐漸成為天然藥物的研究重點(diǎn)［25］。與常春藤皂苷元類似的是，盡管β-谷甾醇能夠作用于多種腫瘤細(xì)胞，發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖或誘導(dǎo)其凋亡的藥理作用［26］，但在卵巢癌細(xì)胞中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道，這將為我們?nèi)蘸蟮难芯刻峁┮恍﹨⒖肌?/p>

芒柄花黃素、常春藤皂苷元及β-谷甾醇分別與PPI網(wǎng)絡(luò)中排名前十的靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接后，活性成分與其對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的結(jié)合能均小于-7.0 kcal/mol，說(shuō)明以上活性成分與其對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)結(jié)合性良好。其中，PTGS 是上述三種活性成分的共同靶點(diǎn)，且其對(duì)接結(jié)合能均小于-9.0 kcal/mol，表明活性成分與PTGS2 之間具有較強(qiáng)的結(jié)合力。前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合酶2（prostaglandin endoperoxide synthase 2，PTGS2），又稱環(huán)氧化酶2（cyclooxygenase-2，COX-2），是前列腺素生物合成的關(guān)鍵酶，兼有環(huán)氧化酶和過(guò)氧化物酶的作用。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究顯示，COX-2 在人類多種腫瘤中呈異常表達(dá)，且能夠在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療的敏感性中發(fā)揮多方面的作用［27］。選擇性COX-2 抑制劑也被作為一種新型的抗癌藥得到了廣泛關(guān)注和研究［28］。研究表明，在卵巢癌患者中，COX-2 的表達(dá)顯著增多，且其高表達(dá)往往與卵巢癌的不良預(yù)后相關(guān)［29］。此外，COX-2能夠通過(guò)調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞遷移，同時(shí)增強(qiáng)了患者對(duì)順鉑的耐藥性［30］，而選擇性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布能夠顯著降低由于COX-2高表達(dá)而引起的卵巢癌細(xì)胞遷移和耐藥性［31-32］，這說(shuō)明COX-2 作為卵巢癌治療的潛在靶點(diǎn)，值得進(jìn)一步探究。然而，COX-2 抑制劑在臨床使用中所帶來(lái)的心腦血管及消化系統(tǒng)損傷等副作用［33-34］亦不容忽略，因此，若能進(jìn)一步闡明三棱-莪術(shù)及其活性成分這類天然成分對(duì)PTGS2 的作用，將對(duì)COX-2 抑制劑在腫瘤治療中的應(yīng)用帶來(lái)一些新的參考。

在對(duì)關(guān)鍵基因進(jìn)行KEGG 通路富集研究后，我們發(fā)現(xiàn)這些關(guān)鍵基因主要與神經(jīng)退化信號(hào)通路、乙型肝炎、HIV-1 感染、凋亡信號(hào)通路、卡波濟(jì)肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、EB病毒感染、人巨細(xì)胞病毒感染、IL-17 信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑具有較強(qiáng)的關(guān)聯(lián)。將這些相關(guān)通路進(jìn)行聚類分析后發(fā)現(xiàn)，這些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑主要分為以下幾類：卵巢類固醇生成、甲狀腺激素信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路、白細(xì)胞介素17（interleukin 17，IL-17），信號(hào)通路、凋亡信號(hào)通路、乙肝及利什曼病。這說(shuō)明三棱-莪術(shù)藥對(duì)在發(fā)揮對(duì)卵巢癌的輔助治療作用時(shí)，可能主要是通過(guò)上述信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制來(lái)實(shí)現(xiàn)的。IL-17 是主要由T 細(xì)胞的亞型Th17細(xì)胞分泌產(chǎn)生的炎癥相關(guān)性細(xì)胞因子。研究表明，無(wú)論是否是炎癥相關(guān)性腫瘤，炎癥因子均是抑制腫瘤炎性作用的重要介質(zhì)，能夠促進(jìn)腫瘤相關(guān)性炎性，使腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)控［35-36］。IL-17 是近年來(lái)備受關(guān)注的促炎細(xì)胞因子，在包括卵巢癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中，均存在IL-17 的高表達(dá)［37-38］，因此，IL-17 及其介導(dǎo)的信號(hào)通路在卵巢癌的研究中逐漸受到廣泛關(guān)注。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)三棱-莪術(shù)藥對(duì)在卵巢癌的輔助治療中可能與IL-17信號(hào)通路密切相關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)值得通過(guò)后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行更為深入的探究。

總而言之，卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展往往涉及多靶點(diǎn)、多通路、多環(huán)節(jié)。臨床中，在使用靶向藥物治療時(shí)，逐漸發(fā)現(xiàn)了單靶點(diǎn)藥物的局限性，因此，多靶點(diǎn)的藥物治療成為研究者新的研究方向［39-40］?；诰W(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)，對(duì)三棱-莪術(shù)藥對(duì)在卵巢癌輔助治療中的作用機(jī)制的探討，充分體現(xiàn)了三棱-莪術(shù)所發(fā)揮的多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)，為后續(xù)進(jìn)一步的研究提供了參考。