血清miR-505和miR-15與潰瘍性結(jié)腸炎內(nèi)鏡下活動(dòng)度的關(guān)系

胡何英，翟慧敏，劉亞楠

（青島市城陽區(qū)人民醫(yī)院 消化內(nèi)科，山東 青島 266109）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種腸道黏膜損傷的慢性炎性疾病，病程較長，且易反復(fù)發(fā)作，隨著病程的延長，可增加癌變風(fēng)險(xiǎn)，故早期評(píng)估病情對患者具有重要意義[1]。內(nèi)鏡檢查是臨床評(píng)估UC患者病情的重要手段，不同分級(jí)的內(nèi)鏡下活動(dòng)度存在一定差異，是臨床診斷UC 病情的重要參考指標(biāo)[2]。但是，結(jié)腸鏡檢查會(huì)增加患者痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，且部分患者有結(jié)腸鏡檢查禁忌證等，內(nèi)鏡檢查應(yīng)用受限[3]。尋找一種簡便、安全和有效的血清學(xué)指標(biāo)，來評(píng)估患者內(nèi)鏡活動(dòng)度，具有重要意義[4]。有研究[5]表明，miRNA 與炎性腸病密切相關(guān)，血清miR-505 在UC患者黏膜組織中異常表達(dá)，但關(guān)于miR-505與UC患者內(nèi)鏡下活動(dòng)度關(guān)系的研究較少。UC 作為一種炎性疾病，炎癥反應(yīng)在其發(fā)病和發(fā)展中起到重要作用，而miR-15與炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切。因此，推測miR-15與UC的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，但關(guān)于miR-15與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系，研究報(bào)道較少[6]。基于此，本研究通過檢測患者血清miR-505 和miR-15 水平變化情況，分析其表達(dá)與UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的關(guān)系，旨在為UC患者病情評(píng)估提供指導(dǎo)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選 取本院2020 年8 月—2022 年5 月收治的98 例UC 患者作為觀察組，選取同期80 例腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）患者作為對照組，回顧性分析患者的臨床資料。兩組患者性別、年齡和體重指數(shù)（body mass index，BMI）等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較Table 1 Comparison of general data between the two groups

納入標(biāo)準(zhǔn)：1）符合《中國炎癥性腸病組織病理診斷共識(shí)意見》[7]中UC診斷標(biāo)準(zhǔn)，IBS參考2016年羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)[8]；2）年齡＞18歲；3）臨床資料和內(nèi)鏡資料完整；4）患者知情且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：1）合并惡性腫瘤、感染性疾病和血液系統(tǒng)疾病等；2）合并其他腸道疾??；3）合并嚴(yán)重肝、腎功能異常者；4）合并嚴(yán)重外傷或既往有手術(shù)史者；5）近3個(gè)月內(nèi)服用過影響研究的相關(guān)藥物者。

1.2 方法

取患者空腹靜脈血約5 mL，以4 000 r/min 離心10 min，取上清液，使用美國Thermo 公司的TRIzol試劑盒（批號(hào)：1405266），提取總RNA，使用美國Thermo 公司TaqManTMMicroRNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（批號(hào)：1405137）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA，PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件為：95℃ 60 s 預(yù)變性，95℃ 15 s，15 s 退火，72℃ 45 s，共40個(gè)循環(huán)。miR-505 正向引物5’-CTACGTGGGTCACCCCCTA-3’，反向引物5’-CCAAAGGCGACCTCGTAG-3’。miR-15 上游引物5’-AAGGAGGGCAAGAACCACTC-3’，下游引物5’-AGCACACAGGCAAAGAAGTTG-3’。GAPDH上游引物5’-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3’，下游引物5’-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3’。以GAPDH 為內(nèi)參，采用2-ΔΔCT計(jì)算miR-505 和miR-15的相對表達(dá)量。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 內(nèi)鏡活動(dòng)度 采用改良Mayo評(píng)分進(jìn)行評(píng)估。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：正?；驘o病變，改良Mayo評(píng)分為0分；紅斑、血管紋理較少和輕度易脆表示輕度病變，改良Mayo評(píng)分為1分；紅斑、血管紋理模糊不清和糜爛為中度病變，改良Mayo 評(píng)分為2 分；出現(xiàn)自發(fā)性出血和潰瘍?yōu)橹囟炔∽儯牧糓ayo 評(píng)分為3 分。臨床分期定義標(biāo)準(zhǔn)：改良Mayo 評(píng)分0 和1 分定義為愈合期，≥ 2 分定義為活動(dòng)期。98 例UC 患者，愈合期53 例，活動(dòng)期45例。

1.3.2 病變分型 參照蒙特利爾分型標(biāo)準(zhǔn)，分為E1 型34 例，E2 型36 例，E3 型28 例。分型標(biāo)準(zhǔn)為：病變僅位于直腸為E1 型；病變累及左半結(jié)腸和脾曲為E2型；病變累及脾曲和全結(jié)腸為E3型。

1.3.3 血清miR-505 和miR-15 水平 比較UC 患者和IBS患者、不同臨床分期UC患者、不同分型UC患者血清miR-505 和miR-15 水平，并繪制受試者操作特征曲線（receiver operator characteristic curve，ROC curve），探討血清miR-505和miR-15對UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的評(píng)估價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料用例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；兩變量相關(guān)性分析采取Pearson直線分析法；根據(jù)血清miR-505 和miR-15 水平，繪制ROC curve，以探討其對UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的評(píng)估價(jià)值。P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清miR-505和miR-15水平比較

觀察組血清miR-505 水平低于對照組，miR-15水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表2。

表2 兩組患者血清miR-505和miR-15水平比較（）Table 2 Comparison of serum miR-505 and miR-15 levels between the two groups（）

表2 兩組患者血清miR-505和miR-15水平比較（）Table 2 Comparison of serum miR-505 and miR-15 levels between the two groups（）

2.2 不同臨床分期的UC患者血清miR-505和miR-15水平比較

活動(dòng)期UC 患者血清miR-505 水平低于愈合期患者，血清miR-15 水平高于愈合期患者（P＜ 0.05）。見表3。

表3 不同臨床分期UC患者血清miR-505和miR-15水平比較（）Table 3 Comparison of serum miR-505 and miR-15 levels in UC patients with different clinical stages（）

表3 不同臨床分期UC患者血清miR-505和miR-15水平比較（）Table 3 Comparison of serum miR-505 and miR-15 levels in UC patients with different clinical stages（）

2.3 不同分型UC 患者血清miR-505、miR-15 水平和改良Mayo評(píng)分比較

E3 型UC患者血清miR-505 水平低 于E2 型和E1型患者，血清miR-15 水平高于E2 型和E1 型患者，改良Mayo 評(píng)分高于E2 型和E1 型患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表4。

表4 不同分型UC患者血清miR-505、miR-15水平和改良Mayo評(píng)分比較（）Table 4 Comparison of serum miR-505，miR-15 levels and modified Mayo score in UC patients with different types（）

表4 不同分型UC患者血清miR-505、miR-15水平和改良Mayo評(píng)分比較（）Table 4 Comparison of serum miR-505，miR-15 levels and modified Mayo score in UC patients with different types（）

注：1）與E1型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）；2）與E2型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。

2.4 UC 患者血清miR-505 和miR-15 水平與改良Mayo評(píng)分的關(guān)系

Pearson分析結(jié)果顯示，血清miR-505與改良Mayo評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.51，P＜ 0.05），血清miR-15與改良Mayo評(píng)分呈正相關(guān)（r=0.54，P＜ 0.05）。

2.5 血清miR-505和miR-15水平評(píng)估UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的價(jià)值

ROC curve 結(jié)果顯示，miR-505 截?cái)嘀禐?.93，評(píng)估UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的曲線下面積（area under the curve，AUC）為0.67（95%CI：0.659～0.785），敏感度和特異度分別為73.24%和68.55%；miR-15截?cái)嘀禐?.85，評(píng)估UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的AUC 為0.69（95%CI：0.672～0.814），敏感度和特異度分別為76.38%和69.72%；兩者聯(lián)合評(píng)估UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的AUC 為0.82（95%CI：0.809～0.912），敏感度和特異度分別為84.56%和68.49%。見圖1。

圖1 血清miR-505和miR-15水平評(píng)估UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的ROC curveFig.1 ROC curve of serum miR-505 and miR-15 levels to assess endoscopic mobility in UC patients

2.6 典型病例

2.6.1 典型病例1 0分，健康人。見圖2。

圖2 典型病例1Fig.2 Typical case 1

2.6.2 典型病例2 患者 男，43 歲，改良Mayo 評(píng)分為1分，輕度潰瘍性結(jié)腸炎。見圖3。

圖3 典型病例2Fig.3 Typical case 2

2.6.3 典型病例3 患者 女，45 歲，改良Mayo 評(píng)分為1分，輕度潰瘍性結(jié)腸炎。見圖4。

圖4 典型病例3Fig.4 Typical case 3

2.6.4 典型病例4 患者 男，50 歲，改良Mayo 評(píng)分為2分，中度潰瘍性結(jié)腸炎。見圖5。

圖5 典型病例4Fig.5 Typical case 4

2.6.5 典型病例5 患者 男，46 歲，改良Mayo 評(píng)分為2分，中度潰瘍性結(jié)腸炎。見圖6。

圖6 典型病例5Fig.6 Typical case 5

2.6.6 典型病例6 患者 女，41 歲，改良Mayo 評(píng)分為3分，重度潰瘍性結(jié)腸炎。見圖7。

圖7 典型病例6Fig.7 Typical case 6

2.6.7 典型病例7 患者 女，43 歲，改良Mayo 評(píng)分為3分，重度潰瘍性結(jié)腸炎。見圖8。

圖8 典型病例7Fig.8 Typical case 7

3 討論

3.1 UC的臨床診斷

UC 一旦發(fā)生惡變，惡性程度較高，早期可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此，早期了解UC 的進(jìn)展情況，對于病情評(píng)估及對癥治療尤為重要[9]。內(nèi)鏡檢查時(shí)，通過觀察腸黏膜情況進(jìn)行病情評(píng)估，UC 的內(nèi)鏡下病理特征為彌漫性縱行表淺潰瘍，且脆弱易出血，周圍組織可存在出血性水腫。miRNA 是一種非編碼小RNA，在細(xì)胞增殖、分化和凋亡等多種疾病的發(fā)生和發(fā)展中，發(fā)揮重要作用[10]。有研究[11]表明，UC 患者miRNA 呈異常表達(dá)，其表達(dá)與患者病情密切相關(guān)。miR-15 和miR-505在胃腸疾病中發(fā)揮重要作用[12]，為進(jìn)一步探究其表達(dá)水平與UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的關(guān)系，本研究對此展開深入分析，發(fā)現(xiàn)血清miR-15 和miR-505 水平與UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度密切相關(guān)，可作為病情評(píng)估的重要血清學(xué)指標(biāo)。

3.2 血清miR-505和miR-15水平與UC發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系

本研究結(jié)果顯示，UC 患者血清miR-505 水平較IBS 患者低，miR-15 水平較IBS 患者高，且不同臨床分期和不同分型的UC患者，血清miR-505和miR-15水平有明顯差異，提示：血清miR-505和miR-15水平與UC的發(fā)生和發(fā)展，密切相關(guān)。究其原因，可能為：miR-505 是一種非編碼小RNA，可通過調(diào)控NF-κB信號(hào)通路，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，進(jìn)而參與疾病發(fā)生發(fā)展過程[13]。miR-15 是一種功能性miRNA，在細(xì)胞分化方面發(fā)揮著重要的作用[14]。以往研究[15]證實(shí)，miR-15與多種炎性疾病關(guān)系密切，考慮與miR-15 可通過調(diào)控炎癥因子水平，參與UC 的發(fā)生發(fā)展過程有關(guān)。因此，探討血清miR-15和miR-505水平與UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的關(guān)系，對于病情的評(píng)估具有重要意義。

3.3 血清miR-505、miR-15和改良Mayo評(píng)分對UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的影響

血清miR-505 與改良Mayo 評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，血清miR-15 與改良Mayo 評(píng)分呈正相關(guān)，提示：血清miR-505和miR-15水平與UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度密切相關(guān)。miR-505 是一種腫瘤抑制因子，高遷移率族box-1蛋白（high mobility group box-1 protein，HMGB1）是其靶基因[16]。由于HMGB1 是損傷相關(guān)分子，在自噬中具有重要作用[17]，而自噬是免疫防御系統(tǒng)的重要過程，故miR-505 可通過調(diào)控HMGB1，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)[18]。炎性活動(dòng)時(shí)，HMGB1 表達(dá)上調(diào)，激活HMGB1介導(dǎo)的自噬，進(jìn)而加劇炎癥反應(yīng)，參與疾病進(jìn)展[19]。miR-505 過表達(dá)可下調(diào)HMGB1 表達(dá)，抑制自噬相關(guān)蛋白，抑制自噬過程，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，減輕炎癥反應(yīng)，進(jìn)而影響UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度[20]。miR-15 參與凋亡、細(xì)胞分化與周期調(diào)控和應(yīng)激等重要細(xì)胞功能活動(dòng)的調(diào)節(jié)[21]。miR-15 表達(dá)水平升高，可促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化，促進(jìn)白細(xì)胞介素-10分泌，減弱巨噬細(xì)胞的抗炎作用，加劇UC 患者炎癥活動(dòng)度[22]。故miR-15 可通過調(diào)控調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞功能，影響炎癥因子分泌，進(jìn)而影響UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度。

3.4 ROC curve 驗(yàn)證血清miR-505 和miR-15 評(píng)估UC患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的參考價(jià)值

ROC curve結(jié)果顯示，血清miR-505和miR-15評(píng)估UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度，具有一定的參考價(jià)值，兩者聯(lián)合檢測，評(píng)估UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的價(jià)值更高。這主要是因?yàn)椋郝?lián)合檢測彌補(bǔ)了單一檢測的不足，可更全面地了解UC 患者炎癥活動(dòng)度情況，進(jìn)而幫助病情評(píng)估[23]。檢測miR-505水平，可了解患者機(jī)體免疫防御系統(tǒng)情況，檢測miR-15 水平，可了解患者炎癥反應(yīng)程度，兩者綜合檢測，可更好地評(píng)估患者炎癥活動(dòng)情況，進(jìn)而為UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的評(píng)估提供重要參考[24]。因此，血清miR-505 和miR-15，對于UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度具有重要評(píng)估作用，可作為病情評(píng)估的重要血清學(xué)指標(biāo)。

3.5 本研究的局限性

本研究為樣本較小的單中心研究，對患者數(shù)據(jù)納入可能考慮不全，還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本來證實(shí)血清miR-505 和miR-15 對UC 患者內(nèi)鏡活動(dòng)度的評(píng)估價(jià)值。

綜上所述，UC 患者血清miR-505 較IBS 患者降低，miR-15較IBS患者升高，其水平與患者病情和內(nèi)鏡活動(dòng)度密切相關(guān)，檢測血清miR-505 和miR-15 水平，可為UC 患者早期病情評(píng)估提供重要參考依據(jù)，值得臨床推廣使用。