痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性對診斷侵襲性肺部真菌感染的臨床應(yīng)用

?；郏◤V東省東莞市樟木頭醫(yī)院,廣東 東莞 523629）

侵襲性肺部真菌感染主要是指因真菌感染引發(fā)的支氣管肺部感染疾病，若患者未能及時(shí)治療，不僅會出現(xiàn)咳嗽、發(fā)熱、呼吸困難等癥狀，還會引發(fā)氣道黏膜炎癥、肺部炎癥肉芽腫、壞死性肺炎等并發(fā)癥，進(jìn)而危及其生命安全。對于侵襲性肺部真菌感染患者而言，因其缺乏典型的臨床表現(xiàn)，誤診、漏診的情況時(shí)有發(fā)生，容易致使其錯過最佳的治療時(shí)機(jī)，進(jìn)而影響預(yù)后。因此，如何提高侵襲性肺部真菌感染的診斷準(zhǔn)確率顯得尤為重要。痰真菌涂片和痰真菌培養(yǎng)均是目前醫(yī)學(xué)上較為常見的兩種檢查方法，其中，痰真菌涂片具有操作簡單、診斷快速的優(yōu)點(diǎn)，痰真菌培養(yǎng)具有較高的敏感性，二者在侵襲性肺部真菌感染診斷中各有優(yōu)缺點(diǎn)[1-2]。因此，臨床認(rèn)為，將痰真菌涂片與痰真菌培養(yǎng)聯(lián)合使用，或能更好地提高侵襲性肺部真菌感染的診斷準(zhǔn)確性，為患者的后續(xù)治療提供較為準(zhǔn)確、可靠的醫(yī)學(xué)依據(jù)[3]。基于此，本文選取了61例侵襲性肺部真菌感染患者進(jìn)行回顧性分析，就其采用痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性的診斷價(jià)值進(jìn)行深入分析和探討，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)下選取2021年10月-2023年10月期間收治的61例侵襲性肺部真菌感染患者作為觀察對象，其中，男患者33例，女患者28例；年齡25-74歲，平均（56.88±10.23）歲；體重46-78kg，平均（60.74±2.15）kg；發(fā)病到住院時(shí)間1-15d，平均（6.74±1.12）d。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合侵襲性肺部真菌感染的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均存在不同程度的肺部感染；③均具備完整的臨床資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他心腦血管疾病者；②合并肺癌等惡性腫瘤者；③合并肺結(jié)核等其他肺部疾病者；④合并中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病者。

1.2 方法 痰真菌涂片檢查方法如下：采用革蘭氏染色作為檢查方法。將患者清晨的痰液制作為痰涂片，待痰涂片自然干燥后，將其固定在染色架上進(jìn)行加熱處理。首次染色時(shí)間為5min，在染色過程中需確保染色液完全覆蓋在痰膜上。染色結(jié)束后需進(jìn)行水洗處理，將涂片上的水清理干凈后，采用脫色劑進(jìn)行1min的脫色處理，必要情況下，可以使用流動水將脫色液沖洗后再進(jìn)行脫色處理，以痰膜無肉眼看到的紅色為最佳。采用水將脫色液沖洗掉后，使用亞甲藍(lán)復(fù)染液進(jìn)行復(fù)染處理，復(fù)染時(shí)間為30s，復(fù)染結(jié)束后再次進(jìn)行水洗，待玻片干燥后進(jìn)行鏡檢。若肉眼觀察玻片樣本的痰膜為亮藍(lán)色，且無紅色斑塊，則為合格玻片。在油鏡下全面觀察100個(gè)視野，詳細(xì)記錄菌絲、真菌孢子、可疑病原菌、正常菌群及細(xì)菌吞噬等情況。

痰真菌培養(yǎng)方法如下：把收集到的1-2ml痰液樣本放入到處理管中，將螺旋蓋擰緊。往處理管內(nèi)加入1-2倍的4%的氫氧化鈉溶液，隨后將處理管放入渦旋振蕩器中進(jìn)行振蕩處理，振蕩時(shí)間為30s，以確保痰液樣本可以與氫氧化鈉溶液充分混合，隨后將處理管放入生物安全柜中，在常規(guī)室內(nèi)條件下靜置15min。認(rèn)真檢查培養(yǎng)基中的凝固水，若凝固水較多，需沿著斜面去除部分凝固水。采用無菌吸管吸取適量的痰液樣本放在培養(yǎng)基中，將培養(yǎng)基保持在斜面水平，隨后接種哥倫比亞血瓊脂、沙氏葡萄瓊脂、念珠菌顯色平板，接種后將其放在35℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，連續(xù)觀察5d，若5d后無真菌生長，則為陰性。若5d后有真菌生長，則為陽性，需將真菌孢子挑出，在電子顯微鏡下對菌種進(jìn)行鑒定。

痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性方法：將痰真菌涂片檢查方法和痰真菌培養(yǎng)方法結(jié)合，先通過痰真菌涂片的檢查結(jié)果確定患者是否存在真菌感染的情況，隨后針對可疑的痰涂片或存在明顯真菌感染的痰涂片進(jìn)行相應(yīng)的痰真菌培養(yǎng)。

1.3 觀察指標(biāo) ①對比3種檢查方法在侵襲性肺部真菌感染診斷中的診斷準(zhǔn)確率。②對比3種檢查方法在不同真菌中的檢出率，真菌種類主要包括白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、毛霉菌、曲霉菌。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本文的研究數(shù)據(jù)統(tǒng)一運(yùn)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，以χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料[n(%)]，若P＜0.05，可視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對比3種檢查方法在侵襲性肺部真菌感染診斷中的診斷準(zhǔn)確率 痰真菌涂片檢查結(jié)果顯示，有16例為陽性，有45例為陰性。痰真菌培養(yǎng)結(jié)果顯示，有20例為陽性，有41例為陰性。痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性結(jié)果顯示，有61例為陽性，有0例為陰性。痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性的診斷準(zhǔn)確率均高于痰真菌涂片檢查和痰真菌培養(yǎng)（P＜0.05），詳情如表1所示。

表1 3種檢查方法在侵襲性肺部真菌感染診斷中的診斷準(zhǔn)確率對比

2.2 對比3種檢查方法在侵襲性肺部真菌感染不同真菌中的檢出率 痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性在白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、毛霉菌、曲霉菌的檢出率均高于痰真菌涂片檢查和痰真菌培養(yǎng)（P＜0.05），詳情如表2所示。

表2 3種檢查方法在侵襲性肺部真菌感染不同真菌中的檢出率對比[n(%)]

3 討論

侵襲性肺部真菌感染通常繼發(fā)于多種嚴(yán)重的原發(fā)病，其臨床表現(xiàn)無特異性，需輔以其他檢查方法才能更好地提高臨床診斷的準(zhǔn)確性，確保患者能及時(shí)得到有效治療，進(jìn)而改善預(yù)后[4-6]。痰真菌涂片和痰真菌培養(yǎng)均是目前醫(yī)學(xué)上較為常見的兩種微生物檢驗(yàn)方法，近年來，二者均被廣泛應(yīng)用于呼吸道感染疾病的診斷中，與單一的痰真菌涂片與單一的痰真菌培養(yǎng)相比，二者聯(lián)合使用能更好地提高呼吸道感染疾病的診斷效能。

本文的研究結(jié)果顯示，采用痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性的診斷準(zhǔn)確率均高于痰真菌涂片檢查和痰真菌培養(yǎng)，說明痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性可以顯著提高侵襲性肺部真菌感染的診斷準(zhǔn)確性。分析原因?yàn)?，痰真菌涂片可以通過染色、沖洗、烘干等操作程序制作成痰涂片，利用高倍顯微鏡觀察痰液中的真菌生長情況，以此來判斷侵襲性肺部真菌感染患者的實(shí)際感染情況和感染程度，但該檢查方法會受到痰液標(biāo)本采集時(shí)間、標(biāo)本質(zhì)量好壞等因素的影響，出現(xiàn)大量假陰性的情況，無法確保診斷準(zhǔn)確性[7-8]。痰真菌培養(yǎng)是臨床上準(zhǔn)確率較高的一種病原學(xué)檢查，其診斷結(jié)果不會受到痰液標(biāo)本的影響，但真菌的生長速度相對較慢，需要較長的時(shí)間才能在固體培養(yǎng)基上完成生長過程，對于需要盡早診斷和治療的患者而言存在一定的局限性。痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性強(qiáng)調(diào)先通過痰真菌涂片的檢查結(jié)果確定患者是否存在真菌感染的情況，隨后針對可疑的痰涂片或存在明顯真菌感染的痰涂片進(jìn)行相應(yīng)的痰真菌培養(yǎng)，這樣既能減少不必要的檢查操作和醫(yī)療資源浪費(fèi)，又能縮短整體的檢查時(shí)間，降低誤診率和漏診率，提高診斷準(zhǔn)確率[9]。本文的研究結(jié)果顯示，痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性在白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、毛霉菌、曲霉菌的檢出率均高于痰真菌涂片檢查和痰真菌培養(yǎng)，說明侵襲性肺部真菌感染采用痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性可以顯著提高不同真菌感染的檢出率。分析原因?yàn)?，不同真菌在肺部組織內(nèi)的表現(xiàn)均存在一定的差異性，可表現(xiàn)為菌絲、孢子、球囊、內(nèi)孢囊，痰真菌涂片相對較厚，真菌孢子菌絲容易混在標(biāo)本內(nèi)部，染色并不明顯，無法準(zhǔn)確辨別具體的真菌類型，且在油鏡的觀察下，孢子菌絲的形態(tài)并不明顯，容易與細(xì)胞碎片、植物纖維混淆，無法做到整片瀏覽，故該檢查方法在提高不同真菌感染檢出率的效果上并不理想。痰真菌培養(yǎng)可以直接分離出真菌，隨后利用電子顯微鏡對培養(yǎng)出來的真菌種類進(jìn)行詳細(xì)的鑒別，與痰真菌涂片聯(lián)合使用，可以幫助臨床醫(yī)師更直觀地觀察患者痰液中的真菌形態(tài)和結(jié)構(gòu)，快速發(fā)現(xiàn)不同真菌形態(tài)的改變，及時(shí)對真菌情況進(jìn)行定性和定量的分析，從而提高不同真菌感染的檢出率[10]。

綜上所述，痰真菌涂片與培養(yǎng)陽性在侵襲性肺部真菌感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值較高，既可以有效提高該疾病的診斷準(zhǔn)確率，又可以提升不同真菌種類的檢出率。