閩楠群體遺傳結(jié)構(gòu)分析與核心種質(zhì)庫構(gòu)建*

張俊紅 王 洋 周生財(cái) 吳小林 吳仁超 楊 琪 張毓婷 童再康

（1. 浙江農(nóng)林大學(xué)省部共建亞熱帶森林培育國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 杭州311300； 2. 麗水職業(yè)技術(shù)學(xué)院 麗水 323000；3. 浙江慶元縣實(shí)驗(yàn)林場(chǎng) 慶元 323800）

閩楠（Phoebe bournei）屬樟科（Lauraceae）楠屬（Phoebe）常綠喬木，為我國特有二級(jí)珍稀瀕危保護(hù)樹種，其材質(zhì)細(xì)膩，具淡香氣，富含倍半萜類化合物，耐腐性能超強(qiáng)，是商品材“金絲楠木”的重要原植物，現(xiàn)為南方山區(qū)重要珍貴造林樹種（Hanet al.，2022）。同時(shí)，閩楠干形通直、冠形優(yōu)美，屬優(yōu)良常綠觀賞樹種（吳大榮等，2003）。然而，閩楠童期長，結(jié)實(shí)大小年現(xiàn)象明顯，且種子容易失活，天然更新困難，加之長期不合理利用和氣候變化等因素，導(dǎo)致現(xiàn)存資源稀少，天然群體面積不斷縮小，分布呈片段化（吳大榮等，2011；劉軍等，2011）。因長期地理隔離和環(huán)境差異，閩楠群體內(nèi)可能存在豐富遺傳變異。為更好保存和利用其種質(zhì)資源，亟需探索良好的種質(zhì)資源保存策略。

作為種質(zhì)資源科學(xué)保存策略制定的前提，應(yīng)充分掌握其遺傳信息、形態(tài)多樣性和適應(yīng)性等，同時(shí)應(yīng)去除冗余單株以獲得高的保存效率（Belajet al.，2018）。諸多研究表明，掌握種質(zhì)資源的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)不僅有利于其保護(hù)策略的制定，更有利于在對(duì)種質(zhì)資源有效保存的前提下進(jìn)行高效、合理的開發(fā)與利用（Wuyunet al.，2015；陳存等，2020）。核心種質(zhì)庫構(gòu)建是科學(xué)保存種質(zhì)資源的重要策略，可最大程度上保存種質(zhì)資源的遺傳多樣性，尤其對(duì)生長周期長、樹體高大的林木更具科研和生產(chǎn)價(jià)值。相關(guān)研究始于20 世紀(jì)80年代，F(xiàn)rankel 等（1984）首次提出核心種質(zhì)概念，Brown（1989）進(jìn)行了擴(kuò)展，認(rèn)為核心種質(zhì)是種質(zhì)資源的核心子集，通過保存最少數(shù)個(gè)體實(shí)現(xiàn)最大限度保存整個(gè)資源群體的遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳變異程度。目前，主要采用表型性狀和分子標(biāo)記2 種方法構(gòu)建核心種質(zhì)，如已構(gòu)建了油茶（Camellia oleifera）（Zhuet al.， 2022； Wanget al.，2023）、美洲黑楊（Populus deltoids）（陳存等，2020）、杉木（Cunninghamia lanceolata）（李魁鵬等，2021）、木荷（Schima superba）（楊漢波等， 2017）和杜仲（Eucommia ulmoides）（李洪果等，2018）等樹種的核心種質(zhì)庫。

近年來，分子標(biāo)記技術(shù)廣泛用于種質(zhì)資源群體的遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)研究及核心種質(zhì)篩選，其中SSR 分子標(biāo)記因穩(wěn)定性好、精度高、共顯性遺傳和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，已應(yīng)用于杜仲（李洪果等，2018）、刺槐（Robinia pseudoacacia）（楊欣超等，2020）、文冠果（Xanthoceras sorbifolia）（申展等， 2017）、 蘋果（Malus domestica）（張春雨等，2009）、杉木（李魁鵬等，2021）和核桃（Juglans regia）（Wanget al.， 2013）等核心種質(zhì)庫構(gòu)建。閩楠群體遺傳多樣性和核心種質(zhì)庫也有報(bào)道，馮一寧等（2022）利用18 對(duì)SSR 引物研究福建省3 個(gè)代表性閩楠自然居群88 個(gè)單株的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明其群體遺傳多樣性較豐富，群體內(nèi)近交程度較高，3 個(gè)居群分2 類；Zhou 等（2021）利用23 對(duì)多態(tài)性EST-SSR 引物分析閩楠3 個(gè)天然居群75 個(gè)單株的遺傳多樣性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其居群具有豐富的遺傳多樣性，其中江西YS 居群的遺傳多樣性最高，遺傳結(jié)構(gòu)分析表明YS 居群與其他2 個(gè)居群存在顯著遺傳分化；黃雨芹等（2020）利用7 個(gè)SSR位點(diǎn)分析江西和福建省16 個(gè)閩楠天然居群的237 份材料的遺傳多樣性，基于逐步聚類位點(diǎn)優(yōu)先取樣策略，篩選出59 份核心種質(zhì)。然而，閩楠在福建、江西、浙江、湖南和廣西等省（區(qū)）均有天然分布（http://www.iplant.cn/），上述研究中的居群僅來自福建和江西等地，不能全面檢測(cè)閩楠群體的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)。鑒于此，本研究選用閩楠5 ?。▍^(qū)）27 個(gè)種源地425 份種質(zhì)資源，分析其遺傳多樣性和群體遺傳結(jié)構(gòu)，篩選構(gòu)建核心種質(zhì)庫，以期用于閩楠種質(zhì)資源保護(hù)、管理和利用，推進(jìn)閩楠良種選育。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

基于課題組前期實(shí)地調(diào)查，在福建、浙江、廣西、江西和湖南5 ?。▍^(qū)）27 個(gè)縣（市）的閩楠天然分布區(qū)收集優(yōu)株種子，參考地形圖，避開山川湖泊，篩選氣候環(huán)境相對(duì)一致的區(qū)域，劃分9 個(gè)群體（圖1）。培育出218 個(gè)半同胞家系（表1）的2年生苗，2013年6月每家系種植10 株于浙江省慶元縣閩楠國家種質(zhì)資源庫（23°72′N，113°02′E）。每家系選擇形態(tài)差異明顯的1～2 單株，2018年3月采集218 個(gè)家系425 份種質(zhì)鮮芽，冰盒保存帶回實(shí)驗(yàn)室，置于?40 ℃冰箱內(nèi)備用。

表1 閩楠種質(zhì)資源信息Tab. 1 Information of P. bournei germplasm resources

圖1 閩楠天然種質(zhì)資源的分布信息Fig. 1 The distribution information of P. bournei resources

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 基因組DNA 提取 采用改良CTAB 法（Doyle,1987）提取基因組DNA，使用NanoDrop2000（Thermo Scientific，美國）檢測(cè)DNA 純度和濃度，通過1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)量。稀釋部分DNA 原液至125 ng·μL?1用于PCR 擴(kuò)增，原液?20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 SSR 引物篩選和PCR 擴(kuò)增 應(yīng)用MISA 程序使用默認(rèn)參數(shù)分別對(duì)轉(zhuǎn)錄組Unigenes 和基因組（Hanetal., 2022）進(jìn)行SSR 位點(diǎn)搜索，再用Primer 3.0 分別設(shè)計(jì)100 對(duì)EST-SSR 引物和100 對(duì)G-SSR 引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。隨機(jī)選取8 個(gè)DNA 樣品作為模板篩選引物，確定出多態(tài)性優(yōu)良的19 對(duì)EST-SSR 和14 對(duì)G-SSR 引物用于后續(xù)研究（表2）。

表2 33 對(duì)SSR 引物信息Tab. 2 The information of 33 pairs of SSR primers

PCR 反應(yīng)體系10 μL：125 ng·μL?1DNA 模板1 μL、10 μmol·L?1上下游引物各0.5 μL、Premix TaqTM5 μL（0.25 U Taq, TaKaRa）、ddH2O 3 μL；擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性4 min；32 個(gè)循環(huán)：94 ℃變性30 s，54 ℃復(fù)性30 s，72 ℃延伸1 min；最后72 ℃延伸5 min。

1.2.3 SSR 擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)與分析 EST-SSR 引物的PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳90 min，利用銀染技術(shù)顯現(xiàn)條帶（Charterset al.， 1996；Gresshoff，1991)，采用500 bp 的DNA ladder，在可見光燈箱上觀察、拍照記錄并讀帶。G-SSR 熒光引物合成及PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)由北京擎科生物科技有限公司完成，應(yīng)用ABI3730 測(cè)序儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)，結(jié)合分子內(nèi)標(biāo)分析片段大小，測(cè)序儀檢測(cè)結(jié)果經(jīng)Gene-Maker v2.2.0 軟件分析，并呈現(xiàn)出毛細(xì)管電泳圖。

1.3 數(shù)據(jù)分析

將EST-SSR 標(biāo)記擴(kuò)增條帶轉(zhuǎn)換成數(shù)字形式，得到bp 形式數(shù)據(jù)矩陣；G-SSR 引物擴(kuò)增結(jié)果經(jīng)Gene-Maker v2.2.0 軟件分析，得到bp 形式數(shù)據(jù)矩陣；利用DateTrans1.0 軟件轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)用于后續(xù)分析。采用Popgene32 軟件計(jì)算觀測(cè)等位基因數(shù)（Na）、有效等位基因數(shù)（Ne）、觀測(cè)雜合度（Ho）、期望雜合度（He）、Shannon 信息指數(shù)（I）和Nei’s 基因多樣性指數(shù)（H）。運(yùn)用PIC_CALC 軟件計(jì)算各引物的多態(tài)性信息含量（PIC）；通過DPS 軟件基于UPGMA 法計(jì)算家系間遺傳距離，使用MEGA 軟件采用UPGMA 法進(jìn)行聚類分析（Yehet al.，2000）。應(yīng)用STRUCTURE 2.3.4 軟件對(duì)9 個(gè)閩楠群體進(jìn)行遺傳類群劃分。設(shè)置K=1～10，Burin=100 000，MCMC=10 000，每個(gè)K值運(yùn)行3 次，以K為橫坐標(biāo)、ΔK為縱坐標(biāo)作折線圖，選取最高值為最佳分類群數(shù)量。

1.4 核心種質(zhì)構(gòu)建及評(píng)價(jià)

1.4.1 取樣方法 參照Hu 等（2000）多次聚類法，設(shè)定10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%和50% 共9 個(gè)取樣比例，采用等位基因最大化的取樣策略構(gòu)建核心種質(zhì)。利用NTSYSpc 2.11a 軟件運(yùn)用UPGMA聚類方法計(jì)算218 個(gè)家系的遺傳距離，應(yīng)用MEGA 6.0 軟件構(gòu)建聚類圖，從分類水平最低的種質(zhì)中選擇具有最多稀有等位基因數(shù)的種質(zhì)進(jìn)入下一輪聚類，如2 份種質(zhì)具有相同數(shù)目的稀有等位基因，則優(yōu)先選擇稀有等位基因頻率最小的種質(zhì)，如2 個(gè)值仍相同則隨機(jī)選擇，組內(nèi)只有一種材料直接選入，對(duì)選取出的種質(zhì)再次聚類，直到取得的種質(zhì)達(dá)到設(shè)定取樣比例，構(gòu)成核心種質(zhì)的樣本群（張春雨等，2009）。

1.4.2 核心種質(zhì)代表性檢驗(yàn)及評(píng)價(jià) 計(jì)算核心種質(zhì)的Na、Ne、Ho、He、H和I，篩選最佳取樣比例構(gòu)成的核心種質(zhì)。通過SPSS22.0 軟件對(duì)原始種質(zhì)和核心種質(zhì)的遺傳多樣性參數(shù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，以評(píng)價(jià)核心種質(zhì)的代表性。

2 結(jié)果與分析

2.1 基于SSR 分子標(biāo)記的閩楠種質(zhì)資源群體的遺傳多樣性

采用SSR 標(biāo)記分析425 份種質(zhì)資源的遺傳多樣性，33 對(duì)SSR 引物共檢測(cè)出130 個(gè)等位點(diǎn)，各位點(diǎn)的變幅為2（G-MN120）～10（G-MN134）個(gè)，平均每對(duì)引物擴(kuò)增出3.939 個(gè)等位點(diǎn)（表3）；Ne為1.142（G-MN114）～4.677（G-MN134）， 均 值 2.159；Ho為 0（E-MN17）～0.699（G-MN134），均值0.224；He為0.124（G-MN114）～0.787（G-MN134），均值0.477；I為0.269（G-MN114）～1.774（G-MN134），均值0.841；H為0.124（G-MN114）～0.786（G-MN134），均值0.476；PIC 為0.118(G-MN114)～0.759(G-MN134)，均值0.417，當(dāng)0.25 ＜ PIC ＜ 0.5，屬于中等多態(tài)性位點(diǎn)，表明收集保存的閩楠種質(zhì)資源具有豐富的遺傳多樣性。

表3 閩楠種質(zhì)資源群體的遺傳多樣性①Tab. 3 The genetic diversity of P. bournei germplasm resources

2.2 閩楠種質(zhì)資源群體的遺傳多樣性

閩楠9 個(gè)群體的Na為2.242～3.636，均值2.899；Ne為1.621～2.287， 均值1.967；Ho為0.157～0.280， 均值0.228；He為0.313～0.516，均值0.433（表4）。H變化范圍0.306～0.510，均值0.421，由高到低為湖南西部、福建北部、浙江南部、福建南部、福建中部、廣西北部、江西南部、湖南東部和江西北部。同時(shí)，I亦反映遺傳多樣性高低，變化范圍0.504～0.892，均值0.712，變化趨勢(shì)與H基本一致，由高到低為湖南西部、福建北部、浙江南部、福建中部、福建南部、廣西北部、江西南部、湖南東部、江西北部。因此，遺傳多樣性最高為湖南西部，遺傳多樣性最低為江西北部。

表4 9 個(gè)閩楠種質(zhì)資源群體的遺傳多樣性①Tab. 4 The genetic diversity of nine P. bournei populations

2.3 閩楠群體間遺傳分化與遺傳結(jié)構(gòu)

閩楠群體間遺傳分化與基因流分析表明，群體內(nèi)近交系數(shù)（Fis）和群體間近交系數(shù)（Fit）的均值分別為0.440 和0.532，群體間遺傳分化系數(shù)（Fst）變化范圍為0.008(E-MN19)～0.354(E-MN90)，均值0.164，說明16.4%的遺傳變異存在于9 個(gè)閩楠群體間，而83.6%的變異存在于群體內(nèi)?；蛄?Nm)反映遺傳分化程度，其變化范圍為0.456(E-MN90)～29.475(E-MN19)，均值1.275，表明群體間存在一定基因交流。

進(jìn)一步研究閩楠群體的遺傳結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)（圖2），9 個(gè)閩楠群體可劃分為3 個(gè)類群，第一類群包括福建北部、福建中部（藍(lán)色部分）；第二類群包括福建南部、湖南西部、湖南東部、江西南部和浙江南部（綠色部分）；第三類群包括廣西北部和江西北部（紅色部分）。

圖2 9 個(gè)閩楠群體的遺傳結(jié)構(gòu)Fig. 2 Genetic structures of nine P. bournei populations

2.4 閩楠核心種質(zhì)資源篩選

采用逐步聚類等位基因最大化法分別構(gòu)建50%（213）、 45%（191）、 40%（170）、 35%（149）、 30%（128）、 25%（106）、 20%（85）15%（64）和 10%（43）的9 個(gè)候選核心種質(zhì)庫，采用Na、Ne、Ho、He、I和H等遺傳多樣性參數(shù)對(duì)候選核心種質(zhì)庫進(jìn)行比較分析（表5），結(jié)果表明，隨取樣比例降低，Na降低，而Ne、He、I和H增大，直至取樣比例降至20%后開始下降；Ho則隨取樣比例降低而升高。因此，本研究最終確定取樣比例為20%，即從425 份閩楠原始保存種質(zhì)劃分為85 份核心種質(zhì)和340 份保留種質(zhì)。

表5 各取樣比例下的遺傳多樣性比較①Tab. 5 Comparison of genetic diversity under various sampling ratios

85 份核心種質(zhì)Na、Ne、Ho、He、I和H的保留率分別為92.318%、103.803%、116.652%、105.052%、103.341%和104.664%，除Na外，其他5 個(gè)參數(shù)均高于原始種質(zhì)和保留種質(zhì)（表6），表明核心種質(zhì)有效剔除了原始種質(zhì)的遺傳冗余，保留了更多遺傳變異。340 份保留種質(zhì)的6 個(gè)遺傳參數(shù)保留率分別為99.241%、98.300%、95.804%、97.568%、97.360%和97.647%，除Na外均低于核心種質(zhì)和原始種質(zhì)，表明保留種質(zhì)因去除了遺傳多樣性更高的樣品導(dǎo)致遺傳重復(fù)率升高。據(jù)構(gòu)建核心種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（Diwan,et al ., 1995），核心種質(zhì)與原始種質(zhì)在各性狀上的變異幅度比應(yīng)大于70%，現(xiàn)構(gòu)建的核心種質(zhì)各遺傳參數(shù)均較為優(yōu)質(zhì)，符合核心種質(zhì)要求。

表6 原始種質(zhì)、核心種質(zhì)和保留種質(zhì)的遺傳多樣性比較①Tab. 6 Comparison of genetic diversity of original, core and reserved germplasms

2.5 閩楠核心種質(zhì)的確認(rèn)與評(píng)價(jià)

原始種質(zhì)共425 份，基于20%取樣比例下構(gòu)建的核心種質(zhì)包含85 份，剩下的340 份為保留種質(zhì)。對(duì)核心種質(zhì)和原始種質(zhì)2 個(gè)群體的遺傳參數(shù)Na、Ne、Ho、He、I和H進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果表明在0.05 水平上差異不顯著（P＞ 0.05，表7）。由此可見核心種質(zhì)可充分代表原始種質(zhì)的遺傳多樣性。

表7 核心種質(zhì)與原始種質(zhì)的遺傳多樣性參數(shù)t 檢驗(yàn)①Tab. 7 The t test of the genetic diversity parameters between core collection and original collection

85 份核心種質(zhì)來自21 個(gè)地理來源的78 個(gè)家系，其中7 個(gè)家系含2 份種質(zhì)，基本覆蓋了全分布區(qū)，福建松溪和湖南永州分別包括18 和17 份核心種質(zhì)（表8）。來自于福建北部和福建中部的39 份種質(zhì)，屬于第一類群（藍(lán)色部分）；福建南部、湖南西部、湖南東部、江西南部、浙江南部的42 份種質(zhì)屬于第二類群（綠色部分）；廣西北部、江西北部的4 份種質(zhì)屬于第三類群（紅色部分）。

表8 閩楠核心種質(zhì)分布情況Tab. 8 The distribution of core collection in P. bournei

3 討論

3.1 閩楠種質(zhì)資源遺傳多樣性

遺傳多樣性指不同群體間及同一群體內(nèi)不同個(gè)體間遺傳變異程度的總和（Castelánet al.，2019），反映物種適應(yīng)環(huán)境的能力及其被改造和利用的潛力。分子水平上的遺傳多樣性可根據(jù)等位基因數(shù)（Na）、Shannon 多樣性指數(shù)和Nei’s 多樣性指數(shù)等進(jìn)行評(píng)價(jià)。本研究利用SSR 引物對(duì)425 份閩楠種質(zhì)進(jìn)行遺傳多樣性檢測(cè)，共檢測(cè)到130 個(gè)等位點(diǎn)，表明閩楠遺傳信息在進(jìn)化過程中發(fā)生顯著變異。多態(tài)性信息（PIC）一般定義為低（PIC ＜ 0.25）、中（0.25 ＜ PIC ＜ 0.5）或高（PIC ＞ 0.5），閩楠33 對(duì)引物的平均 PIC 為0.417，屬中度多態(tài)性引物，表明適用于閩楠群體大量樣本的遺傳多樣性分析。閩楠種質(zhì)資源的期望雜合度（He）為0.477，高于楊葉木姜子（Litsea populifolia）（王雪等，2019）（He= 0.246）， 但低于分布更廣的栓皮櫟（Quercus variabilis）（Shiet al.， 2017） (He= 0.707)。Nei’s 基因多樣性指數(shù)（H）與Shannon 指數(shù)（I）均可度量群體的變異程度和遺傳多樣性，閩楠種質(zhì)資源的H和I平均值分別為0.476 和0.841，高于10 對(duì)SSR 引物對(duì)39 個(gè)閩楠個(gè)體遺傳多樣性（H：0.259，I：0.391）（劉丹，2019），表明閩楠大樣本的遺傳多樣性顯著高于小群體，進(jìn)一步明確種質(zhì)資源擴(kuò)大收集范圍的必要性。在群體水平上， 9 個(gè)閩楠群體的I變化范圍為0.504～0.892，均值0.712；H變化范圍為0.306～0.510，均值0.421，其中遺傳多樣性最高為湖南西部群體，最低為江西北部群體，反映出閩楠種質(zhì)庫具較高水平的遺傳多樣性，高于同屬物種浙江楠（P. chekiangensis）（H： 0.321，I： 0.465）和紫楠（P. sheareri）（H： 0.376，I：0.576）天然群體的遺傳多樣性（Dinget al.，2015；Wanget al.，2022）。一個(gè)物種的遺傳多樣性與生境、生活史等有關(guān)（Hamricket al.，1992），同時(shí)遺傳多樣性受地理分布、群體大小和氣候變化等影響（Rubio-Moragaet al.，2012）。因此，閩楠群體的高遺傳多樣性可能與其較廣的分布范圍、壽命長和異交等生活特征有關(guān)。

3.2 閩楠群體遺傳分化和遺傳結(jié)構(gòu)

研究表明，群體間遺傳分化系數(shù)Fst ＜ 0.05 為低水平的遺傳分化，0.05＜ Fst ＜ 0.15 為中等水平，0.15 ＜Fst ＜ 0.25 為較高水平，F(xiàn)st ＞ 0.25 則為高水平的遺傳分化（Pearseet al.，2004）。閩楠群體間遺傳分化結(jié)果表明83.6%變異存在于群體內(nèi)，與浙江楠（Dinget al.，2015）、光皮樺（Betula luminifera）（張俊紅等，2010）等研究一致，暗示閩楠選擇時(shí)需更加注重群體內(nèi)的單株選擇。

Wright（1931）認(rèn)為，當(dāng)Nm＞ 1 時(shí)，存在一定的基因流動(dòng)，這些基因流可防止由遺傳漂變引起的家系間的遺傳分化；當(dāng)Nm＜ 1 時(shí)，群體發(fā)生強(qiáng)烈遺傳分化。植物的基因流主要借助種子或花粉遷移而成（Hamrick，1989），閩楠群體間基因流（Nm）平均值為1.275，低于同屬浙江楠（Nm=1.992）（(Dinget al.，2015）和紫楠（Nm=1.322）（Wanget al.，2022），以及其他廣布性樹種如光皮樺（Nm=3.596）（張俊紅等，2010）、楓香（Liquidambar formosana）（Nm=3.051）（孫榮喜，2017）和花楸（Sorbus pohuashanensis）（Nm=3.047） （鄭健等，2008)），表明閩楠群體間存在基因流動(dòng)，但可能已發(fā)生了一定水平的遺傳分化。

STRUCTURE 群體遺傳結(jié)構(gòu)分析顯示，9 個(gè)群體被劃分為3 個(gè)類群，未嚴(yán)格按照地理聚類，其遺傳變異存在一定隨機(jī)變異特性，且存在地理距離較近的群體分離。Hamrick（1989）認(rèn)為植物群體遺傳結(jié)構(gòu)受交配系統(tǒng)和基因流相互作用影響，異花授粉可增加群體間基因交流，減少遺傳漂變，使遺傳分化水平較穩(wěn)定。閩楠屬蟲媒的異花授粉植物，花粉傳播距離低于風(fēng)媒花，雖分布范圍較廣，但多呈片段化分布，致使花粉和種子難以大范圍交流，促使其群體間的遺傳分化，且群體間的基因流相對(duì)較低，可能在一定程度上影響群體遺傳結(jié)構(gòu)。

3.3 閩楠核心種質(zhì)構(gòu)建

林木核心種質(zhì)篩選目前主要基于形態(tài)性狀和分子標(biāo)記，其中利用表型數(shù)據(jù)構(gòu)建核心種質(zhì)具有簡(jiǎn)便、費(fèi)用低和構(gòu)建時(shí)限短等優(yōu)點(diǎn)（Huet al.，2000），但表型性狀易受外界因素和生長發(fā)育時(shí)期的影響，而分子標(biāo)記數(shù)據(jù)不受環(huán)境等因素影響（明軍等，2005）。確定取樣比例是構(gòu)建核心種質(zhì)的關(guān)鍵，Brown（1989）基于中性選擇理論認(rèn)為5%～10%的核心種質(zhì)能夠代表全部種質(zhì)資源70%以上的遺傳變異。國內(nèi)外不同植物構(gòu)建核心種質(zhì)時(shí)取樣比例一般在5%～40%，10%～30%是大部分核心種質(zhì)構(gòu)建效果較好的取樣比例（楊漢波等，2017）。一般認(rèn)為對(duì)于原始種質(zhì)多且遺傳多樣性小的物種可適當(dāng)減小取樣比例，相反則需增加取樣比例（Kanget al.， 2006）。本研究選取10%～50%的9 個(gè)取樣比例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)等位基因數(shù)（Na）隨取樣比例下降有所降低，但總體降幅不大，說明取樣比例的降低導(dǎo)致較少量等位基因被剔除。Shannon 信息指數(shù)（I）和Nei’s 基因多樣性指數(shù)（H）隨取樣比例降低而升高，在取樣比例為20%時(shí)達(dá)最大值，而后下降，表明本研究中20%的取樣比例為閩楠核心種質(zhì)構(gòu)建的最佳取樣比例。

取樣策略是影響核心種質(zhì)構(gòu)建有效性的另一重要因子。目前，多數(shù)研究采用分層分組和聚類方法構(gòu)建核心種質(zhì)，但不同分組和聚類方法的核心種質(zhì)存在較大差異。等位基因最大化法是其中最具優(yōu)勢(shì)的方法，已在模式植物和農(nóng)作物的核心種質(zhì)構(gòu)建過程中被廣泛采用（Kanget al.，2006；潘英華等，2018；徐海明等，2004），該策略最大優(yōu)點(diǎn)在于能保存遺傳多樣性最為豐富的種質(zhì)資源，滿足分類學(xué)家和遺傳學(xué)家的需要。因此，本研究選用等位基因最大化法構(gòu)建核心種質(zhì)，得到85 份核心種質(zhì)，保留20%原始種質(zhì)，且經(jīng)t檢驗(yàn)表明核心種質(zhì)和原始種質(zhì)的遺傳多樣性參數(shù)差異不顯著，核心種質(zhì)的遺傳多樣性參數(shù)保留率均高于100%，能很好代表初始種質(zhì)的遺傳多樣性信息。

4 結(jié)論

利用33 對(duì)SSR 引物對(duì)425 份閩楠種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)分析，收集的閩楠種質(zhì)資源群體具有豐富的遺傳多樣性，并將9 個(gè)群體分成3 個(gè)類群。采用逐步聚類等位基因最大化法，按20%入選率得到85 份核心種質(zhì)，等位基因數(shù)（Na）、有效等位基因數(shù)（Ne）、觀測(cè)雜合度（Ho）、期望雜合度（He）、Shannon 信息指數(shù)（I）和Nei’s 基因多樣性指數(shù)（H）的保留率分別為92.318%、103.803%、116.652%、105.052%、103.341%和104.664%，t檢驗(yàn)顯示核心種質(zhì)和原始種質(zhì)的遺傳多樣性參數(shù)差異不顯著，表明構(gòu)建的85 份核心種質(zhì)能有效代表閩楠原始種質(zhì)的遺傳信息，可達(dá)到最大化保留原始種質(zhì)的目的，為閩楠種質(zhì)資源的有效保存和利用提供理論支撐。