黃顙魚雌雄性的生理生化和mTOR信號(hào)通路基因表達(dá)分析

陳佳艷 唐易 戴柳葉 王雪景 黃鎮(zhèn) 彭方媛 唐玲微 劉文彬

摘 要：同齡的黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）呈現(xiàn)明顯的兩性生長差異，即雄性個(gè)體的體長、體重皆大于雌性個(gè)體。而mTOR信號(hào)通路在細(xì)胞生長、發(fā)育以及蛋白合成過程中起重要作用。為了了解黃顙魚兩性差異的營養(yǎng)生長機(jī)制與mTOR信號(hào)通路之間的關(guān)聯(lián)性，本試驗(yàn)首先在生理生化特性方面對(duì)雌、雄黃顙魚的肌肉營養(yǎng)成分進(jìn)行了比較分析。結(jié)果表明，在雌、雄黃顙魚的比較分析中，除了兩者的水分、粗蛋白、粗脂肪含量差別不大以外，在礦物元素、氨基酸組成、蛋白的氨基酸組成和脂肪酸組成等方面，雌性黃顙魚肌肉的營養(yǎng)品質(zhì)相對(duì)雄性更優(yōu)。針對(duì)mTOR信號(hào)通路主要基因開展實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析，結(jié)果顯示，除性腺組織外，AKT1、AKT2、AKT3、mTOR、S6KA、S6KB、4E-BP1基因在雄性黃顙魚的肌肉、肝、腎和心臟組織中的表達(dá)均顯著高于雌性，這可能與雌雄黃顙魚生長差異有關(guān)。本研究為進(jìn)一步探索黃顙魚兩性生長差異的分子機(jī)制奠定了試驗(yàn)基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：黃顙魚；營養(yǎng)成分；生長差異；基因表達(dá)分析；mTOR信號(hào)通路

中圖分類號(hào)：S965? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1007-7146.2023.01.005

Physiological and Biochemical Indicators and mTOR Signaling Pathway Gene Expression Analysis in Female and Male Yellow Catfish （Pelteobagrus fulvidraco）

CHEN Jiayan#， TANG Yi#， DAI Liuye， WANG Xuejing， HUANG Zhen， PENG Fangyuan，

TANG Lingwei， LIU Wenbin*

（State Key Laboratory of Developmental Biology of Freshwater Fish， College of Life Science， Hunan Normal University， Changsha 410081， China）

Abstract： There is a significant sex difference in the growth of yellow catfish （Pelteobagrus fulvidraco） at the same age which shows that males are longer in length and heavier in weight than females. mTOR （mechanistic target of rapamycin kinase） signaling pathway plays an important role in cell growth， development and protein synthesis. In order to understand the correlation between the nutritional growth mechanism of yellow catfish and the mTOR signaling pathway， this study firstly analyzed the muscle nutrient composition of female and male yellow catfish in the aspects of physiology and biochemistry. The results showed that the nutritional quality of female yellow catfish muscle was better than that of the wild female yellow catfish in terms of mineral elements， amino acid composition， protein evaluation and fatty acid quality， while there was little difference in water， crude protein and crude fat content between them. Quantitative real-time PCR （qRT-PCR） analysis was conducted for the major genes of mTOR signaling pathway. The results showed that the expressions of AKT serine/threonine kinase 1 （AKT1）， AKT serine/threonine kinase 2 （AKT2）， AKT serine/threonine kinase 3 （AKT3）， mTOR， ribosomal protein S6 kinase B1 （S6KA）， ribosomal protein S6 kinase B2 （S6KB）， eukaryotic translation initiation factor 4E binding protein 1 （4E-BP1） in muscle， liver， kidney and heart tissues of male yellow catfish were significantly higher than those of female. This may be related to the growth differences of female and male yellow catfish. These results provide an experimental basis for further exploring the molecular mechanism of sexual growth difference of yellow catfish.

Key words： Pelteobagrus fulvidraco; nutritional composition; growth difference; gene expression analysis; mTOR signaling pathway

（Acta Laser Biology Sinica， 2023， 32（1）： 026-035）

黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco），英文名為yellow catfish，別名黃姑魚、黃鴨叫等，其肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美，營養(yǎng)價(jià)值高，經(jīng)濟(jì)價(jià)值大，極受消費(fèi)者喜愛。目前，關(guān)于黃顙魚的研究多有報(bào)道，對(duì)于肌肉營養(yǎng)成分方面也有研究［1-8］。姜巨峰等［6］對(duì)雌雄黃顙魚可食部分進(jìn)行了基本營養(yǎng)成分比較分析，發(fā)現(xiàn)黃顙魚肌肉的營養(yǎng)價(jià)值雌雄無差異。梁琍等［7］比較分析了錦江河野生黃顙魚與養(yǎng)殖黃顙魚營養(yǎng)品質(zhì)，野生黃顙魚肌肉部分的蛋白質(zhì)品質(zhì)優(yōu)于養(yǎng)殖黃顙魚。韓慶等［8］測(cè)定了洞庭湖黃顙魚肌肉營養(yǎng)成分，發(fā)現(xiàn)洞庭湖黃顙魚具有含肉率較高、肌肉粗脂肪含量適宜、肉質(zhì)鮮嫩細(xì)膩、肌肉系水力較好、硬度大及彈性好的特性。但是，對(duì)于洞庭湖流域的野生雌、雄黃顙魚肌肉品質(zhì)及生理生化指標(biāo)的比較鮮有報(bào)道。而且，黃顙魚存在明顯的兩性生長差異，即在相同的養(yǎng)殖環(huán)境下，同齡的黃顙魚雄魚個(gè)體大，生長快，雌魚個(gè)體小，生長慢［9］，因此，黃顙魚是進(jìn)行兩性生長差異研究的好材料。為了分析黃顙魚的兩性生長差異機(jī)理，本研究將對(duì)野生雌、雄黃顙魚的肌肉營養(yǎng)成分及生理生化指標(biāo)進(jìn)行比較分析。

魚類的生長除了與這些營養(yǎng)指標(biāo)有關(guān)外，還與機(jī)體蛋白質(zhì)的合成密切關(guān)聯(lián)，旺盛的蛋白質(zhì)合成是個(gè)體大、生長快的重要保障。研究表明，三倍體湘云鯽快速生長與蛋白質(zhì)合成有明顯的正相關(guān)，且與蛋白質(zhì)代謝密切關(guān)聯(lián)的氨肽酶N、多肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體和谷氨酸脫氫酶在三倍體湘云鯽中的表達(dá)和活性顯著高于其父母本［10］。因此，尋找與魚類生長營養(yǎng)密切關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)合成調(diào)控信號(hào)通路，勢(shì)必有助于進(jìn)一步揭示魚類兩性生長差異的遺傳機(jī)制。

mTOR（mechanistic target of rapamycin kinase）信號(hào)通路是哺乳動(dòng)物合成蛋白質(zhì)的重要途徑。mTOR基因是mTOR信號(hào)通路中的主導(dǎo)基因，可通過對(duì)下游核糖體蛋白S6激酶（ribosomal protein S6 kinase，S6K）和翻譯抑制蛋白4E-BP1（eukaryotic translation initiation factor 4E binding protein 1）的調(diào)節(jié)以控制蛋白質(zhì)合成［11-16］。S6K被mTOR激活后，通過對(duì)核糖體蛋白S6多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化來促進(jìn)翻譯起始復(fù)合體的形成，從而促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成。同時(shí)mTOR也能對(duì)4E-BP1的多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化，使它與被抑制的翻譯起始因子eIF4E（eukaryotic translation initiation factor 4E）脫離，促進(jìn)翻譯復(fù)合體的形成［17］。mTOR的活性受調(diào)節(jié)亞基proline-rich Akt substrate 40 kD（PRAS40）的負(fù)性調(diào)節(jié)，而PRAS40則受上游AKT（Akt kinase）的調(diào)節(jié)。AKT是一個(gè)促進(jìn)生物體成活的重要蛋白激酶。AKT又名PKB，其家族包括三個(gè)成員，即AKT1（AKT serine/threonine kinase 1）、AKT2（AKT serine/threonine kinase 2）和AKT3（AKT serine/threonine kinase 3）。除了直接調(diào)節(jié)PRAS40以外，AKT還直接調(diào)節(jié)mTOR下游的S6K蛋白激酶［18-21］。

有研究報(bào)道，飼料喂食虹鱒魚能誘導(dǎo)mTOR通路中的一系列蛋白激酶，包括mTOR、S6K、PKB和4E-BP1的磷酸化與活性，并提出哺乳動(dòng)物中的mTOR通路在魚類中完全保留［22］。四川農(nóng)業(yè)大學(xué)研究小組從鯉魚中克隆了mTOR cDNA，并推斷鯉魚mTOR由2 515個(gè)氨基酸組成，包含哺乳動(dòng)物mTOR具備的FAT、FRB、PI3Kc和FATc等重要結(jié)構(gòu)域［23］。這些初步的研究表明，mTOR信號(hào)通路在魚類中也是一條重要的營養(yǎng)代謝通路，但是，mTOR信號(hào)通路是否與魚類的兩性生長差異有關(guān)還沒有報(bào)道。

因此，本試驗(yàn)將以洞庭湖流域野生雌、雄黃顙魚為材料，首先，對(duì)其肌肉的營養(yǎng)成分進(jìn)行分析與評(píng)價(jià)，然后，應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因在野生雌、雄黃顙魚中的表達(dá)，以期為進(jìn)一步探索魚類兩性生長差異的生理生化和分子機(jī)制提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco，雌/雄魚）取自洞庭湖流域岳陽縣公田鎮(zhèn)，雌性黃顙魚體質(zhì)量20～48 g，體長9.3～15.3 cm，雄性黃顙魚體質(zhì)量22～54 g，體長9.8～17.5 cm；雌、雄黃顙魚各16尾，均體格健壯，無傷病。樣本經(jīng)測(cè)量體長和體重后，參照黃峰等［24］的方法，取供試個(gè)體頭后至尾柄前的全部肌肉，剪碎、混勻后低溫保存供營養(yǎng)檢測(cè)分析。另取1齡的雌、雄黃顙魚的肌肉、肝、腎、腦、心、腸和性腺7大組織，用于提取總RNA，以上述7種組織的RNA反轉(zhuǎn)錄后的cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）分析。在-20℃冰箱中將cDNA產(chǎn)物保存。具體方法參考文獻(xiàn)［25］。

1.2 方法

1.2.1 黃顙魚肌肉中常規(guī)營養(yǎng)成分的測(cè)定與分析

雌雄黃顙魚肌肉中的水分測(cè)定方法選用的是第一法即直接干燥法，參考GB 5009.3―2016［26］，步驟為：1）準(zhǔn)備干凈的稱量瓶，在里面加入約適量的海砂，附帶一根小的玻棒，放在101～105℃的干燥箱里1 h，取出后放到干燥器中0.5 h，重復(fù)多次至恒重；2）準(zhǔn)確稱5～10 g的樣品（注意要精確到0.000 1 g）到新的稱量瓶中，用干凈的小玻棒攪拌均勻后放置在沸水浴上面進(jìn)行蒸干，期間需不斷攪拌，把瓶子底部的水滴擦干凈，然后把其放在101～105℃的干燥箱里，4 h后取出，然后放置到干燥器里面0.5 h；3）再把其放入101～105℃的干燥箱里1 h，最后放入干燥器里0.5 h，重復(fù)上面的操作直到兩次的重量之差≤2 g，即可視為恒重；4）對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理并表述。

參考GB 5009.5―2016［27］用凱氏定氮法測(cè)定雌雄黃顙魚肌肉中的粗蛋白含量。測(cè)定步驟為：1）樣品的處理；2）樣品的測(cè)定與蒸餾；3）樣品的吸收與滴定；4）數(shù)據(jù)的記錄。

參考GB 5009.6―2016［28］中的第二法酸水解法來測(cè)定雌雄黃顙魚肌肉中的粗脂肪含量，測(cè)定流程為：1）把樣品按照肉類酸水解標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行處理；2）進(jìn)行抽提；3）對(duì)樣品進(jìn)行稱量；4）對(duì)結(jié)果進(jìn)行表述。

參照GB 5009.4―2016［29］的第一法來測(cè)定雌雄黃顙魚肌肉中的粗灰分含量，測(cè)定步驟為：1）坩堝爐預(yù)處理；2）樣品的處理；3）樣品的測(cè)定；4）樣品結(jié)果的計(jì)算及表述。

1.2.2 黃顙魚肌肉中礦物元素的測(cè)定與分析

本試驗(yàn)參照GB 5009.268—2016［30］中的第一法，即電感耦合等離子體質(zhì)譜法對(duì)Zn、Mg、Fe、K、Cu這5中礦物元素在雌雄黃顙魚肌肉中的含量進(jìn)行了測(cè)定，具體方法步驟為：1）對(duì)樣品進(jìn)行勻漿處理；2）用壓力罐消解法對(duì)樣品進(jìn)行消解；3）校正測(cè)定的儀器；4）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；5）對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定；6）對(duì)樣品的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行處理分析并表述。

1.2.3 黃顙魚肌肉中氨基酸組成及含量的測(cè)定

與分析

本試驗(yàn)對(duì)雌雄黃顙魚肌肉中氨基酸的測(cè)定參照GB 5009.124—2016［31］，測(cè)定步驟為：1）樣品的制備；2）稱取≤2 g的樣品；3）根據(jù)樣品蛋白含量的高低加入HCl等進(jìn)行水解；4）用氨基酸分析儀進(jìn)行測(cè)定；5）對(duì)樣品的結(jié)果進(jìn)行分析并表述。

1.2.4 黃顙魚肌肉中脂肪酸組成及含量的測(cè)定

與分析

參照GB 5009.168—2016［32］選用內(nèi)標(biāo)法來測(cè)定雌雄黃顙魚肌肉中脂肪酸含量（以濕重計(jì)）。步驟為：1）樣品的制備，固體樣品或半固體樣品磨成粉末，而液體樣品則勻成勻漿；2）對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，包括稱取適量樣品、對(duì)樣品進(jìn)行水解、提取樣品中的脂肪、對(duì)脂肪進(jìn)行皂化處理及對(duì)脂肪酸進(jìn)行甲酯化處理；3）色譜測(cè)定；4）對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行計(jì)算并表述。

1.2.5 qRT-PCR

運(yùn)用ABI公司的7500 Real-time PCR儀對(duì)同一時(shí)期的雌雄黃顙魚肌肉、肝、腎、腦、心、腸和性腺組織中的AKT1、AKT2、AKT3、mTOR、S6KA、S6KB、4E-BP1基因進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)。所用qRT-PCR引物如表1所示，選取β-actin用作內(nèi)參，通過2-△△Ct方法求出表達(dá)差異，結(jié)合Prism軟件分析是否具有顯著差異，P<0.05則說明有顯著差異。具體方法見參考文獻(xiàn)［33］。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用 Excel 2010 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并參考本研究小組發(fā)表的論文進(jìn)行分析［34］。本試驗(yàn)用每克氮氨基酸評(píng)分（amino acid score，AAS）標(biāo)準(zhǔn)模式［35］結(jié)合全雞蛋蛋白的化學(xué)評(píng)分（chemical score，CS）模式［36］來評(píng)定黃顙魚肌肉蛋白質(zhì)中氨基酸的品質(zhì)。本試驗(yàn)即用此標(biāo)準(zhǔn)對(duì)黃顙魚和肌肉蛋白中的氨基酸品質(zhì)作較全面評(píng)定。本試驗(yàn)中涉及的標(biāo)準(zhǔn)模式中的AAS、CS、必需氨基酸指數(shù)（essential amino acid index，EAAI）和氨基酸含量以及支鏈氨基酸與芳香族氨基酸含量的比值F值（F value）的計(jì)算公式分別如（1～5）所示：

SAAS=（1）

SCS=（2）

IEAAI=n? ?×××…（3）

氨基酸含量（mg/gN）=×6.25×1 000（4）

F值=（5）

上述公式中，n為評(píng)價(jià)中進(jìn)行比較的氨基酸個(gè)數(shù)；A為需評(píng)價(jià)樣品的蛋白質(zhì)氨基酸含量（按mg/gN）；AE為全雞蛋蛋白質(zhì)模式的氨基酸含量（按mg/gN）。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃顙魚肌肉中的常規(guī)營養(yǎng)成分

通過對(duì)肌肉中的常規(guī)營養(yǎng)成分測(cè)定，發(fā)現(xiàn)雌、雄黃顙魚肌肉中水分含量分別為78.7%、79.9%；在粗灰分含量上，雌性黃顙魚的含量（2.6%）是雄性黃顙魚含量（1.8%）的1.44倍，雌性黃顙魚粗蛋白和粗脂肪含量均較高于雄性黃顙魚（表2）。

2.2 黃顙魚肌肉中的礦物元素含量

本試驗(yàn)測(cè)定了鋅、鎂、鐵、鉀、銅5種礦物元素的含量，發(fā)現(xiàn)雌、雄性黃顙魚肌肉的常量元素中鉀的含量均較高，分別為3 046、3 007 mg/kg；而微量元素中鋅的含量為最高，分別為14.1、10.6 mg/kg，鐵、鎂和銅三種元素的含量在雌性黃顙魚中較高（表3）。

2.3 黃顙魚肌肉中的氨基酸組成及含量

在雌、雄黃顙魚的肌肉中均檢測(cè)出16種氨基酸，包括7種必需氨基酸（essential amino acid，EAA）、2種半必需氨基酸（half-essential amino acid，HEAA）和7種非必需氨基酸（non-essential amino acid，NEAA）。其中，雌性黃顙魚的總氨基酸含量（157.5 mg/g）是雄性黃顙魚總氨基酸含量（128.1 mg/g）的1.23倍。在必需氨基酸（EAA）含量方面，雌性黃顙魚總必需氨基酸含量（62.6 mg/g）是雄性黃顙魚總必需氨基酸含量（52.9 mg/g）的1.18倍。在鮮味氨基酸（delicious amino acid，DAA）總含量方面，雌性黃顙魚的總鮮味氨基酸含量（76.8 mg/g）是雄性黃顙魚總鮮味氨基酸含量（61.6 mg/g）的1.25倍（表4）。

2.4 黃顙魚肌肉中的蛋白必需氨基酸組成評(píng)價(jià)

雌、雄黃顙魚肌肉中的總必需氨基酸含量分別為2 749、2 400 mg/gN，低于全雞蛋蛋白標(biāo)準(zhǔn)的2 960 mg/gN，但高于FAO/WHO標(biāo)準(zhǔn)的2 190 mg/gN，即符合FAO/WHO的要求。根據(jù)AAS和CS結(jié)果，雌、雄黃顙魚的第一限制性氨基酸均為蛋氨酸+半胱氨酸。而肌肉中EAAI值為88.59（雌性）>77.42（雄性）。兩者的F值為2.22～2.25，差別不大（表5）。

2.5 黃顙魚肌肉中的脂肪酸組成

在雌性黃顙魚中檢測(cè)出8種脂肪酸（fatty acid，F(xiàn)A），包括3種飽和脂肪酸（saturated fatty acid，SFA）和5種不飽和脂肪酸（unsaturated fatty acid，UFA）；雄性黃顙魚中檢測(cè)出3種脂肪酸，包括1種SFA和2種UFA。不論是脂肪酸的種類還是含量，雌性黃顙魚均要比雄性黃顙魚豐富，雌性黃顙魚中二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA）含量為0.048 6 mg/g，而在雄性黃顙魚中未檢測(cè)到（表6）。

2.6 qRT-PCR結(jié)果

利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)上述7個(gè)基因在肌肉、肝、腎、腦、心臟、腸和性腺組織進(jìn)行了表達(dá)分析，結(jié)果表明：在肌肉、肝、腎、腦和心臟組織中，雄性黃顙魚AKT1的表達(dá)量相對(duì)于雌性黃顙魚顯著上調(diào)；在性腺組織中，雄性黃顙魚的AKT1表達(dá)量相對(duì)于雌性黃顙魚顯著下調(diào)；在腸組織中，兩者沒有顯著差異。在肌肉、肝、腎、心臟和腸組織中，雄性黃顙魚AKT2、AKT3 和S6KB的表達(dá)量相對(duì)于雌性黃顙魚顯著上調(diào)；在性腺組織中，雄性黃顙魚AKT2、AKT3 和S6KB的表達(dá)量相對(duì)于雌性黃顙魚顯著下調(diào)；在腦組織中，兩者沒有顯著性差異。在肌肉、肝、腎、腦、心臟和腸組織中，雄性黃顙魚mTOR 和4E-BP1的表達(dá)量相對(duì)于雌性黃顙魚顯著上調(diào)；在性腺組織中，雄性黃顙魚mTOR 和4E-BP1的表達(dá)量相對(duì)于雌性黃顙魚顯著下調(diào)。在肌肉、肝、腎組織中，雄性黃顙魚S6KA的表達(dá)量相對(duì)于雌性黃顙魚顯著上調(diào)；在性腺和心臟組織中，雄性黃顙魚S6KA的表達(dá)量相對(duì)于雌性黃顙魚顯著下調(diào)；在腦和腸組織中，兩者沒有顯著差異（圖1）。

3 討論

一般來說，魚類肌肉的水分含量平均值為80%左右，變化范圍在70%～85%［37］。從表2中可以看出，黃顙魚肌肉中的水分含量均處于一個(gè)正常范圍內(nèi)。蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，當(dāng)其含量≥15%時(shí)［38］，該肉類可被稱為高蛋白肉質(zhì)。黃顙魚的粗蛋白含量均高于或等于15%，因此，黃顙魚是很好的蛋白質(zhì)攝入來源。肌肉脂肪含量達(dá)到鮮樣的3.5%～4.5%會(huì)有良好的適口性，且在一定范圍內(nèi)肉品的風(fēng)味隨肌肉脂肪含量的增加而持續(xù)改變［39］，黃顙魚肌肉的粗脂肪含量接近這一水平。魚類根據(jù)脂肪的含量可以分為4類：＜2%為瘦魚，2%～4%為低脂肪魚，4%～8%為中脂肪魚，＞8%為高脂肪魚［40］。雌性和雄性黃顙魚中脂肪含量分別為3.4%和3.3%，均屬于低脂肪魚。

礦物元素對(duì)人體的各項(xiàng)生理機(jī)能的正常運(yùn)行至關(guān)重要，只能從食物中獲取。本試驗(yàn)中所檢測(cè)的Zn、Mg、Fe、K、Cu元素的含量，雌性黃顙魚均要高于雄性黃顙魚。從補(bǔ)充礦物質(zhì)方面來看，雌性黃顙魚是更好的食物來源。

氨基酸對(duì)人體的健康至關(guān)重要，其種類又是不同食物肉質(zhì)風(fēng)味的重要呈味物質(zhì)。從表4中我們可以看出，在雌、雄黃顙魚肌肉中均檢測(cè)出16種氨基酸，其中包括7種必需氨基酸、2種半必需氨基酸和7種非必需氨基酸，這證明它們的肉質(zhì)中都富含較全面的氨基酸。

根據(jù) FAO/WHO的理想模式，質(zhì)量較好的蛋白質(zhì)∑EAA /∑AA為40%左右，∑EAA /∑NEAA需在 60%以上［41］。本試驗(yàn)中，雌、雄黃顙肌肉中的∑EAA /∑AA分別達(dá)39.75%、41.30%，∑EAA /∑NEAA分別為76.25%、81.64%，說明雌雄黃顙魚的肌肉氨基酸比例平衡，營養(yǎng)價(jià)值好。而且，雌雄黃顙魚賴氨酸的AAS和CS評(píng)分均很高，約為FAO/WHO標(biāo)準(zhǔn)的2倍，這說明黃顙魚是一種很好的賴氨酸來源。根據(jù) EAAI 能看出不同黃顙魚蛋白和標(biāo)準(zhǔn)蛋白相近的程度，雌、雄黃顙魚的EAAI值分別為88.59、77.42，表明雌性黃顙魚的必需氨基酸組成相對(duì)更合理。

脂肪在食物加熱后能產(chǎn)生濃烈香氣，高含量的多不飽和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid，PUFA）能顯著地增加香味。亞油酸（linoleic acid，C18：2n-6c）是人體的必需脂肪酸，不僅能散發(fā)香味，而且能降低血液中膽固醇含量，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化［42］。本試驗(yàn)中，C18：2n-6c在雌性黃顙魚肌肉中的含量為0.051 1 mg/g，而在雄性黃顙魚中基本沒有檢測(cè)到。此外，亞麻酸（linolenic acid，C18：3n-3）具有降低血脂、防止血栓的功能。雌性黃顙魚的C18：3n-3含量為0.040 7 mg/g，其在雄性黃顙魚中并未檢測(cè)到。二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid，EPA）和DHA有舒張血管和抗血栓、防治心腦血管疾病等功能［43］。EPA和DHA 主要存在于水生生物的脂肪中，魚類是優(yōu)質(zhì)的EPA和DHA來源［42］。本試驗(yàn)中，無論是雌性黃顙魚還是雄性黃顙魚均未檢測(cè)到EPA，但是在雌性黃顙魚中檢測(cè)了DHA，其含量為0.048 6 mg/g。綜上說明，脂肪酸組成上雌性黃顙魚的品質(zhì)更優(yōu)。

通過qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在性腺組織中mTOR信號(hào)通路相關(guān)的幾個(gè)基因 （AKT1、AKT2、AKT3、mTOR、S6KA、S6KB、4E-BP1）在雄性黃顙魚中的表達(dá)量與雌性黃顙魚相比表現(xiàn)為顯著下調(diào)（P<0.01），而雌性在生長前期用于性腺生長的能量顯著高于雄性，在一定程度上降低了雌性個(gè)體用于體長、體重生長的能量［44］，這一點(diǎn)與上述結(jié)果不謀而合。肌肉、肝、腎和心臟組織中該通路相關(guān)基因AKT1、AKT2、AKT3、mTOR、S6KA、S6KB、4E-BP1在雄性黃顙魚中的表達(dá)量與雌性黃顙魚相比表現(xiàn)為顯著上調(diào)，而黃顙魚個(gè)體生長與性別有關(guān)［45］，這點(diǎn)與上述結(jié)果互為佐證。因此，本試驗(yàn)的研究初步表明，mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因可能參與了黃顙魚兩性生長差異的分子調(diào)控機(jī)制，其具體的分子機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究。

總之，本試驗(yàn)對(duì)黃顙魚營養(yǎng)學(xué)評(píng)價(jià)及其健康養(yǎng)殖具有良好的指導(dǎo)意義，同時(shí)為闡明mTOR信號(hào)通路調(diào)控黃顙魚及其他魚類的營養(yǎng)與生長提供了科學(xué)試驗(yàn)依據(jù)。

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收稿日期：2022-11-21；修回日期：2023-01-04。

基金項(xiàng)目：湖南省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（2021JJ30447）；湖南省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目（19A319）；國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（31772902）。

作者簡(jiǎn)介：#為并列第一作者。陳佳艷，碩士研究生；唐易，碩士研究生。

* 通信作者：劉文彬，教授，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)及水產(chǎn)生物學(xué)研究。E-mail： wenbinliu@hunnu.edu.cn。