結(jié)核抗體檢驗(yàn)在肺結(jié)核鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值

廖育榮

廈門(mén)大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廈門(mén) 361000

肺結(jié)核為臨床常見(jiàn)的慢性傳染性疾病，多由結(jié)核分枝桿菌感染導(dǎo)致，患病后隨病情進(jìn)展可對(duì)機(jī)體重要臟器造成一定損傷，嚴(yán)重影響患者生命健康[1]。報(bào)道顯示，目前肺結(jié)核發(fā)病率仍呈每年上升趨勢(shì)，且由于肺結(jié)核早期缺乏典型特征，癥狀受病情影響較大，臨床早期診斷具有一定難度，易延誤患者病情、影響預(yù)后[2-3]。以往臨床多通過(guò)細(xì)菌學(xué)檢查進(jìn)行確診，但由于傳統(tǒng)涂片抗酸染色敏感性較低，分枝桿菌培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，對(duì)于早期診斷存在一定局限性[4]。目前結(jié)核抗體檢驗(yàn)已逐漸應(yīng)用于肺結(jié)核評(píng)估診斷中，隨檢驗(yàn)方法不斷改善，其敏感度及特異度均有所提高，但不同檢驗(yàn)方法間診斷準(zhǔn)確性仍存在較大差異，而結(jié)核菌素（purified protein derivative，PPD）試驗(yàn)為一種利用結(jié)核菌感染后對(duì)結(jié)核蛋白產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)的輔助診斷方案，但檢查結(jié)果易受外界因素干擾[5-6]。目前臨床鮮有研究對(duì)比不同結(jié)核抗體檢驗(yàn)方案及PPD 試驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核的診斷準(zhǔn)確率?；诖?，本研究試分析結(jié)核抗體檢驗(yàn)聯(lián)合PPD 試驗(yàn)在肺結(jié)核鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取130 例我院2021 年8 月至2022 年8 月就診的疑似肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象。其中男75 例（57.69%），年齡22～72 歲，平均（54.84±6.25）歲；平均BMI（22.84±1.05）kg/m2。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)臨床初步診斷為疑似肺結(jié)核患者；可接受本研究檢查方案；患者及家屬知曉本研究，并簽訂同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他呼吸系統(tǒng)疾病者；合并肺部惡性腫瘤；合并肝、腎等重大臟器功能障礙者；合并自身免疫系統(tǒng)疾病、循環(huán)系統(tǒng)疾病者；合并其他感染性疾病者；合并精神異常或檢查依從性較差者。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法 兩大類(lèi)方法具體步驟如下：

結(jié)核抗體檢驗(yàn)：采集所有患者入院后次日晨起空腹?fàn)顟B(tài)下外周靜脈血5 ml，37℃條件下經(jīng)離心半徑8 cm、3500 r/min 離心10 min 后，分離血清于-20℃冰箱保存待測(cè)。分別進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法、蛋白芯片法、膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)，其中酶聯(lián)免疫吸附法檢驗(yàn)試劑盒購(gòu)于程度永安生物制藥有限公司，采用GF-M3000 型酶標(biāo)儀及PW-960 型自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)；蛋白芯片法檢驗(yàn)試劑盒購(gòu)于南京大淵生物科技公司；膠體金法檢驗(yàn)試劑盒購(gòu)于上海奧普生物科技公司。所有操作均嚴(yán)格按照儀器及試劑盒相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

PPD 試驗(yàn)：于患者前臂掌側(cè)采用1 ml 注射器皮內(nèi)注射0.1 ml 含5 IU 的PPD 試劑，于注射后48～72 h觀察記錄硬結(jié)平均直徑，若硬結(jié)直徑≤4 mm 為陰性，5～9 mm 為弱陽(yáng)性，10～19 mm 為陽(yáng)性，≥20 mm 或局部發(fā)生壞死、水泡、潰爛等為強(qiáng)陽(yáng)性。本研究將陽(yáng)性及強(qiáng)陽(yáng)性納入陽(yáng)性診斷結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察分析下列指標(biāo)：

（1）統(tǒng)計(jì)酶聯(lián)免疫吸附法、蛋白芯片法、膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)診斷結(jié)果。

（2）比較酶聯(lián)免疫吸附法、蛋白芯片法、膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)診斷效能。

（3）膠體金法、PPD 試驗(yàn)單獨(dú)及二者聯(lián)合診斷結(jié)果，聯(lián)合診斷結(jié)果采用并聯(lián)原則。

（4）比較膠體金法、PPD 試驗(yàn)單獨(dú)、聯(lián)合診斷效能。

（5）比較膠體金法、PPD 試驗(yàn)單獨(dú)、聯(lián)合診斷對(duì)不同類(lèi)型肺結(jié)核檢出率。

診斷效能相關(guān)公式：

特異度=真陰性數(shù)/真陰性數(shù)+假陽(yáng)性數(shù)；

靈敏度=真陽(yáng)性數(shù)/真陽(yáng)性數(shù)+假陰性數(shù)；

準(zhǔn)確度=檢測(cè)正確的數(shù)量（真陽(yáng)性+真陰性）/總檢測(cè)樣本數(shù)量×100%；

陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù)）；

陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù)）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0 軟件對(duì)不同數(shù)據(jù)類(lèi)型進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料用表示，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，兩組間比較行χ2檢驗(yàn)，默認(rèn)雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同結(jié)核抗體檢驗(yàn)診斷結(jié)果 經(jīng)臨床診斷結(jié)果顯示，130 例疑似肺結(jié)核患者中，陽(yáng)性82 例，陰性48例。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法結(jié)核抗體檢驗(yàn)結(jié)果顯示，陽(yáng)性54 例；經(jīng)蛋白芯片法結(jié)核抗體檢驗(yàn)結(jié)果顯示，陽(yáng)性60 例；經(jīng)膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)結(jié)果顯示，陽(yáng)性71 例。見(jiàn)表1。

表1 不同結(jié)核抗體檢驗(yàn)診斷結(jié)果（例）

2.2 不同結(jié)核抗體檢驗(yàn)診斷效能比較 與酶聯(lián)免疫吸附法、蛋白芯片法比較，膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)對(duì)于肺結(jié)核診斷靈敏度82.93%（68/82）、準(zhǔn)確度86.92%（113/130）較高，漏診率17.07%（14/82）較低（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同結(jié)核抗體檢驗(yàn)診斷效能比較 [例（%）]

2.3 膠體金法、PPD 試驗(yàn)單獨(dú)、聯(lián)合診斷結(jié)果 經(jīng)PPD 試驗(yàn)診斷結(jié)果顯示，130 例疑似肺結(jié)核患者中，陽(yáng)性72 例；經(jīng)膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)聯(lián)合PPD 試驗(yàn)診斷結(jié)果顯示，陽(yáng)性82 例。見(jiàn)表3。

表3 膠體金法、PPD試驗(yàn)單獨(dú)、聯(lián)合診斷結(jié)果（例）

2.4 膠體金法、PPD 試驗(yàn)單獨(dú)、聯(lián)合診斷效能 與膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)、PPD 試驗(yàn)單獨(dú)診斷比較，聯(lián)合診斷靈敏度96.34%（79/82）、準(zhǔn)確度95.38%（124/130）較高，漏診率3.66%（3/82）較低（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 膠體金法、PPD試驗(yàn)單獨(dú)、聯(lián)合診斷效能 [例（%）]

2.5 不同類(lèi)型肺結(jié)核檢出率比較 經(jīng)臨床診斷結(jié)果顯示，82 例肺結(jié)核患者中，原發(fā)性肺結(jié)核21 例，血行播散性肺結(jié)核14 例，繼發(fā)性肺結(jié)核35 例，結(jié)核性胸膜炎12 例。與膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)、PPD 試驗(yàn)單獨(dú)診斷比較，聯(lián)合診斷對(duì)于血行播散性肺結(jié)核、結(jié)核性胸膜炎檢出率較高（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 不同類(lèi)型肺結(jié)核檢出率比較 [例（%）]

3 討論

肺結(jié)核為臨床常見(jiàn)呼吸系統(tǒng)傳染性疾病，目前診斷肺結(jié)核主要通過(guò)痰涂片染色鏡檢，結(jié)合X 線胸片檢查，根據(jù)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行確診，但分離培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，且X 線檢查缺乏特異性，易出現(xiàn)誤診、漏診等現(xiàn)象，延誤患者最佳治療時(shí)機(jī)，影響預(yù)后恢復(fù)[7-8]。因此，積極探討肺結(jié)核早期評(píng)估診斷方案具有重大意義。

血清學(xué)抗體免疫檢測(cè)技術(shù)為結(jié)核病診斷方案之一，具有簡(jiǎn)便快捷、特異性、敏感性高等優(yōu)勢(shì)，對(duì)于肺結(jié)核、肺外結(jié)核鑒別診斷具有一定價(jià)值[9]。本研究通過(guò)比較不同結(jié)核抗體檢驗(yàn)方法對(duì)肺結(jié)核診斷價(jià)值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)對(duì)于肺結(jié)核診斷靈敏度、準(zhǔn)確度均高于酶聯(lián)免疫吸附法、蛋白芯片法，提示臨床可通過(guò)膠體金法進(jìn)行結(jié)核抗體檢驗(yàn)，以提高肺結(jié)核診斷準(zhǔn)確率。報(bào)道顯示，TBSA（結(jié)核分枝桿菌基因）為一種特異性較高的結(jié)核分枝桿菌分泌抗原，易被機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別并產(chǎn)生特異性抗體[10-11]，而酶聯(lián)免疫吸附法結(jié)核抗體檢驗(yàn)通過(guò)酶聯(lián)免疫間接檢測(cè)樣本中TBSA 結(jié)核抗體IgG，檢測(cè)不受結(jié)核菌素試驗(yàn)影響，對(duì)于無(wú)痰性結(jié)核病、菌陰結(jié)核病及肺外結(jié)核病特異性較高。結(jié)核蛋白芯片法為一種以微孔濾膜為載體，利用微陣列技術(shù)將純化的種抗原固相于同一濾膜上，加入血清標(biāo)本反應(yīng)后，經(jīng)顯色系統(tǒng)利用專(zhuān)用芯片閱讀儀、軟件分析顯色后的芯片，對(duì)多種結(jié)核抗體進(jìn)行同步檢測(cè)，可有效區(qū)分活動(dòng)性肺結(jié)核及穩(wěn)定性肺結(jié)核[12]。而膠體金法以結(jié)核特異性外膜成分LAM 為標(biāo)記抗原，通過(guò)標(biāo)記抗原檢測(cè)血清中結(jié)核分枝桿菌抗體，結(jié)核IgG 抗體可特異性與葡萄球菌A蛋白膠體金綴合物結(jié)合顯色，從而有效鑒別診斷結(jié)核分枝桿菌感染[13]。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，采用膠體金法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌感染靈敏度及特異度分別為78.32%、89.25%，對(duì)于復(fù)治型肺結(jié)核抗體陽(yáng)性檢出率可達(dá)85.45%，具有較高診斷價(jià)值[14]。本研究與其結(jié)果基本一致。

PPD 試驗(yàn)?zāi)壳耙褟V泛應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌感染診斷中，對(duì)于兒童、青少年結(jié)核病篩查具有較高應(yīng)用價(jià)值，通過(guò)TB-PPD 皮膚試驗(yàn)后，48～72 h 即可判斷結(jié)核菌感染情況[15]。本研究結(jié)果顯示，膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)聯(lián)合PPD 試驗(yàn)對(duì)于肺結(jié)核診斷準(zhǔn)確度可達(dá)95.38%，提示臨床可通過(guò)膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)、PPD 試驗(yàn)聯(lián)合應(yīng)用于早期篩查結(jié)核分枝桿菌感染，以提高診斷靈敏度，減少漏診、誤診現(xiàn)象發(fā)生，且兩種檢測(cè)方法操作均較為簡(jiǎn)便，可相互補(bǔ)充，有助于疑似肺結(jié)核痰涂片結(jié)果陰性患者診斷。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)、PPD 試驗(yàn)聯(lián)合診斷對(duì)于血行播散性肺結(jié)核、結(jié)核性胸膜炎檢出率較高，臨床可通過(guò)聯(lián)合診斷結(jié)果針對(duì)性制訂治療方案。

綜上所述，膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)對(duì)于肺結(jié)核具有較高診斷價(jià)值，臨床可通過(guò)膠體金法結(jié)核抗體檢驗(yàn)聯(lián)合PPD 試驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核進(jìn)行早期篩查，以提高診斷準(zhǔn)確性。