系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶1與白細(xì)胞介素-17的分析及其臨床意義

吳愛瑜 馬小美 張子渺 田畔 賴勤 余蓮

【摘 要】目的：探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者外周血肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶1（Pin1）活性的表達(dá)與細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-17（IL-17）水平相關(guān)性及其臨床意義。方法：選取98例SLE患者，其中42例為SLE初治患者，另選43例健康體檢者為健康對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測所有研究對象入組時(shí)及98例SLE患者治療后3個(gè)月血清中Pin1、IL-17水平，分析98例SLE患者血清Pin1水平變化及與細(xì)胞因子IL-17、SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI）評分、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性，分析

42例SLE患者初治時(shí)、治療后3個(gè)月時(shí)其水平變化及意義。結(jié)果：①SLE穩(wěn)定組外周血的Pin1表達(dá)水平明顯高于健康對照組（H = 28.913，P < 0.05），SLE活動組外周血的Pin1表達(dá)水平明顯高于SLE穩(wěn)定組（H = 31.738，P < 0.05）。②SLE患者Pin1與IL-17、SLEDAI評分呈正相關(guān)（r = 0.640，P < 0.05；r = 0.461，P < 0.05），與抗ds-DNA抗體、C反應(yīng)蛋白、紅細(xì)胞沉降率無明顯相關(guān)性。③SLE初治組外周血的Pin1表達(dá)水平明顯高于健康對照組（H = 55.568，P < 0.05），SLE初治組治療后3個(gè)月的Pin1表達(dá)水平較治療前下降（H = 28.136，P < 0.05）。④血清Pin1水平在有腎臟損害的SLE患者表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。結(jié)論：SLE患者外周血Pin1過表達(dá)，IL-17增高且與其呈正相關(guān)，經(jīng)過治療能顯著降低Pin1活性，降低IL-17細(xì)胞因子水平，抑制Pin1蛋白表達(dá)，可能會延緩SLE的進(jìn)展，Pin1抑制劑可能成為SLE治療的新靶點(diǎn)之一。

【關(guān)鍵詞】 系統(tǒng)性紅斑狼瘡；肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶1；白細(xì)胞介素-17；酶聯(lián)免疫吸附測定

Analysis and Clinical Significance of Pin1 and IL-17 in Peripheral Blood of Patients with Systemic Lupus Erythematosus

WU Ai-yu，MA Xiao-mei，ZHANG Zi-miao，TIAN Pan，LAI Qin，YU Lian

【ABSTRACT】Objective：To explore the correlation between the expression of Pin1 activity and cytokine interleukin-17（IL-17）levels in peripheral blood of patients with systemic lupus erythematosus（SLE）and its clinical significance.Methods：Ninety-eight SLE patients were selected，of which 42 cases were newly treated SLE patients，and another 43 healthy examinees were selected as the healthy control group.Enzyme Linked Immunosorbent Assaywas used to detect the levels of Pin1 and IL-17 in the serum of all study subjects at enrollment and 3 months after treatment in 98 SLE patients.The changes in serum Pin1 levels in 98 SLE patients and their correlation with cytokine IL-17，SLE disease activity index（SLEDAI）score，and laboratory indicators were analyzed.The changes and significance of these levels in 42 SLE patients at initial treatment and 3 months after treatment were also analyzed.Results：①The expression?level of Pin1 in peripheral blood of the SLE stable group was significantly higher than that of the healthy control group（H = 28.913，P < 0.05），and the expression level of Pin1 in perpheral blood of the SLE active group was significantly higher than that in the SLE stable group（H = 31.738，P < 0.05）.②Pin1 is positively correlated with IL-17 and SLEDAI scores in SLE patients（r = 0.640，P < 0.05;r = 0.461，P < 0.05），but not significantly correlated with anti ds-DNA antibodies，C-reactive protein，and erythrocyte sedimentation rate.③The expression level of Pin1 in peripheral bloodof the SLE initial treatment group was significantly higher than that of the healthy control group（H = 55.568，P < 0.05），and the expression level of Pin1 in the SLE initial treatment group decreased after 3 months' treatmentcompared to before treatment（H = 28.136，P < 0.05）.④The expression of serum Pin1 level increased in SLEpatients with renal damage，and the difference is statistically significant（P < 0.05）.Conclusion：Pin1 in peripheral blood is overexpressed in SLE patients，and IL-17 is increased and positively correlated with it.Treatment can significantly reduce Pin1 activity，lower IL-17 cytokine levels，and inhibit Pin1 protein expression，which may delay the progression of SLE.Pin1 inhibitors may become one of the new targets for SLE treatment.

【Keywords】 systemic lupus erythematosus;Pin 1;IL-17;Enzyme Linked Immunosorbent Assay

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，

SLE）是一種以多種致病性自身抗體和大量免疫復(fù)合物沉積，介導(dǎo)器官、組織損傷的系統(tǒng)性自身免疫性疾病。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，主要為免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)異常，如果診治不及時(shí)或疾病控制不佳，將導(dǎo)致不可逆的組織、臟器損害，甚至死亡［1-2］。目前，臨床上普遍使用糖皮質(zhì)激素、抗瘧藥和免疫抑制劑等治療，但部分患者治療反應(yīng)欠佳，長期完全緩解率較低，且有較多的不良反應(yīng)。近年來，隨著對SLE發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識，出現(xiàn)了一些針對B細(xì)胞的生物靶向治療藥物，如抗CD20單抗利妥昔單抗、B淋巴細(xì)胞刺激因子抑制劑貝利尤單抗等［3］，因價(jià)格昂貴，患者常常難以承受。尋找新的有效且價(jià)廉的靶向治療藥物仍是國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶1（Pin1）可使多種免疫細(xì)胞活化，參與細(xì)胞信號通路的活化，促進(jìn)多種細(xì)胞因子的釋放，發(fā)揮促炎作用，從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，在自身免疫性疾病發(fā)病過程中起重要作用［4-5］。但有關(guān)Pin1在SLE發(fā)生、發(fā)展中作用的研究報(bào)告較少。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測SLE患者及健康對照者血清中Pin1水平，探討其與細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-17（IL-17）的相關(guān)性及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年12月至2022年4月

在福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖第一醫(yī)院就診的98例SLE患者為SLE組，其中42例初治SLE患者為SLE初治療組，所有患者均符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會（ACR）修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)［6］。其中男10例，女88例；年齡18～68歲，中位數(shù)36歲；病程最短7個(gè)月，最長23年，中位數(shù)4年。同時(shí)排除腫瘤、炎癥及其他自身免疫性疾病。另選取同期健康志愿者43例為健康對照組，其中男5例，女38例；年齡19～48歲，中位數(shù)38歲。2組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.5），具有可比性。本研究經(jīng)福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖第一醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑 Pin1 ELISA試劑盒（武漢華美生物有限公司，批號CSB-E11308h）；IL-17 ELISA試劑盒（美國eBioscience，批號900-TM234）。

1.3 檢測血清Pin1、IL-17水平 SLE患者和健康志愿者均晨起空腹，用肝素抗凝管采集靜脈血5 mL，顛倒混勻。待其析出血清，抽取血清置于1.5 mL EP管中，室溫靜置30 min，置于離心機(jī)以3000 r·min-1離心15 min，離心半徑10 cm，然后吸取上層清液。采用ELISA法檢測血清Pin1、IL-17水平，按照Pin1、IL-17試劑盒說明書進(jìn)行檢測。

1.4 記錄SLE患者臨床癥狀，測定相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及進(jìn)行活動度評估 記錄98例SLE患者治療后3個(gè)月的皮膚、腎臟、關(guān)節(jié)、精神神經(jīng)等相關(guān)臨床癥狀。由福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖第一醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測抗ds-DNA抗體、抗核抗體、C反應(yīng)蛋白（CRP）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）等相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。按照加拿大Toronto大學(xué)制定的SLE疾病活動度指數(shù)（SLEDAI）進(jìn)行評分。SLEDAI < 5分為疾病穩(wěn)定，SLEDAI≥5分為疾病活動。將98例SLE患者分為穩(wěn)定組41例，活動組57例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以表示，采用

t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布以中位數(shù)和四分位數(shù)間距［M（P25，P75）］表示，采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)或Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)；采用Pearson相關(guān)性分析直線相關(guān)分析進(jìn)行相關(guān)性分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 SLE活動組、穩(wěn)定組及健康對照組外周血Pin1表達(dá)水平比較 SLE穩(wěn)定組外周血Pin1

［8.93（6.14，15.41） ng·mL-1］表達(dá)水平明顯高于健康對照組［6.12（3.63，9.64）ng·mL-1］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H = 28.913，P < 0.05）；與SLE穩(wěn)定組比較，SLE活動組外周血Pin1［16.37（11.48，27.34）ng·mL-1］表達(dá)水平上升（H = 31.738，P < 0.05）。

2.2 SLE組外周血Pin1表達(dá)與IL-17、SLEDAI評分、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性 98例SLE患者的IL-17 36.19（19.72，70.93） pg·mL-1、SLEDAI評分10（3，12）分、抗ds-DNA抗體134.5（34.4，28.6）IU·mL-1、ESR 30（14，56） mm·h-1、CRP 3.2（0.8，15.8）mg·L-1。結(jié)果顯示，Pin1與IL-17、SLEDAI評分呈正相關(guān)（r = 0.640，P < 0.05；r = 0.461，P < 0.05），而與抗ds-DNA抗體、CRP、ESR無明顯相關(guān)性（P ﹥ 0.05）。見表1。

2.3 SLE初治組入組時(shí)、治療后3個(gè)月及健康對照組外周血Pin1表達(dá)水平比較 SLE初治組入組時(shí)外周血Pin1［14.23（11.21，24.28）ng·mL-1］表達(dá)水平明顯高于健康對照組［6.14（3.57，9.63）ng·mL-1］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H = 55.568，P < 0.05）；與入組時(shí)比較，SLE初治組治療后3個(gè)月外周血Pin1［9.18（6.62，14.93）ng·mL-1］表達(dá)水平總體下降（H = 28.136，P < 0.05）。

2.4 外周血Pin1水平與相關(guān)臨床表現(xiàn)的關(guān)系 在98例SLE患者中，腎臟損傷者占54.08%

（53例），皮膚損害者占48.98%（48例），關(guān)節(jié)損傷者占34.69%（34例）。在有腎臟損害的SLE患者中，血清Pin1水平明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表2。

3 討 論

Pin1是肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶的一種亞型，其基因定位于19p13，由163個(gè)氨基酸殘基組成，相對分子質(zhì)量為18 KD。Pin1包含2個(gè)結(jié)構(gòu)功能域，Pin1底物具有高度特異性，能特異性結(jié)合并催化pSer/Thr-Pro發(fā)生順反異構(gòu)，從而使底物蛋白的穩(wěn)定性和生理功能受影響［7］。Pin1作用于p56亞基的特定基序nThr-254-Pro，使其磷酸化，以阻斷核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）與其抑制劑的結(jié)合，進(jìn)而增強(qiáng)NF-κB的活性，促進(jìn)多種免疫分子如腫瘤壞死因子-α、環(huán)氧化酶-2、前列腺素的分泌，引起免疫反應(yīng)的發(fā)生［8-10］。Pin1還是白細(xì)胞介素1受體關(guān)聯(lián)激酶1（IRAK1）的調(diào)節(jié)器，在Toll樣受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及Ⅰ型干擾素介導(dǎo)的先天及后天免疫中發(fā)揮重要作用［11］。SLE外周血單個(gè)核細(xì)胞中的NF-κB、IRAK1明顯活化［12-14］。本研究發(fā)現(xiàn)，SLE外周血Pin1表達(dá)水平在SLE活動組明顯高于SLE穩(wěn)定組，SLE穩(wěn)定組明顯高于健康對照組，Pin1與SLEDAI評分呈正相關(guān)。且SLE初治組外周血Pin1表達(dá)水平明顯高于健康對照組，SLE初治組治療后3個(gè)月組的Pin1活性表達(dá)水平較入組時(shí)總體下降，表明SLE患者Pin1活性的過表達(dá)可能參與疾病的發(fā)生、發(fā)展過程，且可能參與多條通路、多種炎癥因子的互相作用。

輔助性T細(xì)胞17（Th17）是一種獨(dú)特的Th亞群，主要分泌IL-17。IL-17是一類有強(qiáng)致炎作用的炎性細(xì)胞因子，在人類中至少存在6個(gè)家族成員，均為IL-17的同源分子。IL-17在組織中可以誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生集落刺激因子、趨化因子等炎性細(xì)胞因子［15］，招募白細(xì)胞，從而建立獲得性免疫與先天性免疫之間的聯(lián)系。其參加了許多炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等［16］。多數(shù)研究認(rèn)為，IL-17水平在SLE患者外周血中明顯升高，且與SLEDAI評分呈顯著正相關(guān)［17-18］。全反式維甲酸（ATRA）作為Pin1新型特異性抑制劑，可以選擇性地靶向抑制Pin1并降解其活性。WEI等［19］研究表明，ATRA通過對Pin1的抑制顯著降低了SLE中Th17細(xì)胞的分化，且Pin1敲除也可以顯著降低SLE易發(fā)小鼠模型中血清IL-17水平。多項(xiàng)研究表明，IRAK1的表達(dá)與Th17/IL-17A呈正相關(guān)，IRAK1抑制減弱Th17分化，減少IL-17A的產(chǎn)生［14，20］。本研究結(jié)果也顯示，初診SLE經(jīng)過治療后，Pin1水平下降，且在SLE患者中，Pin1與IL-17呈正相關(guān)，與WEI等［19］報(bào)道一致，說明Pin1在參與SLE疾病的發(fā)生、發(fā)展中與IL-17有關(guān)。但抑制Pin1活性減少了IL-17的表達(dá)，是否與IRAK1通路相關(guān)，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

狼瘡性腎炎是SLE常見且嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，腎臟受累的比例約為50%［21］，是本病主要致殘致死的并發(fā)癥。通過藥物ATRA對Pin1的抑制或Pin1敲除可有效抑制B6.lpr小鼠腎小球中免疫球蛋白G、補(bǔ)體C3、IL-17和單核/巨噬細(xì)胞的沉積，從而減少腎小球腎炎，延長小鼠壽命［19］。本研究顯示有腎臟損害的SLE患者血清中Pin1明顯升高，Pin1可能在某種程度上參與狼瘡性腎炎的發(fā)生、發(fā)展。

SLE患者外周血Pin1過表達(dá)，可能通過多條通路參與SLE的發(fā)生、發(fā)展，其確切機(jī)制尚不明確。IL-17增高與Pin1呈正相關(guān)，經(jīng)過治療能顯著降低Pin1活性，減少IL-17細(xì)胞因子的表達(dá)。因此，抑制Pin1蛋白表達(dá)可能會延緩SLE的進(jìn)展，Pin1抑制劑可能成為SLE治療的新靶點(diǎn)之一。

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收稿日期：2023-06-12；修回日期：2023-07-23