混播比例及乳酸菌劑對(duì)燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 品質(zhì)及瘤胃降解特性的影響

張珈敏，關(guān)皓*，李海萍，賈志鋒，馬祥，劉文輝，陳有軍，陳仕勇，蔣永梅，4，甘麗，周青平，楊麗雪*

（1. 西南民族大學(xué)四川若爾蓋高寒濕地生態(tài)系統(tǒng)國(guó)家野外科學(xué)觀測(cè)研究站，四川 成都 610041；2. 青海省青藏高原優(yōu)良牧草種質(zhì)資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，青海 西寧 810016；3. 青海師范大學(xué)數(shù)學(xué)與統(tǒng)計(jì)學(xué)院，青海 西寧 810016；4. 四川文理學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，四川 達(dá)州635000）

青藏高原面積廣闊，在青藏高原發(fā)展草地畜牧業(yè)有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)，草地畜牧業(yè)是農(nóng)牧民增收的基礎(chǔ)產(chǎn)業(yè)和首選產(chǎn)業(yè)。但由于青藏高原海拔高，氣候寒冷，天然牧場(chǎng)的生長(zhǎng)季短、枯草期長(zhǎng)，加之牧區(qū)牲畜數(shù)量激增以及飼料供應(yīng)不足等因素，導(dǎo)致草畜矛盾日益突出。一年生禾豆混播既能高效合理地利用空間、水分及光照資源，增加飼草產(chǎn)量，又能營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)，增加粗蛋白含量和水溶性碳水化合物含量，降低粗纖維含量，從而提升飼草品質(zhì)［1］。因此，禾豆混播技術(shù)在高寒地區(qū)人工草地種植方面越來越受到重視。

燕麥（Avena sativa）是青藏高原理想的一年生栽培作物，也是重要的冬季飼草之一，有悠久的種植歷史［2］。燕麥的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，適口性好，可調(diào)制成干草和青貯飼料。相較于干草而言，青貯可最大限度地保留飼草的新鮮度，若得到妥善處理，則可延長(zhǎng)飼草的貯藏期并減少其營(yíng)養(yǎng)流失［3］。飼用豌豆（Pisum sativum）生長(zhǎng)迅速，其飼草產(chǎn)量和飼用價(jià)值都非常高，此外，它還具有很強(qiáng)的抗低溫能力、攀援性、固氮能力和適應(yīng)性［4］。盡管豆科牧草含有豐富的蛋白質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分，但由于其緩沖能高，水溶性碳水化合物含量低［5］，單獨(dú)青貯難以成功。由于禾本科作物含有豐富的水溶性碳水化合物，豆科牧草和禾本科作物混合青貯更易于獲得理想的優(yōu)質(zhì)青貯飼料［6］。

發(fā)酵全混合日糧（fermentation total mixed ration，F(xiàn)TMR）是在全混合日糧（total mixed ration，TMR）的基礎(chǔ)上采用裹包技術(shù)，打捆機(jī)壓實(shí)，通過塑料拉伸膜使其密封形成厭氧的環(huán)境，并進(jìn)行青貯發(fā)酵制作而成的日糧［7］。其營(yíng)養(yǎng)均衡，能充分利用當(dāng)?shù)剡m口性差、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值低的秸稈資源，降低飼料成本，提高飼料轉(zhuǎn)化率，耐儲(chǔ)存，商品化程度高，是促進(jìn)青藏高原地區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展的高效合理的飼草加工方式。以全株玉米（Zea mays）［8］、虉草（Phalaris arundinacea）［9］、燕麥［10］等飼草為主要原料的發(fā)酵TMR 相關(guān)研究已有很多，主要探討其發(fā)酵品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分、消化特性及添加劑使用情況，但研究多集中在熱帶和溫帶地區(qū)，對(duì)高寒地區(qū)發(fā)酵TMR 的研究報(bào)道較少。已有的關(guān)于青藏高原地區(qū)發(fā)酵TMR 的研究大多以玉米、苜蓿（Medicago sativa）、燕麥［11-12］為主要原料，未研究禾豆混播飼草在高寒地區(qū)發(fā)酵TMR 加工中的應(yīng)用，相關(guān)技術(shù)要點(diǎn)不明確。

因此，本研究將以燕麥和飼用豌豆為主要飼草料，擬探究乳酸菌劑處理及燕麥和飼用豌豆混播比例對(duì)發(fā)酵TMR 品質(zhì)的影響，使用體外產(chǎn)氣法探究其瘤胃降解特性，同時(shí)利用隸屬函數(shù)法和主成分分析法進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，篩選適宜的混播比例，為青藏高原發(fā)酵TMR 加工提供理論支持和技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試飼草為青海甜燕麥和青建一號(hào)飼用豌豆，于2021 年5 月在青海省海南藏族自治州貴南縣（100°45′ E，35°34′12″ N）混播種植，刈割時(shí)期為燕麥乳熟期和豌豆結(jié)莢期。

供試乳酸菌為混合乳酸菌劑，由植物乳桿菌160（Lactobacillus plantarum，CGMCCNo.23166，授權(quán)申請(qǐng)中）、短乳桿菌248（Lactobacillus brevis，CGMCCNo. 23167，專利號(hào)ZL202210204292.5）和戊糖乳桿菌260（Lactobacillus pentosus，CGMCCNo.23168，專利號(hào)ZL202210204293.X）以1∶1∶1 混合而成（供試菌株由課題組前期篩選）。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)將燕麥和飼用豌豆進(jìn)行混播種植，混播比例為（燕麥∶飼用豌豆）0∶10，5∶5，6∶4，7∶3，8∶2，10∶0，刈割后調(diào)制袋裝發(fā)酵TMR，共設(shè)計(jì)12 個(gè)處理，其中6 個(gè)不接種乳酸菌，按照6 個(gè)不同混播比例分別為C1、C2、C3、C4、C5、C6；另外6 個(gè)處理在各比例基礎(chǔ)上均勻加入混合乳酸菌（植物乳桿菌160∶短乳桿菌248∶戊糖乳桿菌260，比例為1∶1∶1，菌活：106cfu·mL-1左右），即分別為I1、I2、I3、I4、I5、I6（表1）。所有處理按照飼草和農(nóng)副7∶3 的比例加入農(nóng)副產(chǎn)品［青稞（Hordeum vulgare）秸稈∶油菜（Brassica napus）秸稈∶油菜粕=1∶1∶1］。每個(gè)處理設(shè)置3 個(gè)重復(fù)。

表1 樣品原料組成情況Table 1 Composition of raw materials （dry matter basis， %）

1.3 發(fā)酵TMR 的制作

將收獲后的燕麥和飼用豌豆混合飼草切短至1～2 cm，按飼草和農(nóng)副7∶3 的比例混勻，然后均勻噴灑混合乳酸菌，以每1 kg 原料噴灑30 mL 菌液（菌活：106cfu·mL-1左右）為標(biāo)準(zhǔn)添加，對(duì)照添加等量的滅菌蒸餾水。充分混合均勻后裝入無菌青貯袋（26 cm×35 cm）中，每袋約500 g，通過真空包裝機(jī)（DZQ-390，中國(guó)福建安盛科）抽真空。置于室溫（20±5） ℃存放，60 d 后開袋取樣分析。

1.4 營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定

將樣品放置烘箱中65 ℃烘干至恒重后測(cè)定干物質(zhì)（dry matter，DM），粉碎后過1 mm 篩以測(cè)定其他營(yíng)養(yǎng)成分。采用KjeltecTM8400 型全自動(dòng)凱氏定氮儀（丹麥）測(cè)定其粗蛋白（crude protein，CP）含量；采用索氏提取法測(cè)定粗脂肪（ether extract，EE）含量；采用高溫灼燒法［13］測(cè)定粗灰分（ash）含量。采用Van Soest 等［14］的方法測(cè)定中性洗滌纖維（neutral detergent fiber，NDF）和酸性洗滌纖維（acid detergent fiber，ADF）含量；采用蒽酮-硫酸比色法，利用試劑盒（蘇州科銘生物技術(shù)有限公司）測(cè)定水溶性碳水化合物（water soluble carbohydrate，WSC）含量；采用試劑盒（蘇州科銘生物技術(shù)有限公司）測(cè)定淀粉（starch）含量。

1.5 發(fā)酵品質(zhì)的測(cè)定

取20 g 樣品，加入180 mL 蒸餾水，封口放于4 ℃冰箱中24 h，用pH 計(jì)（雷磁，PHS-3C，上海儀電分析儀器有限公司，中國(guó)上海）測(cè)定青貯浸提液的pH 值。處理后的浸提液用4 層紗布過濾，置于-20 ℃冰箱中保存，用于氨態(tài)氮和有機(jī)酸含量的測(cè)定。氨態(tài)氮（ammonium nitrogen， NH3-N）的濃度使用苯酚-次氯酸鈉比色法進(jìn)行測(cè)定［15］；使用高效液相色譜法分析青貯浸提液中乳酸（lactic acid，LA）、乙酸（acetic acid，AA）、丙酸（propionic acid，PA）、丁酸（butyric acid，BA）含量，色譜條件為：RSpak KC-811 色譜柱，流動(dòng)相0.1% H3PO4，流速0.5 mL·min-1，柱溫55 ℃［16］。

1.6 瘤胃降解特性的測(cè)定

使用體外產(chǎn)氣法測(cè)定瘤胃降解特性［17］，緩沖液的配置參照Menci 等［18］的方法，混合均勻并進(jìn)行39 ℃恒溫水浴，期間不斷地充入CO2，直至緩沖液接近無色為止。瘤胃液來源于青白江屠宰場(chǎng)，選取6 頭體重相近的放牧牦牛，將采集的瘤胃液等量過濾到已經(jīng)預(yù)熱好的保溫桶里，迅速帶回實(shí)驗(yàn)室-20 ℃冷凍保存。將瘤胃液解凍后用4層紗布過濾，與事先配制好的人工瘤胃緩沖液以1∶2 的體積比混合均勻，期間不斷地通入CO2，保證其處于厭氧環(huán)境。準(zhǔn)確稱量1 g 樣品放入100 mL 注射器中，再取50 mL 混合瘤胃液加入注射器中，密封后置于39 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)過程中分別于2、4、8、12、24、36、48、72 h 時(shí)，取出注射器快速記錄產(chǎn)氣量（gas production，GP），每個(gè)處理設(shè)置8 個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)72 h 后用0.06 mm 的尼龍布過濾殘?jiān)?，殘?jiān)娓珊笥糜跍y(cè)定干物質(zhì)降解率（dry matter degradation rate，DMD）、中性洗滌纖維降解率（neutral detergent fiber degradation rate，NDFD）、酸性洗滌纖維降解率（acid detergent fiber degradation rate，ADFD）和粗蛋白降解率（crude protein degradation rate，CPD），濾液用于測(cè)定瘤胃pH 和瘤胃氨態(tài)氮含量［19］。

1.7 數(shù)據(jù)處理

使用EXCEL 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，使用SPSS 26.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行雙因素方差分析，結(jié)合鄧肯法（Duncan’s）進(jìn)行處理間多重比較，其中P＜0.01 表示差異極顯著，P＜0.05 表示差異顯著。使用SPSS 26.0 對(duì)測(cè)量指標(biāo)進(jìn)行主成分降維分析，簡(jiǎn)化數(shù)據(jù)量，計(jì)算出各處理綜合得分后按分值大小進(jìn)行排序。

各處理發(fā)酵TMR 瘤胃降解率計(jì)算方法如下［20］：

式中：Dr為待測(cè)樣品某成分的瘤胃降解率（%），NA為待測(cè)樣品某成分含量（g），NB為過瘤胃殘留物中某成分含量（g）。

以各處理發(fā)酵TMR 的DM、WSC、CP、Starch、EE、LA、DMD、NDFD、ADFD、CPD、瘤胃NH3-N 為正向指標(biāo)，Ash、干物質(zhì)損失（dry matter loss， DM loss）、NDF、ADF、pH、AA、NH3-N、GP、瘤胃pH 為負(fù)向指標(biāo)得出各指標(biāo)的隸屬度。計(jì)算方法如下［21］：

式中：Mx正為各處理中某一正向指標(biāo)的隸屬度，V為該指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，Vmin為各處理中該指標(biāo)的最小值，Vmax為各處理中該指標(biāo)的最大值，Mx負(fù)為某一負(fù)向指標(biāo)的隸屬度。

2 結(jié)果與分析

2.1 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 的營(yíng)養(yǎng)成分及發(fā)酵品質(zhì)

未添加乳酸菌處理下，C3的干物質(zhì)含量顯著高于其他比例（P＜0.05）；添加乳酸菌處理下，I3和I6的干物質(zhì)含量顯著高于其他比例（P＜0.05），乳酸菌添加劑和混播比例對(duì)干物質(zhì)含量有極顯著影響（P＜0.01，表2）。接種混合乳酸菌極顯著降低了發(fā)酵TMR 的干物質(zhì)損失（P＜0.05），其中I3和I4的干物質(zhì)損失顯著低于除I5外的其他處理（P＜0.05）；所有處理組中，C2的干物質(zhì)損失最高。乳酸菌添加劑和混播比例的交互作用對(duì)粗灰分含量有極顯著影響（P＜0.01），未添加乳酸菌處理下，C3的粗灰分含量顯著低于其他比例（P＜0.05）。乳酸菌添加劑和混播比例均對(duì)粗蛋白含量有極顯著影響（P＜0.01），未添加乳酸菌處理下，C1的粗蛋白含量顯著高于其他比例（P＜0.05）；添加乳酸菌處理下，I6的粗蛋白含量顯著低于其他比例（P＜0.05）。無論是否添加乳酸菌，燕麥和飼用豌豆混播比例為5∶5 的發(fā)酵TMR 中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量最低。未添加乳酸菌處理下，C3的淀粉含量顯著高于其他比例（P＜0.05）。未添加乳酸菌處理下，C5的WSC 含量顯著低于其他比例；添加乳酸菌處理下，I3的WSC 含量顯著低于其他比例（P＜0.05）。添加乳酸菌處理下，I1的粗脂肪含量顯著低于其他比例（P＜0.05）。

表2 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 營(yíng)養(yǎng)成分Table 2 Nutritional ingredient of oat-feed pea fermentation TMR （%）

乳酸菌添加劑和混播比例的交互作用對(duì)pH 有極顯著的影響（P＜0.01），無論是否添加乳酸菌，燕麥和飼用豌豆混播比例為0∶10 的發(fā)酵TMR 的pH 均顯著高于同處理其他比例（P＜0.05）。混播比例對(duì)乳酸含量有極顯著影響（P＜0.01），添加乳酸菌處理下，I5的乳酸含量顯著高于其他比例（P＜0.05）。未添加乳酸菌處理下，C4的乙酸含量顯著高于其他比例；添加乳酸菌處理下，I5的乙酸含量顯著高于其他比例（P＜0.05）。接種混合乳酸菌顯著降低了發(fā)酵TMR 的NH3-N/TN（P＜0.05），未添加乳酸菌處理下，C1的NH3-N/TN 顯著高于其他比例（P＜0.05），各處理均未檢測(cè)到丙酸和丁酸（表3）。

表3 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 發(fā)酵品質(zhì)Table 3 Fermentation quality of oat-feed pea fermentation TMR（%）

2.2 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 的瘤胃降解特性

隨發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，各組產(chǎn)氣量增加（圖1）。C1和I1的總產(chǎn)氣量最高。所有處理在2～36 h 期間產(chǎn)氣量迅速上升，在36 h 后產(chǎn)氣量上升趨勢(shì)緩慢。

圖1 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 各時(shí)間段產(chǎn)氣量Fig.1 Gas production of oat-feed pea fermentation TMR at different time periods

由表4 可知，乳酸菌添加劑和混播比例的交互作用對(duì)燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 體外降解率有顯著影響（P＜0.05）。所有處理組中，I2的CPD、NDFD、ADFD 和DMD 均最高。無論是否添加乳酸菌，燕麥和飼用豌豆混播比例為0∶10 和10∶0 的發(fā)酵TMR 的CPD 均顯著低于同處理其他比例（P＜0.05）。未添加乳酸菌處理下，C1的NDFD 和ADFD 顯著低于其他比例（P＜0.05）。未添加乳酸菌處理下，C6的DMD 顯著低于其他比例（P＜0.05）；添加乳酸菌處理下，I4和I5的DMD 顯著低于其他比例（P＜0.05）。

表4 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 體外降解率Table 4 In vitro degradation of oat-feed pea fermentation TMR （%）

所有處理組中，I5的瘤胃氨態(tài)氮含量最低，I3的瘤胃氨態(tài)氮含量最高。未添加乳酸菌處理下，C1的瘤胃pH 顯著低于其他比例（P＜0.05）；所有處理組中，I5的瘤胃pH 最高（表5）。

表5 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 體外發(fā)酵參數(shù)Table 5 In vitro fermentation parameters of oat-feed pea fermentation TMR

2.3 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 品質(zhì)綜合價(jià)值評(píng)定及排序

將上述數(shù)據(jù)經(jīng)隸屬函數(shù)法轉(zhuǎn)化后進(jìn)行主成分分析（表6），根據(jù)初始特征值≥1 的原則提取了5 個(gè)主成分，第1主成分的初始特征值為7.860，第2 主成分的初始特征值為6.098，第3 主成分的初始特征值為1.650，第4 主成分的初始特征值為1.427，第5 主成分的初始特征值為1.148。特征向量Z1、Z2、Z3、Z4、Z5（表6）即每個(gè)主成分中每個(gè)指標(biāo)對(duì)應(yīng)的系數(shù)，是由主成分載荷矩陣中的數(shù)據(jù)除以主成分相對(duì)的特征值開平方根得到。從表6 可以得到5 個(gè)主成分與各項(xiàng)指標(biāo)的線性組合，根據(jù)線性組合可算出第1、2、3、4、5 主成分得分F1、F2、F3、F4、F5（表7）。

表6 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 主成分特征向量、特征值、方差百分比及累積百分比Table 6 Principal component eigenvector， eigenvalue， variance percentage and cumulative percentage of oat-feed pea fermentation TMR

表7 燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 主成分綜合分值Table 7 Principal component composite score of oat-feed pea fermentation TMR

以主成分方差百分比為權(quán)重，通過公式：C=0.39298×F1+0.30491×F2+0.08248×F3+0.07133×F4+0.05741×F5，計(jì)算出燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 品質(zhì)的綜合價(jià)值（表7）。通常認(rèn)為，綜合分值越高，綜合品質(zhì)越好。燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 的品質(zhì)由高到低依次為：I2＞I3＞C3＞I6＞C4＞C5＞I4＞I5＞C2＞I1＞C6＞C1。

3 討論

3.1 乳酸菌和不同混播比例對(duì)燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 營(yíng)養(yǎng)成分及發(fā)酵品質(zhì)的影響

含水量在青貯發(fā)酵過程中起到重要作用，研究表明，在高海拔高寒地區(qū)，含水量在50%～60%時(shí)才能獲得理想的青貯效果［22］。剛收獲時(shí)原料含水量較高，因此本試驗(yàn)添加了青稞秸稈、油菜秸稈和油菜粕3 種農(nóng)副產(chǎn)品以控制含水量，同時(shí)提高資源利用率。發(fā)酵60 d 后，添加混合乳酸菌的各組DM 含量高于對(duì)照組，且添加混合乳酸菌有效地降低了發(fā)酵TMR 在青貯過程中的干物質(zhì)損失，這說明混合乳酸菌對(duì)有害微生物消耗發(fā)酵TMR 中營(yíng)養(yǎng)成分有抑制作用，較大程度地保留了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)一步改善了青貯品質(zhì)。粗灰分含量能反映飼料受污染的程度，其含量與青貯飼料有機(jī)質(zhì)成反比，粗灰分越低，飼料質(zhì)量也就越高［23］。C1的粗灰分含量較高，可能是在原料收割過程中混入了較多雜質(zhì)。隨燕麥比例的增加，CP 含量降低，而NDF 和ADF 大體呈增加趨勢(shì)，這與李蕾蕾等［22］的研究結(jié)果相符。NDF 和ADF 是衡量動(dòng)物飼料粗精比平衡的重要標(biāo)志，它們通過影響反芻動(dòng)物的咀嚼時(shí)間和唾液分泌量等，間接影響動(dòng)物的消化率，對(duì)家畜的生長(zhǎng)和發(fā)育具有至關(guān)重要的作用，特別是ADF，其含量越高，消化率越低［24］。研究表明，添加混合乳酸菌劑可以顯著提高發(fā)酵TMR 的粗蛋白含量，降低NDF 和ADF 含量［25］。本研究結(jié)果與之有分歧，可能是不同研究選擇的乳酸菌添加劑種類、原料來源、氣候條件等因素導(dǎo)致青貯效果不同，因此在青貯制作之前，需要根據(jù)添加劑屬性、環(huán)境等多方面因素進(jìn)行篩選，以確定適宜的添加量和種類。青貯后全部處理組的WSC 含量較低的原因可能是WSC 被添加的混合乳酸菌作為營(yíng)養(yǎng)碳源大量利用［26］。添加劑處理組中，I3的WSC 含量顯著低于其他比例的原因可能是大量WSC 被作為乳酸菌的發(fā)酵底物。

Catchpoole 等［27］報(bào)道的優(yōu)質(zhì)青貯飼料pH 值應(yīng)不高于4.2，LA 含量為3%～13% DM，NH3-N/TN 小于10%TN，BA 含量小于0.2% DM。發(fā)酵過程中，乳酸菌大量且快速地繁殖產(chǎn)生LA，隨LA 含量的上升，pH 降低［28］。經(jīng)過60 d 的發(fā)酵，除C1和I1外，各處理pH 值均在4.2 以下，由于C1和I1的LA 含量較低，因此pH 值偏高。這可能是由于C1和I1的主要原料為飼用豌豆，緩沖能值高，影響了發(fā)酵［5］。C3的pH 較高，但添加乳酸菌后，LA 含量提高到較高水平，pH 降低。除I1和I2外，其他處理LA 含量都大于AA，說明本研究發(fā)酵TMR 可能以同型發(fā)酵為主。I1和I2中AA 含量較高，可能是在發(fā)酵過程中，短乳桿菌異型發(fā)酵占據(jù)主導(dǎo)地位，產(chǎn)生大量AA［29］。許多研究表明，AA 能抑制真菌生長(zhǎng)，從而提高青貯有氧穩(wěn)定性［30-31］。雖然本試驗(yàn)各處理組的LA 含量偏低，但由于含有豐富的AA，有利于后續(xù)保存。NH3-N/TN 也是評(píng)價(jià)青貯發(fā)酵品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。NH3-N 含量反映了青貯飼料的蛋白及氨基酸被降解的程度，其值越大，蛋白降解程度越高，且NH3-N 含量過高還會(huì)影響動(dòng)物采食量［32］。本研究對(duì)照組的6 個(gè)處理中，隨著燕麥比例升高，飼用豌豆比例降低，NH3-N/TN 顯著降低，這與劉溫等［23］的研究結(jié)果一致。添加混合乳酸菌顯著降低了NH3-N/TN，說明乳酸菌能明顯抑制發(fā)酵TMR 中蛋白質(zhì)的降解，有效保存營(yíng)養(yǎng)成分［33］。本試驗(yàn)中，除了C1外，NH3-N/TN 均低于10%，符合優(yōu)質(zhì)青貯飼料要求。

本試驗(yàn)中，C3和I3（燕麥∶飼用豌豆=6∶4）的CP 含量相對(duì)較高，而且經(jīng)過乳酸菌處理后，I3的WSC 含量降低，說明其經(jīng)過了充分發(fā)酵。綜合營(yíng)養(yǎng)成分和發(fā)酵品質(zhì)，燕麥和飼用豌豆混播比例為6∶4 時(shí)，制作的發(fā)酵TMR 較其他比例更優(yōu)，添加乳酸菌劑能促進(jìn)發(fā)酵，獲得更優(yōu)質(zhì)的青貯飼料。

3.2 乳酸菌和不同混播比例對(duì)燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 瘤胃降解特性的影響

本試驗(yàn)中乳酸菌處理對(duì)燕麥-飼用豌豆發(fā)酵TMR 瘤胃降解特性沒有顯著影響，但不同混播比例在瘤胃降解特性上有不同的表現(xiàn)。本試驗(yàn)中，各處理組的產(chǎn)氣量隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，理論產(chǎn)氣最大值與CP 含量呈正相關(guān)，與NDF 含量呈負(fù)相關(guān)，這與游茵潔等［34］的研究結(jié)果一致。本研究中C1的CP 含量最高，NDF 含量較低，這可能是C1產(chǎn)氣量最大的原因。而I5的產(chǎn)氣量最低，其CP 含量也較低，NDF 含量高。

瘤胃降解率是評(píng)價(jià)反芻動(dòng)物對(duì)飼料消化特性的重要指標(biāo)，通過測(cè)定瘤胃中不同組分在整個(gè)消化周期內(nèi)的變化情況可以有效地監(jiān)測(cè)反芻家畜營(yíng)養(yǎng)代謝過程及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用狀況。DMD 是影響反芻動(dòng)物干物質(zhì)采食量的重要因素，NDFD 和ADFD 是用于衡量結(jié)構(gòu)性碳水化合物分解程度的關(guān)鍵指標(biāo)，其與飼料纖維組成以及瘤胃微生物種類密切相關(guān)［35］。本研究中不同混播比例發(fā)酵TMR 的DMD 和NDFD、ADFD、CPD 大體上高于單一燕麥組和單一飼用豌豆組，說明燕麥和飼用豌豆在發(fā)酵TMR 制作中具有組合效應(yīng)。I2的DMD、NDFD、ADFD 顯著高于其他處理組，這可能是由于乳酸菌可以破壞植物細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，促進(jìn)了營(yíng)養(yǎng)成分的降解［36-37］。此外，飼料的CPD取決于蛋白質(zhì)組分的溶解度［38］，本試驗(yàn)中添加不同比例燕麥和飼用豌豆組合，瘤胃CPD 得到了顯著提高，其中I2的CPD 顯著高于其他處理組，這表明兩種飼草原料組合的營(yíng)養(yǎng)成分比例得到了合理均衡，從而彌補(bǔ)了單一飼草來源碳氮不平衡的缺陷，同時(shí)也提高了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的降解率［39］。因此，對(duì)于動(dòng)物的健康和飼料資源的開發(fā)利用而言，研究發(fā)酵TMR 的配比是至關(guān)重要的。

瘤胃NH3-N 是反映瘤胃氮代謝和飼料蛋白質(zhì)利用程度的重要指標(biāo)，也是合成微生物蛋白的前體物質(zhì)，其值越高，CP 降解程度越大［32］。靳玲品［40］對(duì)全株玉米青貯、玉米秸青貯、玉米秸、羊草（Leymus chinensis）、小麥（Triticum aestivum）秸和苜蓿等幾種粗飼料進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明體外發(fā)酵24 h 時(shí)NH3-N 濃度為22.36～34.72 mg·dL-1。本研究各處理瘤胃NH3-N 濃度為26.07～31.68 mg·dL-1，均在正常范圍內(nèi)。其中I3瘤胃NH3-N 濃度最高，說明其微生物蛋白產(chǎn)量高，可降解的蛋白質(zhì)含量高。瘤胃液pH 是反映瘤胃環(huán)境穩(wěn)態(tài)情況和發(fā)酵特征的重要指標(biāo)，可綜合反映微生物、代謝產(chǎn)物和有機(jī)酸產(chǎn)生、吸收及排出的狀況［34，41］。研究表明，瘤胃液pH 的適宜范圍為5.5～7.5［42］。本研究各組瘤胃液pH 均在正常范圍內(nèi)，說明乳酸菌處理及不同混播比例發(fā)酵TMR 對(duì)瘤胃內(nèi)環(huán)境無不良影響。

因此，綜合瘤胃降解特性各項(xiàng)指標(biāo)，在各處理組中，I2的瘤胃降解率最高，說明當(dāng)燕麥和飼用豌豆混播比例為5∶5 時(shí)制作的發(fā)酵TMR，在添加乳酸菌處理后有利于瘤胃微生物的繁殖，促進(jìn)瘤胃營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

本試驗(yàn)中，將12 個(gè)處理組測(cè)定的20 個(gè)質(zhì)量指標(biāo)通過隸屬函數(shù)法和主成分分析綜合為5 個(gè)獨(dú)立因子，其反映了90.911%的原始變量信息，能夠比較全面地對(duì)原有指標(biāo)進(jìn)行歸納。根據(jù)主成分得分和累積方差百分比可以算出不同處理品質(zhì)的綜合得分。結(jié)果表明，I2組發(fā)酵TMR 品質(zhì)最好，其綜合分值達(dá)到了0.868，其次是I3和C3，其綜合分值為0.610 和0.469。結(jié)合生產(chǎn)來看，在高寒地區(qū)將燕麥-飼用豌豆以6∶4 和5∶5 的比例混播，飼草產(chǎn)量和品質(zhì)均較優(yōu)［43-44］，是高寒牧區(qū)常見的混播草地建植模式。

4 結(jié)論

與單一燕麥或豌豆作為主要原料的發(fā)酵TMR 相比，燕麥與飼用豌豆混合飼草作為主要原料，提高了發(fā)酵TMR 品質(zhì)，因此在實(shí)際生產(chǎn)中，適當(dāng)?shù)难帑満惋曈猛愣够觳ケ壤軌蛱岣甙l(fā)酵TMR 營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)并且促進(jìn)瘤胃降解；添加適宜乳酸菌劑能夠提高發(fā)酵TMR 青貯發(fā)酵品質(zhì)，更好地保存營(yíng)養(yǎng)成分。隸屬函數(shù)法和主成分分析結(jié)果表明，當(dāng)燕麥和飼用豌豆混播比例為5∶5 或6∶4 時(shí)，發(fā)酵TMR 飼料營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)及瘤胃降解率較優(yōu)，但當(dāng)燕麥和飼用豌豆混播比例為5∶5 時(shí)，添加乳酸菌劑才能保證發(fā)酵TMR 飼料穩(wěn)定發(fā)酵。