酶標(biāo)儀在艾滋病血液檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值體會(huì)

張劍萍

艾滋病(acquired immune deficiency syndrome, AIDS)也被稱為獲得性免疫缺陷綜合征, 是指因機(jī)體在被人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染后而導(dǎo)致的一種全身性疾病［1］。AIDS 的傳播途徑包括母嬰傳播、血液傳播、性傳播, 此類患者的傷口滲出液、陰道分泌物、血液、乳汁、精液等存在較多的HIV, 同時(shí)傳染性非常強(qiáng)［2］。AIDS 存在非常強(qiáng)的隱匿性, 在發(fā)病前并沒(méi)有任何癥狀, 存在長(zhǎng)達(dá)10 年的潛伏期, 同時(shí)由于病毒會(huì)慢慢的破壞人體免疫系統(tǒng), 發(fā)病后疾病會(huì)快速發(fā)展, 可累及其他器官系統(tǒng), 使患者生命受到威脅［3］。發(fā)病后患者以肝脾腫大、持續(xù)性發(fā)熱、皮膚感染、呼吸困難、黏膜感染等為常見(jiàn)癥狀。所以,此病早期檢驗(yàn)并及時(shí)治療可有效控制病情發(fā)展。截至目前, 醫(yī)學(xué)領(lǐng)域并沒(méi)有找到一種有效治愈AIDS 的藥物和方法, 全球并沒(méi)有預(yù)防HIV 的疫苗, 所以, 醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)IDS 檢驗(yàn)作為重點(diǎn)內(nèi)容, 并利用檢驗(yàn)結(jié)果積極控制疾病的傳染、進(jìn)展［4］。AIDS 檢驗(yàn)的方法有很多, 如病毒培養(yǎng)、病毒抗體檢測(cè)、血液分析儀等, 檢驗(yàn)方法不同,其回收率、速度、精準(zhǔn)度等存在一定差異［5］。有研究指出［6］, 酶標(biāo)儀在AIDS 患者血液檢驗(yàn)中價(jià)值較高, 其存在檢測(cè)精準(zhǔn)、簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn), 同時(shí)患者認(rèn)可度較高。所以, 本研究分析AIDS 患者利用酶標(biāo)儀在艾滋病血液檢驗(yàn)中的價(jià)值, 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取疾病預(yù)防控制中心2020 年1 月～2022 年1 月確診為AIDS 的60 例患者納入研究, 其中男35 例, 女25 例；年齡21～56 歲, 平均年齡(29.66±8.78)歲。本研究經(jīng)過(guò)倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合AIDS 診斷標(biāo)準(zhǔn), 病毒抗體陽(yáng)性, 同時(shí)合并卡氏肺囊蟲肺炎或近期持續(xù)發(fā)熱體溫≥38℃；患者和家屬對(duì)本次研究?jī)?nèi)容知情,同時(shí)簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者依從性差；精神疾病者；伴有嚴(yán)重的心血管疾病者；妊娠期、哺乳期患者。

1.3 方法

1.3.1 血液分析儀檢驗(yàn) 將檢測(cè)試紙裝入塑料卡座內(nèi), 利用雙抗原夾心法檢測(cè), 小圓孔(s 區(qū))是加樣孔,需要將受檢者的血液滴入此孔中后再實(shí)施檢測(cè), 結(jié)果可以在窄長(zhǎng)凹形凹陷區(qū)查看, 其中, T 為檢測(cè)線的位置,C 為對(duì)照線的位置。采血時(shí)所用物品為采血針、酒精、棉球, 均按照無(wú)菌要求操作, 在指尖或耳垂處采血, 酒精棉球?qū)Σ裳幭? 直接將血液滴在加樣孔中, 或者利用無(wú)菌吸管吸取血液, 再滴入加樣孔中實(shí)施檢驗(yàn)。10～15 min 后, 觀察試紙結(jié)果, 試紙上只出現(xiàn)一條紅線(對(duì)照線C)為陰性結(jié)果；試紙上出現(xiàn)兩條紅線(對(duì)照線C 和檢測(cè)線T)為陽(yáng)性結(jié)果；試紙上未出現(xiàn)紅線, 表示測(cè)試實(shí)驗(yàn)失敗, 請(qǐng)另取卡重新檢測(cè)。

1.3.2 酶標(biāo)儀檢驗(yàn) ①配液：使用去離子水或蒸餾水按照1∶20 比例稀釋濃縮洗滌液；②編號(hào)：樣品對(duì)應(yīng)微孔板按照順序編號(hào), 并設(shè)陰性對(duì)照組3 孔, 空白對(duì)照1 孔, 1 型、2 型、抗原陽(yáng)性對(duì)照各1 孔；③加生物素試劑：將20 μl 生物素試劑置入孔中, 空白孔不加入；④加樣：將待檢測(cè)樣本加入相應(yīng)的孔中, 震蕩搖勻；⑤溫育：使用封板膜進(jìn)行封板, 溫育溫度設(shè)置36～38℃, 時(shí)間29～31 min；⑥洗板：封板膜完全揭掉后, 用洗板機(jī)清洗5 遍, 扣干；⑦加酶：將100 μl 酶標(biāo)試劑置入孔中, 空白孔不加入, 后再進(jìn)行一次溫育、洗板步驟；⑧顯色：將50 μl 顯色劑A、500 μl 顯色劑B 加入孔中,震蕩搖勻后, 在溫度36～38℃溫度中避光顯色, 時(shí)間為29～31 min；⑨測(cè)定：將50 μl 終止液加入, 震蕩搖勻后,10 min 內(nèi)測(cè)定結(jié)果。酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)定為450 nm, 在空白孔調(diào)零后對(duì)A 值進(jìn)行測(cè)定。

1.4 觀察指標(biāo) 對(duì)比兩種檢驗(yàn)方法精密度, 分析線性范圍；對(duì)比兩種檢驗(yàn)方法標(biāo)本回收率, 分析穩(wěn)定性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢驗(yàn)方法精密度對(duì)比 對(duì)3 份血清進(jìn)行批間、批內(nèi)20 次的重復(fù)檢測(cè), 酶標(biāo)儀檢驗(yàn)的批內(nèi)精密度、批間精密度均明顯高于血液分析儀, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩種檢驗(yàn)方法精密度對(duì)比(%)

2.2 線性范圍 AIDS 血清的線性范圍臨界值是160 kU, 在AIDS 活性達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)后, 可利用等滲鹽水對(duì)其進(jìn)行稀釋, 同時(shí)將檢測(cè)工作完成。

2.3 兩種檢驗(yàn)方法標(biāo)本回收率對(duì)比 酶標(biāo)儀檢驗(yàn)的標(biāo)本平均回收率是98.2%, 高于血液分析儀的94.4%, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩種檢驗(yàn)方法標(biāo)本回收率對(duì)比(%)

2.4 穩(wěn)定性 在一份AIDS 血液標(biāo)本添加NaOH, 濃度為0.4 mmol/L, 在顯色后的不同時(shí)間實(shí)施比色, 結(jié)果指出, 10～90 min 顯色比較穩(wěn)定, 顯色10 min 后比色情況良好。

3 討論

HIV 感染患者從感染開(kāi)始直到10 年左右, 其可以沒(méi)有任何臨床癥狀, 只能經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)血液才可以確診, 進(jìn)而了解到患者是否出現(xiàn)HIV 抗體或病毒［7］。機(jī)體在被疾病威脅時(shí)會(huì)產(chǎn)生一種蛋白質(zhì), 即為抗體, 患者機(jī)體在被HIV 病毒感染后, 就會(huì)產(chǎn)生一種對(duì)此種病毒對(duì)抗的抗體［8］。調(diào)查指出［9］, 酶標(biāo)儀是一種普遍應(yīng)用在HIV病毒檢驗(yàn)中的方法。

酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀, 利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)血液檢驗(yàn)的一種儀器, 此種儀器以比色計(jì)為核心工作原理, 可通過(guò)比色法對(duì)抗體或者抗原的含量分析［10］。酶聯(lián)免疫吸附法指的是一種標(biāo)記技術(shù), 其基礎(chǔ)原理則是同位素免疫技術(shù)、熒光抗體技術(shù), 進(jìn)而實(shí)現(xiàn)高敏感性和高特異性檢測(cè)方法, 快速達(dá)到自動(dòng)化的檢驗(yàn)方式［11］。此種檢驗(yàn)方法的原理是讓抗體結(jié)合酶膠聯(lián)劑, 變?yōu)槊笜?biāo)抗體, 此酶標(biāo)抗體會(huì)同固定載體上的抗體出現(xiàn)特異反應(yīng), 經(jīng)過(guò)結(jié)合后會(huì)變成免疫復(fù)合物, 但是一直存在不同程度的活性, 將底物加入后, 酶會(huì)對(duì)其產(chǎn)生催化作用, 進(jìn)而進(jìn)行反應(yīng), 出現(xiàn)不同的顏色, 抗體的含量隨著顏色的加深而增加。此種檢驗(yàn)法以高效的酶催化劑、抗原-抗體反應(yīng)為基礎(chǔ), 所以存在的靈敏性比較特殊, 該種方式屬于免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)中存在較強(qiáng)生命力的一種［12］。酶標(biāo)儀檢驗(yàn)工作原理：主要結(jié)構(gòu)同光電比色相同, 經(jīng)濾光片處理光源燈所發(fā)出的光波后會(huì)變成一束單色光, 隨后進(jìn)入微孔極中, 可對(duì)標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)［13-16］。部分標(biāo)本會(huì)將單色光吸收, 剩余的部分單色光會(huì)穿透標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上, 后轉(zhuǎn)換待檢測(cè)標(biāo)本光信號(hào)為對(duì)應(yīng)的電信號(hào), 通過(guò)信號(hào)處理, 如模數(shù)轉(zhuǎn)換等輸送到微處理其中, 處理并將結(jié)果計(jì)算出來(lái), 后實(shí)施打印。此外, 利于電路控制微處理器, 機(jī)械式驅(qū)動(dòng), 按照X 軸方向、Y 軸方向移動(dòng)微孔板, 實(shí)施自動(dòng)進(jìn)樣本檢測(cè)。

本研究根據(jù)酶標(biāo)儀相應(yīng)的儀器軟件以及嚴(yán)密的比色系統(tǒng), 簡(jiǎn)單配置了對(duì)應(yīng)的附件, 同時(shí)根據(jù)全國(guó)臨床檢驗(yàn)的有關(guān)檢驗(yàn)項(xiàng)目程序、操作標(biāo)準(zhǔn), 完成采血、檢測(cè)、結(jié)果打印、超微量化學(xué)檢驗(yàn)。在本研究中, 為了進(jìn)行更加針對(duì)性的血液檢測(cè)儀器測(cè)定, 試驗(yàn)中的病例為AIDS, 對(duì)3 份血清實(shí)施了批內(nèi)和批間的20 次重復(fù)檢測(cè), 酶標(biāo)儀檢驗(yàn)的批內(nèi)精密度、批間精密度均明顯高于血液分析儀, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。并且本研究中的其他研究結(jié)果也證實(shí)酶標(biāo)儀效果良好。

總之, 通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定AIDS 患者的血液存在快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì), 效果理想, 成本低, 時(shí)間短, 值得推廣。