男科門診患者人乳頭瘤病毒感染基因型分析

劉艷，沈倩云，程文國

揚州大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院 揚州市婦幼保健院檢驗科，江蘇揚州 225001

人乳頭瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）是隸屬于乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬的一組無包膜環(huán)狀雙鏈DNA病毒，有極強的嗜上皮細胞屬性，可引起人類皮膚及黏膜組織的病變，目前已鑒定出 200多種亞型，40余種與生殖道感染有關。HPV感染不但可引起生殖器疣，還可能引起女性宮頸癌和外陰癌、男性陰莖癌及男女性肛門癌和口咽癌等[1-5]。近年來，隨著女性HPV感染情況的研究和宮頸癌防治工作的深入，男性HPV感染情況也逐漸引起研究者的重視[5-7]。男性HPV感染大多數(shù)為隱性感染或亞臨床感染，容易被忽略，且男性感染HPV后可通過性接觸傳染給性伴侶，從而增加性伴侶被感染的風險[6-9]，因此對男性進行HPV篩查顯得尤為重要。本研究回顧性分析258例男科門診患者37種HPV基因分型檢測結果，為男性HPV感染的干預和治療提供科學依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2018年7月至2022年12月就診于揚州市婦幼保健院男科門診的258例男性患者的外生殖器脫落細胞樣本，年齡20～67歲，平均（33.99±9.26）歲。收集同期就診的1436例女性體檢者及931例宮頸疑似HPV感染的婦科患者宮頸脫落細胞樣本作為對照組，年齡19～87歲，平均（42.96±11.86）歲。納入標準：①患者于揚州市婦幼保健院初次采樣檢測；②未行相關治療措施；③無性病史?；颊呒凹覍倬獣员狙芯坎⒑炇鹬橥鈺１狙芯拷?jīng)揚州市婦幼保健院倫理委員會審批通過。

1.2 樣本采集

樣本采集前24h內患者無性行為。男性樣本用一次性采樣拭子稍用力對龜頭、冠狀溝、系帶、包皮和尿道口反復進行3～6次旋轉摩擦，取得脫落上皮細胞，然后將拭子放入裝有專用細胞保存液的試管中，擰緊管蓋，作好標識。女性樣本由醫(yī)生以窺陰器暴露宮頸，將一次性宮頸采樣刷于宮頸口輕輕地順時針旋轉5圈，取出宮頸刷放入裝有專用細胞保存液的試管中，擰緊管蓋，作好標識。樣本立即送檢或置于4℃冰箱保存，2周內檢測。

1.3 儀器與試劑

采用潮州凱普生物化學有限公司提供的HPV分型檢測試劑盒，包括DNA提取試劑盒、聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒、雜交試劑盒以及杭州博日科技有限公司的TC-96/G/H（b）C型基因擴增儀和凱普HHM-3型醫(yī)用核酸分子快速雜交儀進行HPV基因分型檢測。

1.4 檢測方法

采用PCR體外擴增和導流雜交的方法檢測37種HPV基因亞型，其中包括18種高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、73、82；19種低危型：HPV6、11、42、43、44、81（CP8304）、34、40、54、55、57、61、67、69、70、71、72、83、84。

1.4.1 HPVDNA 分離提取樣本振蕩均勻，取0.5ml樣本至離心管中，14 000轉/min離心1min，棄上清液，加入細胞裂解液提取DNA，嚴格按照DNA提取試劑盒說明書進行操作，取1μl提取好的DNA樣本作為模板。

1.4.2 PCR擴增 按PCR擴增試劑說明書進行操作，反應體系為25μl，包括PCR混合液23.25μl、Taq酶0.75μl、提取的DNA模板1μl，混勻。PCR擴增程序：95℃預變性9min，95℃變性20s，55℃退火30s，72℃延長30s，共40個循環(huán)；72℃延長5min；4℃保持。

1.4.3 雜交過程擴增產(chǎn)物 95℃變性5min，冰水浴2min，加入雜交孔內進行導流雜交10min，雜交液沖洗、加封阻液、加酶標液和顯色液等操作步驟按照雜交試劑盒說明書進行。

1.4.4 結果判定 根據(jù)膜條HPV亞型分布位置判斷結果，陽性點為清晰可見的藍紫色圓點，多個圓點即為多重感染。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS21.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析，計數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 男科門診患者HPV感染情況與女性組結果的比較

258例男科門診患者（男性患者組）中HPV陽性者103例，感染率39.92%。1436例女性體檢者（女性體檢組）中HPV陽性者195例，感染率13.58%。931例宮頸疑似HPV感染的婦科患者（女性患者組）HPV陽性者348例，感染率37.38%。男性患者組感染率與女性體檢組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）；男性患者組與女性患者組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.456）。男性患者組感染類型與女性體檢組差異有統(tǒng)計學意義（P=0.032）；男性患者組與女性患者組差異無統(tǒng)計學意義（P=0.192），見表1。

表1 三組受試者的HPV感染類型比較[n（%）]

2.2 男科門診患者HPV感染狀態(tài)與女性組結果的比較

103例男科門診陽性患者單一亞型感染59例，占57.28%，二重及以上感染（多重感染）44例，占42.72%，最多十重感染；單一亞型感染以高危型為主，二重及多重感染以高危型及高低?；旌闲蜑橹鳎姳?、表3。男性患者組感染狀態(tài)與女性體檢組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001），男性患者組與女性患者組差異無統(tǒng)計學意義（P=0.102）。

表2 男性HPV陽性患者感染狀態(tài)與女性組的比較[n（%）]

表3 男性HPV陽性患者不同感染狀態(tài)時的感染類型（n）

2.3 男科門診患者HPV感染的年齡分布

男科門診患者及HPV陽性者年齡分布均主要集中于20～29歲和30～39歲階段，其次為40～49歲，50歲以上年齡段相對較少。HPV感染的高峰年齡為20～39歲，占74.75%，各年齡段HPV檢出率差異無統(tǒng)計學意義（P=0.297），見表4。

表4 258例男性就診者HPV感染的年齡分布

2.4 HPV亞型分布情況

37種HPV基因亞型中，男性患者組除HPV57、67、69、83型外，其他亞型均有檢出。男性患者組檢出率位列前5位的是HPV52、58、51、54、61型。女性體檢組和女性患者組除HPV57、69、72、26型外，其他亞型均有檢出，位列前5位的是HPV52、16、58、53、61型。HPV各基因亞型檢出率見表5。

表5 男性患者組與女性體檢組和女性患者組基因亞型分布比較[n（%）]

2.5 男性HPV感染者就診原因

103例男性感染者就診主要原因：健康查體（包括患者性伴侶確診HPV感染主動要求檢測者）75例，占72.82%；生育檢驗15例，占14.56%；不育癥5例，占4.85%；外生殖器炎癥或有贅生物5例，占4.85%；病毒性疣2例，占1.94%；男性勃起障礙1例，占0.97%。

3 討論

HPV能引起人體皮膚及黏膜的鱗狀上皮增生，且不同型別HPV的致病力存在差異，國際癌癥研究協(xié)會（International Agency for Research on Cancer，IARC）根據(jù)其與腫瘤發(fā)生危險性的高低，把HPV亞型分為低危型和高危型，其中低危型HPV感染尤其是HPV6型和HPV11型與外生殖器尖銳濕疣等良性病變有關，高危型HPV持續(xù)性感染與女性宮頸癌的發(fā)病及男性陰莖癌和口咽癌等病變密切相關[1-5]。HPV感染被認為是男性和女性感染相關癌癥的主要原因之一[1]。本研究主要探討男科門診患者HPV感染及其基因型的分布特點及與女性兩組結果的比較，有助于男性HPV相關性疾病的防治及降低HPV相關腫瘤的發(fā)生。

根據(jù)流行病學調查發(fā)現(xiàn)我國男性HPV的總體感染率與西方國家相比處于較低的水平，且國內普通男性HPV感染情況及基因亞型分布特征存在地區(qū)性差異[10]。耿見忠[11]報道貴州地區(qū)男性HPV感染率為76.59%；張新鵬等[12]報道北京東南地區(qū)男性HPV感染率為64.30%；鐘陽青等[13]報道東莞地區(qū)男性HPV感染率為58.33%，與本研究結果存在不同程度的差異。本研究檢測258例男科門診患者樣本，HPV感染率為39.92%，與程連娜等[14]報道麗水地區(qū)男性HPV感染情況相似，與其他地區(qū)比較處于相對較低的水平，分析原因可能為樣本來源不同，本研究采集樣本多為無癥狀健康體檢或生育檢查患者。本研究顯示HPV陽性樣本中感染HPV高危型占58.25%，與貴州地區(qū)及北京東南地區(qū)以低危、高?；旌细腥緸橹鞑煌赡転榈貐^(qū)性差異[11-12]；本研究以單一亞型感染為主，占57.28%，與東莞地區(qū)、麗水地區(qū)及海南地區(qū)的報道基本一致[13-15]。

本研究顯示男科門診患者及HPV陽性患者年齡均主要集中于20～29歲和30～39歲，HPV感染的高峰年齡為20～39歲，占74.76%，與鐘文英等[16]報道基本一致；各年齡組HPV檢出率差異無統(tǒng)計學意義，但50歲以上患者HPV檢出率較高，因此中老年男性的生殖健康也值得重視。本研究檢測的37種HPV基因亞型中，男性患者組除HPV57、67、69、83型外，其他亞型均有檢出。

目前HPV感染已成為全球最常見的性傳播疾病之一，配偶感染HPV可增加性伴侶被感染的風險，有研究報道配偶宮頸HPV感染男性外生殖器HPV感染率高[6-7]。吳正沐等[17]研究女性HPV感染患者的男性性伴侶感染HPV型別與女方基本一致，吻合率高達97.70%。本研究顯示男性患者HPV感染率和感染類型及感染狀態(tài)與女性患者差異無統(tǒng)計學意義，與女性體檢者相比差異有統(tǒng)計學意義，表明除與女性健康體檢者有差異，男性患者與女性患者HPV感染情況基本一致，均以高危型感染為主，且以單一亞型感染為主。女性組除HPV57、69、72、26型外，其他亞型均有檢出，女性組檢出率位列前5位的是HPV52、16、58、53、61型，低危型以HPV61（7.73%）、HPV81（6.45%）、HPV54（5.89%）為常見亞型，高危型以HPV52（22.285）、HPV16（14.92%）、HPV58（11.79%）為常見亞型，與男性患者相比略有不同，這與邵玲俐等[18]研究結果相似。

隨著HPV在人群中篩查工作的開展，研究發(fā)現(xiàn)與異性戀男性相比，男男性行為者的口腔和生殖器HPV感染率更高[8-9]。研究表明在男男性行為者中，HPV疫苗接種對預防肛門生殖器和口腔HPV是有效的，尤其是在年輕時接種[19]。2018年10月5日，美國食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）批準九價HPV疫苗的補充申請，將使用該疫苗的年齡范圍擴大到27～45歲女性和男性成人的接種，而此前九價HPV疫苗只適用于9～26歲女性或男性。近年來，隨著女性HPV感染研究和宮頸癌防治工作的深入，男性HPV疫苗接種也將逐漸引起大家的重視[20]。有研究顯示男性HPV感染可能影響精子活力、增加畸形率，從而降低精液質量，影響男性生育能力，尤其是對單純精子活力減低的原發(fā)性不育男性，應當考慮到精液HPV感染的可能并予以檢測[21-22]。

綜上所述，本研究結果顯示男科門診患者HPV感染率較高，以高危型感染為主，且以單一亞型感染為主，感染的高峰年齡為20～39歲，各地區(qū)應重視男性HPV感染患者及各基因型的檢測。由于HPV可通過性接觸傳播，因此對男性生殖健康的監(jiān)測還可降低性伴侶感染HPV的風險，減少HPV相關疾病的發(fā)生。本研究采集的樣本量較小，不能完全反映本地區(qū)的男性HPV感染情況，因此還需大量數(shù)據(jù)進一步研究，為男性HPV感染的干預和治療提供科學依據(jù)。