35份綠豆種質(zhì)資源萌發(fā)期耐鹽堿性綜合評(píng)價(jià)及耐鹽堿機(jī)制分析

關(guān)鍵詞：綠豆；萌發(fā)期；鹽堿脅迫；綜合評(píng)價(jià)；生理響應(yīng)；核酸損傷修復(fù)

綠豆[Vigna radiata （L.）R．Wilczek]是豆科豇豆屬一年生直立草本植物。綠豆籽粒富含淀粉、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)和維生素等營(yíng)養(yǎng)成分，可加工制成多種菜品，故有“食中佳品，濟(jì)世長(zhǎng)谷”之稱。隨著人們生活水平提高和健康意識(shí)增強(qiáng)，綠豆的需求量顯著增加。

綠豆原產(chǎn)于中國(guó)，在中國(guó)已有兩千余年的栽培史。綠豆在全國(guó)各地均有種植，產(chǎn)區(qū)主要集中在黃淮流域及東北和華北地區(qū)。目前，我國(guó)現(xiàn)有鹽漬化及次生鹽漬化的耕地達(dá)4x107hm2以上，約占我國(guó)耕地面積的10%，主要分布在東北、西北、中北部、華北和濱海五大區(qū)域。其中，中國(guó)東北地區(qū)主要為蘇打鹽堿地，鹽堿地面積居世界蘇打鹽堿化土壤前三位。土壤鹽堿化嚴(yán)重影響綠豆生長(zhǎng)和產(chǎn)量形成，因此，篩選適宜鹽堿地區(qū)種植的綠豆種質(zhì)資源對(duì)其品種選育和產(chǎn)量提高意義重大。

與溫度、水分等非生物脅迫不同，鹽堿脅迫在植物生長(zhǎng)初期就已經(jīng)存在，并一直伴隨其整個(gè)生育期。因此，在種子萌發(fā)期進(jìn)行耐鹽堿性篩選，能夠快速準(zhǔn)確反映植株的抗逆水平。目前，關(guān)于綠豆種質(zhì)資源耐鹽堿性篩選和評(píng)價(jià)體系建立的研究已有一些報(bào)道。于崧等對(duì)30個(gè)不同基因型綠豆萌發(fā)期和苗期的耐鹽堿性進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)表明，萌發(fā)期的活力指數(shù)、發(fā)芽率、根冠比、胚根長(zhǎng)、胚芽長(zhǎng)可以作為耐鹽堿性強(qiáng)弱評(píng)價(jià)的關(guān)鍵指標(biāo)：苗期的葉片凈光合速率、相對(duì)電導(dǎo)率、最大光化學(xué)效率、可溶性糖含量、初始熒光及地上干重和地下鮮重可作為耐鹽堿性強(qiáng)弱評(píng)價(jià)的關(guān)鍵指標(biāo)。胡亮亮等在苗期用150mmol·L-1NaCl溶液模擬鹽脅迫對(duì)346份國(guó)內(nèi)外綠豆種質(zhì)進(jìn)行處理，通過主成分分析、隸屬函數(shù)分析、耐鹽性綜合評(píng)價(jià)分析、聚類分析等方法進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)和耐鹽性鑒定，結(jié)果表明根鮮重、根干重、根長(zhǎng)、根分枝數(shù)、根體積和地上部鮮重是綠豆苗期耐鹽性評(píng)價(jià)的主要指標(biāo)。李小雷等利用6個(gè)不同濃度NaCl溶液對(duì)19份綠豆資源進(jìn)行萌發(fā)期的耐鹽性鑒定，篩選得到高耐鹽材料4份和耐鹽材料14份。

植物在遭遇逆境脅迫時(shí)，過量積累的活性氧（ROS）會(huì)引起膜脂過氧化、酶活性喪失、蛋白質(zhì)降解、呼吸作用異常等現(xiàn)象。當(dāng)植物體內(nèi)的ROS產(chǎn)生和代謝發(fā)生紊亂時(shí)，植物會(huì)啟動(dòng)多種抗氧化機(jī)制（包括酶促系統(tǒng)和非酶促系統(tǒng)）來應(yīng)對(duì)ROS過量積累所帶來的傷害。酶促系統(tǒng)一般包括超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）、抗壞血酸過氧化物酶（APX）、脫氫抗壞血酸還原酶（DHAR）和單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）等。綠豆在鹽脅迫下常表現(xiàn)為提高滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量和抗氧化酶活性。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，過量積累的ROS能夠攻擊基因組DNA，破壞核酸的穩(wěn)定性，最終導(dǎo)致DNA損傷?；蚪M核酸一旦受到不可逆的損傷，就會(huì)引起植物體一系列的變化，包括基因表達(dá)調(diào)控紊亂、生理生化進(jìn)程受阻等，甚至引起生長(zhǎng)發(fā)育異常，最終導(dǎo)致生物量和產(chǎn)量降低。對(duì)于植物中DNA損傷修復(fù)研究，在由UV-B、重金屬等引發(fā)的擬南芥基因組損傷中較為深入。近年來在菜豆、大豆、黑小麥、煙草等的研究中發(fā)現(xiàn)鹽脅迫等非生物脅迫也能夠引起基因組損傷。然而，目前關(guān)于鹽堿脅迫與綠豆DNA損傷的關(guān)系、不同耐鹽堿性綠豆資源抗氧化能力與基因組穩(wěn)定性的聯(lián)系等問題還研究較少。

韓毅強(qiáng)等研究表明，大慶地區(qū)的鹽堿土壤類型屬于硫酸鹽型蘇打鹽堿土，土壤鹽堿成分含量比為NaCl：Na2 C03：Na2 S04：NaHC03=1：1：9：9，pH值8.9，Na+總量為80

mmol·L-1。本研究選擇上述類似混合鹽堿溶液進(jìn)行綠豆資源篩選，更有利于大慶地區(qū)耐鹽堿資源的鑒定和品種選育。綠豆屬于低耐鹽作物，我們的預(yù)試驗(yàn)（結(jié)果未列出）也表明在80mmol·L-1的上述鹽堿溶液中，大部分綠豆資源表現(xiàn)為發(fā)芽率及相關(guān)發(fā)芽指標(biāo)受到嚴(yán)重抑制，故選用40 mmol·L-1的中等濃度混合鹽堿溶液進(jìn)行綠豆資源篩選較為合適。

本試驗(yàn)對(duì)35份綠豆種質(zhì)材料進(jìn)行萌發(fā)期鹽堿脅迫處理，對(duì)萌發(fā)相關(guān)的14個(gè)指標(biāo)進(jìn)行隸屬函數(shù)分析、主成分分析、相關(guān)分析、回歸分析和聚類分析，對(duì)不同綠豆種質(zhì)資源的耐鹽堿性進(jìn)行綜合鑒定和評(píng)價(jià)，對(duì)篩選出的耐鹽堿綠豆種質(zhì)進(jìn)行抗氧化酶活性和基因組DNA的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA標(biāo)記（RAPD）分析，旨在建立耐鹽堿綠豆資源的篩選指標(biāo)和評(píng)價(jià)方法，明確鹽堿脅迫與綠豆DNA損傷的關(guān)系以及不同耐鹽堿性綠豆資源抗氧化能力與基因組穩(wěn)定性的關(guān)系，為鹽堿地區(qū)綠豆品種選育、耐鹽堿綠豆優(yōu)異資源篩選以及綠豆耐鹽堿基因鑒定提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試35份綠豆種質(zhì)材料均由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)作物種質(zhì)資源創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)室提供，保存于國(guó)家雜糧工程技術(shù)研究中心種質(zhì)資源庫(kù)。種質(zhì)材料名稱見表1。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2023年6月在國(guó)家雜糧工程技術(shù)研究中心進(jìn)行。試驗(yàn)以蒸餾水為對(duì)照，以40mmol·L-1鹽堿溶液（NaCl：Na- C03：Na2 S04： NaHC03=1：1：9：9， pH值8.9）進(jìn)行鹽堿脅迫（SA）處理。選取大小均一、飽滿健康的綠豆籽粒，2.0%次氯酸鈉滅菌10min，蒸餾水洗滌2次，處理液（蒸餾水或40mmol.L-1鹽堿溶液）再次清洗2次。將沖洗后的種子均勻擺放在鋪有雙層濾紙的培養(yǎng)皿中，每皿15粒種子，種子表面覆蓋1層濾紙，加6mL處理液。培養(yǎng)皿置于恒溫人工氣候箱中，設(shè)置溫度（25±1）℃，黑暗培養(yǎng)7d。每天更換濾紙和處理液。每處理重復(fù)3次。

1.3測(cè)定指標(biāo)及方法

當(dāng)綠豆種子胚根長(zhǎng)度大于種子長(zhǎng)度時(shí)視為萌發(fā)。第5天時(shí)，按照《農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽試驗(yàn)》（GB/T 3543.4-1995），統(tǒng)計(jì)綠豆種子發(fā)芽勢(shì)（GE）；第7天時(shí)，統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽率（GR），選擇10粒有代表性的種子測(cè)定胚根長(zhǎng)（RL）、總鮮重（TFW）、子葉鮮重（CFW）和胚根鮮重（RFW）。85℃烘干樣品至恒重，測(cè)定其總干重（TDW）、子葉干重（CDW）和胚根干重（RDW），并計(jì)算活力指數(shù)（VI）、子葉相對(duì)含水量（CWC）、胚根相對(duì)含水量（RWC）和根冠比（R/S）。

相關(guān)指標(biāo)計(jì)算公式如下：

（1） GE（%）=第5天發(fā)芽種子粒數(shù)／供試種子粒數(shù)×100；

（2） GR（%）=第7天發(fā)芽種子粒數(shù)／供試種子粒數(shù)×100：

（3）發(fā)芽指數(shù)（GI）=∑Gt/Dt，其中，Gt為第t天的發(fā)芽種子粒數(shù)，Dt為相應(yīng)的發(fā)芽天數(shù)；

（4）VI=發(fā)芽指數(shù)×胚根鮮重；

（5）CWC（%）=（CFW-CDW）/CFWx100;

（6）RWC（%）=（RFW-RDW）/RFWx100;

（7）R/S=胚根干重／子葉干重；

（8）綜合評(píng)價(jià)相關(guān)指標(biāo)：

1.4胚根DNA提取與RAPD分析

利用CTAB法進(jìn)行樣品DNA提取，Nanodrop 2000測(cè)定DNA質(zhì)量和濃度。將DNA濃度稀釋至100ng·uL-1后，利用黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)作物種質(zhì)資源創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)室前期建立的方法進(jìn)行基因組DNA的RAPD分析。試驗(yàn)設(shè)置3次生物學(xué)重復(fù)和3次技術(shù)重復(fù)，每次試驗(yàn)中至少出現(xiàn)2次RAPD片段的定義為有效多態(tài)性差異。隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性引物序列為Random Primer 1：5 7-CT-GCGCTGGA-3'; Random

Primer 2：5'-CT-GGGGCTGA-3'; Random Primer 3：5'-GGTG-GTGATG-3';Random Primer 4：5'-AAAGTGCGGC-3'.

1.5數(shù)據(jù)處理與分析

利用SPSS 26.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（Plt;0.05）、主成分分析、聚類分析和相關(guān)性分析并繪制聚類圖；用Origin 2021軟件繪制相關(guān)系數(shù)聚類熱圖；用GraphPad Prism 9軟件繪制柱形圖。

2結(jié)果與分析

2.1鹽堿脅迫下35份綠豆種質(zhì)萌發(fā)期相關(guān)指標(biāo)的差異分析

由表2可知，鹽堿脅迫處理下，35份綠豆種質(zhì)的總鮮重、總干重、子葉鮮重、子葉干重、胚根鮮重、胚根干重、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、根長(zhǎng)、根冠比、胚根相對(duì)含水量、子葉相對(duì)含水量、發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)共14項(xiàng)指標(biāo)存在差異，其中胚根鮮重、活力指數(shù)、胚根干重和總鮮重的變異系數(shù)較大，分別為1.128、0.716、0.663和0.634，發(fā)芽率、胚根相對(duì)含水量和子葉相對(duì)含水量的較小，分別為0.137、0.169和0.090。

2.2 35份綠豆種質(zhì)萌發(fā)期耐鹽堿性指標(biāo)的主成分分析

如表3所示，對(duì)14個(gè)指標(biāo)進(jìn)行主成分分析共得到5個(gè)主成分，對(duì)應(yīng)的特征根分別為4. 169、3.289、2.159、1.041和1.010，貢獻(xiàn)率分別為29.782%、23.492%、15.402%、7.438%和7.216%，累計(jì)貢獻(xiàn)率為83.330%。表明這5個(gè)主成分可以充分反映鹽堿脅迫下綠豆萌發(fā)期14個(gè)測(cè)量指標(biāo)的變化趨勢(shì)。其中，第1主成分的貢獻(xiàn)率最高，是鹽堿脅迫高度敏感主成分，胚根鮮重的特征向量值最高，為0.899，總鮮重次之，為0.833，故選擇胚根鮮重和總鮮重作為綠豆萌發(fā)期耐鹽堿的主要評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.3 35份綠豆種質(zhì)萌發(fā)期耐鹽堿性的隸屬函數(shù)及聚類分析

根據(jù)5個(gè)主成分計(jì)算出35份綠豆種質(zhì)的隸屬函數(shù)值和綜合評(píng)價(jià)值（D），見表4，并根據(jù)D值對(duì)不同綠豆資源萌發(fā)期的耐鹽堿性進(jìn)行排序，D值越大表明該綠豆資源萌發(fā)期鹽堿耐性越好?？梢钥闯?，LSS-13的D值最大，為0.703：新育1號(hào)次之，為0.676;綠豐2號(hào)的D值最小，為0.054。

通過組間聯(lián)接法基于綜合指標(biāo)對(duì)35份綠豆種質(zhì)資源進(jìn)行聚類分析，在平方歐氏距離為4處可將其劃分為5大類（圖1）。其中第1大類包含6個(gè)綠豆種質(zhì)，分別為L(zhǎng)SS-13、新育1號(hào)、黑綠豆（2020）、洮綠8號(hào)、赤綠6號(hào)和洮綠9號(hào)，綜合評(píng)價(jià)值高，為強(qiáng)耐鹽堿種質(zhì)：第Ⅱ大類包含7個(gè)種質(zhì)，綜合評(píng)價(jià)值較高，為耐鹽堿種質(zhì)；第Ⅲ大類包含9個(gè)種質(zhì)，綜合評(píng)價(jià)值中等，為中耐鹽堿種質(zhì)；第Ⅳ大類包含7個(gè)綠豆種質(zhì)，綜合評(píng)價(jià)值較低，為鹽堿敏感種質(zhì)；第V大類包含6個(gè)種質(zhì)，綜合評(píng)價(jià)值低，為鹽堿極敏感種質(zhì)，分別為濰8×冀黑452020F8、綠珍珠遼寧鐵嶺、LD13-20、黑農(nóng)院LD05-08、遼綠5號(hào)和綠豐2號(hào)。

2.4綠豆種質(zhì)萌發(fā)期指標(biāo)與D值的相關(guān)性分析及耐鹽性評(píng)價(jià)指標(biāo)篩選

對(duì)鹽堿脅迫下14個(gè)綠豆萌發(fā)期指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析（圖2）可知，胚根鮮重、子葉鮮重和總鮮重與D值均呈顯著正相關(guān)，發(fā)芽率、胚根長(zhǎng)、子葉干重、胚根干重、總干重和根冠比與D值呈正相關(guān)，但均未達(dá)顯著水平。綜合主成分分析和相關(guān)性分析結(jié)果表明，總鮮重、子葉鮮重、胚根鮮重、胚根干重和胚根長(zhǎng)可作為綠豆萌發(fā)期耐鹽堿性評(píng)價(jià)的一級(jí)指標(biāo)，發(fā)芽率、胚根長(zhǎng)、子葉干重、胚根干重、總干重和根冠比可作為綠豆萌發(fā)期耐鹽堿性評(píng)價(jià)的二級(jí)指標(biāo)。

2.5鹽堿脅迫對(duì)不同耐鹽堿性綠豆種質(zhì)萌發(fā)期抗氧化相關(guān)酶活性的影響

綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，選擇強(qiáng)耐鹽堿種質(zhì)LSS-13和鹽堿極敏感種質(zhì)LD13-20作為材料，進(jìn)一步分析其耐鹽堿的生理差異。由圖3可知，鹽堿脅迫處理下兩個(gè)綠豆種質(zhì)子葉和胚根中抗氧化酶活性存在顯著差異。與對(duì)照相比，鹽堿脅迫顯著提高兩個(gè)綠豆種質(zhì)子葉SOD、POD（LD13-20除外）、CAT、APX活性，其中LSS-13子葉APX活性增幅最大，達(dá)364.71%（Plt;0.05）；鹽堿脅迫處理下不同綠豆種質(zhì)胚根中4種酶活性（LSS-13的SOD及LD13-20的POD除外）均顯著提高，其中LSS-13的POD活性增幅最大，達(dá)166.67%（Plt;0.05）。

2.6鹽堿脅迫下不同耐鹽堿性綠豆種質(zhì)萌發(fā)期胚根基因組RAPD分析

為了明確鹽堿脅迫下綠豆基因組DNA損傷情況，利用RAPD對(duì)不同綠豆資源基因組的多態(tài)性進(jìn)行分析，結(jié)果見圖4和表5。與對(duì)照相比較，鹽堿脅迫處理后兩個(gè)綠豆資源基因組的RAPD片段數(shù)均有明顯變化，LSS-13發(fā)生變化的條帶數(shù)為29條，LD13-20發(fā)生變化的條帶數(shù)為35條。與LD13-20相比較，強(qiáng)耐鹽堿資源LSS-13在鹽堿脅迫處理下表現(xiàn)出更強(qiáng)的基因組穩(wěn)定性。

3討論

我國(guó)東北地區(qū)的鹽堿土壤類型為蘇打鹽堿土。一般認(rèn)為，由Na+過量積累引起的鹽脅迫會(huì)對(duì)植物產(chǎn)生滲透脅迫和離子毒害，進(jìn)而嚴(yán)重抑制植株生長(zhǎng)和產(chǎn)量形成。然而，與單一Na+積累的鹽脅迫（如NaCl）相比較，鹽堿脅迫（如Na2C03和NaHCO，）還會(huì)對(duì)植物生長(zhǎng)造成高pH脅迫，植物的耐鹽堿機(jī)制也與耐鹽機(jī)制存在差異。Wang等研究表明，相同Na+濃度下，堿性鹽（NaHC03、Na2C03）對(duì)大豆幼苗的危害程度大于中性鹽（NaCl、Na，S04）。

種子萌發(fā)期是作物生長(zhǎng)的重要起始階段。與干旱、低溫等非生物脅迫不同，鹽堿脅迫下種子首先需要克服的就是萌發(fā)障礙。因此，在萌發(fā)期對(duì)綠豆種質(zhì)資源進(jìn)行鑒定和評(píng)價(jià)對(duì)選育耐鹽堿材料尤為重要。在對(duì)萌發(fā)期種質(zhì)資源進(jìn)行耐鹽（堿）篩選和鑒定評(píng)價(jià)時(shí)，前人多采用脅迫指數(shù)法、相對(duì)鹽害率、隸屬函數(shù)法等進(jìn)行。脅迫指數(shù)法主要通過預(yù)先設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)，通過比較對(duì)照條件和脅迫條件下植株的生長(zhǎng)差異進(jìn)行絕對(duì)耐鹽堿性評(píng)價(jià)。隸屬函數(shù)法通過綜合評(píng)價(jià)群體的各個(gè)性狀指標(biāo)，再設(shè)定劃分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行耐鹽堿能力差異評(píng)估。目前，大豆、玉米、小麥已經(jīng)廣泛采用綜合評(píng)價(jià)方法對(duì)作物的耐逆性進(jìn)行鑒定。本研究以14個(gè)萌發(fā)相關(guān)指標(biāo)作為綠豆資源耐鹽堿性的鑒定指標(biāo)，通過主成分分析、隸屬函數(shù)分析、聚類分析和相關(guān)性分析對(duì)其進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。主成分分析能夠?qū)?shù)據(jù)維度降低，把多個(gè)指標(biāo)轉(zhuǎn)為少數(shù)綜合指標(biāo)來表征大部分目標(biāo)性狀，每個(gè)主成分均是原始指標(biāo)的線性組合。主成分分析結(jié)果表明，綠豆萌發(fā)期14個(gè)萌發(fā)相關(guān)指標(biāo)可簡(jiǎn)化為5個(gè)主成分，這5個(gè)主成分可代表萌發(fā)性狀83.330%的信息：通過隸屬函數(shù)和聚類分析將35份綠豆資源劃分為5類，I類為強(qiáng)耐鹽堿種質(zhì)（6個(gè)），Ⅱ類為耐鹽堿種質(zhì)（7個(gè)），Ⅲ類為中耐鹽堿種質(zhì)（9個(gè)），Ⅳ類為鹽堿敏感種質(zhì)（7個(gè)），V類為鹽堿極敏感種質(zhì)（6個(gè)）。通過主成分分析和相關(guān)性分析綜合得出，總鮮重、子葉鮮重、胚根鮮重、胚根干重和胚根長(zhǎng)可作為綠豆萌發(fā)期耐鹽堿性評(píng)價(jià)的主要指標(biāo)。

在非生物脅迫下，激活SOD、POD、CAT和APX等抗氧化酶活性可有效降低ROS積累引起的氧化損傷。一般認(rèn)為，植物體內(nèi)抗氧化酶活性高低能夠直接反映其活性氧清除能力。本試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽堿脅迫顯著提高綠豆子葉和胚根中的抗氧化酶活性，這表明抗氧化系統(tǒng)參與了綠豆的鹽堿脅迫響應(yīng)：比較兩個(gè)不同耐鹽堿性品種的酶活性表明，強(qiáng)耐鹽堿綠豆種質(zhì)LSS-13較鹽堿極敏感種質(zhì)LD13-20具有更強(qiáng)的ROS清除能力。這可能是兩類種質(zhì)出現(xiàn)鹽堿耐性差異的主要原因，這與Zhao等在大豆中的研究結(jié)果一致。本研究對(duì)子葉和胚根中抗氧化系統(tǒng)的研究發(fā)現(xiàn)，子葉中APX活性差異幅度最大，而在胚根中POD活性差異幅度最大。APX和POD都具有清除過氧化氫的作用，但其反應(yīng)過程存在差異。POD能夠?qū)⑦^氧化氫轉(zhuǎn)化為氧和水，同時(shí)氧化還原底物，而APX是將抗壞血酸還原為脫氫抗壞血酸，并將過氧化氫轉(zhuǎn)化為水，從而減少氧化損傷。這表明綠豆子葉和胚根在響應(yīng)鹽堿脅迫時(shí)通過啟動(dòng)不同的抗氧化調(diào)控系統(tǒng)來降低氧化損傷。

內(nèi)源或外源因素造成的基因組DNA損傷及其修復(fù)失敗能夠直接影響遺傳信息的穩(wěn)定傳遞，進(jìn)而對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育造成嚴(yán)重影響。在分子毒理學(xué)中，RAPD分析是一種比較常用的基于PCR技術(shù)的DNA指紋技術(shù)，用來檢測(cè)核酸損傷程度。利用此方法能夠準(zhǔn)確、快速、高通量地檢測(cè)基因組DNA的變化情況，核酸片段數(shù)量變化越多，表示基因組損傷程度越嚴(yán)重。逆境脅迫產(chǎn)生的過量ROS能夠直接造成基因組DNA的損傷。本研究發(fā)現(xiàn)，鹽堿脅迫處理后綠豆基因組RAPD片段增加，表明鹽堿脅迫能夠造成綠豆DNA受損。這與我們課題組在大豆和蕓豆中的研究結(jié)果一致。與鹽堿極敏感種質(zhì)LD13-20相比較，鹽堿脅迫處理后LSS-13基因組的RAPD片段變化程度更小，表明LSS-13的基因組DNA損傷程度較低，具有更強(qiáng)的活性氧清除能力，這可能是強(qiáng)耐鹽堿種質(zhì)LSS-13基因組穩(wěn)定性更強(qiáng)的重要原因。

4結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，總鮮重、子葉鮮重、胚根鮮重、胚根干重和胚根長(zhǎng)可作為綠豆萌發(fā)期耐鹽堿能力鑒定評(píng)價(jià)的主要指標(biāo)。對(duì)35份綠豆種質(zhì)進(jìn)行萌發(fā)期耐鹽堿性鑒定及綜合評(píng)價(jià)，篩選出LSS-13、新育1號(hào)、黑綠豆（2020）、洮綠8號(hào)、赤綠6號(hào)和洮綠9號(hào)6個(gè)強(qiáng)耐鹽堿種質(zhì)，濰8×冀黑45 2020F8．綠珍珠遼寧鐵嶺、LD13-20、黑農(nóng)院LD05-08、遼綠5號(hào)和綠豐2號(hào)為鹽堿極敏感種質(zhì)。鹽堿脅迫激活了綠豆萌發(fā)期子葉和胚根中的抗氧化酶系統(tǒng)，可有效提升綠豆種質(zhì)的耐鹽堿水平。鹽堿脅迫能夠引起綠豆基因組DNA損傷，耐鹽堿綠豆種質(zhì)（LSS-13等）可能通過維持較高的活性氧清除能力減少其DNA損傷。本研究結(jié)果可為綠豆耐鹽堿種質(zhì)資源的利用及鹽堿地區(qū)綠豆育種和種質(zhì)創(chuàng)新提供理論依據(jù)。