馬鈴薯響應(yīng)低氮肥脅迫AP2轉(zhuǎn)錄因子的生物信息分析

摘要：為研究馬鈴薯（Solanum tuberosum）AP2 亞組類轉(zhuǎn)錄因子家族對低氮肥脅迫的響應(yīng)特征，以馬鈴薯品種Russet Burbank為材料，分別種植于氮肥供應(yīng)充足和不足條件下處理10 d后，收取不同處理下的葉片和根構(gòu)建轉(zhuǎn)錄組測序文庫，基于轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果篩選出AP2轉(zhuǎn)錄因子并對其進(jìn)行生物信息分析和對低氮肥脅迫的響應(yīng)分析。結(jié)果表明，18個馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子不均勻地分布在11條染色體上，且都含有不同數(shù)目的保守基序結(jié)構(gòu)，親緣關(guān)系分析發(fā)現(xiàn)有15個馬鈴薯AP2家族蛋白與擬南芥的AP2蛋白聚集在了一起。基于馬鈴薯轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)根中12個基因在低氮肥脅迫處理后被抑制性表達(dá)，其中3個基因顯著降低；在葉片中9個基因被抑制表達(dá)，2個基因達(dá)到了顯著性差異。此外，還發(fā)現(xiàn)AP2轉(zhuǎn)錄因子在馬鈴薯不同組織中的表達(dá)水平有很大差異，其中14個AP2轉(zhuǎn)錄因子在根和葉片中的表達(dá)量呈顯著性差異。根據(jù)親緣關(guān)系和功能分析，推測PGSC0003DMG400027502、PGSC0003DMG400012181和PGSC0003DMG400013587可作為候選的響應(yīng)氮肥脅迫的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，該研究為下一步研究馬鈴薯AP2響應(yīng)低氮肥脅迫的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：馬鈴薯；低氮肥脅迫；AP2轉(zhuǎn)錄因子；生物信息學(xué)分析；響應(yīng)

中圖分類號：S532.01" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2024）04-0055-08

收稿日期：2023-04-21

基金項目：河南省科技攻關(guān)項目 （編號：202102110167、212102110211）；鄭州師范學(xué)院高層次人才科研啟動專項經(jīng)費(fèi) （編號：2018）。

作者簡介：張珍華（1985—），男，河南林州人，碩士，主要從事生物信息學(xué)及作物育種研究。E-mail：zhenhuayuemu@163.com。

通信作者：牛蘇燕，博士，講師，主要從事薯類作物育種及功能基因組學(xué)研究。E-mail：niusuyan1234@163.com。

植物在生長發(fā)育過程中，總是會遭受到生物和非生物脅迫的影響。有研究表明，轉(zhuǎn)錄因子AP2/ERF、MYB、TCP、bHLH、NAC、WRKY、VOZ、ZEP和EIN3等在植物防御和抵抗逆境脅迫時發(fā)揮著關(guān)鍵調(diào)控作用［1-5］。AP2轉(zhuǎn)錄因子是AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子基因家族的一個亞族，包含2個可以與DNA結(jié)合的AP2/ERF結(jié)構(gòu)域。自Jofuku等從擬南芥中成功分離出第1個AP2轉(zhuǎn)錄因子之后［6］，越來越多的AP2轉(zhuǎn)錄因子基因在水稻、玉米、小麥、大麥、蘋果、茶樹等模式植物和非模式植物中被報道［3，7-11］。研究表明，AP2 轉(zhuǎn)錄因子可通過響應(yīng)植物激素如生長素、細(xì)胞分裂素、脫落酸、赤霉素、油菜素內(nèi)酯和乙烯的調(diào)節(jié)，直接或間接參與種子的發(fā)育過程，花、果實、根和側(cè)根等器官的形態(tài)建成等植物發(fā)育的多個進(jìn)程［12-14］。例如，過表達(dá)擬南芥ANT基因的矮牽牛植株表現(xiàn)為花瓣明顯增大，而PhANT RNAi表達(dá)的矮牽牛植株則表現(xiàn)為PhANT基因的表達(dá)量降低同時花瓣變小［14］。此外，有研究證明擬南芥 PLT3、PLT5和 PLT7 基因突變體植株的側(cè)根數(shù)目顯著多于野生型植株側(cè)根數(shù)目［15-16］。

AP2轉(zhuǎn)錄因子除了參與植物的形態(tài)建成，越來越多的研究證明AP2 轉(zhuǎn)錄因子參與植物的逆境代謝［17-20］。例如，過表達(dá)AP2轉(zhuǎn)錄因子FTL1/DDF1提高了擬南芥植株對多個非生物脅迫包括干旱、高溫和寒冷等脅迫的抗性［18］。在辣椒中，AP2轉(zhuǎn)錄因子CaDRAT1 通過調(diào)節(jié) ABA 的生物合成和信號傳導(dǎo)，起到了脫水抗性的負(fù)調(diào)節(jié)作用［19］。此外，有研究表明，AP2轉(zhuǎn)錄因子在缺硼條件下發(fā)揮重要作用。在低硼肥條件下，AP2通過維持多個硼轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的側(cè)極性定位來保證硼的有效攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)［21］。馬鈴薯是世界上第四大糧食作物，在維護(hù)我國糧食安全中起重要作用。在其生長發(fā)育過程中，氮肥是決定馬鈴薯產(chǎn)量和商品薯率的關(guān)鍵因子。王慧等利用RT-PCR技術(shù)從馬鈴薯加湘1號中克隆了1個響應(yīng)晚疫病菌的AP2/ERF家族基因［22］，但是有關(guān)馬鈴薯AP2基因家族響應(yīng)氮肥脅迫的研究尚未有報道。本研究基于馬鈴薯轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)，挖掘出AP2轉(zhuǎn)錄因子家族基因，對其進(jìn)行理化性質(zhì)預(yù)測、motif分類、GO功能注釋、與擬南芥AP2的蛋白親緣關(guān)系分析，并對馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子在不同部位及低氮肥脅迫下的表達(dá)譜進(jìn)行分析，以期為馬鈴薯AP2基因家族的功能研究提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本試驗以種植于氮肥供應(yīng)充足（7.5 mmol/L）和供應(yīng)不足（0.05 mmol/L）［23-24］條件下的馬鈴薯Russet Burbank為材料，培養(yǎng)10 d 后分別取不同處理條件下馬鈴薯的葉片和根，構(gòu)建4個轉(zhuǎn)錄組文庫進(jìn)行測序。葉片對照組和根對照組為馬鈴薯氮供應(yīng)充足條件下的葉片和根測序文庫；葉片處理組和根處理組為馬鈴薯氮供應(yīng)不足條件下的葉片和根測序文庫。

1.2 馬鈴薯AP2基因家族響應(yīng)氮肥脅迫相關(guān)基因的生物信息學(xué)分析

基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和Phytozome 13.1 （https：//phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html）馬鈴薯基因組數(shù)據(jù)庫獲取AP2基因序列信息。利用軟件ProtParam、SOPMA和BLAST2GO分析AP2蛋白的理化性質(zhì)、二級結(jié)構(gòu)和功能注釋。利用在線工具M(jìn)EME Suite 5.4.1（http：//meme-suite.org/）對馬鈴薯AP2家族蛋白的保守基序（motif）進(jìn)行預(yù)測，設(shè)定基序長度為6～60個氨基酸，基序數(shù)量為 6。同時，利用MEGA 7.0.14軟件將馬鈴薯AP2家族蛋白序列和擬南芥AP2家族蛋白序（http：//planttfdb.gaolab.org/family.php？sp=Athamp;fam=AP2）比對分析后，采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。最后，根據(jù)馬鈴薯轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，對葉片和根不同部位以及低氮肥脅迫處理后 AP2 基因家族成員的表達(dá)進(jìn)行分析，并用HemI 1.0.3.7軟件繪制基因表達(dá)熱圖［25］。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬鈴薯AP2基因的篩選及在染色體上的分布

經(jīng)篩選鑒定，4個馬鈴薯轉(zhuǎn)錄組文庫共獲得18個AP2轉(zhuǎn)錄因子 （表1）。這些AP2轉(zhuǎn)錄因子不均勻地分布在11條染色體上，其中11號染色體分布4個基因，其他染色體大多包含1～2個AP2基因。基因長度分布在1 257～7 530 bp之間，氨基酸數(shù)量介于193～1 055個之間。外顯子數(shù)量在1～11個之間，其中基因PGSC0003DMG400014598含有外顯子最多，為11個。

2.2 馬鈴薯AP2家族蛋白理化性質(zhì)分析

利用生物信息學(xué)工具對獲得的AP2轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行理化性質(zhì)分析，結(jié)果表明，18個AP2家族蛋白的相對分子質(zhì)量差別較大，最小值為21 956.20 u（PGSC0003DMG400028913），最大值為118 287.00 u（PGSC0003DMG400012181），平均相對分子質(zhì)量為54 500.81 u（表2）。等電點(diǎn)（pI）平均值為7.00，其中有11個AP2家族蛋白小于7.00，呈酸性；有7個AP2蛋白大于7.00，呈堿性。18個AP2家族蛋白的平均疏水性值在-1.01～-0.40之間，表明均屬于親水性蛋白。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果顯示，18個AP2蛋白均具有α螺旋、β轉(zhuǎn)角、延伸鏈和無規(guī)則卷曲4種構(gòu)型 （表2），其中α螺旋和無規(guī)則卷曲構(gòu)成平均占比分別為24.51%和56.05%，而延伸鏈和β轉(zhuǎn)角占比分別為14.49%和4.96%。在這些AP2家族基因中，除了基因PGSC0003DMG400022695之外，其余AP2蛋白均表現(xiàn)為無規(guī)則卷曲占比最大，且所有AP2蛋白α螺旋占比大于延伸鏈占比。

2.3 馬鈴薯AP2基因家族蛋白基序及分類

利用MEME數(shù)據(jù)庫對獲得的18個馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子的蛋白進(jìn)行序列分析，結(jié)果顯示，18個馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子含有不同數(shù)目的保守基序結(jié)構(gòu)，且均包含基序1即motif 1（包含2個保守結(jié)構(gòu)域，RAYD和YRG），說明該基序是馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子中不可缺少的結(jié)構(gòu)域（圖1和圖2），該結(jié)果與其他植物中的報道［1-2］一致。此外，motif 2和motif 4為YRG結(jié)構(gòu)域，motif 3為RAYD結(jié)構(gòu)域（圖2）。每個AP2基因家族的成員都含有數(shù)量不等的RAYD和YRG，且不同的AP2轉(zhuǎn)錄因子家族之間的保守結(jié)構(gòu)域的氨基酸存在變異，例如基因PGSC0003DMG400014598中motif 1的RAYD結(jié)構(gòu)域的丙氨酸（A）被絲氨酸（S）代替。在這些轉(zhuǎn)錄因子中，3個基因PGSC0003DMG400004006、PGSC0003 DMG400006482和PGSC0003DMG400025479含有6個基序；基因PGSC0003DMG401013782、PGSC0003DMG4000 14598、PGSC0003DMG400016196含有motif 1、motif 2、motif 3和motif 5 共4個基序，而基因PGSC0003DM G400028913只含有motif 1和motif 5（圖1）。

2.4 馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子與擬南芥AP2的蛋白親緣關(guān)系分析

為了解析馬鈴薯AP2蛋白的進(jìn)化關(guān)系并預(yù)測其功能，利用MEGA 7.0.14軟件分析馬鈴薯AP2家族蛋白和擬南芥AP2家族蛋白的親緣關(guān)系（圖3）。結(jié)果表明，有15個馬鈴薯AP2家族蛋白與擬南芥的AP2蛋白聚集在一起，分別歸屬于7個亞類中。例如，PGSC0003DMG401013782與擬南芥AT5G57390.1親緣關(guān)系較近；PGSC0003DMG 400016252與擬南芥AT1G72570.1親緣關(guān)系較近；PGSC0003DMG400016196和PGSC0003DMG400014598與擬南芥AT5G65510.1、AT5G10510.1、AT5G10510.2和AT5G10510.3親緣關(guān)系較近；PGSC0003DMG40 0013587與擬南芥AT3G20840.1和AT1G51190.1Q親緣關(guān)系較近；PGSC0003DMG400004921與擬南芥AT4G37750.1親緣關(guān)系較近；PGSC0003DMG 400028913與擬南芥AT1G79700.1、AT1G79700.2、AT1G16060.1和AT1G16060.2親緣關(guān)系較近；PGSC 0003DMG400027502與擬南芥AT3G54320.1和AT3 G54320.3親緣關(guān)系較近；PGSC0003DMG4000 12181、PGSC0003DMG400012178和PGSC0003DMG 400022695與擬南芥AT2G41710.3、AT2G41710.2和AT2G41710.1親緣關(guān)系較近；PGSC0003DMG40 0025479、PGSC0003DMG400004006和PGSC0003DM G400006482與擬南芥AT4G36920.2、AT4G36920.1和AT5G67180.1親緣關(guān)系較近；PGSC0003DMG 400012038與擬南芥AT2G39250.1、AT3G54990.1和AT3G54990.2親緣關(guān)系較近。此外，有3個AP2轉(zhuǎn)錄因子PGSC0003DMG400025390、PGSC0003DMG40 0011046和PGSC0003DMG400027904單獨(dú)聚類為一類。

2.5 馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子的GO注釋分析

GO注釋分析結(jié)果表明，馬鈴薯18個AP2轉(zhuǎn)錄因子序列被富集到27個功能類別。其中，轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞核功能、DNA結(jié)合和轉(zhuǎn)錄因子活性包含的基因較多，達(dá)18個。此外，還包括一些參與植物形態(tài)建設(shè)和抗逆相關(guān)的功能類別，例如莖尖分生組織特性的維持、植物胚珠發(fā)育、胚胎發(fā)育的正調(diào)控、細(xì)胞增殖調(diào)控、糖酵解過程的調(diào)節(jié)、根系發(fā)育、根分生組織生長、種子發(fā)育、種子萌發(fā)、分生組織營養(yǎng)到生殖階段的轉(zhuǎn)變、分生組織維持、甘油三酸酯生物合成過程、蔗糖響應(yīng)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞核功能、DNA結(jié)合、RNA磷酸二酯鍵水解、RNA加工、轉(zhuǎn)錄因子活性等功能組都包含1個序列（表3）。

2.6 馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子在不同組織和低氮肥脅迫下的表達(dá)譜分析

基于馬鈴薯轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，獲得了18個馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子在根和葉不同組織和低氮肥脅迫處理下的表達(dá)譜，并繪制表達(dá)熱圖（圖4）。結(jié)果表明，14個AP2轉(zhuǎn)錄因子在根和葉片中的表達(dá)呈顯著性差異， 其中有6個基因在根中的表達(dá)量顯著低于在葉片中的表達(dá)量，其余8個基因在根中的表達(dá)量顯著高于在葉片中的表達(dá)量。

此外，通過分析AP2轉(zhuǎn)錄因子響應(yīng)低氮肥脅迫的表達(dá)譜發(fā)現(xiàn)，AP2轉(zhuǎn)錄因子在不同組織中響應(yīng)低氮肥脅迫的模式不完全相同。在低氮肥脅迫處理后，有12個基因在根中下調(diào)表達(dá)，其中有3個基因顯著降低，其余6個基因在氮肥脅迫后表達(dá)量被誘導(dǎo)表達(dá)，但未達(dá)到顯著水平。在葉片中，有8個基因被誘導(dǎo)表達(dá)，但未達(dá)到顯著水平，有9個基因被抑制表達(dá)，其中2個基因達(dá)到了顯著性差異。在低氮肥脅迫下，基因PGSC0003DMG400012181在2個組織中均被顯著抑制表達(dá)， 基因PGSC0003DMG400 012178在2個組織中雖未達(dá)到顯著性水平，但是上調(diào)表達(dá)量最大。

3 結(jié)論與討論

本研究從馬鈴薯中篩選出18個AP2轉(zhuǎn)錄因子，蛋白基序分析發(fā)現(xiàn)，不同的AP2轉(zhuǎn)錄因子包含的保守基序存在差異，但均包含YRG和RAYD等2個保守結(jié)構(gòu)域，這與擬南芥和金銀花AP2轉(zhuǎn)錄因子家族的研究結(jié)果［26-27］一致，表明AP2轉(zhuǎn)錄因子家族在物種進(jìn)化過程中高度保守，但保守的氨基酸匯總存在較大的差異，可能是植物在進(jìn)化過程中為了適應(yīng)環(huán)境而產(chǎn)生的。此外，不同的AP2轉(zhuǎn)錄因子編碼的蛋白的理化性質(zhì)存在一定的差異，說明其發(fā)揮的生物學(xué)作用也不相同。

在本研究中，基因PGSC0003DMG400027502與擬南芥AT3G54320.1（WRINKLED1、WRI1）和AT3G54320.3（WRI1）親緣關(guān)系較近。WRI1是多種含油組織中脂肪酸生物合成基因的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，參與一系列糖響應(yīng)基因的激活，并能控制種子發(fā)育過程蔗糖輸往油脂積累的碳流［28］。在擬南芥中，WRI1功能缺失導(dǎo)致脂肪酸生物合成和糖酵解基因表達(dá)減少，籽粒含油量大幅降低。此外，擬南芥wri1-1功能缺失突變體表現(xiàn)出主根生長減少、生長培養(yǎng)基酸化減少的現(xiàn)象［29］。在馬鈴薯根組織中基因PGSC0003DMG400027502的表達(dá)量顯著高于葉片組織，氮肥脅迫后在2個組織中都被抑制表達(dá)，表明該基因參與馬鈴薯根組織的生長發(fā)育，且通過根組織來響應(yīng)低氮肥。在葉片組織中顯著表達(dá)，而在根組織中不明顯，可能是因為不同組織應(yīng)對氮肥脅迫的敏感程度不同。馬鈴薯基因PGSC0003DMG400025479和PGSC0003DMG400004006與擬南芥AT4G36920.2（FLO2）和AT4G36920.1（FLO2）親緣關(guān)系最近，已有研究表明擬南芥AtFLO2突變體的萌發(fā)、花序和花的形態(tài)發(fā)生均表現(xiàn)正常，但是葉片和角果的表型卻出現(xiàn)異常，表現(xiàn)為葉片的葉綠體數(shù)量減少，角果變小且種子產(chǎn)量下降質(zhì)量降低。這些現(xiàn)象都是由于光合同化物的轉(zhuǎn)運(yùn)或轉(zhuǎn)運(yùn)性能降低引起的［30］。本研究發(fā)現(xiàn)，該基因在馬鈴薯根中的表達(dá)量明顯低于在葉片中的表達(dá)量，推測這2個基因在馬鈴薯葉片形態(tài)的維持和同化物運(yùn)輸中起重要作用。此外，還發(fā)現(xiàn)基因PGSC0003 DMG400013587只在根中表達(dá)，且在氮肥脅迫下被抑制表達(dá)。在葉片的2個轉(zhuǎn)錄組文庫中都沒有檢測到該基因的表達(dá)量。PGSC0003DMG 400013587與擬南芥AT3G20840.1［PLETHORA1 （PLT1）］和

AT1G51190.1（PLT2）親緣關(guān)系最近，研究表現(xiàn)PLT1和PLT2是茉莉酸和生長素在調(diào)節(jié)根干細(xì)胞生態(tài)位維持和分生組織活性方面的關(guān)鍵相互作用節(jié)點(diǎn)［31］，推測基因PGSC0003DMG400013587可能介導(dǎo)了根的抗低氮肥脅迫表達(dá)。

此外，PGSC0003DMG400012181在低氮肥脅迫下的2個馬鈴薯組織中均顯著性被抑制表達(dá)。根據(jù)親緣關(guān)系分析可知，PGSC0003DMG400012181與擬南芥AT2G41710.3、AT2G41710.2和AT2G41710.1親緣關(guān)系較近。GO功能注釋表明，擬南芥的這3個基因可充當(dāng)轉(zhuǎn)錄激活因子，能夠與 GCC-box 發(fā)病機(jī)制相關(guān)的啟動子元件結(jié)合，并通過應(yīng)激因素和應(yīng)激信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的組成部分調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。推測馬鈴薯轉(zhuǎn)錄因子PGSC0003DMG400012181可能與擬南芥這3個基因一樣可通過應(yīng)激因素和應(yīng)激信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的組成部分調(diào)節(jié)氮肥脅迫相關(guān)基因的表達(dá)。本研究還發(fā)現(xiàn)，馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子PGSC0003DMG400025390、PGSC0003DMG400011046和PGSC0003DMG400027904未與擬南芥的任何AP2轉(zhuǎn)錄因子聚為一類，而單獨(dú)聚為另一類，推測其可能是馬鈴薯中特有的一類AP2轉(zhuǎn)錄因子，其功能有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究以馬鈴薯轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，利用生物信息學(xué)方法挖掘出18個AP2轉(zhuǎn)錄因子，不僅對其進(jìn)行理化性質(zhì)、基序、GO功能注釋和與擬南芥AP2轉(zhuǎn)錄因子親緣關(guān)系分析，對AP2轉(zhuǎn)錄因子在馬鈴薯不同部位及低氮肥脅迫下的表達(dá)譜進(jìn)行分析，初步獲得3個響應(yīng)低氮肥脅迫的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，該研究結(jié)果為豐富馬鈴薯AP2轉(zhuǎn)錄因子的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

［1］Liu Z，Saiyinduleng，Chang Q Y，et al. Identification of yellowhorn （Xanthoceras sorbifolium） WRKY transcription factor family and analysis of abiotic stress response model ［J］. Journal of Forestry Research，2021，32（3）：987-1004.

［2］李紅霞，汪 妤，張戰(zhàn)鳳，等. 植物轉(zhuǎn)錄因子與作物抗逆脅迫關(guān)系的研究進(jìn)展［J］. 麥類作物學(xué)報，2013，33（3）：613-618.

［3］Wu Z J，Li X H，Liu Z W，et al. Transcriptome-based discovery of AP2/ERF transcription factors related to temperature stress in tea plant （Camellia sinensis） ［J］. Functional Integrative Genomics，2015，15（6）：741-752．

［4］牛蘇燕，梁 芳，張珍華，等. 馬鈴薯低氮肥脅迫響應(yīng)TCP轉(zhuǎn)錄因子的鑒定與分析 ［J］. 廣西植物，2023，43（2）：293-302.

［5］夏 楊，蘇初連，晁 駿，等. 菠蘿VOZ轉(zhuǎn)錄因子序列特征及其對非生物脅迫的響應(yīng) ［J］. 西北植物學(xué)報，2018，38（7）：1228-1234.

［6］Jofuku K D，Boer B G，Montagu M V，et al. Control of Arabidopsis flower and seed development by the homeotic gene APETALA2 ［J］. Plant Cell，1994，6（9）：1211-1225.

［7］Fu F F，Xue H W. Coexpression analysis identifies Rice Starch Regulator1，a rice AP2/EREBP family transcription factor，as a novel rice starch biosynthesis regulator ［J］. Plant Physiology，2010，154（2）：927-938.

［8］Zhuang J，Deng D X，Yao Q H，et al. Discovery，phylogeny and expression patterns of AP2-like genes in maize ［J］. Plant Growth Regulation，2010，62（1）：51-58.

［9］Zhuang J，Chen J M，Yao Q H，et al. Discovery and expression profile analysis of AP2/ERF family genes from Triticum aestivum ［J］. Molecular Biology Reports，2011，38（2）：745-753.

［10］Zhuang J，Anyia A，Vidmar J，et al. Discovery and expression assessment of the AP2-like genes in Hordeum vulgare ［J］. Acta Physiologiae Plantarum，2011，33（5）：1639-1649.

［11］Zhuang J，Anyia A，Vidmar J，et al." Isolation，phylogeny and expression patterns of AP2-like genes in apple （Malus×domestica Borkh） ［J］. Plant Molecular Biology Reporter，2011，29（1）：209-216.

［12］Liu Z N，Kong L J，Zhang M，et al. Genome-wide identification，phylogeny，evolution and expression patterns of AP2/ERF genes and cytokinin response factors in Brassica rapa ssp. Pekinensis ［J］. PLoS One，2013，8（12）：e83444.

［13］Qi W W，Sun F，Wang Q J，et al. Rice ethylene-response AP2/ERF factor OsEATB restricts internode elongation by down-regulating a gibberellin biosynthetic gene ［J］. Plant Physiology，2011，157（1）：216-228.

［14］Manchado-Rojo M，Weiss J，Egea-Cortines M. Validation of Aintegumenta as a gene to modify floral size in ornamental plants ［J］. Plant Biotechnology Journal，2015，12（8）：1053-1065.

［15］Du Y J，Scheres B. PLETHORA transcription factors orchestrate de novo organ patterning during Arabidopsis lateral root outgrowth ［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2017，114（44）：11709-11714.

［16］Scheres B，Krizek B A. Coordination of growth in root and shoot apices by AIL/PLT transcription factors［J］. Current Opinion in Plant Biology，2018，41：95-101.

［17］豐 錦，陳信波. AP2/EREBP 轉(zhuǎn)錄因子在植物發(fā)育和脅迫應(yīng)答中的作用 ［J］. 生物技術(shù)通報，2011（7）：1-6.

［18］Kang H G，Kim J，Kim B，et al. Overexpression of FTL1/DDF1，an AP2 transcription factor，enhances tolerance to cold，drought，and heat stresses in Arabidopsis thaliana ［J］. Plant Science，2011，180（4）：634-641.

［19］Lim C W，Lim J，Lee S C. The pepper AP2 domain-containing transcription factor CaDRAT1 plays a negative role in response to dehydration stress［J］. Environmental and Experimental Botany，2019，164：170-180.

［20］Hui L，Wang Y，Wu M，et al. Genome-wide identification of AP2/ERF transcription factors in cauliflower and expression profiling of the ERF family under salt and drought stresses［J］. Frontiers in plant science，2017，8：946．

［21］Yoshinari A，Hosokawa T，Amano T，et al. Polar localization of the borate exporter BOR1 requires AP2-dependent endocytosis［J］. Plant Physiology，2019，179（4）：1569-1580.

［22］王 慧，劉 洪，楊奕琦，等. 馬鈴薯AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子的克隆及植物表達(dá)載體構(gòu)建 ［J］. 分子植物育種，2020，1（8）：2563-2568.

［23］Li X Q，Sveshnikov D，Zebarth B J，et al. Detection of nitrogen sufficiency in potato plants using gene expression markers［J］. American Journal Potato Research，2010，87（1）：50-59.

［24］Sharifi M，Zebarth B J，Coleman W. Screening for nitrogen-use efficiency in potato with a recirculating hydroponic system［J］. Communications in Soil Science and Plant Analysis，2007，38（3/4）：359-370.

［25］Deng W K，Wang Y B，Liu Z X，et al. HemI：a toolkit for illustrating heatmaps ［J］. PLoS One，2014，9（11）：e111988.

［26］Okamuro J K，Caster B，Villarroel R. The AP2 domain of APETALA2 defines a large new family of DNA binding proteins in Arabidopsis［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1997，94（13）：7076-7081.

［27］喬永剛，陳 亮，崔芬芬，等. 基于轉(zhuǎn)錄組金銀花AP2基因家族的生物信息學(xué)及表達(dá)分析 ［J］. 核農(nóng)學(xué)報，2019，33（9）：1698-1706.

［28］Masaki T，Mitsui N，Tsukagoshi H，et al. Activator of Spomin∷LUC1/WRINKLED1 of Arabidopsis thaliana transactivates sugar-inducible promoters［J］. Plant Cell Physiology，2005，46（4）：547-556.

［29］Kong Q，Ma W，Yang H B，et al. The Arabidopsis WRINKLED1 transcription factor affects auxin homeostasis in roots［J］. J Experimental Botany，2017，68（16）：4627-4634.

［30］Kihira M，Taniguchi K，Kaneko C，et al. Arabidopsis thaliana FLO2 is involved in efficiency of photoassimilate translocation，which is associated with leaf growth and aging，yield of seeds and seed quality［J］. Plant Cell Physiology，2017，58（3）：440-450.

［31］Chen Q，Sun J Q，Zhai Q Z，et al. The basic helix-loop-helix transcription factor MYC2 directly represses PLETHORA expression during jasmonate-mediated modulation of the root stem cell niche in Arabidopsis［J］. Plant Cell，2011，23（9）：3335-3352.