兩種蛋氨酸對大口黑鱸（Micropterus salmoide）生長性能、肌肉品質(zhì)與抗氧化能力的影響

李妹妍　楊煜潔　夏輝

摘 要：為探究在酶解羽毛粉替代魚粉的飼料中蛋氨酸對大口黑鱸（Micropterus salmoide）生長性能和肌肉品質(zhì)的影響，配制三種飼料，對照組投喂基礎(chǔ)飼料，晶體組添加晶體蛋氨酸，螯合組添加鋅螯合蛋氨酸。挑選初始體重為（9.68±0.05）g（平均值±標準差）的大口黑鱸幼魚180尾，隨機分到9個養(yǎng)殖缸中，每個養(yǎng)殖缸20尾，并將9個養(yǎng)殖缸隨機分成3組（每組3重復(fù)），進行8周養(yǎng)殖。結(jié)果表明，添加兩種蛋氨酸后，大口黑鱸WGR與SGR顯著提高（P＜0.05）。兩種蛋氨酸對大口黑鱸肌肉水分和粗脂肪均無顯著影響（P＞0.05）；晶體組肌肉粗蛋白含量顯著提高（P＜0.05），螯合組無顯著改變（P＞0.05）；兩種蛋氨酸沒有改變大口黑鱸肌肉組織學結(jié)構(gòu)和TPA數(shù)據(jù)（P＞0.05）。兩種蛋氨酸都提高了大口黑鱸血清AKP、T-SOD和T-AOC活性（P＜0.05）；同時，添加鋅螯合蛋氨酸降低了大口黑鱸血清MDA含量（P＜0.05）。綜上所述，酶解羽毛粉替代部分魚粉的飼料中添加蛋氨酸可以提高大口黑鱸的生長性能，同時不改變其肌肉品質(zhì)，并提高大口黑鱸抗氧化能力。

關(guān)鍵詞：大口黑鱸（Micropterus salmoide）；蛋氨酸；生長性能；肌肉品質(zhì)

大口黑鱸（Micropterus salmoides）又名加州鱸，屬鱸形目，太陽魚科，黑鱸屬，原產(chǎn)美國加利福尼亞州密西西比河水系，引入我國后，因其肉質(zhì)細膩鮮美、營養(yǎng)成分豐富、抗病力強、適應(yīng)溫度范圍廣、養(yǎng)殖周期短等特點，迅速成為我國主要的淡水肉食性魚類之一，我國2022年鱸魚養(yǎng)殖產(chǎn)量已達102萬噸[1]。大口黑鱸為肉食性魚類，對蛋白質(zhì)需求相對較高，目前商品飼料中，魚粉占比較高，達50%～55%[2-3]，所以亟待尋找適宜的大口黑鱸飼料魚粉替代物。羽毛粉作為家禽產(chǎn)業(yè)副產(chǎn)品之一，具有蛋白質(zhì)含量高、氨基酸含量高、抗營養(yǎng)因子少等優(yōu)點，但羽毛粉缺乏蛋氨酸和賴氨酸，用羽毛粉替代魚粉時，可能會對生物造成一定程度的應(yīng)激或者其他負面影響[4]。羽毛粉對肌肉蛋白質(zhì)和脂肪的影響可能因為生物的種類不同而不同。蔣步國等[5]實驗發(fā)現(xiàn)羽毛粉會降低奧尼羅非魚肌肉中的粗蛋白含量并提高粗脂肪含量，Cao等[6]實驗結(jié)果表明羽毛粉降低了大菱鲆肌肉中粗蛋白和粗脂肪含量，在Campos等[7]實驗中羽毛粉沒有改變歐洲鱸魚肌肉中粗蛋白和粗脂肪含量。

蛋氨酸（Met）作為魚類生長的必需氨基酸之一，生物體不能自身合成，在多種生理反應(yīng)中起到關(guān)鍵作用，如轉(zhuǎn)甲基化、抗氧化和免疫細胞的增殖和分化等[8]。近年來，對不同物種的研究證明了Met在修飾基因表達、細胞信號傳導(dǎo)、營養(yǎng)物質(zhì)代謝和免疫應(yīng)答方面有重要作用[9]，進而影響蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物在機體內(nèi)的沉積[10]。魚肉品質(zhì)受營養(yǎng)成分、理化和質(zhì)地參數(shù)等多方面的影響，主要表現(xiàn)為肌肉蛋白質(zhì)和脂肪含量。此外，質(zhì)地參數(shù)（硬度、黏附性、內(nèi)聚性、彈性和咀嚼性）也是衡量肉質(zhì)的重要指標[11]。孫樹奎等[12]實驗表明，在鯉飼料中添加晶體蛋氨酸或者微囊蛋氨酸對其生長性能均無顯著影響，但提高了肌肉中粗脂肪的含量。毛華東等[8]發(fā)現(xiàn)，添加蛋氨酸可以提高綠鰭馬面鲀幼魚生長性能，提高機體抗氧化能力，但過高會降低肌肉粗蛋白和粗脂肪含量。不同形式的蛋氨酸對生物的影響不同，鋅螯合蛋氨酸是一種新型飼料添加劑，具有可溶性強，吸收率高，穩(wěn)定性好等優(yōu)點[13]。目前，有關(guān)蛋氨酸對大口黑鱸的影響方面的研究尚少，本研究旨在探討酶解羽毛粉替代魚粉后，添加蛋氨酸（晶體蛋氨酸與鋅螯合蛋氨酸）對大口黑鱸生長性能肌肉品質(zhì)和抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計與飼料制作

本試驗主要探究用25%的酶解羽毛粉替代魚粉后，添加兩種蛋氨酸對大口黑鱸的影響。以25%的酶解羽毛粉替代魚粉作為基礎(chǔ)日糧，在此基礎(chǔ)上，分別添加晶體蛋氨酸和鋅螯合蛋氨酸，對大口黑鱸幼魚進行8周養(yǎng)殖。分析兩種蛋氨酸添加對大口黑鱸的生長性能、肌肉品質(zhì)和抗氧化能力產(chǎn)生的影響。

試驗飼料利用魚粉、豆粕、酶解羽毛粉作為蛋白源，按表1配制成三種試驗飼料，分別記為對照組（硫酸鋅）、晶體組（添加晶體蛋氨酸）和螯合組（添加鋅螯合蛋氨酸）。將所有原料通過粉碎機研磨成細粉，經(jīng)80目篩過濾，逐級混勻后放入攪拌機充分混合均勻，再用膨化機擠壓膨化為直徑2.5 mm的飼料顆粒。在通風處干燥約8 h，將干燥的飼料留樣用于測定飼料營養(yǎng)成分，其余飼料儲存在-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗用魚與飼養(yǎng)管理

試驗用大口黑鱸幼魚購于天津市某養(yǎng)殖場，品種為優(yōu)鱸3號，經(jīng)過2周暫養(yǎng)馴化后，從中選取魚體健壯、規(guī)格均一（9.68 g±0.05 g）的大口黑鱸180尾，隨機分到9個養(yǎng)殖缸中，每缸20尾，并將9個養(yǎng)殖缸隨機分成3組。養(yǎng)殖試驗為期56 d，每天定時投喂2次（8：00和17：00），每次投喂體重的2%～3%，并于投喂1 h后吸底以便清除殘餌。24 h供氧。每天檢測水中氨氮、溶氧、pH值、溫度等。養(yǎng)殖期間，水中氨氮＜0.50 mg/L，溶解氧（5.90±0.61）mg/L，pH值7.5±0.5，水溫（25.50±1.3）℃。每天定時排污及換水，換水量為1/2。養(yǎng)殖期間記錄大口黑鱸的死亡狀況。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，統(tǒng)計每缸大口黑鱸的尾數(shù)，稱取最終重量以及采食量，計算存活率（SR）、增重率（WGR）、特定增長率（SGR）和飼料系數(shù)（FCR）。饑餓24 h后，每個缸中隨機選取9尾魚用MS-222麻醉，紗布吸干魚體表面水分后稱重，測體長和全長，計算肥滿度（CF）。之后在冰上進行尾靜脈采血，于4 ℃靜置12 h，3 000 r/min離心10 min后取上清，至于-80 ℃?zhèn)溆谩Ｈ?nèi)臟及肝臟進行稱重，計算肝體比（HSI）和臟體比（VSI）。取3尾大口黑鱸背鰭下方相同位置的肌肉，測定肌肉紋理數(shù)據(jù)，其余放入離心管中備用，用于測定肌肉中水分、粗蛋白、粗脂肪。另每缸隨機選取2尾魚，用于測定全魚水分、粗蛋白和粗脂肪。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 飼料、肌肉及全魚組成

按照國標方法測定水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分。

1.4.2 肌肉組織學

將同一位置的背部肌肉樣本放入組織固定液（乙醇∶冰醋酸∶甲醛=17∶1∶2）中經(jīng)脫水、石蠟包埋后制成切片后，用光學顯微鏡觀察肌肉形態(tài)。

1.4.3 肌肉紋理輪廓分析

每組三尾魚的樣本用于紋理輪廓分析（TPA），包括：硬度、內(nèi)聚性、彈性、咀嚼性和黏附性。

1.4.4 酶活測定

使用南京建成生物工程研究所試劑盒測定酶活。用于稀釋的組織勻漿液為：0.02 M TRIS-HCl，0.25 M蔗糖，2 mM EDTA，0.1 M氟化鈉，0.5 mM甲基磺酰氟和0.01 M巰基乙醇，pH值7.4。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)用平均值+標準差（mean±SD）表示，采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析（one-way ANOVA），差異顯著者用Dancons進行多重比較，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 兩種蛋氨酸對大口黑鱸生長性能和形態(tài)的影響

飼料中蛋氨酸的添加對大口黑鱸的SR、FCR、VSI和CF無顯著影響（P＞0.05）。晶體組和螯合組WGR和SGR顯著高于對照組（P＜0.05），但晶體組和螯合組之間無顯著差異（P＞0.05）。蛋氨酸的添加增加了大口黑鱸的HSI，晶體組HSI最高，顯著高于對照組（P＜0.05），但螯合組與其他兩組間均無顯著差異（P＞0.05），見圖1。

2.2 兩種蛋氨酸對大口黑鱸全魚和肌肉的營養(yǎng)成分的影響

兩種蛋氨酸的添加沒有顯著改變大口黑鱸全魚水分（ P ＞0.05），但全魚粗脂肪含量顯著提高 （ P ＞0.05）。與對照組相比，螯合組全魚粗蛋白含量顯著提高（P＜0.05），晶體組無顯著差異（P＞0.05）。大口黑鱸肌肉中的水分和粗脂肪沒有顯著差異（P＞0.05），晶體組肌肉粗蛋白含量顯著高于其他兩組（P＜0.05），見表2。

2.3 兩種蛋氨酸對大口黑鱸肌肉組織學切片的影響

兩種蛋氨酸的添加，沒有改變大口黑鱸背部肌肉的形態(tài)。見圖2。

2.4 兩種蛋氨酸對大口黑鱸肌肉質(zhì)構(gòu)特性的影響

飼料中添加蛋氨酸對大口黑鱸肌肉的硬度、黏附性、內(nèi)聚性、彈性和咀嚼性的影響不顯著（P＞0.05），見表3。

縮放比例為60 μm。En表示肌內(nèi)膜；MF表示肌纖維；N表示細胞核。

2.5 兩種蛋氨酸對大口黑鱸非特異性免疫與抗氧化性能的影響

兩種蛋氨酸均顯著提高了血清中堿性磷酸酶（AKP）的活性（P＜0.05），且晶體組顯著高于螯合組，血清酸性磷酸酶（ACP）活性無顯著差異（P＞0.05）。肝臟中AKP與ACP活性均無顯著差異（P＞0.05）。飼料中添加蛋氨酸顯著提高了抗氧化酶的活性，血清中總抗氧化能力（T-AOC）與總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性均顯著高于對照組（P＜0.05）。與對照組相比，鋅螯合蛋氨酸顯著降低了血清中丙二醛（MDA）的含量（P＜0.05），見表4。

3 討論

3.1 兩種蛋氨酸對大口黑鱸生長性能的影響

生長性能是魚類營養(yǎng)狀況的重要指標。作為蛋白質(zhì)翻譯的初始氨基酸，Met是控制蛋白質(zhì)合成代謝的限速氨基酸，對水生動物的生長性能有著顯著的影響。在本試驗中，與對照組相比，兩種蛋氨酸的添加均顯著提高了大口黑鱸的WGR與SGR，這在其他水產(chǎn)養(yǎng)殖生物中也有類似結(jié)果[14-17]。

3.2 兩種蛋氨酸對大口黑鱸肌肉質(zhì)地的影響

魚類肌肉營養(yǎng)成分是肌肉營養(yǎng)價值的體現(xiàn)，同時直接影響其肌肉品質(zhì)[16]。在常規(guī)營養(yǎng)組成中，蛋白質(zhì)含量和脂肪含量對于評價肌肉的營養(yǎng)價值十分重要，肌肉的蛋白質(zhì)水平可以反映肌肉最基本的營養(yǎng)水平[15]。在本試驗中，添加蛋氨酸使大口黑鱸全魚粗脂肪含量升高，但肌肉中粗脂肪含量沒有差異，脂肪可能沉積于內(nèi)臟團中。與對照組相比，晶體組大口黑鱸肌肉中蛋白質(zhì)含量增加，螯合組無顯著影響，而三組間肌肉脂肪含量均無顯著差異。蛋氨酸的添加對魚體蛋白的影響可能因為魚的品種、飼料配方結(jié)構(gòu)、氨基酸補充的種類和比例及研究條件不同而產(chǎn)生不同結(jié)果[14-15，19-20]。

質(zhì)構(gòu)特性是一種感官質(zhì)量，表現(xiàn)為機械特性，在肌肉食品中表現(xiàn)為硬度、黏附性、內(nèi)聚性、彈性和咀嚼性，是評價魚肉品質(zhì)高低的重要指標[21]。肌肉纖維直徑對肉的質(zhì)地特征有很大影響[11]。在本試驗中，大口黑鱸背部肌肉組織學結(jié)構(gòu)與TPA數(shù)據(jù)均無顯著改變，說明了飼料中蛋氨酸的添加并未使大口黑鱸的肌肉質(zhì)地發(fā)生改變。

3.3 兩種蛋氨酸對非特異性免疫與抗氧化指標的影響

AKP和ACP被認為是必不可少的免疫指標，它們反映了免疫系統(tǒng)中巨噬細胞激活細胞內(nèi)消化和吞噬抗原的能力[22]。AKP是一種特異性較低的膜結(jié)合酶，主要參與體內(nèi)物質(zhì)（如磷酸基團）的轉(zhuǎn)運和代謝以及動物骨骼的礦化，骨骼釋放的AKP與成骨作用有關(guān)[23]。幼年動物血液AKP主要來自骨骼，隨著動物長大成熟和骨骼成年化，來自骨骼的AKP逐漸減少[24]。在本試驗中，兩種蛋氨酸均顯著提高了幼魚血清AKP活性，但肝臟中AKP活性無明顯差異，推測血清中的AKP來自成骨細胞和生長中的骨軟骨細胞。結(jié)合上述大口黑鱸生長性能表現(xiàn)，認為血清中AKP活性上升是因為大口黑鱸幼魚的快速生長導(dǎo)致的。

在抗氧化活性方面，機體抗氧化作用有多層次相互協(xié)同的特點，T-AOC是反映機體內(nèi)各種抗氧化酶的總活性，具有清除活性氧、判斷機體健康狀況的重要作用。T-SOD是抗氧化酶之一，其功能是通過刺激兩個超氧自由基解離成過氧化氫和氧來清除細胞環(huán)境中的有害活性氧（ROS）[25]。在本試驗中，兩種蛋氨酸添加后，血清T-AOC活性和T-SOD活性都顯著升高。MDA是ROS引起脂質(zhì)過氧化和氧化損傷的重要指標，可以反映魚類的抗氧化狀況。本研究結(jié)果表明，鋅螯合蛋氨酸的添加，使大口黑鱸血清中MDA含量顯著減少，說明蛋氨酸對大口黑鱸抗氧化能力有增強作用，降低其對機體的損害。這一觀察結(jié)果與先前Kishawy等[26]的研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

在用25%的酶解羽毛粉替代魚粉后，兩種蛋氨酸的添加都能提高大口黑鱸的生長性能，同時不改變大口黑鱸的肌肉質(zhì)地，且均能提高大口黑鱸的抗氧化能力。

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Effects of two types of methionine on growth performance， muscle quality and antioxidant capacity of largemouth bass （Micropterus salmoide）

LI Meiyan， YANG Yujie， XIA Hui

（Ocean College， Hebei Agriculture University， Qinhuangdao 066000，China）

Abstract：To investigate the effect of methionine on growth performance and muscle quality of the largemouth bass Micropterus salmoide in feeds with keratinase-hydrolyzed feather meal replacing fish meal. Three diets were formulated， with the control group on a basal diet， the crystalline group with crystalline methionine， and the chelated group with zinc chelated methionine. 180 juvenile largemouth bass with an initial body weight of （9.68±0.05）g （mean±SD） were selected and randomly assigned to 9 culture tanks with 20 fish each， and the 9 tanks were randomly divided into 3 groups and cultured for 8 weeks. The results showed that the addition of two kinds of methionine significantly increased the WGR and SGR of largemouth bass （P<0.05）. Two kinds of methionine had no significant effect on muscle moisture and crude lipid of largemouth bass （P>0.05）， muscle crude protein content was significantly increased in the crystalline group （P<0.05）， and there wasno significant change in the chelated group （P>0.05）， and the two types of methionine did not change the histological structure of largemouth bass muscle and TPA data （P>0.05）. Two kinds of methionine increased the activities of AKP， T-SOD and T-AOC in serum of largemouth bass （P<0.05）， while the addition of zinc chelated methionine decreased serum MDA content of largemouth bass （P<0.05）. In conclusion， the addition of methionine to feeds in which keratinase-hydrolyzed feather meal replaces part of the fish meal can improve the growth performance of largemouth bass without altering its muscle quality and improve the antioxidant capacity of largemouth bass.

Key words：Micropterus salmoide; methionine; growth performance; muscle quality

（收稿日期：2023-11-15）

作者簡介：李妹妍（1995-），女，在讀研究生，研究方向：水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料。E-mail：245428126@qq.com。