QuEChERS-HPLC 法測定食用菌中克百威及3-羥基克百威的殘留量

◎ 蘇肯明，羅詩泳

（佛山市沃特測試技術(shù)服務(wù)有限公司，廣東 佛山 528000）

克百威（carbofuran），又名呋喃丹、蟲螨威，是一種因具有高效、低毒、選擇性強等優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用的氨基甲酸酯類農(nóng)藥。克百威在農(nóng)作物中，除了本體殘存外，還存在相關(guān)降解物，其降解物又分為3-羥基克百威（3-hydroxycarbofuran）和3-酮基克百威（Carbofuran-3-keto）。其中，3-羥基克百威毒性大[1]。GB 2763—2021《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定，克百威殘留物為克百威和3-羥基克百威之和，在食用菌中的最大殘留限量定為 0.02 mg·kg-1[2-3]。

現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)和其他標(biāo)準(zhǔn)體系中，較為常用的有C18 固相萃取小柱、Carb/NH2固相萃取小柱、QuEChERS 凈化管、凝膠色譜儀等方法，多使用OPA 進(jìn)行衍生，再柱后衍生法進(jìn)行測定，如GB 23200.112—2018《植物源性食品中9 種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-柱后衍生法》和NY/T 761—2008 的第三部分[4-5]。目前，國內(nèi)外的主流檢測儀器有GC、HPLC、GC-MS/MS、HPLCMS/MS 等。由于克百威屬于極性強、熱穩(wěn)定性較差的物質(zhì)，因此，更適合使用HPLC 或HPLC-MS/MS 進(jìn)行檢測。雖然HPLC-MS/MS 技術(shù)已日趨成熟，但其成本昂貴，在一般實驗室中難以得到推廣和應(yīng)用。用高效液相色譜法檢測克百威和3-羥基克百威，具有選擇性強、靈敏度較高、重現(xiàn)性較好，且易于實現(xiàn)等優(yōu)點。

基于此，本研究期望建立一種液相色譜法檢測食用菌中克百威和3-羥基克百威的分析方法，旨在保證食用菌的質(zhì)量安全、加強環(huán)境保護。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀 U3000 analytical（配FLD 檢測器，Thermo Fisher）；高速均質(zhì)儀（德國IKA 集團）；多功能渦旋混合器（上海力辰）；24 位氮吹儀（上海安浦）；冷凍離心機（湖南湘儀）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與試劑

克百威標(biāo)準(zhǔn)品、3-羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)品（1 000 mg·L-1，上海安浦）；乙腈、甲醇（色譜純，默克）；MgSO4、NaCl（分析純，國藥）；Na3C6H5O7·2H2O、C6H6Na2O7·1.5H2O（分析純，阿拉丁）；PSA（分析純，上海安浦）；Milli-Q 超純水。

1.3 試驗方法

1.3.1 溶液配制

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：吸取一定量的克百威、3-羥基克百威貯備液，置棕色容量瓶中，用乙腈稀釋成濃度為5 mg·L-1混合標(biāo)準(zhǔn)工作液避光-18 ℃及以下條件保存，有效期1 個月。用乙腈逐級稀釋成濃度分別為 0.05、0.10、0.20、0.50、1 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.3.2 樣品前處理

稱取10 g 食用菌試樣于50 mL 離心管中，加入20 mL 0.1 % 甲酸乙腈溶液，用高速均質(zhì)機20 000 r·min-1均質(zhì)1 min，加入4 g MgSO4、1 g NaCl、1 g Na3C6H5O7·2H2O、0.5 g C6H6Na2O7·1.5H2O及1 顆陶瓷均質(zhì)子，3 000 r·min-1渦旋1 min 后8 000 r·min-1冷凍離心5 min[6]。取10 mL 上清液加入含1 500 mg MgSO4、250 mg PSA 的15 mL 塑料離心管中，3 000 r·min-1渦旋1 min，8 000 r·min-1離心5 min。取2 mL 上清液于40 ℃水浴氮吹至近干，殘渣用乙腈定容至1 mL，過微孔濾膜，用于測定[7]。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：C18 柱，150×4.6 mm，5 μm；流動相：甲醇+0.1 %甲酸溶液=30+70；流速：1 mL·min-1；熒光檢測器：λem=209 nm，λex=307 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍和檢出限

克百威、3-羥基克百威混合系列工作液濃度分別為 0.05、0.10、0.20、0.50、1 mg·L-1。以目標(biāo)農(nóng)藥的保留時間定性，被測定的試樣中克百威、3-羥基克百威的色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中所對應(yīng)的色譜峰的保留時間作比較，相差應(yīng)在±0.05 min 之內(nèi)。

采用外標(biāo)法定量，以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中克百威、3-羥基克百威的質(zhì)量濃度和色譜峰的峰面積，繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如表1 所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜如圖1 所示。在0.05～1 mg·L-1的線性范圍內(nèi)，克百威相關(guān)系數(shù)（r2）為0.998 95，3-羥基克百威相關(guān)系數(shù)（r2）為0.999 44，定量限均為0.01 mg·kg-1，各考察參數(shù)均滿足標(biāo)準(zhǔn)限值要求。

表1 克百威、3-羥基克百威線性關(guān)系與檢出限表

圖1 克百威、3-羥基克百威的線性曲線圖

2.2 方法的準(zhǔn)確度和精密度

準(zhǔn)確度指在一定實驗條件下多次重復(fù)性試驗測定值與參考值之間的接近程度。在本方法中，準(zhǔn)確度以試驗回收率進(jìn)行評估，精密度以變異系數(shù)（CV）進(jìn)行評估。

取18 份陰性食用菌樣品，每份試樣質(zhì)量為10 g，分別添加克百威、3-羥基克百威混合標(biāo)準(zhǔn)溶液至0.05、0.10、0.20 mg·kg-13 個水平濃度，每個水平做6 個平行試樣。樣品按2.3.3 步驟進(jìn)行前處理后進(jìn)行上機測試，分別計算平均值、平均回收率和實驗室內(nèi)變異系數(shù)。結(jié)果顯示，當(dāng)添加濃度為0.05、0.10、0.20 mg·kg-1時，克百威回收率為85.29%～101.1 %，CV 值（n=6）為1.48～6.25；3-羥基克百威回收率為93.04 %～98.29 %，CV 值（n=6）為1.16～1.77。具體計算結(jié)果如表2 所示，加標(biāo)圖譜如圖2 所示。結(jié)果表明，克百威、3-羥基克百威的回收率和實驗室內(nèi)變異系數(shù)均滿足規(guī)定要求。

表2 克百威、3-羥基克百威回收率和變異系數(shù)測定結(jié)果表

圖2 添加水平為0.20 mg·kg-1 樣品的液相色譜圖

3 結(jié)語

本試驗建立了一種經(jīng)QuEChERS 凈化，液相色譜法（HPLC）測定食用菌中克百威、3-羥基克百威殘留量的檢測方法。QuEChERS 凈化法是目前用于農(nóng)殘檢測的熱門前處理方法，具有步驟便捷、試驗耗時短、過程損失小的優(yōu)勢，整體過程具有簡單、高效、成本低、易于推廣的特點，且該試驗方法線性范圍、檢測限、精密度和準(zhǔn)確度均滿足現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的要求，可以為今后建立食用菌的其他農(nóng)藥殘留檢測提供參考。