CD103和E-鈣黏蛋白在結(jié)腸癌中的表達(dá)及臨床意義研究

【摘要】目的 分析CD103和E-鈣黏蛋白在結(jié)腸癌中的表達(dá)及臨床意義研究。方法 將2019年1月至2020年12月桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的80例結(jié)腸癌患者作為觀察組，同時(shí)另選80例病理結(jié)果正常結(jié)腸組織者作為對(duì)照組，對(duì)其臨床資料進(jìn)行回顧性研究。采用免疫組化法檢測(cè)CD103和 E-鈣黏蛋白在結(jié)腸癌組織、正常組織中的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)水平與分化程度、年齡、Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 觀察組受試者CD103表達(dá)水平高于對(duì)照組，E-鈣黏蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組（均Plt;0.05）。觀察組受試者CD103陽(yáng)性率為46.25%、E-鈣黏蛋白陽(yáng)性率51.25%，高于對(duì)照組的1.25%、2.50%（均Plt;0.05）。受試者的CD103、E-鈣黏蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在性別、年齡、腫瘤大小方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Pgt;0.05）；低分化、Dukes分期C+D期受試者CD103、E-鈣黏蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率低，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移受試者陽(yáng)性表達(dá)率高（均Plt;0.05）。結(jié)論 與正常結(jié)腸組織相比，E-鈣黏蛋白在結(jié)腸癌組織呈低表達(dá)，CD103呈高表達(dá)；其異常表達(dá)在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，可作為臨床評(píng)估結(jié)腸癌侵襲、轉(zhuǎn)移的重要參考指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】結(jié)腸癌；CD103；E-鈣黏蛋白；水平表達(dá)；免疫組化檢測(cè)

中圖分類號(hào)：R446.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2096-2665.2023.10.00.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2023.10.030

結(jié)腸癌為臨床高發(fā)、常見的一種發(fā)生于結(jié)腸黏膜上皮的惡性腫瘤，占常見胃腸道惡性腫瘤第3位[1]。結(jié)腸癌具有浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特征，浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是多步驟過程，包括細(xì)胞黏附、基質(zhì)分解、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等3個(gè)步驟。結(jié)腸癌的病因較為復(fù)雜，多種因素、基因、步驟均參與疾病的發(fā)生、發(fā)展過程[2]。在這種特殊微環(huán)境的影響下，癌細(xì)胞也會(huì)受到多種調(diào)節(jié)機(jī)制的影響，如腫瘤細(xì)胞間、腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞間存在的黏附作用是產(chǎn)生這種微環(huán)境的基礎(chǔ)。整合素參與了結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展及細(xì)胞耐藥等多個(gè)重要環(huán)節(jié)，它在不同結(jié)腸癌組織中的差異表達(dá)、發(fā)揮的不同作用。整合素是機(jī)體重要的黏附分子，在結(jié)腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中的重要作用越來(lái)越受到關(guān)注[3]。CD103是整合素αEβ7的αE亞基，整合素與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移尤其是與侵襲轉(zhuǎn)移過程中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。鑒于此，本研究通過分析CD103和E-鈣黏蛋白在結(jié)腸癌中的表達(dá)情況，以期為結(jié)腸癌早期診斷、治療、預(yù)后及耐藥相關(guān)研究提供新的切入點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2019年1月至2020年12月桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的80例結(jié)腸癌患者作為觀察組，同時(shí)另選80例病理結(jié)果正常結(jié)腸組織者作為對(duì)照組，對(duì)其臨床資料進(jìn)行回顧性研究。觀察組中男性53例，女性27例；年齡53～82歲，平均年齡（61.52±3.25）歲。對(duì)照組中男性55例，女性25例；年齡55～81歲，平均年齡（60.79±4.03）歲。兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），具有可比性。本研究經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組均符合《中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）》[5]中制定相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，以排便性狀、習(xí)慣改變、黏液血便、腹瀉等為臨床主要表現(xiàn)，經(jīng)X線、CT等影像學(xué)檢查、病理檢查等明確診斷；②均為首次手術(shù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神疾病患者；②既往進(jìn)行放化療者。

1.2 檢驗(yàn)方法

1.2.1 試劑 研究使用鼠抗人CD103抗體，鼠抗人E-鈣粘蛋白抗體、檢測(cè)試劑PV-9000、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒均來(lái)源于北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 免疫組化染色法 組織切片用石蠟包埋，并脫蠟水化，室溫10 min以滅活內(nèi)源性酶，用蒸餾水洗3 min；隨后熱修復(fù)抗原，即將切片置于0.01 mol/L枸櫞酸緩沖液（pH值6.0）中，放入微波爐，溫度95 ℃，時(shí)間控制在15～20 min；然后自然冷卻20 min，再用蒸餾水進(jìn)行沖洗2次，3 min/次；再用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗2次，5 min/次。體積分?jǐn)?shù)為3%H2O2室溫下孵育10 min，PBS漂洗3次，5 min/次。一抗（鼠抗人CD103抗體，鼠抗人E-鈣粘蛋白抗體）稀釋度為（1∶200），稀釋劑為PBS；以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。4 ℃冰箱中過夜，第2天取出置室溫1 h后，PBS漂洗3次，5 min/次。滴加生物素標(biāo)記的二抗，37 ℃或室溫下孵育30 min，PBS漂洗3次，5 min/次。滴加鏈霉素化蛋白生物素復(fù)合物，37 ℃或室溫下孵育30 min，PBS沖洗3次，5 min/次，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色3～10 min。蒸餾水漂洗，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片。

1.3 觀察指標(biāo) ①觀察兩組受試者E-鈣黏蛋白、CD103水平及其陽(yáng)性率。隨機(jī)觀察切片10個(gè)高倍鏡視野，每個(gè)計(jì)算100個(gè)細(xì)胞，以此計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例。陽(yáng)性細(xì)胞的判斷：E-鈣黏蛋白表達(dá)顆粒呈棕黃色或棕褐色，主要定位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜，陽(yáng)性細(xì)胞占比低于10%則為陰性，超過10%則為陽(yáng)性；CD103陽(yáng)性表達(dá)顆粒呈棕黃色，主要定位于細(xì)胞膜，陽(yáng)性細(xì)胞占比低于10%則為陰性，超過10%則為陽(yáng)性。②觀察CD103、E-鈣黏蛋白表達(dá)水平與結(jié)腸癌臨床病理關(guān)系。對(duì)觀察組患者CD103、E-鈣黏蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行調(diào)查，主要包括性別、年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、Dukes分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 利用SPSS 22.0 軟件完成統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料用[例（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用（x±s）表示，用t檢驗(yàn)。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者CD103、E-鈣黏蛋白表達(dá)水平比較 觀察組受試者CD103表達(dá)水平高于對(duì)照組，E-鈣粘蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05），見表1。

2.2 兩組受試者CD103、E-鈣黏蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 觀察組受試者CD103陽(yáng)性率為46.25%、E-鈣黏蛋白陽(yáng)性率51.25%，高于對(duì)照組的1.25%、2.50%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05），見表2。

2.3 CD103、E-鈣黏蛋白表達(dá)水平與結(jié)腸癌臨床病理關(guān)系 受試者的CD103、E-鈣黏蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在性別、年齡、腫瘤大小方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Pgt;0.05）；低分化、Dukes分期C+D期受試者CD103、E-鈣黏蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率低，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移受試者陽(yáng)性表達(dá)率高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05），見表3。

3 討論

結(jié)腸癌為臨床常見惡性腫瘤之一，其整體5年生存率在50%左右[6]。該病早期并無(wú)明顯癥狀，且缺乏特異度高、靈敏度高的早期診斷技術(shù)，因此大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬于中晚期。隨著醫(yī)療水平的發(fā)展，人們對(duì)健康標(biāo)準(zhǔn)的日益提高，尋找更有效的治療方式和更精確的預(yù)后指標(biāo)極為迫切。目前發(fā)現(xiàn)，除了腫瘤的病理分期，組織學(xué)亞型、外科手術(shù)程度外，經(jīng)切除的腫瘤組織中腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的存在與患者的預(yù)后也存在密切關(guān)系。

CD103是整合素αEβ7的αE亞基，被認(rèn)為是一種腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的表面分子標(biāo)志物，主要表達(dá)于瘤內(nèi)T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，這兩種細(xì)胞都是抗腫瘤免疫的重要參與者。正常情況下，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與效應(yīng)T細(xì)胞通過相互調(diào)節(jié)來(lái)維持動(dòng)態(tài)平衡，從而保持免疫的穩(wěn)定。但在腫瘤微環(huán)境中，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞被打亂，重新編程，抗惡性腫瘤的免疫被抑制，癌癥細(xì)胞快速增殖發(fā)展。研究表明[7]，CD103 在T細(xì)胞定位中具有重要作用，與CD103negTIL相比，CD103+TIL更能明細(xì)抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的活化，因此CD103被多數(shù)學(xué)者認(rèn)為能對(duì)腫瘤浸潤(rùn)性Treg進(jìn)行一定程度消除的有趣目標(biāo)。本組中觀察組CD103表達(dá)水平高于對(duì)照組，其陽(yáng)性率46.25%，高于對(duì)照組的1.25%（Plt;0.05），表明與正常結(jié)腸組織相比，CD103表達(dá)在結(jié)腸癌組織中表達(dá)升高。與結(jié)腸癌臨床病理關(guān)系發(fā)現(xiàn)，CD103表達(dá)與腫瘤分化程度、分期、轉(zhuǎn)移等存在密切關(guān)系，在Dukes分期C+D及低分者中CD103表達(dá)則明顯偏低，轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率更高（Plt;0.05），提示隨著結(jié)腸癌病情的惡化，相應(yīng)的CD103+TIL也隨之降低了對(duì)腫瘤免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)能力，癌細(xì)胞組織發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的幾率也大大增加。

有關(guān)研究也表明[8]，CD103+淋巴細(xì)胞是結(jié)直腸癌內(nèi)部微環(huán)境重要的組成部分，與患者生存率呈密切關(guān)系。E-鈣黏蛋白是一種強(qiáng)有力的黏附分子，由上皮型鈣黏附素（CDH1）基因所編碼，負(fù)責(zé)黏附臨近的細(xì)胞。在正常結(jié)腸黏膜，E-鈣黏蛋白存在上皮細(xì)胞細(xì)胞膜上，其作用即是將細(xì)胞黏附一起，讓細(xì)胞形成有固定結(jié)構(gòu)和形態(tài)的組織，其表達(dá)異?；蛉笔Ь山档徒M織內(nèi)細(xì)胞的黏附程度，致使細(xì)胞活性增加，為癌細(xì)胞對(duì)周圍組織的侵入創(chuàng)造了條件。既往對(duì)E-鈣黏蛋白的研究均表明[9]，在多數(shù)癌癥患者腫瘤進(jìn)展期均發(fā)現(xiàn)E-鈣黏蛋白的表達(dá)發(fā)生了一定的變化，而這變化通常導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的侵襲性的增加，以及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移率的增高。本次研究結(jié)果顯示，觀察組E-鈣黏蛋白表達(dá)低于對(duì)照組，其陽(yáng)性率51.25%，高于對(duì)照組的2.50%（Plt;0.05），表明與正常結(jié)腸組織相比，E-鈣黏蛋白表達(dá)在結(jié)腸癌組織中表達(dá)降低。與結(jié)腸癌臨床病理關(guān)系發(fā)現(xiàn)，CD103表達(dá)與腫瘤分化程度、分期、轉(zhuǎn)移等存在密切關(guān)系，在Dukes分期C+D及低分者中E-鈣黏蛋白表達(dá)表達(dá)明顯更低，轉(zhuǎn)移者陽(yáng)性率更高（Plt;0.05），表明隨著結(jié)腸癌惡性程度的發(fā)展進(jìn)程加劇，E-鈣黏蛋白表達(dá)也隨之降低。在相關(guān)的體外實(shí)驗(yàn)中[10]，也證明這一結(jié)論，敲低SW480細(xì)胞中E-鈣黏蛋白表達(dá)能夠增強(qiáng)SW480細(xì)胞的侵襲能力，可見E-鈣黏蛋白表達(dá)的降低，會(huì)在一定程度上促進(jìn)結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，使患者預(yù)后不良。由此可見，CD103、E-鈣黏蛋白在結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。

綜上所述，與正常結(jié)腸組織相比，E-鈣黏蛋白在結(jié)腸癌組織呈低表達(dá)，CD103呈高表達(dá)；其異常表達(dá)在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，可作為臨床評(píng)估結(jié)腸癌侵襲、轉(zhuǎn)移的重要參考指標(biāo)。

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