微生態(tài)制劑對錦鯉生長、消化酶活性和表觀消化率的影響

史東杰++梁擁軍++許金華+孫硯勝+張欣

摘要：在基礎(chǔ)飼料中分別添加質(zhì)量為0、0.005%、0.01%、0.02%、0.04%微生態(tài)制劑干粉，研究微生態(tài)制劑對錦鯉生長、腸道消化酶活性、表觀消化率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同濃度微生態(tài)制劑對錦鯉的生長均有促進作用，其中002%添加組的增質(zhì)量率、特定生長率最高，較對照組分別顯著增加62.29%、50.00%，但飼料系數(shù)顯著降低1667%。在20、30、40 d時，各微生態(tài)制劑添加組的腸胰蛋白酶活性、干物質(zhì)表觀消化率較對照組均顯著提高，其中20 d時Ⅳ組的胰蛋白酶活性、干物質(zhì)表觀消化率顯著高于其他試驗組。10、20、30、40 d時，各微生態(tài)制劑添加組的腸脂肪酶活性較對照組均有所提高，其中30、40 d時各添加組的腸脂肪酶活性顯著增加。各微生態(tài)制劑添加量對試驗魚腸淀粉酶活性無顯著性影響。說明飼料中添加微生態(tài)制劑能顯著提高錦鯉生長性能，增強腸道消化酶活性，并在一定程度上提高錦鯉對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，適宜的添加量為0.02%，適宜持續(xù)投喂時間為20 d。

關(guān)鍵詞：微生態(tài)制劑；錦鯉；生長性能；消化酶；表觀消化率

中圖分類號： S965.812文獻標志碼： A[HK]

文章編號：1002-1302（2017）13-0136-03[HS）][HT9.SS]

收稿日期：2015-12-28

基金項目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項（編號：GSY20160201）；北京淡水魚種質(zhì)資源保存項目（編號：KJCX20140112）；北京市農(nóng)林科學院觀賞魚與熱水性名優(yōu)魚類創(chuàng)新團隊項目（編號：BJRKYGSYTD2016）。

作者簡介：史東杰（1985—），女，北京人，碩士，工程師，主要從事觀賞魚繁育及養(yǎng)殖技術(shù)研究。E-mail：sdj19850104@163.com。

[ZK）]

微生態(tài)制劑是從天然環(huán)境中篩選分離出來的多種有益微生物的復(fù)合物，富含蛋白質(zhì)、脂肪及其他生理活性物質(zhì)，具有無殘留、無抗藥性、無污染等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動物養(yǎng)殖[1-3]。已有研究表明，微生態(tài)制劑可平衡或改善魚類消化系統(tǒng)有益菌群、提高魚類血清免疫力、促進生長發(fā)育，同時微生態(tài)制劑可有效分解養(yǎng)殖水環(huán)境中的氨氮、亞硝酸鹽等有害物質(zhì)，改善養(yǎng)殖環(huán)境，提高魚類生長性能和抗病力[4-6]。近年來，有關(guān)微生態(tài)制劑應(yīng)用于魚類生長及消化酶活性的研究較多，是水產(chǎn)動物飼料添加劑的應(yīng)用熱點，但關(guān)于微生態(tài)制劑調(diào)節(jié)錦鯉生長、消化酶活性及表觀消化率的研究尚少。本試驗通過在錦鯉飼料中添加微生態(tài)制劑粉劑，研究其對錦鯉生長、腸道消化酶活性及表觀消化率的影響，為錦鯉健康養(yǎng)殖提供技術(shù)參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗魚來自北京市水產(chǎn)科學研究所小湯山良種繁育中心自行繁育的紅白錦鯉。試驗用基礎(chǔ)飼料不含微生態(tài)制劑（表1），微生態(tài)制劑購自康源綠洲生物科技（北京）有限公司，含有枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）、蛋白酶、玉米蛋白粉、藻類營養(yǎng)素、光合催化劑、活性酶、免疫因子劑及代謝產(chǎn)物等多種物質(zhì)，有效活菌數(shù)≥2 000億/g，按分組配比加入基礎(chǔ)飼料的預(yù)混料中。

1.2試驗設(shè)計及飼養(yǎng)管理

選取體質(zhì)健壯、規(guī)格整齊的錦鯉225尾，初始體質(zhì)量為（183.76±5.48） g，隨機分配15個小型循環(huán)水養(yǎng)殖缸（1.5 m×1.5 m×1.5 m）內(nèi)進行養(yǎng)殖，每缸15尾，實際養(yǎng)殖水容積為2.5～2.8 m3。試驗分為5組，1個對照組（Ⅰ組）、4個試驗組（Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組），每組設(shè)3個平行，Ⅰ組投喂基礎(chǔ)飼料，其他試驗組分別添加微生態(tài)制劑干粉質(zhì)量為0005%（Ⅱ組）、0.01%（Ⅲ組）、0.02%（Ⅳ組）、0.04%（Ⅴ組）。試驗魚試養(yǎng)7 d后開始正式試驗，分別投喂對應(yīng)的試驗飼料，試驗周期為40 d。試驗期和試養(yǎng)期飼養(yǎng)條件相同，養(yǎng)殖用水為地下井水，水溫為（18±1） ℃，pH值為7.4，溶氧量≥5 mg/L，光照為自然光源。每日投喂2次（09：30、17：00），投喂量為魚體質(zhì)量的3%～3.5%，根據(jù)魚體的攝食情況作適當調(diào)整。[JP]

1.3生長性能指標的測定

[JP2]養(yǎng)殖試驗結(jié)束時，禁食24 h，測量每缸試驗魚體質(zhì)量。選用增質(zhì)量率、特定生長率、飼料系數(shù)、成活率作為主要生長性能指標。增質(zhì)量率（WGR，%）=（終末體質(zhì)量-初始體質(zhì)量）/初始體質(zhì)量×100%；特定生長率（SGR，%/d）=（ln終末魚體質(zhì)量-ln初始魚體質(zhì)量）/飼養(yǎng)時間（d）×100%；飼料系數(shù)（FCR）=總投喂量/（終末體質(zhì)量+死魚質(zhì)量-初始體質(zhì)量）；成活率（SR，%）=試驗?zāi)~尾數(shù)/試驗初魚尾數(shù)×100%。[JP]

1.4消化酶活性的測定

在試驗10、20、30、40 d時取樣，每次取樣前禁食24 h。每缸隨機選取試驗魚6尾，在冰盤上迅速解剖，分離出整個腸道，雙蒸水沖洗，迅速用液氮冷凍2 min，放入-80 ℃超低溫冰箱保存，備測胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等消化酶的活性。胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的測定采用北京澳聯(lián)雅實驗設(shè)備中心的試劑盒進行，具體測定方法參照試劑盒說明書。

[HTK]1.5表觀消化率的測定[HT]

在試驗后10、20、30、40 d取樣，每次取樣時，在1次投喂后3 h將試驗魚撈起，解剖取出腸道，擠出腸道后1/3的糞便，用清水洗去腸道黏液。試驗連續(xù)重復(fù)多次，待收集到足夠的糞便樣品后于75 ℃下烘干至恒質(zhì)量，備測干物質(zhì)表觀消化率。Cr2O3采用Frukawa等的酸消化比色法[7]測定。每個樣品測定3個平行樣。

干物質(zhì)表觀消化率（ADC，%）=100%-100%×飼料中的Cr2O3含量/糞便中的Cr2O3含量。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析endprint

試驗數(shù)據(jù)用“平均值±標準差”表示。采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析，用多重比較法進行組間差異顯著性分析，顯著水平為0.05。

2結(jié)果與分析

2.1飼料中添加微生態(tài)制劑對錦鯉生長性能的影響

不同濃度微生態(tài)制劑對錦鯉的生長均有促進作用（表2）。與對照組Ⅰ相比，Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組的增質(zhì)量率、特定生長率均顯著增加，增質(zhì)量率分別提高8.93%、37.02%、62.30%，特定生長率分別提高14.29%、28.57%、50.00%，但其飼料系數(shù)顯著降低8.97%、8.97%、16.67%。試驗組Ⅴ與對照組相比，增質(zhì)量率提高7.06%，特定生長率提高429%，飼料系數(shù)降低1.28%，且均無顯著性差異。不同添加組對成活率無顯著影響。結(jié)果表明，飼料添加0.02%微生態(tài)制劑對錦鯉促生長效果最佳。

2.2飼料中添加微生態(tài)制劑對錦鯉消化酶活性的影響

與對照組相比，20、30、40 d時各微生態(tài)制劑添加組的腸胰蛋白酶活性均顯著提高，且20 d時Ⅳ組的胰蛋白酶活性顯著高于其他試驗組（表3）。與對照組相比，10、20、30、40 d時各微生態(tài)制劑添加組的腸脂肪酶活性均有所提高，10、20 d時各添加組的腸脂肪酶活性增加不顯著，30、40 d時各添加組的腸脂肪酶活性顯著增加。與對照組相比，10、20、30、40 d時，各微生態(tài)制劑添加量對試驗魚腸淀粉酶活性均無顯著性影響。說明微生態(tài)制劑的適量添加能夠提高錦鯉腸道內(nèi)胰蛋白酶活性、脂肪酶活性，但對淀粉酶活性無顯著影響，適宜的添加量為0.02%，適宜持續(xù)投喂時間為20 d。

[HTK]2.3飼料中添加微生態(tài)制劑對錦鯉干物質(zhì)表觀消化率的影響[HT]

飼料中添加微生態(tài)制劑可以提高飼料中營養(yǎng)成分的表觀消化率，并在一定程度上提高錦鯉對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的利用率（表4）。與對照組相比，20、30、40 d時各微生態(tài)制劑添加組的干物質(zhì)表觀消化率均顯著提高，20 d時Ⅳ組的干物質(zhì)表觀消化率顯著高于其他試驗組，為98.46%±1.15%。說明以干物質(zhì)表觀消化率為指標，添加量為0.02%，持續(xù)投喂20 d時效果最好。

3討論

大量研究表明，在水產(chǎn)動物飼料中添加微生態(tài)制劑可以促進供試動物的生長性能，提高飼料利用率[7-9]。如付鑫等對幼刺參[10]、仇明等對斑點叉尾[XCZ11.tif，JZ][11]、白利丹等對錦鯉[12]、艾炎軍等對大鱗副泥鰍[13]、劉曉勇等對雜交鱘幼魚[14]的研究均表明，適當添加微生態(tài)制劑可促進動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，加強魚體消化能力，調(diào)節(jié)代謝，改善生長性能。在本試驗中，不同濃度微生態(tài)制劑對錦鯉的生長均有促進作用，其中0.02%添加組的增質(zhì)量率、特定生長率最高，較對照組分別顯著增加62.29%、50.00%，但飼料系數(shù)顯著降低 16.67%。這表明本試驗與上述研究一致，微生態(tài)制劑的添加均對水產(chǎn)動物產(chǎn)生了積極的作用。在本試驗中，0.04%添加組對增質(zhì)量率、特定生長率、飼料系數(shù)的影響與其他添加組較對照組相比有所下降，說明過量添加微生態(tài)制劑可能會有不利的影響。例如，丁麗等研究表明，增質(zhì)量率和特定生長率隨著酵母菌和乳酸菌添加量的增加呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢[15]，隨著芽孢桿菌添加量的增加反而降低，這說明過多或過少的益生菌對動物都會有不利的影響。

在本試驗中，20、30、40 d時各微生態(tài)制劑添加組的腸胰蛋白酶活性較對照組均顯著提高，10、20、30、40 d時各微生態(tài)制劑添加組的腸脂肪酶活性均有所提高，說明微生態(tài)制劑通過作用于錦鯉腸道，提高了其胰蛋白酶、脂肪酶的活性，從而增強了錦鯉對飼料的利用率。但本試驗還顯示，20 d時002%添加組的胰蛋白酶活性才顯著高于其他試驗組，30、40 d 時各添加組的腸脂肪酶活性才顯著增加。可能是由于胰蛋白酶、脂肪酶的中心生成器官是肝胰臟，這2種酶由肝胰臟分泌后再轉(zhuǎn)移至腸道時需要一個生理過程。牟洪生等研究微生態(tài)制劑A對羅非魚生長及消化酶活性的影響，結(jié)果顯示由芽孢桿菌和光合細菌為主要成分組成的復(fù)合微生態(tài)制劑A能夠提高羅非魚的淀粉酶活性[16]。徐文彥等研究枯草芽孢桿菌對黃河鯉生產(chǎn)性能及消化酶活性的影響，結(jié)果顯示枯草芽孢桿菌的添加對黃河鯉中腸組織淀粉酶活性無顯著性影響[17]。在本試驗中，與對照組相比10、20、30、40 d時各微生態(tài)制劑添加量對試驗魚的腸淀粉酶活性無顯著性影響。可能與微生態(tài)制劑的種類、劑量、添加量、試驗魚品種、規(guī)格及腸道pH值差別、基礎(chǔ)飼料等有關(guān)，這還有待對淀粉酶主要分泌器官肝胰臟中該酶的活性進行測定，可能會有一些新的結(jié)論。

研究發(fā)現(xiàn)，微生態(tài)制劑對動物腸道吸收功能有一定的促進作用[15，18]。在本試驗中，20、30、40 d時各微生態(tài)制劑添加組的干物質(zhì)表觀消化率較對照組均顯著提高，說明飼料中添加微生態(tài)制劑可以提高飼料中營養(yǎng)成分的表觀消化率，并在一定程度上提高錦鯉對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。這與付鑫等對幼刺參[10]、仇明等對斑點叉尾鮰[11]、丁麗等對異育銀鯽[15]的研究結(jié)論一致。劉克林等在研究益生菌對鯉魚免疫功能影響時觀察到，試驗組腸道黏膜皺褶增多、隱窩增深、微絨毛長而密集，腸道吸收面積增加，同時益生菌降低了腸道內(nèi)環(huán)境pH值，有利于刺激腸道消化腺的代謝分泌活動，從而提高腸道消化酶活力，繼而提高了魚類對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力[19]。在本試驗中，雖未對各微生態(tài)制劑添加組的試驗魚腸道的表觀及pH值進行詳細研究，但通過測定干物質(zhì)表觀消化率也間接反映了本試驗的研究結(jié)論與劉克林等的研究結(jié)論[19]相同，即微生態(tài)制劑增強了魚類對飼料中營養(yǎng)成分的吸收，有關(guān)微生態(tài)制劑促進魚類飼料營養(yǎng)物質(zhì)吸收利用的作用機制還有待進一步研究。

4結(jié)論

綜上所述，飼料中添加微生態(tài)制劑顯著提高了錦鯉生長性能，增強了腸道消化酶活性，并在一定程度上提高了錦鯉對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，適宜的添加量為0.02%，適宜持續(xù)投喂時間為20 d。endprint

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