梓醇-川芎嗪方干預(yù)APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用機(jī)制研究

摘要 目的：探究梓醇-川芎嗪方干預(yù)APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用機(jī)制。方法：將3月齡C57BL/6J野生型小鼠為對(duì)照組（control組），構(gòu)建阿爾茨海默病模型后，將同月齡APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為模型組（model組）、梓醇-川芎嗪方低劑量組（CT-L組）、梓醇-川芎嗪方中劑量組（CT-M組）、梓醇-川芎嗪方高劑量（CT-H組）、安理申組，對(duì)照組及模型組均給予生理鹽水灌胃，各用藥組以相應(yīng)藥物灌胃，每日灌胃1次，連續(xù)8周。對(duì)各組小鼠進(jìn)行行為學(xué)觀察，檢測各組小鼠海馬組織乙酰膽堿酯酶（AChE）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）及血清中β淀粉樣蛋白42（Aβ42）。結(jié)果：行為學(xué)觀察：與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組長時(shí)程學(xué)習(xí)和參考記憶能力、自主探究能力、情景識(shí)別記憶能力、短期工作記憶能力、條件恐懼記憶能力，緩解焦慮、抑郁狀態(tài)等7項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組7項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組7項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組7項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05）。生化檢測方面：與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組海馬組織SOD、GSH-Px水平均升高，AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組海馬組織SOD、GSH-Px水平均升高，AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組海馬組織SOD、GSH-Px水平均升高（P＜0.05），AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組海馬組織SOD、GSH-Px水平均升高（P＜0.05），AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低（P＜0.05）。結(jié)論：梓醇-川芎嗪方可以改善阿爾茨海默病模型小鼠的長時(shí)程學(xué)習(xí)和參考記憶能力、自主探究能力、情景識(shí)別記憶能力、短期工作記憶能力、條件恐懼記憶能力，緩解焦慮、抑郁狀態(tài)，且其效應(yīng)呈劑量依賴性，高劑量梓醇-川芎嗪方優(yōu)于安理申。其作用機(jī)制可能與提高海馬組織SOD、GSH-Px水平，降低AChE活性及iNOS、IL-6、TNF-α、MDA、Aβ42水平有關(guān)。

關(guān)鍵詞 阿爾茨海默??；梓醇-川芎嗪方；APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因；動(dòng)物行為學(xué)；氧化應(yīng)激；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.13.013

Study on Mechanism of Catalpol-Tetramethylpyrazine Prescription on APPswe/PS1dE9 Double Transgenic Mice

DENG Chujun， MENG Shengxi， CHEN Huize， WANG Bing， LI Wentao， PAN Weidong， Zhang Yunyun

Shanghai Sixth People′s Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine， Shanghai 200233， China

Corresponding Author MENG Shengxi， E-mail： mengsx163@163.com

Abstract Objective：To investigate the effects of Catalpol- Tetramethylpyrazine Prescription（CT） on APPswe/PS1dE9 double transgenic mice.Methods：Three-month-old C57BL/6J wild-type mice were set as control group，and three-month-old APPswe/PS1dE9 double transgenic mice were divided into model group，Catalpol-Tetramethylpyrazine Prescription low-dose（CT-L） group，medium-dose（CT-M） group，high-dose（CT-H） group，and Aricept group，respectively.The mice in control group and model group were given intragastric administration of normal saline，and the mice in each medication group were given intragastric administration of the corresponding drug once a day for 8 weeks.The behavior of mice in each group was observed，and the acetylcholinesterase（AChE）， inducible nitric oxide synthase（iNOS），interleukin-6（IL-6），tumor necrosis factor-α（TNF-α），superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-Px），and malondialdehyde（MDA） in the hippocampal tissues and serum amyloid beta 42 （Aβ42） of mice in each group were detected.Results：Behavioral test，Compared with model group，the ability of long-term learning and reference memory，independent inquiry ability，episodic recognition and memory ability，short-term working memory ability，conditional fear memory ability，and anxiety and depression state of mice in CT-M group，CT-H group，and Arceipt group were significantly improved（P＜0.01）.

Compared with CT-L group，the seven behavioral indexes of mice in CT-M group， CT-H group and Arceipt group were improved（P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with CT-M group，the seven behavioral indexes of CT-H group were improved（P＜0.05）. Compared with Arceipt group，the seven behavioral indexes of CT-H group were improved（P＜0.05）.Biochemical tests，Compared with model group，the levels of SOD and GSH-Px in hippocampus of CT-M group，CT-H group，and Arceipt group were increased，while the activity of AChE，the levels of iNOS，IL-6，TNF-α，and MDA in hippocampus and the level of serum Aβ42 were decreased（P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with CT-L group，the levels of SOD and GSH-Px were increased in hippocampus of CT-M group，CT-H group，and Arceipt group，while the activity of AChE，the levels of iNOS，IL-6，TNF-α，and MDA in hippocampus and the level of serum Aβ42 were decreased（P＜0.05 or P＜0.01）. Compared with CT-M group，the levels of SOD and GSH-Px in hippocampus of CT-H group were increased，the activity of AChE，the levels of iNOS，IL-6，TNF-α，and MDA in hippocampus and the level of serum Aβ42 were decreased（P＜0.05）.Compared with Arceipt group，the levels of SOD and GSH-Px in hippocampus of CT-H group were increased，the activity of AChE，the levels of iNOS，IL-6，TNF-α，and MDA in hippocampus and the level of serum Aβ42 were decreased（P＜0.05）.Conclusion：Catalpol-Tetramethylpyrazine Prescription can improve AD model mice long process learning and reference memory ability，the ability of independent exploring，scene recognition memory，short-term memory ability，condition of fear memory ability，reduce anxiety，depression，and its effect is dose-dependent and high-dose Catalpol-Tetramethylpyrazine Prescription is superior to Aricept.Its mechanism may be related to increasing the levels of SOD and GSH-Px，decreasing the activity of AChE and the levels of iNOS，IL-6，and TNF-α in hippocampus and decreasing the level of MDA in hippocampus and the level of serum Aβ42.

Keywords " Alzheimer′s disease; Catalpol-Tetramethylpyrazine Prescription;"" APPswe/PS1dE9 double transgenic; animal behavior; oxidative stress; experiment research

基金項(xiàng)目 上海市第六人民醫(yī)院醫(yī)療服務(wù)能級(jí)提升工程臨床醫(yī)療技術(shù)骨干隊(duì)伍培育項(xiàng)目（No.20220213）；上海市第六人民醫(yī)院院級(jí)課題（No.ynxg202218）；上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院“大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃”項(xiàng)目（No.1723Z002）；上海市進(jìn)一步加快中醫(yī)藥傳承創(chuàng)新發(fā)展三年行動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目（2021年—2023年）[No.ZY（2021—2023）-0205-04]；華東片區(qū)及市級(jí)中醫(yī)?？茖２÷?lián)盟建設(shè)項(xiàng)目[No.ZY（2021—2023）-0302]

作者單位 1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第六人民醫(yī)院（上海 200233）；2.上海市中醫(yī)醫(yī)院；3.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院；4.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

通訊作者 孟勝喜，E-mail：mengsx163@163.com

引用信息 鄧楚珺，孟勝喜，陳慧澤，等.梓醇-川芎嗪方干預(yù)APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用機(jī)制研究[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2023，21（13）：2412-2417.

據(jù)2018年世界阿爾茨海默?。ˋlzheimer′s disease，AD）報(bào)告顯示，預(yù)估到2050年全球阿爾茨海默病病人將達(dá)1.52億例，而我國阿爾茨海默病人數(shù)也將達(dá)到3 003萬例^[1]，并由此帶來超9.12億美元的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)^[2]。目前，西醫(yī)針對(duì)阿爾茨海默病的治療主要是以緩解疾病進(jìn)展為主要手段，現(xiàn)階段尚無有效逆轉(zhuǎn)阿爾茨海默病病情進(jìn)展和提高治療效果的特效藥^[3]。

作為中藥復(fù)方的微觀模式，中藥有效組分配伍模式是基于中醫(yī)藥理論，以傳統(tǒng)方劑的配伍理論和原則為核心，將中藥中組分明確、藥理作用清晰的生物活性成分作為研究重點(diǎn)，研究具有某一特定功效的中藥有效組分配伍組方^[4]。目前其在防治阿爾茨海默病方面正在發(fā)揮著越來越重要的作用，也受到越來越多的關(guān)注和重視。前期課題組研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，梓醇-川芎嗪方（CT）可以有效改善阿爾茨海默病模型小鼠的認(rèn)知障礙，其效果既優(yōu)于其單一成分（梓醇或川芎嗪），也優(yōu)于陽性對(duì)照藥鹽酸多奈哌齊片（安理申）^[5]。本研究進(jìn)一步驗(yàn)證梓醇-川芎嗪方對(duì)APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用，并探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

梓醇-川芎嗪方由梓醇4.274 mg和川芎嗪1.554 mg組成。梓醇（catalpol），物質(zhì)數(shù)字識(shí)別號(hào)碼（CAS Number）為2415-24-9，分子式為C₁₅H₂₂O₁₀。分子量為362.33，純度≥98.0%，由上海滬崢生物科技有限公司提供，批號(hào)：DSTDZ000502。川芎嗪（tetramethylpyrazine），CAS Number為1124-11-4，分子式為C₈H₁₂N₂，分子量為136.19，純度≥98.0%，由上海滬崢生物科技有限公司提供，批號(hào)：DST200602-032。安理申，由衛(wèi)材（中國）藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20050978，批號(hào)：1705080，規(guī)格：每片5 mg。

1.2 儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)Morris水迷宮（上海吉量軟件科技有限公司生產(chǎn)，型號(hào)：JLBehv-MWMG-1）；全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀（Tanon-6100）。曠場實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮、新物體識(shí)別、Y迷宮由深圳瑞沃德公司提供；恐懼驚跳箱由西班牙Panlab公司提供；記錄系統(tǒng)由美國Smart 3.0公司提供；攝像頭由日本Sony公司提供。小鼠β淀粉樣蛋白42（Aβ42）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒購自江蘇酶標(biāo)生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

3月齡無特定病原體（SPF）級(jí)APPswe/PS1ΔE9雙轉(zhuǎn)基因雄性小鼠50只，3月齡C57BL/6J野生型雄性小鼠10只，體質(zhì)量（23±3）g，均購自南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK-（蘇）2018-0008，飼養(yǎng)于上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司動(dòng)物房。全部動(dòng)物預(yù)飼養(yǎng)2周，分別單籠喂養(yǎng)，光照/黑暗時(shí)間為12 h/12 h，隨意飲水和進(jìn)食，溫度（22±2）℃，相對(duì)濕度（60±5）%，12 h光照。構(gòu)建阿爾茨海默病模型后，將小鼠隨機(jī)分為模型組（model組）、梓醇-川芎嗪方低劑量組（CT-L組）、梓醇-川芎嗪方中劑量（CT-M組）、梓醇-川芎嗪方高劑量（CT-H組）、安理申組（Aricept組），每組10只。3月齡C57BL/6J野生型雄性小鼠10只作為對(duì)照組（control組）。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物干預(yù)

CT-L組、CT-M組、CT-H組分別給予低劑量、中劑量、高劑量梓醇-川芎嗪方灌胃，依據(jù)人和動(dòng)物體表面積折算系數(shù)換算^[6]，梓醇-川芎嗪方低劑量、中劑量、高劑量分別為25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg；Aricept組以安理申溶液5 mg/kg灌胃；control組、model組給予等體積生理鹽水灌胃。各組小鼠均每天灌胃1次，連續(xù)灌胃8周。

1.5 檢測指標(biāo)

1.5.1 行為學(xué)觀察

分別于干預(yù)前后對(duì)各組小鼠進(jìn)行行為學(xué)觀察。

1.5.1.1 長時(shí)程學(xué)習(xí)、參考記憶能力及短期工作記憶檢測

長時(shí)程學(xué)習(xí)、參考記憶能力檢測采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。記錄逃避潛伏期（escape latencies，EL）和120 s內(nèi)小鼠通過平臺(tái)的次數(shù)（number of crossing platforms，NCP），用Morris水迷宮圖像自動(dòng)監(jiān)視處理系統(tǒng)完成對(duì)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)采集以及處理。

短期工作記憶檢測采用Y迷宮實(shí)驗(yàn)。將小鼠從三角形中央放入迷宮，無干擾活動(dòng)8 min，攝像頭和Smart 3.0軟件記錄活動(dòng)軌跡和進(jìn)臂的順序，小鼠每次進(jìn)入與前兩次不同的臂視為進(jìn)臂正確，最后統(tǒng)計(jì)總進(jìn)臂次數(shù)（total times of arm entries，TTAE）和自發(fā)交替正確率（spontaneous alternate accuracy rate，SAAR），SAAR＝[進(jìn)臂正確次數(shù)/（總進(jìn)臂次數(shù)－2）]×100%。

1.5.1.2 自主探究能力、情景識(shí)別記憶能力及恐懼記憶能力檢測

自主探究能力檢測采用曠場實(shí)驗(yàn)。測定各組小鼠運(yùn)動(dòng)總距離（total distance of motion，TDM）及在曠場中心區(qū)域停留時(shí)間比（stay time ratio in the central area of the open field，STRCAOF）。

情景識(shí)別記憶能力檢測采用新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)。開啟攝像監(jiān)視器記錄在5 min內(nèi)小鼠對(duì)原圓柱體積木探索時(shí)長（time of familiar object，TF）和新正方體積木的探索時(shí)長（time of new object，TN）。用識(shí)別指數(shù)（discrimination index，DI）表示小鼠對(duì)新舊實(shí)驗(yàn)積木的識(shí)別能力，計(jì)算公式：DI＝[（TN－TF）/（TN＋TF）]×100%^[7]。

恐懼記憶能力檢測采用條件恐懼實(shí)驗(yàn)。記錄小鼠條件刺激（conditioning stimulus，CS）前和條件刺激期間兩個(gè)時(shí)間段內(nèi)的僵直比率（freezing ratio，F(xiàn)R）。

1.5.1.3 焦慮狀態(tài)及抑郁狀態(tài)檢測

焦慮狀態(tài)檢測采用高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)。觀察各組實(shí)驗(yàn)小鼠開放臂（open-arm）進(jìn)入次數(shù)以及停留時(shí)長（stay time in open-arm，STO），閉合臂（closed-arm）進(jìn)入次數(shù)以及停留時(shí)長（stay time in closed-arm，STC），5 min實(shí)驗(yàn)過程中各組小鼠開臂以及閉臂總進(jìn)入次數(shù)（total times，TT），計(jì)算各組小鼠在開臂停留時(shí)間占比（ratio of stay time in open-arm，RSTO）。抑郁狀態(tài)測定采用懸尾實(shí)驗(yàn)（TST）。記錄各組小鼠不動(dòng)狀態(tài)（IT）的總時(shí)長，來反映其抑郁程度。

1.5.2 生化指標(biāo)檢測

行為學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)全部完成后，取外周血，血液在室溫下靜置至少2 h，待血清完全析出，4 ℃環(huán)境下，3 000 r/min離心20 min，收集上清。每組大鼠用10%水合氯醛深度麻醉后進(jìn)行解剖實(shí)驗(yàn)。在碎冰上快速剝離海馬組織并稱重，在低溫裂解緩沖液（pH 7.4）中制備勻漿，冷凍離心（4 ℃，12 000 r/min離心10 min），吸取上清液，按乙酰膽堿酯酶（AChE）試劑盒說明書上的方法，在412 nm處測定二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB）與碘化乙酰硫代膽堿酶解生成的5-巰基-硝基苯甲酸（TNB）生成量，用其評(píng)估AChE活性。根據(jù)二喹啉甲酸（BCA）蛋白試劑盒說明書上的方法，以牛血清白蛋白（BSA）為標(biāo)準(zhǔn)，Bradford法測定蛋白濃度。結(jié)合以上兩種方法即可計(jì)算AChE活性。

同時(shí)采用ELISA測定海馬體組織中的促炎因子誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）表達(dá)量，氧化應(yīng)激標(biāo)志物超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）表達(dá)量以及血清中Aβ42含量。iNOS、IL-6、TNF-α、SOD、GSH-Px、MDA的ELISA試劑盒均購自美國賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher Scientific），操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS Statistics 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用One Way ANOVA單因素方差分析及LSD檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 行為學(xué)檢測

2.1.1 長時(shí)程學(xué)習(xí)和參考記憶能力及短期工作記憶

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與control組比較，model組EL明顯延長（P＜0.01），NCP明顯減少（P＜0.01）；與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組EL明顯縮短（P＜0.01），NCP明顯增加（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組EL明顯縮短，NCP明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組EL明顯縮短（P＜0.05），NCP明顯增加（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組EL明顯縮短（P＜0.05），NCP明顯增加（P＜0.05）。詳見表1。

Y迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果：各組TTAE比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與control組比較，model組SAAR明顯下降（P＜0.01）；與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組SAAR明顯升高（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組SAAR明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組SAAR明顯升高（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組SAAR明顯升高（P＜0.05）。詳見表1。

2.1.2 自主探究能力、情景識(shí)別記憶能力及條件恐懼記憶能力

曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果：各組TDM比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與control組比較，model組STRCAOF明顯下降（P＜0.01）；與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組STRCAOF明顯升高（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組STRCAOF明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組STRCAOF明顯升高（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組STRCAOF明顯升高（P＜0.05）。詳見表2。

新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與control組比較，model組DI明顯減低（P＜0.01）；與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組DI明顯增加（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組DI明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組DI明顯增加（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組DI明顯增加（P＜0.05）。詳見表2。

條件恐懼實(shí)驗(yàn)結(jié)果：條件刺激前，各組FR差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。條件刺激期間，與control組比較，model組FR明顯下降（P＜0.01）；與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組FR明顯升高（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組FR明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組FR明顯升高（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組FR明顯升高（P＜0.05）。詳見表2。

2.1.3 焦慮及抑郁狀態(tài)

高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果：各組TT比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與control組比較，model組RSTO明顯下降（P＜0.01）；與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組RSTO明顯升高（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CL-H組、Arceipt組RSTO明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組RSTO明顯升高（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組RSTO明顯升高（P＜0.05）。詳見表3。

懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與control組比較，model組IT明顯減少（P＜0.01）；與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組IT明顯增加（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組IT明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組IT明顯增加（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組IT明顯增加（P＜0.05）。詳見表3。

2.2 生化檢測結(jié)果

2.2.1 各組小鼠海馬組織AChE活性及促炎因子iNOS、IL-6、TNF-α水平比較

與control組比較，model組小鼠海馬組織的AChE活性明顯升高（P＜0.01），促炎因子iNOS、IL-6、TNF-α水平均升高（P＜0.01）；與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組小鼠海馬組織的AChE活性明顯降低，促炎因子iNOS、IL-6、TNF-α水平均下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組AChE活性明顯降低，促炎因子iNOS、IL-6、TNF-α水平均下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組AChE活性明顯降低（P＜0.05），促炎因子iNOS、IL-6、TNF-α水平均下降（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組AChE活性明顯降低（P＜0.05），促炎因子iNOS、IL-6、TNF-α水平均下降（P＜0.05）。詳見表4。

2.2.2 各組小鼠海馬組織SOD、GSH-Px和MDA水平及血清Aβ42水平比較

與control組比較，model組小鼠海馬組織SOD、GSH-Px水平均明顯下降（P＜0.01），MDA水平明顯升高（P＜0.01），血清Aβ42水平明顯升高（P＜0.01）；與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組SOD、GSH-Px水平均明顯升高，MDA水平明顯下降，血清Aβ42水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組SOD、GSH-Px水平均明顯升高，MDA水平明顯下降，血清Aβ42水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組SOD、GSH-Px水平均明顯升高，MDA水平明顯下降，血清Aβ42水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組SOD、GSH-Px水平均明顯升高，MDA水平明顯下降，血清Aβ42水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表5。

3 討 論

梓醇是從地黃中提取的環(huán)烯醚萜類化合物，可以通過抑制神經(jīng)元凋亡、抗氧化、促血管新生、促神經(jīng)營養(yǎng)因子等途徑起到防治阿爾茨海默病的作用^[8]。川芎嗪作為川芎中的主要生物堿，具有抗炎、抗氧化、抗血小板作用^[9]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，梓醇-川芎嗪方可以有效改善阿爾茨海默病模型小鼠的認(rèn)知障礙，其效果既優(yōu)于其單一成分（梓醇或川芎嗪），優(yōu)于陽性對(duì)照藥安理申^[5]。梓醇-川芎嗪方已申請(qǐng)了國家專利，且該專利已經(jīng)獲得授權(quán)，專利號(hào)：ZL 202011556436.0；授權(quán)公告號(hào)：CN 112336738 B。

本研究中，行為學(xué)觀察：與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組小鼠的長時(shí)程學(xué)習(xí)和參考記憶能力、自主探究能力、情景識(shí)別記憶能力、短期工作記憶能力、條件恐懼記憶能力，緩解焦慮、抑郁狀態(tài)等7項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組小鼠7項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組小鼠7項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組小鼠7項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)均明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05）。生化檢測方面：與model組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組海馬組織SOD、GSH-Px水平均升高，AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與CT-L組比較，CT-M組、CT-H組、Arceipt組海馬組織SOD、GSH-Px水平均升高，AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與CT-M組比較，CT-H組海馬組織SOD、GSH-Px水平均升高（P＜0.05），AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低（P＜0.05）；與Arceipt組比較，CT-H組海馬組織SOD、GSH-Px水平均升高（P＜0.05），AChE活性、iNOS、IL-6、TNF-α、MDA水平及血清Aβ42水平均降低（P＜0.05）。

綜上所述，梓醇-川芎嗪方可以改善阿爾茨海默病模型小鼠的長時(shí)程學(xué)習(xí)和參考記憶能力、自主探究能力、情景識(shí)別記憶能力、短期工作記憶能力、條件恐懼記憶能力，緩解焦慮、抑郁狀態(tài)，且其效應(yīng)呈劑量依賴性，高劑量梓醇-川芎嗪方優(yōu)于安理申。其作用機(jī)制可能與提高海馬組織SOD、GSH-Px水平，降低AChE活性及iNOS、IL-6、TNF-α、MDA、血清Aβ42水平有關(guān)。

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（收稿日期：2022-01-20）

（本文編輯郭懷?。?/p>