基于網(wǎng)絡藥理學及實驗驗證探討穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的作用機制

摘要 目的：基于網(wǎng)絡藥理學探討穩(wěn)心湯治療氣虛血瘀型冠心病心絞痛的潛在作用靶點及其分子機制，并結合大鼠心肌梗死模型深入探析其可能的作用機制。方法：將中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫和分析平臺（TCMSP）獲取的穩(wěn)心湯中藥物潛在相關靶點，與人類孟德爾遺傳病數(shù)據(jù)庫（OMIM）、藥物數(shù)據(jù)庫（DrugBank）、人類基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards）中篩選得到的冠心病心絞痛靶點取交集，并基于STRING數(shù)據(jù)庫構建交集靶點蛋白互作網(wǎng)絡圖。根據(jù)Cytoscape 3.9.1軟件構建穩(wěn)心湯關鍵活性成分-疾病靶點網(wǎng)絡，篩選出核心靶點。利用Metascape平臺對藥物與疾病交集靶點進行基因本體（GO）及京都基因與基因組百科全書（KEGG）富集分析，篩選出穩(wěn)心湯治療氣虛血瘀型冠心病心絞痛過程中可能參與的信號通路。構建大鼠心肌梗死模型，采用蘇木精-伊紅（HE）、馬松（Masson）染色觀察心臟炎癥及纖維化情況，利用蛋白免疫印跡法（Western Blot）實驗驗證網(wǎng)絡藥理學富集分析結果。結果：共獲取穩(wěn)心湯與冠心病心絞痛交集靶點173個，包括白介素6（IL6）、腫瘤壞死因子（TNF）、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（Akt1）等，KEGG富集信號通路205條，包括脂質(zhì)和動脈粥樣硬化、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路等。HE、Masson染色顯示，穩(wěn)心湯可降低心肌梗死后心肌炎癥反應，緩解纖維化進程。Western Blot實驗顯示，穩(wěn)心湯可以升高PI3K/Akt蛋白表達水平（P＜0.01）。結論：穩(wěn)心湯可通過多成分、多靶點治療冠心病心絞痛，其中可能與PI3K/Akt信號通路相關，為揭示穩(wěn)心湯療效的分子機制和生物學基礎提供了有力依據(jù)，為進一步院內(nèi)制劑的研發(fā)提供了新思路。

關鍵詞 冠心病心絞痛；穩(wěn)心湯；網(wǎng)絡藥理學；實驗驗證；作用機制

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.13.008

The Mechanism of Wenxin Decoction in Treating Coronary Heart Disease Angina Pectoris Based on Network Pharmacology and Experimental Verification

BAI Donghan， TAN Yuqing， LI Jun， SHAO Zhen， CHEN Hengwen

Guang′anmen Hospital， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100053， China

Corresponding Author " LI Jun， E-mail： gamyylj@163.com

Abstract Objective：To predict the potential molecular mechanism of Wenxin Decoction（WXT） in the treatment of coronary heart disease angina pectoris based on network pharmacology，and verify the results by myocardial infarction rat model.Methods：The potential" targets of WXT were obtained through the Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform （TCMSP），the disease targets obtained from the Human Mendelian Inherited Diseases Database（OMIM），Drugbank，and GeneCards databases.The protein interaction network map of the intersected targets was constructed based on the STRING database.The network of \"Key active ingredients of WXT-disease targets\" was constructed according to Cytoscape 3.9.1，and the core targets were screened out. Gene ontology（GO） and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG） enrichment analysis of intersection targets was performed to screen out the possible signaling pathways using the Metascape platform.Then，rat myocardial infarction model was established.Cardiac inflammation and fibrosis were observed by hematoxylin-eosin（HE） staining and Masson staining.The possible pathways involved were verified by Western Blot experiments.Results：A total of 173 intersection targets of WXT and coronary heart disease angina pectoris were obtained，including interleukin-6（IL6），tumor necrosis factor（TNF），serine/threonine protein kinase（Akt1）. KEGG pathway analysis screened out 205 related signaling pathways，including lipid， atherosclerosis，phosphatidylinositol-3-kinase（PI3K）/Akt signaling pathway，and mitogen activated protein kinase（MAPK） signaling pathway，etc.HE and Masson staining showed that WXT could reduce the myocardial inflammatory response after myocardial infarction and alleviate the fibrosis process.Western Blot experiments proved that WXT could affect the expression level of PI3K/Akt protein（P＜0.01）.Conclusion：WXT can treat coronary heart disease angina pectoris through multiple components and targets，which may be related to PI3K/Akt signaling pathway，and provide effective basis for revealing the molecular mechanism and biological basis of WXT efficiency and new ideas for further research and development.

Keywords coronary heart disease angina pectoris; Wenxin Decoction; network pharmacology; experimental verification; mechanism

基金項目 國家自然科學基金項目（No.81973836，82074396）；首都衛(wèi)生發(fā)展科研專項重點攻關項目（No.2020-1-4151）；中國中醫(yī)科學院“優(yōu)勢病種-醫(yī)院制劑-新藥”研發(fā)專項（No.ZZ15-XY-CT-08）

作者單位 1．中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院（北京100053）；2．北京中醫(yī)藥大學研究生院（北京100029）

通訊作者 李軍，E-mail：gamyylj@163.com

引用信息 白棟漢，譚雨晴，李軍，等.基于網(wǎng)絡藥理學及實驗驗證探討穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的作用機制[J].中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2023，21（13）：2383-2390.

冠心病是一種在高血壓、高脂血癥等基礎疾病及吸煙等危險因素的誘導下，冠狀動脈血管內(nèi)膜發(fā)生粥樣硬化病變，引起血管腔內(nèi)進行性狹窄或阻塞，最終造成心肌組織缺血缺氧、壞死而導致的心臟疾病。流行病學研究顯示，我國心血管疾病患病人數(shù)高達3.30億人，其中冠心病病人約1 139萬人，死亡率上升明顯，是我國目前重大的公共衛(wèi)生問題^[1]。心絞痛的病因主要是由于冠狀動脈血管粥樣硬化或血栓形成導致供血無法滿足心臟需求，心肌缺血缺氧引起胸痛或胸部不適感，若不及時采取有效的干預措施，病人病情將逐漸惡化，心絞痛發(fā)作時間、發(fā)作頻率及服藥劑量不斷增加，最終出現(xiàn)心肌梗死^[2]。目前，現(xiàn)代醫(yī)學治療冠心病心絞痛的方式主要為經(jīng)皮冠狀動脈介入、抗血小板聚集、調(diào)脂、降壓等。但是介入術后再狹窄、支架內(nèi)血栓、手術并發(fā)癥、藥物副作用等，均不同程度地影響病人的預后及生活質(zhì)量。中藥治療氣虛血瘀型冠心病心絞痛療效顯著，尤其對于冠狀動脈介入術后心絞痛、冠狀動脈臨界病變（狹窄50%～70%）、非梗阻性心肌缺血等疾病，在改善心肌供血、抗炎、調(diào)脂、穩(wěn)定粥樣斑塊、減少心血管不良事件等方面具有良好效果^[3]。

穩(wěn)心湯是中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院李軍教授多年實踐并結合名老中醫(yī)經(jīng)驗總結的有效方劑，由黃芪（astragalus mongholicus）、太子參（radix pseudostellariae）、赤芍（radix paeonia）、川芎（ligusticum chuanxiong）、瓜蔞（trichosanthes kirilou）、薤白（allium macrostemon）、半夏（pinellia ternata）、桂枝（cassia twig）、姜黃（turmeric）、僵蠶（bombyx rigidis）、大黃（rhubarb）11味中藥組成，具有益氣活血、通陽降濁、散寒止痛的功效，在臨床廣泛運用于治療氣虛血瘀型冠心病心絞痛，初步觀察，療效顯著，然而對其具體作用機制研究尚未明確，故本研究擬借助網(wǎng)絡藥理學方法，結合動物實驗驗證，初步探討穩(wěn)心湯治療氣虛血瘀型冠心病心絞痛的作用機制，系統(tǒng)闡述穩(wěn)心湯干預冠心病心絞痛的有效性。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物

穩(wěn)心湯顆粒由中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院顆粒藥房統(tǒng)一制備。藥物組方為：黃芪30 g，太子參15 g，赤芍12 g，川芎10 g，姜黃9 g，桂枝9 g，僵蠶9 g，瓜蔞10 g，薤白15 g，大黃6 g，法半夏9 g，共11味中藥。

1.2 實驗動物

實驗用無特定病原體（SPF）級雄性Wistar大鼠30只，體質(zhì)量（300±10）g，許可證號：SCXK（京）2020-0004，飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院實驗動物中心。

1.3 試劑

蘇木精-伊紅（HE）、馬松（Masson）三色染色試劑盒（中國Solarbio公司，批號G1120、G1340）；RIPA裂解液（中國Solarbio公司，批號R0010）；苯甲磺酰氟（PMSF）購自中國普利萊公司（批號A1100）；二喹啉甲酸（BCA）蛋白濃度測定試劑盒（中國碧云天公司，批號P0012S）；過硫酸銨、四甲基乙二胺（TEMED）購自美國Amresco公司（批號0486-25G、0761-25ml）；廣譜蛋白Marker（中國Solarbio公司，批號PR1930）；電泳緩沖液、轉(zhuǎn)膜液、封閉-洗滌緩沖液購自中國普利萊公司（批號B1005、B1006、B1009）；磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）多克隆抗體、兔抗大鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）單克隆抗體購自中國Proteintech公司（批號60225-1-Ig、10176-2-AP、60004-1-Ig）；辣根酶標記山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）購自中國中衫金橋公司（批號ZB-2301）；Omni-ECLTM超靈敏化學發(fā)光檢測試劑盒（中國雅酶公司，批號SQ201）。

1.4 儀器

小動物呼吸機（中國奧爾科特公司）；蛋白免疫印跡法（Western Blot）凝膠電泳系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司）；超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）；4 ℃冰箱、－20 ℃冰箱均購自中國海爾；Spark多功能酶標儀（瑞士Tecan公司）；自動脫水、透明、浸蠟機、包埋機、病理切片機均購自德國Leica公司；BX53型光學顯微鏡（日本Olympus 公司）。

1.5 方法

1.5.1 穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的網(wǎng)絡藥理學研究

1.5.1.1 穩(wěn)心湯有效成分、靶點篩選

利用中藥系統(tǒng)藥理學分析平臺（TCMSP）數(shù)據(jù)庫（https：//tcmspw.com/tcmsp.php），設置篩選條件為口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%，類藥性（drug likeness，DL）≥0.18^[4]，檢索出穩(wěn)心湯的有效活性成分，并通過Related Targets得到活性成分對應靶點，使用UniProt數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org/）進行基因注釋轉(zhuǎn)換。

1.5.1.2 冠心病心絞痛疾病靶點篩選

以“coronary heart disease”為檢索詞，在人類基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards，https：//www.genecards.org/）、人類孟德爾遺傳病數(shù)據(jù)庫（OMIM，https：//www.omim.org/）、藥物數(shù)據(jù)庫（DrugBank，https： //www.drugbank.ca/）等獲得冠心病心絞痛疾病靶點。

1.5.1.3 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡構建及核心靶點篩選

將上述藥物與疾病靶點利用韋恩圖在線平臺 Draw Venn Diagram（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）取交集基因后，上傳至STRING數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org），構建PPI網(wǎng)絡，導入Cytoscape 3.9.1軟件，使用CytoHubba 插件對PPI網(wǎng)絡及核心團簇進行分析，將得到的網(wǎng)絡拓撲參數(shù)按自由度（Degree）高低進行排序，以自由度高的靶點作為關鍵靶點。

1.5.1.4 穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛相關靶點的功能與通路的富集分析

將上述交集靶點導入Metascape（https：//metascape.org/gp/index.html#/main/step1）在線平臺，通過基因本體（GO）與京都基因與基因組百科全書（KEGG）富集分析，篩選穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛過程中可能參與的生物學過程及信號通路，并通過富集分數(shù)判斷發(fā)揮作用的核心通路以及靶點。

1.5.1.5 靶點-通路網(wǎng)絡的構建

運用 Cytoscape 3.9.1 軟件構建穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的靶點-通路網(wǎng)絡圖，可視化穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛相關靶點與信號通路的關聯(lián)情況。

1.5.2 穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的體內(nèi)實驗驗證

1.5.2.1 心肌梗死模型制備及分組

將30只SPF級雄性 Wistar大鼠開胸暴露心臟，棉線結扎左冠狀動脈前降支（LAD）構建心肌梗死模型，模型建立成功標準為結扎后心臟前壁變白、心電圖ST段持續(xù)性抬高。術后第2天再次行心電圖檢測，確保模型成功后，隨機分為假手術組（Sham組）、心肌梗死模型組（MI組）、穩(wěn)心湯低劑量組（WXT-L組）、穩(wěn)心湯中劑量組（WXT-M組）、穩(wěn)心湯高劑量組（WXT-H組），各6只，并進行藥物干預。其中根據(jù)藥物體表面積計算公式，WXT-L組、WXT-M組、WXT-H組分別給予穩(wěn)心湯393.4、786.8、1 573.6 mg/（kg·d）劑量灌胃，Sham組、MI組給予等量生理鹽水灌胃，連續(xù)28 d。

1.5.2.2 HE染色觀察心臟組織形態(tài)

干預結束后取材：予大鼠2%戊巴比妥鈉液（50 mg/kg）腹腔注射麻醉，每組取3只大鼠心臟，4%多聚甲醛固定后脫水、石蠟包埋、切片、撈片。選片后用試劑盒進行常規(guī)HE染色，光學顯微鏡下觀察并記錄各組心臟組織形態(tài)學改變。

1.5.2.3 Masson染色觀察心肌纖維化情況

取經(jīng)石蠟切片脫蠟、水化的心臟組織，Bouin液固定，Harris蘇木精染色，0.5%鹽酸乙醇溶液分化，Masson復合染色，5%磷鉬酸分化，2%苯胺藍溶液無水乙醇沖洗后自然晾干，中性樹膠封片。

1.5.2.4 Western Blot檢測

動物取材時，剝離心臟后迅速剪下心臟左心室梗死邊緣區(qū)心肌組織并放置于液氮中保存，后轉(zhuǎn)移至－80 ℃冰箱備用。?。?0±5）mg組織置于1.5 mL離心管中，加入 1 mL的RIPA（1 mL RIPA＋10 μL PMSF）組織/細胞裂解液，離心后取上清，使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。配制10%～15%聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE），樣品上樣，恒壓100 V電泳1 h后，恒流250 mA電轉(zhuǎn)1 h，5%脫脂牛奶常溫封閉聚偏二氟乙烯（PVDF）膜1 h，一抗4 ℃冰箱孵育過夜（PI3K、Akt 1∶1 000；GAPDH 1∶8 000）。TBST洗膜3次后室溫孵育二抗1 h，TBST洗去二抗，增強型化學發(fā)光試劑（ECL）發(fā)光。通過 Image J 軟件計算目的條帶與內(nèi)參灰度值的比值。

1.6 統(tǒng)計學處理

實驗數(shù)據(jù)使用GraphPad Prism 8.0軟件分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用單因素方差分析（One Way-ANOVA）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的網(wǎng)絡藥理學分子機制

2.1.1 穩(wěn)心湯的主要化學成分及作用靶點

通過TCMSP數(shù)據(jù)庫及文獻收集補充，經(jīng)去重后，共收集到穩(wěn)心湯活性成分共108種，潛在靶點537個。OB排名前10位的中藥活性成分見表1。

2.1.2 冠心病心絞痛與穩(wěn)心湯的交集靶點

在GeneCards、OMIM、DrugBank 等數(shù)據(jù)庫檢索，并結合相關文獻取并集，共得到冠心病心絞痛相關的人類疾病靶點1 464個，將穩(wěn)心湯對應的藥物靶點與疾病靶點上傳至Venn圖在線軟件中，得到交集靶點173個。詳見圖1。

2.1.3 PPI網(wǎng)絡構建及核心靶點篩選

為進一步研究藥物與疾病交集靶點的互作關系，將173個交集靶點導入STRING數(shù)據(jù)庫后，利用Cytoscape 3.9.1軟件繪制PPI網(wǎng)絡圖，并通過CytoHubba插件進行分析，以Degree高低進行排序，排名前10位的蛋白作為關鍵靶點，分別是白介素-6（IL6）、腫瘤壞死因子（TNF）、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（AKT1）、白介素-1（IL1B）、TP53、胱天蛋白酶3（CASP3）、JUN、表皮生長因子受體（EGFR）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）、信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）。詳見圖2。

2.1.4 穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛相關靶點的功能與通路的富集分析

通過GO分析，共富集到2 419個條目，其中生物過程（BP）2 126個，細胞組成（CC）121個，分子功能（MF）172個，以矯正后P值排序，分別選擇排名前10位進行分析，詳見圖3?？梢姺€(wěn)心湯治療冠心病心絞痛主要影響到機體對無機物的反應（response to inorganic substance）、蛋白質(zhì)磷酸化的正向調(diào)控（positive regulation of protein phosphorylation）、促進細胞運動與遷移（positive regulation of cell migration，positive regulation of cell motility）等生物學過程。涉及細胞膜上的膜筏（membrane raft）、細胞膜微結構域（membrane microdomain）、囊泡（vesicle lumen）等細胞成分。參與到蛋白激酶活性（protein kinase activity）、絲氨酸水解酶活性（serine hydrolase activity）、細胞因子受體結合（cytokine receptor binding）等分子功能。

KEGG分析共富集到205條通路，根據(jù)校正后P值進行排序，選擇前10位進行分析，詳見圖4。結果顯示，穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛主要涉及癌癥相關通路（pathways in cancer）、脂質(zhì)和動脈粥樣硬化（lipid and atherosclerosis）、PI3K/Akt信號通路、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路等。

2.1.5 靶點-通路網(wǎng)絡圖構建

將KEGG富集的通路與靶點蛋白對應，運用Cytoscape 3.9.1軟件構建穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的靶點-通路網(wǎng)絡圖，可視化分析穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛相關靶點與信號通路的關聯(lián)情況。詳見圖5。

2.2 穩(wěn)心湯對心肌梗死模型大鼠治療作用的實驗驗證

2.2.1 穩(wěn)心湯干預心肌梗死大鼠后組織形態(tài)學改變

穩(wěn)心湯干預心肌梗死大鼠28 d后取材，HE結果顯示，Sham組大鼠心肌細胞排列整齊致密，組織結構清晰完整，細胞間隙均勻一致。MI組大鼠心臟梗死邊緣區(qū)心肌組織排列雜亂，結構模糊，心肌橫紋斷裂、消失，細胞間隙增寬且存在大量炎癥細胞浸潤。穩(wěn)心湯各劑量組心肌病變較模型組減輕，心肌細胞較為規(guī)整，結構清晰，且呈劑量依賴特征。詳見圖6。

對各組大鼠心臟Masson染色，可見Sham組大鼠心肌纖維化程度不明顯，而MI組大鼠心肌纖維化程度嚴重，梗死區(qū)與正常組織分界清晰，穩(wěn)心湯干預后纖維化程度逐漸減輕，梗死區(qū)與正常心肌組織交界處界限模糊。使用Image J 軟件對膠原容積進行半定量分析，結果顯示，穩(wěn)心湯干預后大鼠心肌膠原容積分數(shù)明顯降低（P＜0.01），且呈劑量依賴性。詳見圖7、圖8。

2.2.2 穩(wěn)心湯干預心肌梗死大鼠后PI3K、Akt蛋白表達情況

給藥28 d后，檢測各組大鼠心臟梗死邊緣區(qū)組織中PI3K、Akt蛋白表達情況。結果顯示，與MI組比較，經(jīng)穩(wěn)心湯干預后，大鼠心臟梗死邊緣區(qū)組織中PI3K、Akt蛋白表達逐漸升高（P＜0.05），且呈劑量依賴性。詳見圖9、圖10。

3 討 論

冠心病可歸屬于中醫(yī)學“胸痹”“心痛”范疇，其基礎病機為“陽微陰弦”，即胸中陽氣不足，導致寒邪、飲邪上乘，氣血運行受阻，心脈不暢，不通則痛，從而引起“胸痹”“心痛”。 中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院聯(lián)合首都醫(yī)科大學附屬朝陽醫(yī)院開展了針對430例心肌梗死病人的臨床觀察，認為冠心病心絞痛病人以氣虛或陰虛為本、血瘀為標，本虛標實貫穿于病程的始終，而以氣虛血瘀占主導地位^[5]。氣為血之帥，血液的正常運行有賴于氣的正常推動，若元氣虧虛，無力行血，則血行緩慢，停留而瘀，因此，益氣活血法是目前臨床治療冠心病心絞痛的主要治法。穩(wěn)心湯中君藥為黃芪、太子參，補益心氣；赤芍、川芎、姜黃為臣，活血化瘀；瓜蔞、薤白、半夏、桂枝、僵蠶、大黃為佐，化痰理氣、通陽活血、調(diào)暢氣機。課題組前期通過臨床研究發(fā)現(xiàn)，穩(wěn)心湯可以有效地降低硝酸甘油使用量，降低病人血清超敏C反應蛋白（hs-CRP）、低密度脂蛋白（LDL）水平，降低不良心腦血管事件發(fā)生率，尤其可降低非致死性心肌梗死發(fā)生率^[6]?，F(xiàn)代藥理學亦表明，黃芪可以保護心肌細胞，抗動脈粥樣硬化，緩解炎癥^[7]，其有效成分黃芪甲苷可通過調(diào)控Toll樣受體4（TLR4）/髓分化因子88（MyD88）/核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）通路預防急性心肌梗死^[8]，并對缺血再灌注誘導的心臟微血管內(nèi)皮細胞高通透性具有一定的保護作用，其機制可能與胰島素樣生長因子1受體（IGF1R）信號通路相關^[9]。川芎可以增強組織抗氧化能力，改善冠狀動脈循環(huán)，縮小心肌缺血范圍^[10]，其有效成分川芎嗪可通過P2Y受體相關信號通路選擇性抑制二磷酸腺苷（ADP）誘導的血小板活化，在預防血栓形成中具有重要作用^[11]。

中醫(yī)藥的“多成分”“多靶點”特征是中醫(yī)藥的優(yōu)勢所在，但同時也是闡釋中藥科學內(nèi)涵的難點所在。網(wǎng)絡藥理學通過“中藥-成分-疾病-靶點”網(wǎng)絡模型的構建，對預測中藥靶標以及揭示中藥“異病同治”及“同病異治”原理具有重要作用^[12-13]。本研究通過網(wǎng)絡藥理學預測穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的作用機制。經(jīng)TCMSP篩選得到穩(wěn)心湯藥物對應靶點基因 537個，通過疾病數(shù)據(jù)庫獲得冠心病心絞痛相關靶點1 464個，二者交集基因173個，為穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的潛在靶點。PI3K/Akt通路是細胞內(nèi)調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡以及細胞周期等生物學過程的經(jīng)典信號通路。Akt是該信號通路的關鍵下游因子，Akt激活后磷酸化細胞周期調(diào)控因子p27，進而激活細胞周期蛋白激酶（CDK），上調(diào)細胞增殖活性^[14]。缺血缺氧條件下，癌癥抑制基因磷酸酯酶（PTEN）抑制Akt的活化，Akt活性下降，使細胞周期蛋白的合成減少，細胞停滯在G1期，負性調(diào)控PI3K/Akt信號通路，增殖受抑，上調(diào)自噬水平，一直持續(xù)到細胞死亡^[15]。此外，激活Akt后，還可以通過磷酸化激活內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）、糖原合成酶（GSK3β），抑制線粒體膜通透性轉(zhuǎn)運孔道（mPTP）的開放，降低線粒體膜的通透性，減少細胞凋亡^[16]。穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛潛在靶點的PPI網(wǎng)絡分析顯示，穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛的最重要靶點為Akt1，KEGG富集分析結果進一步顯示，PI3K/Akt信號通路在穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛中可能發(fā)揮了重要作用。通過動物實驗，進一步驗證了穩(wěn)心湯可以降低心肌梗死后心肌炎癥反應，緩解纖維化進程，并影響PI3K/Akt蛋白的表達水平，為揭示穩(wěn)心湯通過多成分、多靶點治療冠心病心絞痛的分子機制和生物學基礎提供了有效依據(jù)。然而穩(wěn)心湯是否可以通過激活Akt，進一步提高心肌細胞線粒體功能，改善細胞凋亡，尚需深入研究。

臨床使用中，穩(wěn)心湯治療冠心病心絞痛療效明確，但其藥理研究目前仍較少。本研究通過網(wǎng)絡藥理學的方法構建了穩(wěn)心湯“藥物成分-疾病靶點-信號通路”關系網(wǎng)絡，并通過動物實驗加以驗證，為進一步新藥研發(fā)提供了新思路。

參考文獻：

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（收稿日期：2022-06-05）

（本文編輯郭懷?。?/p>