不同白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量的比較

摘 要：研究以島津Column Shim-pack GIST C18（250 nm×4.6 nm）為色譜柱，甲醇-水為流動相，流速1 mL/min，柱溫40℃，檢測樣品中的白術(shù)內(nèi)酯。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ的檢測波長分別為275和220 nm，進樣量為10 μL，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的線性關(guān)系方程為Y=1.049×107X－4.090×105（r=0.999 8），在4～1 023 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的線性關(guān)系方程為Y=6.872×106X＋1.194×106（r=0.999 0），在3.7～933 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的線性關(guān)系方程為Y=4.819×106X－3.969×105（r=0.999 0），在3.7～933 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。研究還測定了不同產(chǎn)地（山東、安徽、湖南）、不同采收時間（2022年12月1、10、20、27日）的白術(shù)和不同溫度（50、60、70、80和90℃）所制白術(shù)的白術(shù)內(nèi)酯（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）含量。結(jié)果表明：安徽亳州的白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量較高，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量分別為1.07、0.43、2.40 mg/g；以12月20日采收的白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量較高，分別為1.49、0.53、1.96 mg/g；而50℃烘干白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量較高，分別為1.50、2.37、1.45 mg/g。

關(guān)鍵詞：白術(shù)；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ；白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ；白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ；高效液相色譜

中圖分類號：S482.4 文獻標識碼：A 文章編號：1006-060X（2023）07-0093-04

Abstract：This study has revealed the differences of contents of atractylenolide I， II and III in Atractylodes macrocephala samples from various origins （Shandong， Anhui， Hunan）， harvest time （2022， Dec. 1st， 10th， 20th， and 27th） and drying temperatures （50， 60， 70， 80 and 90℃）. The seperation and detection of atractylenolide I， II and III was performed under the conditions of Shimadzu Column Shim-pack GIST C18 （250 nm×4.6 nm） chromatographic column， methanol-water mobile phase， 1mL/min flow rate， and 40 °C column temperature. The detection wavelength for atractylenolide I was 275 nm， for atractylenolide II and III was 220 nm， and the injection volume was 10μL. The linear equation of atractylenolide I was Y=1.049×107X－4" "." "090 ×105 （r=0.999 8）， performing well in the range of 4-1，023 μg. The linear equation of atractylenolide II was Y=6.872×106X+1.194×106 （r=0.999 0）， performing well in the range of 3.7-933 μg. The linear equation of atractylenolide III was Y=4.819×106X－3.969×105 （r=0.999 0）， acting well in the range of 3.7-933 μg. The detection results showed that the contents of atractylenolide I， II and III in the samples from Bozhou， Anhui were high， reaching 1.07， 0.43 and 2.40 mg/g， respectively， in the samples harvested on Dec. 20th were high， reaching 1.49， 0.53 and 1.96 mg/g， respectively， and in the samples dried at 50℃ were high， reaching 1.50， 2.37 and 1.45 mg/g， respectively.

Key words：Atractylodes macrocephala Koidz; atractylenolide I; atractylenolide II; atractylenolide III; high performance liquid chromatography

中藥白術(shù)為菊科（Composetae）蒼術(shù)屬（Atractylodes）植物白術(shù)（Atractylodes macrocephala Koidz）的干燥根莖[1]，原產(chǎn)于浙江寧波（為道地產(chǎn)區(qū)），現(xiàn)分布于我國的浙江、安徽、甘肅、湖南及江西等地[2]。白術(shù)內(nèi)酯（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）是一類從白術(shù)中提取的內(nèi)酯化合物。近20 a來對白術(shù)內(nèi)酯的研究表明，白術(shù)內(nèi)酯具有抗癌、抗炎、抗血小板、抗骨質(zhì)疏松、抗菌活性、保護神經(jīng)系統(tǒng)的功能并有調(diào)節(jié)血糖和血酯的作用。由于結(jié)構(gòu)上的差異，白術(shù)醇Ⅰ和白術(shù)醇Ⅱ都具有顯著的抗癌活性，而白術(shù)醇Ⅲ和白術(shù)酮Ⅰ具有顯著的抗炎和神經(jīng)保護活性[3-5]。不同的產(chǎn)區(qū)生產(chǎn)的白術(shù)，或同一產(chǎn)區(qū)不同時間采收的白術(shù)，白術(shù)內(nèi)酯3種有效成分可能存在差異，試驗收集了來自包括山東、安徽、湖南等地方的白術(shù)樣品，進行白術(shù)內(nèi)酯提取，通過高效液相色譜對其白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量進行比較測定，并對湖南白術(shù)樣品進行不同采收時期、不同溫度烘干后其白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量的變化進行比較，研究成果有助于了解不同地區(qū)、不同采收時間及不同溫度處理白術(shù)有效成分的差異，對白術(shù)有效成分的影響，同時為白術(shù)有效成分的質(zhì)量控制提供了簡單、快捷、可靠的方法。

1 材料與方法

1.1 試驗材料、儀器與試劑

試驗儀器有島津高效液相色譜LD–40DXR（日本島津公司）和BX5200H超聲波清洗儀（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）。

試驗試劑包括白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（純度99.8%）、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ（純度99.8%）和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ（純度99.8%）對照品（上海詩丹德標準技術(shù)服務(wù)有限公司），及甲醇（色譜純，哈利威爾公司）。白術(shù)樣品采自山東、安徽、湖南等白術(shù)種植基地。

1.2 白術(shù)內(nèi)酯提取、檢測方法

1.2.1 標準品制備 精準稱取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標準品2.8、2.8和3.07 mg，分別加入10 mL容量瓶中，加入甲醇至刻度，配制成標樣原液，逐級稀釋成5個濃度梯度，并配制備成5組梯度混合標樣，備用。

1.2.2 樣品提取 （1）不同來源白術(shù)樣品提取。取1 g白術(shù)干粉（經(jīng)過60℃烘干，磨粉，過篩后得到），加入10 mL甲醇，超聲30 min，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

（2）不同處理溫度白術(shù)樣品提取。將白術(shù)樣品采用50、60、70、80和90℃進行烘干，再采用不同來源白術(shù)樣品的方法進行樣品提取。

1.2.3 方法評估 將白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別進入高效液相色譜檢測，調(diào)整流動相洗脫梯度，將3個標準品完全分離，并添加標準品添加到樣品中進行提取，得到了整個提取檢測方法的回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 白術(shù)內(nèi)酯提取、液相檢測方法評估

通過對白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標樣分別進樣檢測，根據(jù)保留時間，色譜峰峰型等對色譜流動相梯度進行調(diào)整，得到最佳分離檢測條件為：島津Column Shim–pack GIST C18（250 nm×4.6 nm）色譜柱，流動相：A為甲醇，B為水，洗脫梯度：0～16 min，40%～20%B；16.1～20 min，20%～0%B；20.1～30 min，0%B；30.1～35 min，40%B，柱溫40℃，進樣量10 μL。

從圖1可見，3個樣品峰完全分開，后期清洗平衡色譜柱，在高效分離樣品的同時，對儀器進行了清洗平衡，節(jié)約了實驗時間。

將白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ分別配置成5個濃度梯度：1.1、4.4、17.5、70和280 μg/mL，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ標樣配置成5個濃度梯度：1.2、4.8、19.2、76.75和307 μg/mL，分別按濃度梯度混合，備用。通過試驗，得到白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的標準曲線、相關(guān)系數(shù)及線性范圍，同時對保留時間及其標準偏差，加標回收率進行了計算，得到表1，說明該方法檢測白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。

2.2 不同來源白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯含量比較

通過高效液相色譜對不同來源白術(shù)提取液進行分離檢測，得到表2數(shù)據(jù)，由數(shù)據(jù)比較可以看出，產(chǎn)自安徽亳州、湖南長沙高橋鎮(zhèn)的白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量均很高，產(chǎn)自山東、寧鄉(xiāng)白術(shù)品種白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量有顯著差異。

2.3 不同采收時間白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯含量比較

通過高效液相色譜對湖南長沙縣高橋鎮(zhèn)不同采收時間的白術(shù)提取液進行分離檢測，得到表3數(shù)據(jù)，由數(shù)據(jù)比較可知，在12月上旬進行采收的白術(shù)樣品中，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的含量顯著高于其他采收時間白術(shù)樣品；12月20日采收的白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ含量最高，經(jīng)過綜合考慮，選擇12月20日左右進行白術(shù)樣品采收最為適宜。

2.4 不同溫度處理白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯含量比較

通過高效液相色譜對湖南長沙縣高橋鎮(zhèn)不同溫度處理的白術(shù)提取液進行分離檢測，得到表4數(shù)據(jù)，由數(shù)據(jù)比較可知，采用50℃烘干白術(shù)樣品，對后續(xù)白術(shù)內(nèi)酯含量測定最為適宜。

3 結(jié)論與討論

試驗采用高效液相色譜法：島津Column Shim–pack GIST C18（250 nm×4.6 nm）色譜柱、流動相為甲醇–水，流速1 mL/min，柱溫40℃，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的檢測波長為275 nm，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、Ⅲ的檢測波長為220 nm，進樣量10 μL，該方法檢測白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。試驗通過高效液相色譜法對不同來源、采收時間及處理溫度對白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量進行測定，結(jié)果表明安徽亳州、湖南長沙高橋鎮(zhèn)的白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量高；選擇12月20日左右進行白術(shù)樣品采收最為適宜；采用50℃烘干白術(shù)樣品，對后續(xù)白術(shù)內(nèi)酯含量測定最為適宜。

白術(shù)樣品中白術(shù)內(nèi)酯提取溶劑主要參考孫向紅的研究，對多種溶劑測試中，發(fā)現(xiàn)甲醇是同時從白術(shù)和中藥制劑樣品中提取白術(shù)內(nèi)酯II和III的最佳溶劑[6]；提取方法主要是超聲波法[7-9]。

有關(guān)高效液相色譜測定白術(shù)內(nèi)酯含量的研究有很多，早在20 a前就有關(guān)于高效液相色譜測定白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ含量的文獻，僅采用了220 nm波長的進行檢測[10]，而在周海艷等[7]的文章中檢測波長：白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ為220 nm，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為276 nm，筆者試驗檢測波長與之相符，能夠更加準確的計算白術(shù)內(nèi)酯含量；一些文獻中流動相采用乙腈，然而其分離效果一般，峰面積并沒有顯著提高，因此試驗采用甲醇作為流動相。

在后續(xù)的研究中，應(yīng)收集更多來源明確的白術(shù)樣品，考慮檢測不同采收時間的白術(shù)、設(shè)定不同的樣品烘干時間，建立更加科學(xué)、完善的中藥材質(zhì)量評價模型，以期能更好的評價和控制白術(shù)品質(zhì)。

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（責(zé)任編輯：肖彥資）