MEIS1 基因多態(tài)性與血液透析維持不寧腿綜合征的相關(guān)性研究

潘 濤 池學(xué)鋒 褚滋泓

不寧腿綜合征（restless leg syndrome，RLS）屬于是較為常見(jiàn)的一種運(yùn)動(dòng)感覺(jué)異常性病癥，常表現(xiàn)為靜態(tài)休息或夜間睡眠時(shí)存在下肢麻木、蟲蝕、蟻?zhàn)叩葒?yán)重不適感[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)，相比正常健康的群體，血液透析維持患者伴發(fā)RLS 的概率較高（6%～75%）[3]。RLS 家族有較高的陽(yáng)性率，說(shuō)明RLS 存有遺傳易感性，環(huán)境因素、易感基因以及其互相作用有關(guān)[4]。髓系親嗜性白血病病毒整合位點(diǎn)1（myelophilic leukemia virus integration site 1，MEIS1）屬于同源盒基因中的分枝基因，轉(zhuǎn)錄因子的編碼為三核苷酸環(huán)延伸家族中的一員，對(duì)血液透析維持伴RLS 發(fā)生、進(jìn)展均有參與[5]?；诖?，本文探討了MEIS1 基因多態(tài)性與血液透析維持伴RLS 的相關(guān)性，以期為臨床治療該病提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2021 年5 月至2022 年5 月在浙江省溫州老年病醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科進(jìn)行血液透析維持患者70 例，其中血液透析維持伴RLS 組患者40 例，男27 例，女13 例；年齡50～65（60.64±4.56）歲；特發(fā)性RLS 組患者30 例，男26 例，女14 例；年齡50～66（60.67±4.59）歲。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批（批件號(hào)WLNY-A-2023001）。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合慢性腎臟?。╟hronic kidney disease，CKD）5 期診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）符合RLS 相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)：①下肢存在異常感覺(jué)；②具有強(qiáng)烈想要活動(dòng)下肢的欲望；③休息誘發(fā)或加重癥狀；④精神或體力活動(dòng)可以暫時(shí)性部分或完全緩解癥狀；同時(shí)滿足以上四條，并確保不是因其他醫(yī)學(xué)行為狀況導(dǎo)致的即可確診為RLS。（3）年齡≥18 歲；（4）行規(guī)律血液透析時(shí)間≥3 個(gè)月；（5）病例資料完整、可靠性、準(zhǔn)確較優(yōu)，能配合研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有嚴(yán)重腦、肝及造血系統(tǒng)等原發(fā)病癥、精神疾病患者；（2）存在帕金森病、肌痛、周圍神經(jīng)病變、妊娠、靜脈瘀滯、感染、下肢水腫、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、心力衰竭、腿部痙攣性病癥、體位不適、習(xí)慣性拍足等疾患者；（3）臨床病歷原始資料記錄不全者。

1.3 方 法

1.3.1 基因多態(tài)性檢測(cè) （1）留取所有研究對(duì)象肘靜脈血3 mL，-20 ℃保存，通過(guò)血液基因組提取試劑盒（廠家：武漢納磁生物科技有限公司；批號(hào)NMG0141-16）提取細(xì)胞全基因組以此對(duì)DNA 進(jìn)行提取。（2）采用4 對(duì)引物特異擴(kuò)增突變分析方法對(duì)MEIS1 基因的rs1820989、rs113851554 基因多態(tài)性予以檢測(cè)。rs1820989 上游引物序列為 5' -ATTGATCCTGTCACCCAGGTAG-3'，下游引物序列為5'-GAAGGGAGACTGTGAAATGGTC-3'；rs113851 554 上游引物序列：5'-AACAAGCACAGTTCTCAGCA AA-3'，下游引物序列：5'-TGATCTAGATGCTTGAGT TGAAA-3'。（3）MEIS1 2 個(gè)基因位點(diǎn)PCR 反應(yīng)體系和條件：其中，PCR 反應(yīng)引物：由NCBI 的GenBank獲取MEIS1 基因序列及其對(duì)應(yīng)的2 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系：cDNA 模板10 μL，IOuM 上游引物0.1 μL，IOuM 下游引物0.1 μL，H2O 為6.35 μL，25 mM dNTP 為0.8 μL。反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min，94 ℃變性30 s，56～66 ℃復(fù)性30 s，72 ℃退火延長(zhǎng)30 s，總延長(zhǎng)為72 ℃5 min。（4）使用Prime Premier Version 5.0 軟件選取限制性內(nèi)切酶及酶切產(chǎn)物片段大小，其中，MEIS1 基因rs1820989：限制性內(nèi)切酶Vsp1 中包含等位基因（C、T），且對(duì)應(yīng)的酶切片大小分別是393bp、202bp+191bp；MEIS1 基因rs113851554：限制性內(nèi)切酶Csp61 包括等位基因（T、C）及對(duì)應(yīng)的酶切片大小分別為183 bp、105 bp+78 bp。（5）DNA 在特定位點(diǎn)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增后，先檢測(cè)經(jīng)電泳的瓊脂糖（廠家：太陽(yáng)馬；規(guī)格：100 g/瓶），看是否有目的條帶的擴(kuò)出，以此對(duì)PCR 產(chǎn)物的濃度進(jìn)行判斷，以便進(jìn)行下一步的限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)，酶切反應(yīng)后在進(jìn)行電泳檢測(cè)。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo) 所有受試者抽靜空腹脈血4 mL，使用離心機(jī)（廠家：Eppendorf；型號(hào)：5417R）行離心處理（設(shè)半徑5 cm，10 min，轉(zhuǎn)速3500 r/min）后，分離清液，-70 ℃置冰箱內(nèi)儲(chǔ)存，待檢。由我院實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血肌酐（serum creatinine，Scr）、血紅蛋白（Hemoglobin，Hb）、血液透析尿素清除指數(shù)（clearance time/Urea distribution volume，Kt/V）、甲狀旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）、鈣離子（Calcium ion，Ca）、血清無(wú)機(jī)磷（phosphorus，P）、C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度（transferrin saturation，TS）水平。

1.3.3 MRI 檢查 使用美國(guó)GE 1.5T 超導(dǎo)型磁共振掃描，其中T1W1、FLAIR 及T2W2 序列，部分的患者增加DWI 序列額掃描，F(xiàn)OV：2218，矩陣：200180，層厚：5 cm，NEX：2～3 次，層間距為2 mm，對(duì)患者施加增強(qiáng)掃描，行冠狀位、矢狀位及橫軸位的掃描。測(cè)量共3 次后取平均值，獲得最終的RMSI 值、log 值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SSPS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法比較兩個(gè)位點(diǎn)的等位基因和基因型在各組中的分布差異。采用二元Logistic 回歸分析MEIS1 基因rs1820989、rs113851554 多態(tài)性2 個(gè)位點(diǎn)表達(dá)與血液透析維持伴RLS 患者的相關(guān)生化指標(biāo)的相關(guān)性，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血液透析維持伴RLS 患者與特發(fā)性RLS 患者之間MEIS1 基因多態(tài)性2 個(gè)位點(diǎn)表達(dá)比較 應(yīng)用Logistic 回歸分析顯示，血液透析維持伴RLS 患者與特發(fā)性RLS 患者的發(fā)生均與MEIS1 基因多態(tài)性的2個(gè)位點(diǎn)表達(dá)有關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 血液透析維持伴RLS 患者與特發(fā)性RLS 患者之間MEIS1 基因多態(tài)性2 個(gè)位點(diǎn)表達(dá)比較[例（%）]

2.2 MEIS1 基因rs1820989、rs113851554 多態(tài)性2個(gè)位點(diǎn)表達(dá)與血液透析維持伴RLS 患者的相關(guān)生化指標(biāo)相關(guān)性 采用Logistic 回歸分析，可得出MEIS1基因rs113851554、rs1820989 多態(tài)性與Kt/V、Ca 水平無(wú)關(guān)（P＞0.05）；與β2-MG、BUN、Scr、Hb、PTH、P、CRP、TS 相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表2、3。

表2 MEIS1 基因rs1820989 多態(tài)性與血液透析維持伴RLS 患者的相關(guān)生化指標(biāo)相關(guān)性[例（%）]

表3 MEIS1 基因rs113851554 多態(tài)性與血液透析維持伴RLS 患者的相關(guān)生化指標(biāo)相關(guān)性[例（%）]

2.3 MEIS1 基因rs1820989、rs113851554 多態(tài)性分別與血液透析維持伴RLS 患者的MRI 參數(shù)相關(guān)性采用Logistic 回歸分析，顯示MEIS1 基因rs113851554、rs1820989 多態(tài)性與MRI 參數(shù)的幅度log 值及RMSI值相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表4、5。

表4 MEIS1 基因rs1820989 多態(tài)性與血液透析維持伴RLS 患者M(jìn)RI 參數(shù)的相關(guān)性[例（%）]

表5 MEIS1 基因rs113851554 多態(tài)性與血液透析維持伴RLS 患者M(jìn)RI 參數(shù)的相關(guān)性[例（%）]

2.4 MEIS1 基因s1820989、rs113851554 多態(tài)性與特發(fā)性RLS 患者的MRI 參數(shù)的相關(guān)性 采用Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，MEIS1 基因s1820989、rs113851554多態(tài)性均與MRI 參數(shù)RMSI 值、幅度log 值有關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表6、7。

表6 MEIS1 基因rs1820989 多態(tài)性與特發(fā)性RLS 患者M(jìn)RI 參數(shù)的相關(guān)性[例（%）]

表7 MEIS1 基因rs113851554 基因多態(tài)性與特發(fā)性RLS患者的MRI 參數(shù)的相關(guān)性[例（%）]

3 討 論

RLS 屬于一種中樞性神經(jīng)系統(tǒng)病癥，可分為癥狀性及特發(fā)性兩種，多數(shù)特發(fā)性患者存在家族史，呈現(xiàn)常染色體顯性或隱性遺傳[6-7]。MEIS1 是指同源盒基因中三氨基酸環(huán)延伸家族的成員，通過(guò)和同源框基因（HOX）蛋白及其他的轉(zhuǎn)錄因子互相作用進(jìn)而發(fā)揮對(duì)細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)作用，且MEIS1 基因在多種類的正常造血組織內(nèi)有著廣泛的表達(dá)[8-9]。本研究發(fā)現(xiàn)，MEIS1 基因rs113851554、rs1820989 多態(tài)性與BUN、PTH、Scr、β2-MG、CRP、TS、Hb 表 達(dá) 及MRI 參 數(shù)RMSI 值、幅度log 值變化相關(guān)。表明RLS 患者中CRP、BUN、β2-MG、PTH、Scr、Hb、TS 可通過(guò)MEIS1基因進(jìn)行影響。

血液透析患者會(huì)伴隨機(jī)體中毒素的積聚使得體內(nèi)肌肉萎縮、貧血等狀況，久之引起RLS 疾病[10-11]。有研究對(duì)接受血液透析的RLS 患者疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行探究，發(fā)現(xiàn)糖尿病史及透析齡較長(zhǎng)為主要的影響因素[12-13]。研究指明，老年屬于發(fā)生RLS 病癥的主要保護(hù)性因素，而腹膜透析、年齡≥35 歲、高表達(dá)的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-23（FGF-23）、Hb≤9.8 g/dL、TS＜47%、CRP≥1.24 mg/dL、血清鐵蛋白（SF）≤700 ng/mL 及P＞5.2 mg/dL 為透析患者發(fā)生RLS 疾病的風(fēng)險(xiǎn)因素[14]。本研究顯示，血液透析維持伴RLS 與CRP、TS、β2-MG、BUN、Scr、PTH、Hb 以及幅度log 值、RMSI 值與MEIS1 基因s1820989、rs113851554 多態(tài)性有著一定的相關(guān)性。表明可通過(guò)進(jìn)一步分析血液透析維持伴RLS 患者癥狀發(fā)生的主要因素，為臨床對(duì)該類患者的病癥更好的進(jìn)行干預(yù)。

綜上所述，在MEIS1 基因s1820989、rs113851554多態(tài)性的基礎(chǔ)上分析血液透析維持與RLS 的相關(guān)性，探討MEIS1 基因多態(tài)性與患者發(fā)生血液透析維持伴RLS 的關(guān)聯(lián)性，可以證實(shí)β2-MG、BUN、TS、Scr、Hb、PTH、CRP 的水平變化可作為血液透析維持伴RLS 疾病主要特異及敏感的生物學(xué)指標(biāo)，為分析血液透析維持伴RLS 患者患病的主要病理機(jī)制及干預(yù)提供了依據(jù)，為臨床治療帶來(lái)契機(jī)。