痰熱清注射液對(duì)9 種腫瘤標(biāo)志物電化學(xué)發(fā)光法、光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果的干擾情況觀察

尹元，張賽，王正印，趙延榮，顧征璟，邢嘉翌，胡昀昭，陸群

1 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200082；2 復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院生物樣本庫(kù)

近年來，惡性腫瘤發(fā)病率持續(xù)上升，腫瘤標(biāo)志物在腫瘤的早診斷和早治療發(fā)揮重要作用。腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)目前主要采用化學(xué)發(fā)光法，包括直接化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)發(fā)光法和光激化學(xué)發(fā)光法等。研究［1-3］顯示，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的結(jié)果可能受到多種因素的干擾，如部分基于生物素鏈霉親和素的化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物、心肌標(biāo)志物和內(nèi)分泌檢測(cè)項(xiàng)目的結(jié)果受到了明顯干擾［4］。近年來，臨床上對(duì)藥物干擾檢測(cè)結(jié)果給予了很多關(guān)注。隨著中藥在臨床上的廣泛使用，特別是在中醫(yī)醫(yī)院和中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，中藥對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的干擾日益受到廣泛關(guān)注。痰熱清注射液是一種具有抑菌抗毒、抗炎解熱、祛痰鎮(zhèn)咳、護(hù)膽利肝作用的中藥注射液，臨床應(yīng)用廣泛［5-6］。在臨床工作中，我們偶然發(fā)現(xiàn)個(gè)別患者的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符，經(jīng)查閱患者病史發(fā)現(xiàn)其使用了痰熱清注射液。2022年9月—2023年10月，我們觀察了痰熱清注射液對(duì)9 種腫瘤標(biāo)志物電化學(xué)發(fā)光法、光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果的干擾情況，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 痰熱清注射液、儀器及試劑 痰熱清注射液（20 mL/瓶）購(gòu)自上海凱寶藥業(yè)有限公司，批號(hào)1609216。Roche Cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀和科美Lica500 全自動(dòng)光激化學(xué)發(fā)光免疫分析儀均為本實(shí)驗(yàn)室正常在用儀器，已按照相關(guān)規(guī)范進(jìn)行儀器校準(zhǔn)和相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目的分析性能驗(yàn)證。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)質(zhì)控品購(gòu)自上海市臨床檢驗(yàn)中心。

1.2 痰熱清注射液藥物干擾濃度的確定 根據(jù)國(guó)際臨床化學(xué)和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)（International Federation of Clinical Chemistry and laboratory medicine ，IFCC）的建議，我們將干擾藥物濃度設(shè)定為該藥物治療濃度的10倍［7］。根據(jù)痰熱清注射液的藥品說明書，該藥的治療用量為1 瓶/日（20 mL/瓶），經(jīng)計(jì)算得到其藥物治療濃度為4 mL/L（血清藥物濃度），即本研究中使用的痰熱清注射液的藥物干擾濃度為40 mL/L。

1.3 檢測(cè)樣本的制備 收集近期未使用痰熱清注射液的上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院腫瘤科患者和健康人新鮮血清（無黃疸、溶血和脂血）混合制備基礎(chǔ)樣本。將40 μL 痰熱清注射液和注射用水分別加入960 μL 基礎(chǔ)樣本中，分別配制成干擾樣本和對(duì)照樣本，用于后續(xù)檢測(cè)。

1.4 痰熱清注射液對(duì)9 種腫瘤標(biāo)志物電化學(xué)發(fā)光法、光激化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)結(jié)果干擾情況觀察 采用干擾篩選試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前已對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行儀器校準(zhǔn)和檢測(cè)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證，并常規(guī)開展室內(nèi)質(zhì)量控制，檢測(cè)系統(tǒng)均符合要求。通過每日的室內(nèi)質(zhì)控評(píng)估檢測(cè)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，得到相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目的精密度。將基礎(chǔ)樣本檢測(cè)10次，計(jì)算批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差s，計(jì)算dmax/s，然后查dmax/s與重測(cè)次數(shù)對(duì)應(yīng)表得出各項(xiàng)目重復(fù)測(cè)定次數(shù)，計(jì)算得本研究中腫瘤標(biāo)志物項(xiàng)目重復(fù)檢測(cè)次數(shù)為3 次。分別采用電化學(xué)發(fā)光法、光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)基礎(chǔ)樣本、干擾樣本和對(duì)照樣本中9種腫瘤標(biāo)志物（AFP、CEA、CA125、CA15-3、CA19-9、CA72-4、TPSA、FPSA、CYFRA21-1），測(cè)定三次并計(jì)算均值，計(jì)算藥物干擾值（dobs）、最大允許干擾值（dc）。藥物干擾值（dobs）=干擾樣本均值-對(duì)照樣本均值。參考2022年國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心臨床檢驗(yàn)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)中使用的腫瘤標(biāo)志物的允許總誤差（allowable total error，TEa）作為項(xiàng)目的允許總誤差（25%），按照臨床檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定腫瘤標(biāo)志物的最大允許干擾值（dc）為1/3 Tea（8.33%），即dc=對(duì)照樣本均值×1/3 Tea（8.33%）。將dobs與dc進(jìn)行比較，若dobs的絕對(duì)值＜dc，則不存在干擾；dobs的絕對(duì)值＞dc且dobs為正，則表明藥物對(duì)檢測(cè)結(jié)果存在正干擾；若dobs的絕對(duì)值＞dc且dobs為負(fù)，則表明藥物對(duì)檢測(cè)結(jié)果存在負(fù)干擾。

1.5 痰熱清注射液的干擾效應(yīng)及最低干擾濃度測(cè)算 采用劑量效應(yīng)試驗(yàn)。使用干擾樣本和對(duì)照樣本配置藥物濃度分別為0 mL/L、10 mL/L、20 mL/L、30 mL/L、40 mL/L 的劑量效應(yīng)試驗(yàn)樣本，使用“1.4”中判定為存在干擾的檢測(cè)方法檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物濃度，測(cè)定三次并計(jì)算均值，計(jì)算干擾效應(yīng)。干擾效應(yīng)=（各濃度樣本均值-0 mL/L 樣本均值）/0 mL/L 樣本均值×100%。為降低系統(tǒng)漂移影響，第1 次檢測(cè)按照樣本濃度降序檢測(cè)，第2 次檢測(cè)按樣本濃度升序檢測(cè)，第3 次檢測(cè)按樣本濃度降序檢測(cè)。采用多項(xiàng)式回歸法建立干擾劑量效應(yīng)擬合方程，以干擾效應(yīng)為最大允許干擾值時(shí)，計(jì)算最低干擾濃度。

2 結(jié)果

2.1 痰熱清注射液對(duì)9 種腫瘤標(biāo)志物的電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果干擾情況 電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)基礎(chǔ)樣本中9 種腫瘤標(biāo)志物的濃度均值分別為AFP 24.45 ng/mL、CEA 25.72 ng/mL、CA125113.80 U/mL、CA15-361.81 U/mL、CA72-428.19 U/mL、TPSA 14.27 ng/mL、FPSA 0.808 ng/mL、CA19-954.28 U/mL、CYFRA2113.01 ng/mL，對(duì)照樣本濃度均值分別為24.03 ng/mL、23.69 ng/mL、107.00 U/mL、56.20 U/mL、27.35 U/mL、13.08 ng/mL、0.755 ng/mL、50.57 U/mL、12.73 ng/mL，干擾樣本濃度均值分別為23.18 ng/mL、23.56 ng/mL、105.86 U/mL、58.23 U/mL、27.33 U/mL、13.08 ng/mL、0.770 ng/mL、34.28 U/mL、12.67 ng/mL，痰熱清注射液對(duì)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)9種腫瘤標(biāo)志物的干擾篩選試驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可知，痰熱清注射液對(duì)CA19-9 的電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果存在負(fù)干擾，對(duì)AFP、CEA、CA125、CA15-3、CA72-4、TPSA、FPSA、CYFRA21-1 等8 種腫瘤標(biāo)志物的電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果均無干擾。

表1 痰熱清注射液對(duì)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)9種腫瘤標(biāo)志物的干擾篩選試驗(yàn)結(jié)果

2.2 痰熱清注射液對(duì)9種腫瘤標(biāo)志物的光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果干擾情況 光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)基礎(chǔ)樣本中9 種腫瘤標(biāo)志物的濃度均值分別為AFP 24.54 ng/mL、CEA 21.43 ng/mL、CA125120.03 U/mL、CA15-337.20 U/mL、CA72-432.64 U/mL、TPSA 14.20 ng/mL、FPSA 0.97 ng/mL、CA19-955.22 U/mL、CYFRA2110.52 ng/mL，對(duì)照樣本濃度均值分別為22.81 ng/mL、20.14 ng/mL、121.62 U/mL、34.50 U/mL、36.82 U/mL、14.94 ng/mL、0.92 ng/mL、60.40 U/mL、11.36 ng/mL，干擾樣本濃度均值分別為23.53 ng/mL、19.78 ng/mL、120.86 U/mL、34.23 U/mL、37.41 U/mL、14.36 ng/mL、0.92 ng/mL、58.37 U/mL、11.05 ng/mL，痰熱清注射液對(duì)光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)9 種腫瘤標(biāo)志物的干擾篩選試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可知，痰熱清注射液對(duì)9 種腫瘤標(biāo)志物的光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果均無干擾。

表2 痰熱清注射液對(duì)光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)9種腫瘤標(biāo)志物的干擾篩選試驗(yàn)結(jié)果

2.3 痰熱清注射液的干擾效應(yīng)及最低干擾濃度痰熱清注射液對(duì)CA19-9 干擾的劑量效應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3 可知，當(dāng)藥物濃度為40 mL/L 時(shí)，痰熱清注射液對(duì)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)CA19-9 的干擾效應(yīng)為-29.28%。建立的干擾劑量效應(yīng)擬合方程為：Y=-0.7231X-1.938（R2=0.9784）。其中Y 為干擾效應(yīng)值，X 為干擾藥物濃度，R2為相關(guān)系數(shù)。當(dāng)Y=-8.33 時(shí)，X 為8.84 mL/L，即痰熱清注射液對(duì)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)CA19-9 產(chǎn)生干擾的最低干擾濃度為8.84 mL/L。

表3 痰熱清注射液對(duì)CA19-9干擾的劑量效應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

藥物干擾在對(duì)臨床檢驗(yàn)結(jié)果的干擾中普遍存在［8］。齊志宏等［9］研究發(fā)現(xiàn)，羥苯磺酸鈣能夠?qū)γ阜z測(cè)血肌酐產(chǎn)生明顯的負(fù)干擾。在前期研究［10-11］中，我們也發(fā)現(xiàn)痰熱清注射液和紅花注射液對(duì)部分臨床生化檢驗(yàn)項(xiàng)目也存在明顯干擾。在臨床免疫學(xué)檢測(cè)中，有很多物質(zhì)會(huì)造成干擾，如異嗜性抗體（heterophile antibody，HAb）、類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）、人抗動(dòng)物抗體（human anti-animal antibody，HAAb）、自身抗體等，這些物質(zhì)主要是與被測(cè)物化學(xué)結(jié)構(gòu)存在差異但活性類似的物質(zhì)［12］。一些治療性藥物抗體也可以通過與檢測(cè)試劑中的抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原，對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾，如使用地高辛抗體Fab片段［13］。羅氏電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)CA19-9是將樣本、生物素化的CA19-9 單克隆抗體和釕（Ru）a 標(biāo)記的CA19-9特異性單抗一起孵育，形成抗原抗體夾心復(fù)合物。隨后添加包被鏈霉親合素的磁珠微粒進(jìn)行孵育，復(fù)合體與磁珠通過生物素和鏈霉親合素的作用結(jié)合。隨后將反應(yīng)液吸入測(cè)量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面，未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過清洗液被去除，給電極加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍增器測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度以確定含量。電化學(xué)發(fā)光法因其特異性好、靈敏度高、檢測(cè)范圍寬等優(yōu)點(diǎn)已廣泛應(yīng)用于臨床免疫學(xué)檢測(cè)［14］。羅氏CA19-9試劑說明書指出，廠商已經(jīng)對(duì)可能的干擾因素進(jìn)行了驗(yàn)證，并指出CA19-9的檢測(cè)結(jié)果不受黃疸（膽紅素＜1129 μmol/L或＜66 mg/dL）、溶血（血紅蛋白＜1.4 mmol/L 或＜2.2 g/dL）、脂血（脂肪乳劑＜1500 mg/dL）和生物素（＜100 ng/mL 或＜409 nmol/L）的影響。同時(shí)也不受27 種常用藥物和類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF＜1500 IU/mL）的干擾，但并未指出具體藥物名稱。但對(duì)于接受高劑量生物素治療的患者（＞5 mg/d），必須在末次生物素治療8 h 后再進(jìn)行采血檢測(cè)。

痰熱清注射液是一種由黃芩、連翹、金銀花、山羊角、熊膽粉等組成的中成藥，具有清熱解毒、鎮(zhèn)咳平喘、抗炎等作用，在臨床使用中表現(xiàn)出確切療效，使用廣泛［15］。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)痰熱清注射液對(duì)羅氏Cobas e601 電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)CA19-9 產(chǎn)生了明顯負(fù)干擾，但干擾的具體機(jī)制尚不清楚。由于藥物的種類繁多，特別是中藥的復(fù)雜性，因此藥物對(duì)臨床檢驗(yàn)結(jié)果的干擾通常比較隱匿［16］。本研究也存在一定的局限性，如本研究是在體外進(jìn)行的干擾研究，藥物在體內(nèi)的代謝和存在形式和體外可能存在差異。此外不同廠家生產(chǎn)的痰熱清注射液可能由于成分的差異也對(duì)結(jié)果的干擾存在差異。

綜上所述，痰熱清注射液對(duì)CA19-9的電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果存在負(fù)干擾，干擾效應(yīng)為-29.28%，最低干擾濃度為8.84 mL/L。痰熱清注射液對(duì)光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)9種腫瘤標(biāo)志物沒有干擾。因此我們建議臨床醫(yī)生和檢驗(yàn)人員都需對(duì)該項(xiàng)目的檢測(cè)中的干擾因素給予足夠的重視。同時(shí)體外診斷試劑廠商應(yīng)該對(duì)藥物干擾引起高度重視，在產(chǎn)品驗(yàn)證階段應(yīng)對(duì)可能的干擾藥物進(jìn)行充分驗(yàn)證并在試劑盒說明書中告知用戶。為了盡可能減少藥物的使用對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾，檢驗(yàn)人員當(dāng)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果和臨床不符時(shí)，可以采取樣品稀釋、更換檢測(cè)系統(tǒng)或聯(lián)系臨床重新采樣等方式來消除干擾以得到正確結(jié)果指導(dǎo)臨床的診療。