照山白浸膏片的快速多信息梯度薄層鑒別

劉 勇，安麗娜，安 靜，王立偉，石巖碩，申玉龍，董占軍△

（1. 河北省人民醫(yī)院，河北 石家莊 050051； 2. 承德燕峰藥業(yè)有限責(zé)任公司，河北 石家莊 050051）

照山白浸膏片為部頒標(biāo)準(zhǔn)［1］收載品種，主成分為照山白單味藥材。原標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下僅收載了照山白浸膏片的顯微鑒別和顯色反應(yīng)，無法全面控制制劑的質(zhì)量。崔小麗等［2］對(duì)照山白浸膏片進(jìn)行了薄層色譜鑒別，采用2種展開劑分別鑒別了制劑中金絲桃苷、槲皮素和山柰素3 種成分。王志軒等［3］采用高效液相色譜法，以梯度洗脫的方式同時(shí)測(cè)定了照山白浸膏片中上述3 種成分含量。多信息梯度薄層鑒別將中藥指紋圖譜［4-5］的內(nèi)涵引申到薄層鑒別領(lǐng)域，按脂溶性、中極性、水溶性的梯度順序，以薄層鑒別的形式檢視藥材中多種成分信息斑點(diǎn)。本研究中參照文獻(xiàn)［6-9］，對(duì)照山白浸膏片進(jìn)行了多信息梯度薄層色譜（TLC）鑒別研究?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

KQ3200E 型醫(yī)用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ZF-2型三用紫外分析儀（上海市安亭電子儀器廠）；AX205DU型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.1 mg）；ST16R 型高速冷凍離心機(jī)（德國Thermo Fisher Scientific公司）。

1.2 試藥

照山白浸膏片樣品（承德燕峰藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為20210618）；照山白對(duì)照藥材（河北省保定市安國藥材批發(fā)市場(chǎng)，批號(hào)為20201002），由河北省藥品檢驗(yàn)研究院段吉平主任藥師鑒定為正品；硅膠GF254薄層板（青島海洋化工有限公司）；甲醇、乙酸乙酯、甲酸、三氯甲烷、濃氨試液等均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

取樣品（除去包衣，研細(xì)）0.7 g，精密稱定，加70%甲醇3 mL，超聲（功率120 W、頻率40 kHz，下同）處理15 min，4 000 r/min離心10 min，取上清液，即得供試品溶液；取照山白對(duì)照藥材細(xì)粉0.5 g，精密稱定，加70%甲醇2 mL，超聲處理15 min，離心，取上清液，即得對(duì)照藥材溶液。

2.2 薄層鑒別

脂溶性成分：吸取2.1 項(xiàng)下供試品溶液4μL、對(duì)照藥材溶液6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨水（7.2∶2.2∶3.4∶1，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖1 A）；噴以1%三氯化鋁乙醇溶液（第1次顯色），熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖1 B）；再噴以10%硫酸乙醇溶液（第2 次顯色），105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖1 C）；置暗室內(nèi)透光檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖1 D）。結(jié)果共獲得27個(gè)脂溶性成分斑點(diǎn)。

圖1 脂溶性成分薄層色譜圖1，3 - 5.Test solution 2.Reference medicinal solutionA.Under UV lamp（365 nm） B.After the first color development under UV lamp（365 nm） C.After the second color development under UV lamp（365 nm） D.After the second color development under darkroom light transmissionFig.1 TLC chromatograms of liposoluble components

中極性成分：吸取2.1項(xiàng)下供試品溶液4μL、對(duì)照藥材溶液5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨水（3∶5∶4∶1，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖2 A）；置紫外光燈（254 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖2 B）；噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖2 C）；置暗室內(nèi)透光檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液相應(yīng)位置顯相同顏色斑點(diǎn)（圖2 D）。結(jié)果共獲得26個(gè)中極性成分斑點(diǎn)。

圖2 中極性成分薄層色譜圖1 - 3，5.Test solution 4.Reference medicinal solutionA.Under UV lamp（365 nm） B.Under UV lamp（254 nm） C.After the color development under UV lamp（365 nm） D.After the color development under darkroom light transmissionFig.2 TLC chromatograms of medium - pola components

水溶性成分：吸取2.1 項(xiàng)下供試品溶液3μL、對(duì)照藥材溶液4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨水（2∶3∶5∶1，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖3 A）；置紫外光燈（254 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖3 B）；噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖3 C）；置日光燈下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖3 D）。結(jié)果共獲得21個(gè)水溶性成分斑點(diǎn)。

圖3 水溶性成分薄層色譜圖1.Reference medicinal solution 2 - 5.Test solutionA.Under UV lamp（365 nm） B.Under UV lamp（254 nm） C.After the color development under UV lamp（365 nm） D.After the color development under daylight lampFig.3 TLC chromatograms of water - soluble components

3 討論

采用3 種極性梯度展開劑，以各自4 種條件下檢視，薄層色譜圖中呈現(xiàn)的斑點(diǎn)形狀、大小、比移值均不同，且互不干擾，在各自的層次上均呈現(xiàn)出特有的斑點(diǎn)。3塊薄層板在多檢視條件下進(jìn)行多成分累加，分別檢出脂溶性、中極性、水溶性成分斑點(diǎn)27，26，21 個(gè)，歸屬15，16，13種化學(xué)成分，去除因極性間的銜接產(chǎn)生的重復(fù)斑點(diǎn)后共歸屬約26種化學(xué)成分。斑點(diǎn)顏色各異、清晰、直觀，易于識(shí)別、對(duì)比和判斷。

綜上所述，本研究中建立的多信息梯度薄層鑒別方法簡便、快捷，成本低、效率高，且檢測(cè)的成分信息斑點(diǎn)多，優(yōu)于指紋圖譜法［10-13］，可為照山白浸膏片的質(zhì)量控制提供參考。