血清HCG、D-二聚體、G-CSF聯(lián)合檢測(cè)對(duì)反復(fù)種植失敗患者妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值*

葉旭鑫,張 昭,袁玉清

東莞市人民醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科;2.生殖醫(yī)學(xué)科,廣東東莞 523000

目前我國育齡夫婦的不孕癥發(fā)生率約為10%[1]。雖然輔助生殖技術(shù)幫助了許多不孕夫婦成功懷孕,但接受輔助生殖技術(shù)的不孕夫婦中有10%～15%在多次體外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期后未能懷孕[2],這些患者被定義為反復(fù)種植失敗(RIF)患者。不孕癥診斷及治療過程不僅給患者家庭增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),同時(shí)還可能面臨社會(huì)輿論,使患者產(chǎn)生一定心理壓力。RIF的病因復(fù)雜,主要包括遺傳異常、內(nèi)分泌紊亂、生殖道解剖結(jié)構(gòu)異常、感染或某些自身免疫性疾病及易栓癥等[3]。如何預(yù)測(cè)、改善RIF患者的治療結(jié)局,提高種植成功率一直是研究的熱點(diǎn)問題。人絨毛膜促性腺激素(HCG)作為最早人胚胎源的信號(hào),與胚胎著床關(guān)系最為密切[4]。D-二聚體作為機(jī)體高凝狀態(tài)及血栓形成的重要標(biāo)志物,在健康妊娠女性中隨著孕周的增加,D-二聚體水平呈逐漸升高的趨勢(shì)[5]。粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)作為調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜免疫細(xì)胞功能的細(xì)胞因子,可以提高子宮內(nèi)膜容受性、胚胎著床率,降低復(fù)發(fā)性流產(chǎn),在母體和胚胎之間發(fā)揮著重要的作用[6]。因此,本研究檢測(cè)RIF患者血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平,探討其與妊娠結(jié)局的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年5月至2022年5月在本院進(jìn)行IVF-ET的RIF患者80例作為研究對(duì)象,年齡25～38歲,平均(31.59±3.64)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合RIF診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],既往移植≥3次高質(zhì)量胚胎或多次移植≥10個(gè)胚胎仍然未能獲得臨床妊娠者。(2)尿檢日HCG結(jié)果為陽性。(3)患者卵巢功能正常;(4)未接受抗凝治療,如阿司匹林、低分子量肝素注射液;(5)患者超聲或腹腔鏡檢查結(jié)果正常;(6)夫妻雙方染色體核型分析結(jié)果正常;(7)患者進(jìn)行IVF-ET后妊娠成功到中晚期;(8)患者臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)患者存在生殖道感染和生殖器畸形;(2)有遺傳學(xué)疾病或家族遺傳史;(3)合并心血管疾病及自身免疫性疾病;(4)心、肝、腎等重要臟器功能障礙;(5)精神、認(rèn)知存在障礙。本研究經(jīng)過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。已獲得所有參與者的知情同意。根據(jù)是否發(fā)生不良妊娠結(jié)局分為妊娠結(jié)局良好組與妊娠結(jié)局不良組。

1.2方法 分別在2周(驗(yàn)孕日)、6～<13周(孕早期)、13～<25周(孕中期)和25～37周(孕晚期)對(duì)所有RIF患者進(jìn)行常規(guī)孕檢。采集RIF患者肘靜脈血6 mL,分別加至枸櫞酸鈉抗凝管和促凝劑管中混合均勻。以3 000 r/min離心10 min,取上層血漿、血清備用。采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清HCG,免疫比濁法檢測(cè)血D-二聚體,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清G-CSF水平,具體操作步驟嚴(yán)格按照各試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1妊娠結(jié)局 80例RIF患者中有48例妊娠結(jié)局良好(妊娠結(jié)局良好組),有32例發(fā)生不良妊娠(妊娠結(jié)局不良組),其中妊娠結(jié)局不良組中早產(chǎn)12例(15.00%),宮內(nèi)窘迫10例(12.50%),產(chǎn)后出血3例(3.75%),巨大兒1例(1.25%),低體重兒6例(7.50%)。

2.2不同妊娠階段血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平比較 驗(yàn)孕日、孕早期、孕中期、孕晚期血清HCG水平逐漸降低,血清D-二聚體與G-CSF水平逐漸升高(P<0.05)。妊娠結(jié)局不良組各階段血清HCG水平低于妊娠結(jié)局良好組(P<0.05),血清D-二聚體與G-CSF水平高于妊娠結(jié)局良好組(P<0.05)。見表1～3。

表1 不同妊娠階段血清HCG水平變化

表2 不同妊娠階段血清D-二聚體水平變化

表3 不同妊娠階段血清G-CSF水平變化

2.3血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平與妊娠結(jié)局的相關(guān)性 血清HCG水平與妊娠結(jié)局不良呈負(fù)相關(guān)(r=-0.506,P<0.05);血清D-二聚體、G-CSF水平與妊娠結(jié)局不良呈正相關(guān)(r=0.498、0.542,P<0.05)。見表4。

表4 血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平與妊娠結(jié)局的相關(guān)性

2.4多因素Logistic回歸分析RIF患者妊娠結(jié)局不良的影響因素 以RIF患者妊娠結(jié)局為因變量,以血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平為自變量,進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示HCG、D-二聚體、G-CSF是RIF患者妊娠結(jié)局不良的影響因素(P<0.05)。見表5。

表5 RIF患者妊娠結(jié)局不良的影響因素

2.5血清HCG、D-二聚體、G-CSF對(duì)RIF患者妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值 繪制驗(yàn)孕日血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平預(yù)測(cè)RIF患者妊娠結(jié)局的ROC曲線,結(jié)果顯示,血清HCG、D-二聚體、G-CSF單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)RIF患者妊娠結(jié)局的曲線下面積(AUC)分別為0.877、0.947、0.911和0.971,靈敏度分別為88.10%、88.10%、90.48%和95.24%,特異度分別為81.58%、97.37%、76.32%和89.47%,三者聯(lián)合可提高預(yù)測(cè)效能(P<0.05)。見表6、圖1。

圖1 血清HCG、D-二聚體、G-CSF預(yù)測(cè)妊娠結(jié)局的ROC曲線

表6 血清HCG、D-二聚體、G-CSF對(duì)妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討 論

盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在將IVF-ET應(yīng)用于不孕患者的治療方面取得了巨大進(jìn)展,但RIF患者胚胎移植的成功率只有30%,對(duì)育齡夫婦及其家庭造成巨大的心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[8-9],迫切需要尋求新的手段來提高種植成功率。成功植入取決于胚胎質(zhì)量和子宮內(nèi)膜容受性,子宮內(nèi)膜容受性是一個(gè)復(fù)雜的過程,涉及許多分子的參與和調(diào)節(jié),包括細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、黏附分子和細(xì)胞骨架蛋白等[10]。RIF患者大多有子宮內(nèi)膜容受性障礙,有研究報(bào)道了改善子宮內(nèi)膜容受性的方法,包括低劑量阿司匹林治療、宮內(nèi)輸注HCG或G-CSF等[11],但是低妊娠成功率問題始終沒有得到有效解決,因此尋找可以有效預(yù)測(cè)RIF患者妊娠結(jié)局的血清學(xué)指標(biāo),及時(shí)采取措施改善妊娠結(jié)局至關(guān)重要。

HCG是由合體滋養(yǎng)層產(chǎn)生的一種糖蛋白,維持發(fā)育中胎盤的血液供應(yīng),并作為調(diào)節(jié)著床、侵襲和細(xì)胞生長(zhǎng)的自分泌因子發(fā)揮作用[12]。HCG水平在絨毛膜羊膜炎孕婦中表達(dá)異常,可以預(yù)測(cè)胎膜早破和新生兒結(jié)局[13]。宮外孕早期、胚胎著床環(huán)境差、絨毛發(fā)育異常、HCG分泌減少等,可降低黃體分泌的雌二醇和孕酮水平,導(dǎo)致子宮內(nèi)膜得不到滋養(yǎng)[14]。研究發(fā)現(xiàn)HCG在子癇前期的孕婦血清中水平升高,可以有效預(yù)測(cè)子癇前期的發(fā)生[15]。本研究發(fā)現(xiàn)RIF患者不同妊娠階段血清HCG水平逐漸降低,各階段妊娠結(jié)局不良組血清HCG水平低于妊娠結(jié)局良好組,提示HCG水平的高低與不良妊娠結(jié)局的發(fā)生有關(guān)。

D-二聚體作為機(jī)體高凝狀態(tài)及血栓形成的重要標(biāo)志物,在健康妊娠女性中隨著孕周的增加,水平呈逐漸升高的趨勢(shì)[16]。王婧彥等[17]研究發(fā)現(xiàn)多囊卵巢綜合征患者行IVF-ET后,妊娠丟失組患者的D-二聚體水平高于未丟失組。周凌云等[18]研究發(fā)現(xiàn)在不同妊娠時(shí)期妊娠結(jié)局不良組血清D-二聚體水平高于正常妊娠結(jié)局組。本研究發(fā)現(xiàn)RIF患者不同妊娠階段血清D-二聚體水平逐漸升高,各階段妊娠結(jié)局不良組血清D-二聚體水平高于妊娠結(jié)局良好組,提示D-二聚體水平的高低與不良妊娠結(jié)局的發(fā)生有關(guān)。

G-CSF是一種氨基酸多肽,主要刺激具有高親和力受體的多形核粒細(xì)胞,可以調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性和免疫細(xì)胞,對(duì)滋養(yǎng)層生長(zhǎng)和胎盤代謝具有積極影響[19]。研究發(fā)現(xiàn)G-CSF在胎膜早破患者中的血清水平明顯高于正常妊娠孕婦[20-21]。本研究發(fā)現(xiàn)RIF患者不同妊娠階段血清G-CSF水平逐漸升高,各階段妊娠結(jié)局不良組血清G-CSF水平高于妊娠結(jié)局良好組,提示G-CSF水平的高低與不良妊娠結(jié)局的發(fā)生有關(guān)。

Spearman相關(guān)分析顯示,血清HCG水平與妊娠結(jié)局不良呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),血清D-二聚體、G-CSF水平與妊娠結(jié)局不良呈正相關(guān)(P<0.05)。血清HCG、D-二聚體、G-CSF單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)RIF患者妊娠結(jié)局的AUC分別為0.877、0.947、0.911和0.971,靈敏度分別為88.10%、88.10%、90.48%和95.24%,特異度分別為81.58%、97.37%、76.32%和89.47%,三者聯(lián)合可提高預(yù)測(cè)效能(P<0.05),提示血清HCG、D-二聚體、G-CSF聯(lián)合可用于RIF患者妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)。

綜上所述,不同妊娠結(jié)局的RIF患者血清HCG、D-二聚體、G-CSF水平不同,三者聯(lián)合檢測(cè)可以有效預(yù)測(cè)RIF患者的妊娠結(jié)局。