重癥壞死性胰腺炎患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p表達與病情嚴重程度及預(yù)后的關(guān)系*

劉風(fēng)浩,周真真,李學(xué)峰,張旭東,馬忠廣

滄州市中心醫(yī)院:1.肝膽胰外二科;2.日間手術(shù)室,河北滄州 061000;3.鹽山縣人民醫(yī)院普外科,河北滄州 061399

重癥壞死性胰腺炎屬于急性胰腺炎(AP)的一種,類型比較特殊,是ICU常見的危重癥。該病發(fā)展迅速、病情兇險、病死率高[1]。重癥壞死性胰腺炎是由于胰腺異常分泌蛋白酶引起胰腺自身消化,導(dǎo)致機體應(yīng)激性釋放大量炎癥因子,引起全身炎癥反應(yīng)綜合征,損傷機體各個組織器官,嚴重威脅患者生命安全[2]。因此,及時評估患者病情,預(yù)測患者預(yù)后死亡風(fēng)險對降低患者病死率和提高生活質(zhì)量具有重要意義。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類長度為200～100 000個核苷酸的非編碼蛋白質(zhì)RNA分子,可對細胞生長、發(fā)育等生理活動進行調(diào)控,在多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮作用[3]。有研究發(fā)現(xiàn),AP細胞模型中上調(diào)miR-29a基因表達可增加胰腺細胞凋亡率,且lncRNA MEG3可通過miR-29a通路對細胞周期進行調(diào)控[4]。微小RNA(miRNA)作為重要的多功能調(diào)控因子,在細胞分化、增值、凋亡過程中發(fā)揮重要作用,miRNA的異常表達與多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)[5]。miR-195-5p作為miRNA家族成員之一,參與多種炎癥疾病的發(fā)生發(fā)展[6]。但二者在重癥壞死性胰腺炎中的作用目前研究較少,因此,本研究旨在探討血清lncRNA MEG3、miR-195-5p在重癥壞死性胰腺炎患者中的表達情況及其與病情嚴重程度和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年10月至2023年1月滄州市中心醫(yī)院收治的122例AP患者為研究對象,其中男68例、女54例,年齡28～69歲,平均(46.39±8.49)歲。根據(jù)相關(guān)標準[7],參照急性生理學(xué)和慢性健康狀況評價Ⅱ(APACHEⅡ)評分和AP嚴重程度估計指標(Ranson評分)將AP患者分為非重癥組(非重癥壞死性胰腺炎患者69例,Ranson評分<3分,APACHEⅡ評分<8分)和重癥組(重癥壞死性胰腺炎患者53例,Ranson評分≥3分,APACHEⅡ評分≥8分),Ranson評分和APACHEⅡ評分越高,患者病情越嚴重。非重癥組中男39例、女30例,年齡28～62歲,平均(46.21±8.41)歲;重癥組中男29例、女24例,年齡29～69歲,平均(46.63±8.60)歲。納入標準:(1)符合《中國急性胰腺炎診治指南(2021)》[8]中的相關(guān)標準;(2)均為首次發(fā)病;(3)發(fā)病至入院時間≤48 h;(4)臨床資料完整。排除標準:(1)合并原發(fā)性膽、胰疾病者;(2)存在自身免疫性疾病者;(3)合并組織或器官惡性病變者;(4)合并其他感染性疾病者。另選取同期在該院的體檢健康者50例為對照組,其中男27例、女23例,年齡27～65歲,平均(45.14±8.01)歲。本研究通過醫(yī)院倫理委員批準,所有受試者或其家屬知情并同意。

1.2方法

1.2.1資料收集 收集所有研究對象一般臨床資料,包括性別、年齡、體重指數(shù)(BMI)、基礎(chǔ)疾病(糖尿病、高血脂、高血壓、冠心病)、病因(膽源性、酒精性、高脂血癥、其他)等。

1.2.2血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平檢測 抽取所有受試者晨起空腹靜脈血3 mL,經(jīng)過冷凝處理后,離心取上清液(3 500 r/min,10 min),血清保存至-70 ℃的冰箱中待測。使用實時熒光定量PCR測定血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平,Trizol法提取總RNA(Trizol購自美國Invitrogen公司),使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國GeneCopoeia公司)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用熒光定量PCR儀(美國GeneCopoeia公司)測定血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平,根據(jù)目的基因lncRNA MEG3、miR-195-5p設(shè)計并合成相應(yīng)引物,內(nèi)參基因為GAPDH、U6,引物序列見表1。使用2-ΔΔCt法計算lncRNA MEG3、miR-195-5p相對表達水平,試驗重復(fù)3次,盡量避免誤差。

表1 PCR引物序列

1.2.3重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后及分組 根據(jù)《中國急性胰腺炎診治指南(2021)》[8]中相關(guān)標準對患者治療28 d內(nèi)的病情進行評估,并根據(jù)重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后結(jié)局分為預(yù)后良好組(38例,病情穩(wěn)定、恢復(fù)期患者)和預(yù)后不良組(15例,嚴重器官衰竭、搶救失敗、無法治愈患者)。

2 結(jié) 果

2.1重癥組和非重癥組臨床資料比較 非重癥組和重癥組年齡、性別、BMI、基礎(chǔ)疾病及病因比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),與非重癥組比較,重癥組APACHEⅡ、Ranson評分升高(P<0.05),見表2。

表2 重癥組和非重癥組臨床資料比較[n/n或或n]

2.2各組血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平比較 與對照組比較,非重癥組、重癥組血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平降低(P<0.05),且重癥組患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平低于非重癥組(P<0.05),見表3。

表3 各組血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平比較

2.3血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平與APACHEⅡ和Ranson評分的關(guān)系 Spearman相關(guān)分析結(jié)果表明,AP患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平與APACHEⅡ和Ranson評分均呈負相關(guān)(P<0.05),見表4。

表4 血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平與APACHEⅡ和Ranson評分的關(guān)系

2.4重癥壞死性胰腺炎患者不同預(yù)后患者臨床資料及l(fā)ncRNA MEG3、miR-195-5p水平比較 預(yù)后良好組和預(yù)后不良組性別、年齡、BMI、基礎(chǔ)疾病及病因比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);預(yù)后良好組APACHEⅡ、Ranson評分低于預(yù)后不良組(P<0.05),血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平高于預(yù)后不良組(P<0.05),見表5。

表5 重癥壞死性胰腺炎患者不同預(yù)后患者臨床資料及l(fā)ncRNA MEG3、miR-195-5p水平比較[n/n或或n]

2.5影響重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良的危險因素分析 以重癥壞死性胰腺炎患者是否發(fā)展為預(yù)后不良為因變量(發(fā)生=1,未發(fā)生=0),以APACHEⅡ、Ranson評分及血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平為自變量,進行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示,APACHEⅡ、Ranson評分及血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平是影響重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良的獨立危險因素(P<0.05),見表6。

表6 影響重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良的多因素Logistic分析

2.6血清lncRNA MEG3、miR-195-5p聯(lián)合對重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良預(yù)測價值分析 ROC曲線結(jié)果顯示,lncRNA MEG3單獨評估重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良的AUC為0.767(95%CI0.622～0.911),其靈敏度、特異度分別為86.7%、49.9%,最佳臨界值為0.49;miR-195-5p單獨評估重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良的AUC為0.777(95%CI0.643～0.911),其靈敏度、特異度分別為80.0%、45.8%,最佳臨界值為0.51。二者聯(lián)合評估重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良的AUC為0.982(95%CI0.861～0.999),其靈敏度、特異度分別為86.7%、78.8%;二者聯(lián)合預(yù)測的AUC大于lncRNA MEG3單獨預(yù)測的AUC(Z=1.991,P=0.046),miR-195-5p單獨預(yù)測的AUC(Z=2.001,P=0.045),見圖1。

圖1 血清lncRNA MEG3、miR-195-5p預(yù)測重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良的ROC曲線

3 討 論

重癥壞死性胰腺炎主要是由于胰腺局部炎癥反應(yīng),導(dǎo)致促炎細胞因子大量釋放,破壞了促炎因子平衡和免疫調(diào)節(jié)功能,最終引起全身炎癥反應(yīng)綜合征而形成的[9]。全身炎癥反應(yīng)和多器官功能衰竭是造成重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后差、病死率高的重要原因[10]。因此早期識別重癥壞死性胰腺炎患者病情嚴重程度,預(yù)測死亡風(fēng)險,可為臨床決策提供參考,同時對促進疾病轉(zhuǎn)歸具有重要價值[11]。胰酶和常規(guī)血清檢測特異性較低,超聲、CT引導(dǎo)的細針穿刺細胞學(xué)檢查屬于有創(chuàng)檢查,風(fēng)險大,技術(shù)難度高,不能廣泛開展。隨著對重癥壞死性胰腺炎病理生理學(xué)研究的深入,炎癥指標及細胞因子等血清學(xué)診斷指標已成為臨床關(guān)注的焦點。

lncRNA MEG3作為lncRNA家族成員之一,與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[12]。研究發(fā)現(xiàn),在胰腺癌組織中,lncRNA MEG3表達下調(diào),可促進癌細胞增殖,增強細胞集落形成能力[13]。成鑒曉等[14]研究發(fā)現(xiàn),lncRNA MEG3在胰腺癌組織和細胞系中呈低表達,過表達可抑制PANC-1細胞增殖、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。本研究結(jié)果顯示,重癥組血清lncRNA MEG3水平低于非重癥組,提示lncRNA MEG3可能參與了重癥壞死性胰腺炎的發(fā)展過程。本結(jié)果與張云等[15]研究結(jié)果一致,然而具體作用機制尚不明確,仍需進一步的深入研究。

miRNA是一類小分子、多功能非編碼的RNA,由20～24個核苷酸構(gòu)成,具有多種生物學(xué)功能,且在細胞的生長、運動及組織代謝過程中發(fā)揮重要作用[16]。miR-195-5p作為miRNA家族成員之一,在許多炎癥反應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用[17]。林惠等[18]研究發(fā)現(xiàn),miR-195-5p在急性哮喘發(fā)作患者血清中水平降低,且與病變嚴重程度、是否首次發(fā)病密切相關(guān),miR-195-5p異常表達與病變的發(fā)生和進展可能有一定關(guān)系。本研究結(jié)果顯示,重癥組血清miR-195-5p水平低于非重癥組。提示miR-195-5p可能參與了重癥壞死性胰腺炎的發(fā)展過程。原因可能是由于miR-195-5p低表達可促進炎癥因子表達,同時激活配對基因,增強胰腺相關(guān)蛋白酶活性,使患者病情加重。

多因素Logistic回歸分析顯示,APACHEⅡ評分、Ranson評分、血清lncRNA MEG3、miR-195-5p是影響重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良的獨立危險因素,進一步提示血清lncRNA MEG3、miR-195-5p的異常表達可能與患者預(yù)后不良有關(guān);ROC曲線結(jié)果提示,血清lncRNA MEG3、miR-195-5p在評估重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后存在一定價值,lncRNA MEG3聯(lián)合miR-195-5p評估可提高預(yù)測效能,且聯(lián)合預(yù)測效能優(yōu)于單一指標預(yù)測,表明血清lncRNA MEG3、miR-195-5p二者聯(lián)合評估具有較高價值,可用于輔助臨床預(yù)測。

綜上所述,重癥壞死性胰腺炎患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平均降低,二者的異常表達與病情嚴重程度有關(guān),且二者是影響患者預(yù)后不良的獨立危險因素。lncRNA MEG3、miR-195-5p聯(lián)合檢測對重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良具有較高的診斷價值,二者有望成為預(yù)測重癥壞死性胰腺炎患者預(yù)后不良的血清學(xué)標志物。然而,本研究的樣本數(shù)量較少,后續(xù)可擴大樣本量,深入探究血清lncRNA MEG3、miR-195-5p對重癥壞死性胰腺炎的具體作用機制。