急性冠脈綜合征患者血清miR-130a、AngⅡ水平與冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系*

馮天保,劉宏穎,方 媛,張 陽,聞志軍,李 臻

遵化市人民醫(yī)院心血管內(nèi)科,河北唐山 064200

急性冠脈綜合征(ACS)是一種致殘率高、起病急的心血管病變,也是引發(fā)心血管疾病死亡的重要因素[1-2]。目前認(rèn)為ACS發(fā)生發(fā)展與動(dòng)脈粥樣硬化、血管內(nèi)皮功能紊亂及微小RNA(miRNA)異常表達(dá)等相關(guān)[3-5]。研究發(fā)現(xiàn),miR-130a在冠心病患者中水平較高,其有望成為評(píng)估冠心病嚴(yán)重程度的輔助指標(biāo)[6]。另外,血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)在ACS患者血漿中水平較高,其具有評(píng)估ACS患者病情嚴(yán)重程度的潛在價(jià)值[7]。李麗等[8]研究發(fā)現(xiàn),miR-130a可調(diào)控AngⅡ表達(dá)從而影響心肌細(xì)胞纖維化進(jìn)程。推測(cè)血清miR-130a、AngⅡ水平與ACS患者冠狀動(dòng)脈病變程度相關(guān)。因此,本研究通過測(cè)定miR-130a、AngⅡ在ACS患者血清中的水平,旨在分析miR-130a、AngⅡ與冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系及其診斷ACS的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2021年1月至2023年2月本院收治的ACS患者160例作為ACS組,其中男85例、女75例,年齡45～78歲,平均(60.89±10.87)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)患者符合ACS診斷標(biāo)準(zhǔn)[9];(2)年齡>18歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)有精神疾病或惡性腫瘤者;(2)合并臟器功能不全、自身免疫性疾病或感染性疾病者;(3)妊娠期女性。同期另納入160例本院的體檢健康者作為對(duì)照組,男78例、女82例,年齡45～78歲,平均(59.87±10.67)歲。本研究所有受試者均簽署知情同意書,由醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(審批號(hào):臨床L2020第54號(hào))。

1.2方法

1.2.1臨床資料收集 收集所有受試者性別、年齡、心率、體重指數(shù)(BMI)、高血壓史、糖尿病史。

1.2.2血清標(biāo)本采集 收集ACS患者入院后次日、體檢健康者體檢當(dāng)日清晨空腹靜脈血6 mL,靜置16 min后,4 600 r/min離心11 min,分離血清,均分為兩部分裝到新的收集管中保存于-80 ℃冰箱備用。

1.2.3血清miR-130a水平檢測(cè) 取血清標(biāo)本,低溫融化,使用Trizol試劑盒(批號(hào)2171841,杭州翠鳥生物試劑有限公司)提取總RNA,利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號(hào)SJ65921,邯鄲市亞星生物科技有限公司)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。應(yīng)用PCR試劑盒(批號(hào)2180765,杭州翠鳥生物試劑有限公司)及熒光定量PCR儀(型號(hào)CG-05,廣州雋沐生物科技有限公司)進(jìn)行擴(kuò)增、檢測(cè)。反應(yīng)體系參照PCR試劑盒進(jìn)行配置,熒光定量PCR程序設(shè)定為:94 ℃ 3 min,93 ℃ 31 s、62 ℃ 28 s、71 ℃ 16 s 40個(gè)循環(huán),72 ℃延伸4 min。以GAPDH為內(nèi)參,引物由大連美侖生物科技公司設(shè)計(jì)、合成,引物序列見表1,采用2-ΔΔCt計(jì)算分析血清miR-130a水平。

表1 引物序列

1.2.4血清AngⅡ水平測(cè)定 采用人AngⅡ酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒(批號(hào)EH26272,江蘇艾瑋得生物科技有限公司)配制AngⅡ的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液,同時(shí)解凍血清,酶標(biāo)儀(型號(hào)Chromate 4300,廣州測(cè)迪生物科技有限公司)測(cè)定血清AngⅡ標(biāo)準(zhǔn)品溶液在450 nm處的吸光度,繪制AngⅡ的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線,結(jié)合AngⅡ的標(biāo)準(zhǔn)回歸方程,計(jì)算血清AngⅡ水平。

1.2.5冠狀動(dòng)脈病變程度評(píng)價(jià) 利用Judkin′s法多體位投照對(duì)ACS患者行冠狀動(dòng)脈造影檢查,將冠狀動(dòng)脈血管分為15段,按Gensini積分系統(tǒng)和冠狀動(dòng)脈血管圖像分段評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)來評(píng)定各冠狀動(dòng)脈分支血管病變程度,計(jì)算總Gensini評(píng)分[10]。依據(jù)ACS患者的總Gensini評(píng)分將其分為輕度組57例(0～<31分)、中度組54例(31～<60分)、重度組49例(≥60分)[11]。

2 結(jié) 果

2.1對(duì)照組、ACS組臨床資料比較 對(duì)照組、ACS組性別、年齡、心率、BMI比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與對(duì)照組比較,ACS組高血壓史、糖尿病史比例升高(P<0.05)。見表2。

表2 對(duì)照組、ACS組臨床資料比較(n/n或

2.2對(duì)照組、ACS組血清miR-130a、AngⅡ水平比較 與對(duì)照組比較,ACS組患者血清miR-130a、AngⅡ水平升高(P<0.05)。見表3。

表3 對(duì)照組、ACS組血清miR-130a、AngⅡ水平比較

2.3不同病變程度ACS患者血清miR-130a、AngⅡ水平比較 輕度組、中度組、重度組ACS患者血清miR-130a、AngⅡ水平依次升高(P<0.05)。見表4。

表4 不同病變程度ACS患者血清miR-130a、AngⅡ水平比較

2.4ACS患者血清miR-130a、AngⅡ水平的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,ACS患者血清miR-130a水平與AngⅡ呈正相關(guān)(r=0.584,P<0.001)。

2.5影響ACS發(fā)生的多因素Logistic回歸分析 以ACS發(fā)生為因變量,以高血壓史、糖尿病史及血清miR-130a、AngⅡ水平為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示有高血壓史、糖尿病史及血清miR-130a、AngⅡ水平升高是影響ACS發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表5。

表5 影響ACS發(fā)生的多因素Logistic回歸分析

2.6血清miR-130a、AngⅡ水平對(duì)中度ACS的診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清miR-130a、AngⅡ及二者聯(lián)合診斷中度ACS的曲線下面積(AUC)分別為0.728、0.823、0.885,相較于血清miR-130a、AngⅡ水平單獨(dú)診斷的AUC,二者聯(lián)合診斷的AUC更高(Z=3.276、P=0.001,Z=2.226、P=0.026)。見表6、圖1。

圖1 血清miR-130a、AngⅡ水平及二者聯(lián)合診斷中度ACS的ROC曲線

表6 血清miR-130a、AngⅡ水平對(duì)中度ACS的診斷價(jià)值

2.7血清miR-130a、AngⅡ水平對(duì)重度ACS的診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清miR-130、AngⅡ及二者聯(lián)合診斷重度ACS的AUC分別為0.731、0.730、0.825,相較于血清miR-130a、AngⅡ水平單獨(dú)診斷的AUC,二者聯(lián)合診斷的AUC更高(Z=2.214、P=0.027,Z=2.457、P=0.014)。見表7、圖2。

圖2 血清miR-130a、AngⅡ水平及二者聯(lián)合診斷重度ACS的ROC曲線

表7 血清miR-130a、AngⅡ水平對(duì)重度ACS的診斷價(jià)值

3 討 論

ACS是由心肌缺血引發(fā)的一種心血管疾病,其致死率高,嚴(yán)重威脅人類健康,及早發(fā)現(xiàn)并給予治療對(duì)提高ACS患者預(yù)后效果具有重要意義[12-13]。血液生化標(biāo)志物有較高的靈敏度、特異度,通過測(cè)定特殊的標(biāo)志物用于評(píng)估ACS病情發(fā)展程度或預(yù)測(cè)有關(guān)主要不良心血管事件的發(fā)生,改善預(yù)后有積極意義。

miRNA可通過調(diào)控有關(guān)基因表達(dá)進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞凋亡、參與炎癥反應(yīng)、影響血管內(nèi)皮損傷,是理想的生物標(biāo)志物,且許多miRNA與ACS相關(guān)[14-15]。其中,miR-130a與血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、心臟發(fā)育、心肌纖維化、心律失常、心肌梗死等現(xiàn)象關(guān)系密切[16-17]。另外,miR-130a在急性缺血性腦卒中大鼠腦組織中呈高表達(dá),其可能通過靶向調(diào)控有關(guān)基因表達(dá),進(jìn)而調(diào)節(jié)血管生成[18]。BARRACLOUGH等[19]發(fā)現(xiàn),高水平的miR-130a會(huì)增加ACS發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn),而經(jīng)秋水仙堿治療后,可使ACS患者中升高的miR-130a恢復(fù)到與健康者相似的水平。本研究發(fā)現(xiàn),與體檢健康者比較,ACS患者血清miR-130a水平較高,這與謝巖等[6]和BARRACLOUGH等[19]報(bào)道的miR-130a的水平變化趨勢(shì)一致。本研究還發(fā)現(xiàn),血清miR-130a水平隨ACS患者冠狀動(dòng)脈病變程度加重而呈升高趨勢(shì),推測(cè)miR-130a可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路和基因表達(dá)影響心肌細(xì)胞增殖、凋亡和血管生成,造成血管內(nèi)皮功能障礙,從而在ACS病理變化中起作用,但其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。此外,本研究探討了血清miR-130a對(duì)ACS冠狀動(dòng)脈病變程度的診斷價(jià)值,結(jié)果顯示,血清miR-130a診斷中、重度ACS的AUC分別為0.728、0.731,提示血清miR-130a對(duì)ACS中、重度分級(jí)有一定診斷價(jià)值,測(cè)定血清miR-130a水平有助于臨床及時(shí)診斷ACS冠狀動(dòng)脈病變程度。

AngⅡ可影響心肌纖維化、細(xì)胞增殖、凋亡,促進(jìn)血管內(nèi)氧化應(yīng)激,進(jìn)而造成內(nèi)皮功能障礙,調(diào)節(jié)血管收縮功能,促進(jìn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),誘發(fā)炎癥反應(yīng),促使易損斑塊形成,造成血栓,影響冠心病等心血管病變進(jìn)程[20-21]。有研究發(fā)現(xiàn),AngⅡ在ACS患者血清中呈高水平,其可作為判斷ACS危險(xiǎn)分層和預(yù)后預(yù)測(cè)的輔助指標(biāo)[22]。本研究結(jié)果顯示,與體檢健康者比較,ACS患者血清AngⅡ水平升高,與秦曙光等[22]的研究結(jié)果相似,并且ACS患者冠狀動(dòng)脈病變程度越高血清AngⅡ水平越高,提示血清AngⅡ可能與ACS冠狀動(dòng)脈病變程度有關(guān)。同時(shí),本研究探討了血清AngⅡ?qū)CS冠狀動(dòng)脈病變程度的診斷價(jià)值,結(jié)果顯示,血清AngⅡ診斷中、重度ACS的AUC分別為0.823、0.730,提示血清AngⅡ可作為診斷ACS冠狀動(dòng)脈病變程度的潛在指標(biāo)。

余明等[23]研究顯示,miR-130a可通過調(diào)控AngⅡ表達(dá)進(jìn)而調(diào)節(jié)心血管疾病進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示,ACS患者血清miR-130a、AngⅡ水平呈正相關(guān),且血清miR-130a水平與AngⅡ升高是影響ACS發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,提示血清miR-130a、AngⅡ水平可能共同參與ACS病變過程,二者高水平可能更容易誘發(fā)ACS的發(fā)生,但其機(jī)制有待深入研究證實(shí)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),血清miR-130a、AngⅡ水平聯(lián)合診斷中、重度ACS的AUC分別為0.885、0.825,提示血清miR-130a、AngⅡ聯(lián)合對(duì)ACS中、重度分級(jí)有較好的診斷價(jià)值,可更好地診斷ACS冠狀動(dòng)脈病變程度,且優(yōu)于單一指標(biāo),有一定臨床參考價(jià)值。

綜上所述,ACS患者血清miR-130a、AngⅡ水平較高,二者水平呈正相關(guān),均與ACS冠狀動(dòng)脈病變程度有關(guān),二者聯(lián)合對(duì)冠狀動(dòng)脈病變程度具有較高診斷價(jià)值。但本研究樣本較少,研究結(jié)果有一定局限性,后期仍需擴(kuò)大樣本,從多角度探究血清miR-130a、AngⅡ水平在ACS發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制。