續(xù)斷化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展

黃蒙蒙,周廣濤,張霞,曹桂云,王全軍,林永強(qiáng),孟兆青

(1.山東宏濟(jì)堂制藥集團(tuán)股份有限公司,山東 濟(jì)南 250100;2.山東肺康中醫(yī)藥科技有限責(zé)任公司,山東 濟(jì)南 250100;3.山東省食品藥品檢驗研究院,山東 濟(jì)南 250101)

續(xù)斷為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷(DipsacusasperWall.ex Henry)的干燥根,其來源在中國古代各時期雖有變化,但自明清時期至近現(xiàn)代再到《中國藥典》均以川續(xù)斷為唯一正品來源。明代《本草綱目》載:“續(xù)斷、屬折、接骨,皆以功效名也”,“接骨以功而名,別名接骨木”,在明代的《滇南本草》中,更是首次將川續(xù)斷科植物川續(xù)斷引入[1]。《中國藥典》2020年版(一部)收載其來源為“于秋季采挖,除去根頭和須根,用微火烘至半干,堆置‘發(fā)汗’至內(nèi)部變綠色時,再烘干”[2]。關(guān)于續(xù)斷的研究,10年前主要集中在化學(xué)成分和質(zhì)量差異方面[3-7],近10年國內(nèi)外亦有關(guān)于續(xù)斷的綜述報道,但存在報道不全,內(nèi)容不夠前沿等問題[8-11]。前通過整理總結(jié)近10年來對續(xù)斷化學(xué)成分和藥理作用的文獻(xiàn)報道,以期有助于對其更深入研究。

1 化學(xué)成分研究進(jìn)展

續(xù)斷中主要含有三萜皂苷類、環(huán)烯醚萜類、木脂素類、揮發(fā)油類、生物堿類和多糖等成分,三萜皂苷類以及環(huán)烯醚萜類也是其含量最高的成分。近年來,隨著對續(xù)斷研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)其中還含有苯丙素類、有機(jī)酸類、蛋白質(zhì)類等成分。

1.1 三萜皂苷類三萜皂苷類不僅是續(xù)斷中含量最高的成分更是其主要活性成分。目前已報道發(fā)現(xiàn)的約有20余種,且均為齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷,在3位和(或) 28位糖基取代[12]。其中以川續(xù)斷皂苷VI含量最高?！吨袊幍洹?015年版(一部)中續(xù)斷含量測定項下,便以川續(xù)斷皂苷VI作為指標(biāo)成分進(jìn)行定量控制[1]?，F(xiàn)代常用的發(fā)汗、酒制和鹽制炮制加工方法均可達(dá)到增效目的。白玫等[13]對酒續(xù)斷最佳炮制工藝研究發(fā)現(xiàn),川續(xù)斷浸出物和川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量最高時的炮制工藝為加酒量10%,溫度150 ℃,炒制6 min。劉艷等[14]對續(xù)斷的發(fā)汗炮制進(jìn)行評分比較,發(fā)現(xiàn)將續(xù)斷烘至半干時發(fā)汗,其川續(xù)斷總皂苷和川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量最高。

1.2 環(huán)烯醚萜類張芬等[15]通過HPLC法測定發(fā)現(xiàn),馬錢苷、馬錢苷酸和當(dāng)藥苷為續(xù)斷中3種高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的環(huán)烯醚萜類成分。此外,孫欣光等[16]運(yùn)用大孔樹脂、反相硅膠及制備高效液相等色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化,發(fā)現(xiàn)了7個環(huán)烯醚萜類成分,分別為馬錢苷、獐牙菜苷、續(xù)斷苷H、續(xù)斷苷F、續(xù)斷苷E、6′-O-β-D-apiofuranosyl-sweroside、triplostoside A。

1.3 揮發(fā)油類揮發(fā)油也是續(xù)斷的主要成分之一。關(guān)于續(xù)斷中揮發(fā)油的提取研究,較早的有吳知行等[17]采用索氏提取法,以乙醚連續(xù)回流6 h,回收乙醚,再將提取物用水蒸氣蒸餾法提取,共鑒定得到41種化合物。近年來,李濤等[18]采用超聲輔助提取川續(xù)斷揮發(fā)油。并通過GC-MS進(jìn)行揮發(fā)油化學(xué)成分分析,共檢測出53種成分,鑒定出51種。

1.4 木脂素類有關(guān)續(xù)斷中木質(zhì)素類成分的報道較少。孫欣光等[16]運(yùn)用大孔樹脂、反相硅膠及制備高效液相等色譜技術(shù)對續(xù)斷藥材進(jìn)行分離純化,共分離得到6個木質(zhì)素類化合物,分別為(7R,8S,7′R,8′S)-5-methoxyprinsepiol-4-O-β-D-glucopyranoside、(7R,8S,7′R,8′S)-prinsepiol4-β-D-glucopyranoside、acanthoside D、(7R,8S,7′R,8′S)-fraxiresinol-4′-O-β-D-glucopyranoside、(7R,8S,7′R,8′S)-8-hydroxypinoresinol-4′-O-β-D-glucopyranoside、(7R,8S,7′R,8′S)-8-hydroxypin-oresinol-4-O-β-D-glucopyranoside。

1.5 生物堿類張丹等[19]對比了不同炮制方法對續(xù)斷中總生物堿的影響,發(fā)現(xiàn)鹽制續(xù)斷中總生物堿含量最高,生品次之,而清炒和酒制法得到的續(xù)斷其生物堿較低。目前已報道鑒定出的續(xù)斷生物堿主要有venoterpine、cantleyine和gentianine[20]。

1.6 多糖類多糖也是續(xù)斷中含量較多的成分之一。張丹等[21]采用超聲波輔助提取法提取續(xù)斷多糖,并對工藝進(jìn)行了優(yōu)化,最終確定最佳提取工藝為料液比1∶20(g∶mL),提取時間60 min,提取4次,測得續(xù)斷多糖的平均提取率為7.472%。商龍臣等[22]采用微波輔助水浴浸提方法提取續(xù)斷多糖,并對提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,最終確定最佳提取條件為微波功率800 W處理6 min、料液比1∶100(g∶mL)、水浴浸提時間80 min。

1.7 其他隨著近年來對續(xù)斷研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)其中還含有苯丙素類、有機(jī)酸類、蛋白質(zhì)類等。楊瑩等[23]研究續(xù)斷“發(fā)汗”前后水煎液HPLC指紋圖譜,發(fā)現(xiàn)續(xù)斷中有綠原酸、異綠原酸C、咖啡酸等成分,說明續(xù)斷中含有苯丙素類、有機(jī)酸類成分。晉海軍等[24]采用Tris-HCl法提取不同產(chǎn)地川續(xù)斷根蛋白,用SDS-PAGE凝膠電泳技術(shù)對比不同產(chǎn)地續(xù)斷根蛋白條帶差異,為在蛋白質(zhì)層面闡釋因產(chǎn)地差異造成續(xù)斷質(zhì)量差異提供基礎(chǔ)資料。

2 藥理作用

續(xù)斷在臨床中應(yīng)用較廣泛,目前主要用于治療筋傷骨折、跌撲損傷、風(fēng)濕痹痛、肝腎不足、腰膝酸軟、崩漏、胎漏等病癥。近年來,也有文獻(xiàn)報道續(xù)斷有誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡作用,為續(xù)斷在臨床應(yīng)用方面研究提供了基礎(chǔ)。

2.1 對骨組織的續(xù)斷用于治療骨折、骨質(zhì)疏松早有報道。近年來,研究者對其作用機(jī)制又有深入研究。楊瑩等[23]研究分析續(xù)斷HPLC指紋圖譜與細(xì)胞增殖分化藥效的譜效關(guān)系發(fā)現(xiàn),川續(xù)斷皂苷VI、川續(xù)斷皂苷IV同分異構(gòu)體系列、馬錢苷、綠原酸、川續(xù)斷皂苷X、異綠原酸C、咖啡酸可能是續(xù)斷影響細(xì)胞增殖分化作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。劉開飛[25]通過建立體外RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞的培養(yǎng)體系和體內(nèi)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎的動物模型,發(fā)現(xiàn)川續(xù)斷皂苷Ⅵ通過抑制NF-κB中P65的核轉(zhuǎn)位和AKT通路以及MAPK中JNK和p38的磷酸化,繼而影響下游C-Fos、NFATcl的活化進(jìn)而抑制體外RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成及其骨吸收活性,緩解體內(nèi)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎小鼠的骨破壞。楊瑩等[26]通過將人成骨樣MG-63細(xì)胞、幼鼠成骨細(xì)胞分別與續(xù)斷水煎液和大鼠含藥血清共同培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)續(xù)斷水煎液和含藥血清均能明顯促進(jìn)MG-63細(xì)胞、幼鼠成骨細(xì)胞的增殖,且提高成骨細(xì)胞ALP活性。高歌等[27]研究續(xù)斷治療骨質(zhì)疏松作用機(jī)制,發(fā)現(xiàn)續(xù)斷可能主要通過AKT1、MAPK1、MAPK3影響PI3K-AKT信號通路治療骨質(zhì)疏松。

2.2 對生殖系統(tǒng)的作用續(xù)斷在臨床中也常被用于不孕不育、安胎、治療先兆性流產(chǎn)和習(xí)慣性流產(chǎn)的治療,其所含生物堿是主要的活性成分。龔小健等[28]分別以受孕22 d的大鼠為實驗對象,分別給藥300 μg·mL-1和600 μg·mL-1的生物堿,發(fā)現(xiàn)隨著劑量的增加,起效增快,效果也相應(yīng)增強(qiáng),有一定的量效關(guān)系。王權(quán)勝等[29]研究續(xù)斷種子方對無精子癥模型小鼠睪丸精子發(fā)生發(fā)育及c-kit蛋白表達(dá)的影響的作用機(jī)制,發(fā)現(xiàn)該方可有效促進(jìn)睪丸生精上皮的精子發(fā)生發(fā)育,增加精子數(shù)量。

2.3 對神經(jīng)系統(tǒng)的作用洪汝[30]研究續(xù)斷提取物對血管性癡呆大鼠模型的影響,發(fā)現(xiàn)其可明顯改善血管性癡呆大鼠認(rèn)知學(xué)習(xí)記憶障礙;作用機(jī)理可能是通過調(diào)節(jié)bcl-2、bax蛋白表達(dá)和提高體內(nèi)清除代謝過程中所產(chǎn)生的自由基能力,從而對海馬神經(jīng)元起到一定的保護(hù)作用。未小明[31]研究續(xù)斷對血管性癡呆模型大鼠血流動力學(xué)的影響,發(fā)現(xiàn)續(xù)斷水煎液可改善VD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

2.4 對免疫系統(tǒng)的作用李顏桃等[32]研究川續(xù)斷水煎液對小鼠血清中免疫球蛋白和細(xì)胞因子的影響,發(fā)現(xiàn)川續(xù)斷水煎劑可升高小鼠血清中免疫球蛋白水平,在降低Th2類細(xì)胞因子的水平的同時還可增強(qiáng)血清中Th1類細(xì)胞因子水平。李賢讓[33]研究續(xù)斷總皂苷治療骨關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制發(fā)現(xiàn)其可抑制炎性細(xì)胞因子和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá),進(jìn)而達(dá)到對骨關(guān)節(jié)炎的治療作用。

2.5 抗腫瘤目前,關(guān)于續(xù)斷抗腫瘤作用的報道較少。謝瑾玉等[34]對續(xù)斷水提液誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡作用機(jī)制進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)續(xù)斷水提液能通過損傷線粒體的方式,導(dǎo)致HeLa細(xì)胞凋亡,為臨床應(yīng)用續(xù)斷治療腫瘤提供研究基礎(chǔ)。

3 總結(jié)

續(xù)斷在我國具有悠久的藥用史,雖然歷史上均以續(xù)斷為其正名,但也存在基源復(fù)雜,品種混亂的情況。據(jù)考證,其來源從最早的漢朝時期的豆科植物、唇形科植物,到南北長時期的寄生科植物桑寄生、忍冬科植物接骨木和買麻藤科植物買麻藤,再到唐宋時期的唇形科植物糙蘇、忍冬科植物接骨木、大薊、大葉糙蘇、短柄影芝麻及野芝麻;至明清時期其主要來源則變?yōu)闊粜静菘浦参锸埰c和川續(xù)斷科植物川續(xù)斷,近現(xiàn)代時期還有日本續(xù)斷這一來源,《中國藥典》將川續(xù)斷科植物川續(xù)斷作為其唯一正品來源。

續(xù)斷作為臨床常用中藥,對其研究已較全面。但真正深入研究的大多是其含量較高的三萜皂苷類,如川續(xù)斷皂苷Ⅵ,目前,大量的研究也表明,其是續(xù)斷發(fā)揮各種藥理藥效的主要有效成分。但雖然其療效確切,但續(xù)斷中的化學(xué)成分較復(fù)雜,對于其他成分的研究還有待深入。通過總結(jié)近10年來對續(xù)斷的研究文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)對續(xù)斷中的生物堿類、有機(jī)酸類、苯丙素類和蛋白質(zhì)類研究報道較少,這些成分雖含量較低但亦有較高研究價值。此外,在藥理作用方面,大多數(shù)研究均集中在續(xù)斷對骨組織的作用而對其改善心腦血管血液流通作用及抗腫瘤作用等方面研究報道較少,值得進(jìn)一步深入探索。