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    土壤處理方式對不同茶樹品種露地?zé)o心土扦插生根率及3 種氧化酶活性的影響

    2023-12-22 12:50:04吳鵬川宋育林倪德江
    茶葉通訊 2023年4期
    關(guān)鍵詞:病葉率靖江生根

    吳鵬川,宋育林,胡 靜,郭 飛,倪德江,王 璞*

    1. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝林學(xué)學(xué)院/園藝植物生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖北 武漢 430070;2. 秭歸縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局,湖北 秭歸 443000

    茶葉中富有營養(yǎng)物質(zhì)和功能性成分,具有多種藥理及保健功效[1],深受大眾喜愛。茶樹在我國已有200 多年的種植歷史[2]。茶樹的繁殖技術(shù)主要分為有性繁殖與無性繁殖。無性繁殖主要包括扦插、壓條、分株以及嫁接等[3],其中短穗扦插就目前而言在生產(chǎn)上應(yīng)用最為普遍,具有插穗易獲取、扦插密度大、土地面積利用率高等優(yōu)勢,同時(shí)在我國大部分茶區(qū)四季都可進(jìn)行,且插后插穗生根成苗速度快、存活率高及移栽易成活。茶樹短穗扦插又可分為穴盤育苗和露地扦插。肖輝等[4]采用單因素試驗(yàn)探討了不同留葉量、土壤消毒方式等對茶樹穴盤存活率與發(fā)芽率等的影響,提出最佳扦插條件。與穴盤育苗相比,露地扦插密度大、土地面積利用率高、操作簡便且易于管理,目前我國茶樹種苗繁育主要采取露地扦插。茶樹露地扦插,茶樹母本及土壤對扦插出苗率有重要的影響。為優(yōu)化茶樹露地扦插技術(shù),本試驗(yàn)主要從土壤著手,選用‘鄂茶1 號’‘靖江1 號’和‘中茶108’等3個(gè)茶樹品種分別采取土壤消毒(棉隆、威百畝、石灰氮)、施加復(fù)合肥料和深耕處理,探討茶樹無心土(原土)條件下提高扦插茶苗的出苗率。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

    試驗(yàn)地點(diǎn)為湖北省宜昌市秭歸縣建東姊杰采摘茶園,位于湖北省西部,介于北緯30°38' ~31°11'、東經(jīng)110°18' ~ 111°0',試驗(yàn)地為園中一塊三年未耕種的荒地。

    1.2 試驗(yàn)茶樹品種

    選擇秭歸縣種植的‘中茶108’‘靖江1 號’和‘鄂茶1 號’3 個(gè)茶樹品種?!胁?08’由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所選育而成,育芽力強(qiáng),持嫩性好,抗寒性、抗旱性、抗病性均較強(qiáng)[5]?!醪? 號’由湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果茶研究所采用雜交育種法育成,芽葉生育力和持嫩性強(qiáng),抗寒性、抗旱性強(qiáng),扦插繁殖力強(qiáng)?!附? 號’為當(dāng)?shù)夭铇淦废担m宜當(dāng)?shù)丨h(huán)境,抗病蟲害能力強(qiáng),扦插繁殖力強(qiáng)。

    1.3 試劑與器具

    棉隆(土壤消毒試劑,姜地康98%)、威百畝(土壤消毒試劑,利民沃野42%)、石灰氮(土壤消毒試劑,中奧生物)、復(fù)合肥料、二水磷酸二氫鈉(Na2HPO4·2H2O)、十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)、氯化錳、2,4-二氯酚、IAA粉末、無水乙醇、氯化鐵、高氯酸、鄰苯二酚、愈創(chuàng)木酚、過氧化氫等。

    農(nóng)耕機(jī)、黑色地膜、白色地膜、枝剪、鋤頭、萬分之一天平、離心機(jī)、分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀等。

    1.4 試驗(yàn)方法

    1.4.1 試驗(yàn)處理

    在清理空地表面碎石、樹枝、野草等雜物后利用農(nóng)耕機(jī)進(jìn)行10 ~ 20 cm 翻耕,清理大部分土壤中的雜物,人工起壟,壟高5 ~ 10 cm。(圖1)劃分成寬0.9 m、長36.7 m 的兩塊苗圃進(jìn)行平行試驗(yàn),苗圃兩邊留出0.3 m 排水溝。苗圃內(nèi)每5.3 m 設(shè)置一個(gè)處理小區(qū)扦插3 個(gè)品種,小區(qū)之間設(shè)置0.7 m 保護(hù)行,各處理小區(qū)劃分為長0.5 m、寬0.9 m 的扦插地塊,間隔0.1 m。各品種重復(fù)三次(圖2)。

    圖1 苗圃分布圖Figure 1 Nursery distribution map

    圖2 處理小區(qū)分布Figure 2 Distribution of treatment plot

    分別設(shè)土壤消毒、施用復(fù)合肥和深耕3 種處理。土壤消毒處理:(1)石灰氮,70 kg/667 m2,撒施;(2)棉隆,30 kg/667 m2,撒施;(3)威百畝,兌水300 倍噴施。施用復(fù)合肥處理:采用市售三元復(fù)合肥(N ∶P2O5∶K2O=15 ∶15 ∶15),66.7 kg/667 m2,撒施。深耕處理:采用農(nóng)耕機(jī)深耕22 ~ 30 cm。

    1.4.2 扦插

    2021 年9 月上旬使用農(nóng)耕機(jī)淺耕土壤,然后采用不同的土壤消毒試劑(棉隆、威百畝、石灰氮)、復(fù)合肥或者深耕(22 ~ 30 cm)對土壤進(jìn)行扦插前處理[6-10],并以黑色地膜覆蓋30 d。去除黑色地膜,覆蓋白色地膜采取打小孔方式扦插。

    2021 年10 月上旬,選取母本園當(dāng)年生健壯無病害且已木質(zhì)化的紅棕色枝條(頂芽停止生長,腋芽膨大或萌芽),剪成長3 ~ 4 cm、帶有一片葉與強(qiáng)壯飽滿腋芽的短穗,剪口平滑、傾斜[11]。插穗現(xiàn)剪現(xiàn)插或者短期貯存,避免陽光直射。插穗稍傾斜插入土壤中,露出葉柄,腋芽與白色地膜稍有距離,葉片不相互重疊,邊插邊壓緊土壤。及時(shí)澆水與管理。

    1.4.3 取樣

    分別于短穗扦插30 d、90 d、150 d 和180 d隨機(jī)取樣。每處理一個(gè)品種取30 株左右,液氮快速固定后置于-80℃冰箱保存。

    1.4.4 粗酶液制備

    樣品研磨后,取300 mg 于10 mL 離心管中,加入5 mL PBS(pH 7.0),預(yù)冷,4℃、12 000 g離心15 min,取上清液移至新的離心管中,制得粗酶液。

    1.4.5 IAAO 活性測定

    0.25 mL粗酶液 + 0.5 mL氯化錳(1 mmol/L)+0.25 mL 2,4-二氯酚(1 mmol/L) + 0.5 mL IAA(1 mmol/L)(制備時(shí)需先用少量無水乙醇溶解),在30℃的條件下孵育45 min,獲得混合液。使用前,按10 mL 0.5 mol/L 氯化鐵 + 500 mL 35%高氯酸比例配得合適體積的反應(yīng)液。取0.5 mL混合液+ 1 mL 反應(yīng)液,混合后置于30℃黑暗條件中30 min。于530 nm 處測定吸光值,以每分鐘每克鮮重變化0.01 吸光光度值為一個(gè)酶活性單位。

    其中ΔA530 為反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化,Vt為酶提取液的總體積(mL),W為茶葉鮮重的質(zhì)量(g),VS為參加反應(yīng)的酶液體積(mL),t為反應(yīng)時(shí)間(min)。

    1.4.5 PPO 活性測定

    400 μL鄰苯二酚(50 mmol/L)+400 μL PBS(pH 6.5)為反應(yīng)液,在反應(yīng)液中加入200 μL 粗酶液37℃水浴2 h 后420 nm 處連續(xù)讀數(shù),以每分鐘每克鮮重變化0.01 吸光光度值為一個(gè)酶活性單位。

    ΔA420 為反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化,Vt為酶提取液的總體積(mL),W為茶葉鮮重的質(zhì)量(g),VS為參加反應(yīng)的酶液體積(mL),t為反應(yīng)時(shí)間(min)。

    1.4.6 POD 活性測定

    以50 mL PBS(pH 6.0)+ 28 μL 愈創(chuàng)木酚比例配得合適體積的溶液,加熱使其溶解,冷卻后加入19 μL 30%過氧化氫,得到反應(yīng)液。0.05 mL 粗酶液+2.95 mL 反應(yīng)液,在470 nm 下測定吸光值,每30 s 讀數(shù)一次,共計(jì)9 次,以每分鐘每克鮮重變化0.01 吸光光度值為一個(gè)酶活性單位。

    ΔA470 為反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化,Vt為酶提取液的總體積(mL),W為茶葉鮮重的質(zhì)量(g),VS為參加反應(yīng)的酶液體積(mL),t為反應(yīng)時(shí)間(min)。

    1.5 數(shù)據(jù)分析

    采用Excel 2019 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),采用Graph Pad Prism 8 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同土壤處理方式對插穗存活率的影響

    結(jié)果如圖3 所示。扦插30 d 時(shí)‘靖江1 號’(97.69%)和‘中茶108’(96.55%)使用石灰氮土壤消毒處理的存活率高于對照,扦插90 d時(shí)兩個(gè)品種的存活率(‘靖江1 號’96.62%、‘中茶108’95.57%)也均高于對照。使用威百畝進(jìn)行土壤消毒處理,扦插30 d 時(shí)‘靖江1 號’(99.66%)與‘中茶108’(96.33%)的存活率高于對照,扦插90 d 時(shí)‘鄂茶1 號’(97.68%)、‘靖江1 號’(98.06%)和‘中茶108’(95.39%)的存活率均高于對照。使用棉隆處理的存活率低于其他處理。表明使用威百畝和石灰氮進(jìn)行土壤消毒處理能提高茶樹扦插的存活率,其中威百畝的使用效果最好,棉隆處理對插穗存活率沒有正向影響。

    圖3 不同土壤處理方式對不同茶樹品種扦插插穗存活率的影響Figure 3 Effects of different soil treatment methods on the survival rate of cutting of different tea cultivars

    圖3 結(jié)果顯示,扦插30 d 時(shí)施復(fù)合肥處理與對照組插穗存活率相差不大,扦插90 d 時(shí)‘靖江1 號’(96.22%)和‘中茶108’(93.78%)的存活率高于對照組,表明施復(fù)合肥能保證茶樹插穗生根過程中需要的養(yǎng)分,可提高茶樹插穗扦插的存活率。

    土壤采取深耕處理,扦插30 d 時(shí)‘鄂茶1號’(100%)和‘中茶108’(96.35%)的存活率比對照組高,扦插90 d 時(shí)3 個(gè)品種(‘鄂茶1 號’98.04%、‘靖江1 號’94.46%、‘中茶108’94.56%)的存活率均比對照組高(圖3)。表明深層土壤中營養(yǎng)物質(zhì)較淺層土壤豐富,深耕后將深層的土壤翻至土壤上層,提高了土壤有效肥力,有利于插穗吸收營養(yǎng)物質(zhì),從而提高了茶樹插穗的存活率。

    2.2 不同土壤處理方式對插穗病葉率的影響

    圖4 結(jié)果顯示,扦插30 d 未出現(xiàn)病葉,扦插30 d 后開始出現(xiàn)病葉。與對照組比較,‘鄂茶1 號’(16.70%)、‘靖江1 號’(12.98%)和‘中茶108’(41.34%)3 個(gè)品種扦插土壤采取棉隆處理插穗的病葉率均低于對照;‘靖江1號’(18.87%)和‘中茶108’(47.16%)2 個(gè)品種扦插土壤采取威百畝處理的插穗病葉率低于對照,土壤采取石灰氮消毒處理,這兩個(gè)品種(‘靖江1 號’13.45%、‘中茶108’46.59%)插穗的病葉率也都低于對照??梢?,使用棉隆、威百畝和石灰氮進(jìn)行土壤消毒處理都能在一定程度上降低插穗的病葉率?!醪? 號’插穗僅在棉隆處理的病葉率低于對照,可能與該品種本身原因有關(guān)。綜合插穗存活率和病葉率結(jié)果,土壤采用威百畝消毒處理的效果最好,插穗的存活率高、病葉率低。

    圖4 土壤處理對病葉率的影響Figure 4 Effect of soil treatment on disease leaf rate

    與對照相比,施用復(fù)合肥處理插穗病葉率降低的是‘靖江1 號’(18.20%)和‘中茶108’(45.43%)2 個(gè)品種(圖4)。結(jié)合存活率,施用復(fù)合肥處理能夠提高‘靖江1 號’和‘中茶108’插穗的存活率,同時(shí)降低這兩個(gè)品種插穗的病葉率。露地土壤中的病蟲害爭光、爭水、爭肥,影響作物的產(chǎn)量。

    深耕是有效防止病蟲害的措施之一。扦插90 d 時(shí),‘鄂茶1 號’(20.05%)、‘靖江1 號’(19.98%)和‘中茶108’(40.25%)3 個(gè)品種插穗的病葉率與對照組相比均有所降低,表明通過深耕有利于降低茶樹扦插插穗的病葉率(圖4)。

    2.3 不同土壤處理方式對插穗生根率的影響

    結(jié)果如圖5所示。土壤采取棉隆消毒處理中,扦插120 d 時(shí)僅有‘中茶108’的插穗出現(xiàn)生根現(xiàn)象,生根率為16.67%;采取威百畝消毒處理,扦插120 d 時(shí)也僅有‘靖江1 號’的插穗出現(xiàn)生根,生根率為23.33%。表明土壤采用棉隆消毒處理和威百畝消毒處理,分別能夠促進(jìn)‘中茶108’和‘靖江1 號’的插穗生根,而對‘鄂茶1 號’的插穗生根均沒有促進(jìn)作用。

    圖5 土壤處理對生根率的影響Figure 5 Effect of soil treatment on rooting rate

    采取復(fù)合肥處理的扦插120 d 后,‘鄂茶1號’(6.67%)、‘靖江1 號’(20%)和‘中茶108’(10%)3 個(gè)茶樹品種皆出現(xiàn)生根(圖5)??梢?,扦插時(shí)施用復(fù)合肥,插穗吸收養(yǎng)分后提高了其存活率,具有一定的抗病蟲害能力,并能有效促進(jìn)茶樹插穗的生根。

    深耕處理,‘鄂茶1號’插穗的生根率(25.3%)高于對照(23.3%),但‘靖江1 號’(23.3%)和‘中茶108’(3.3%)均低于對照(36.7%和26.6%),說明深耕僅對‘鄂茶1 號’有促進(jìn)作用,對‘靖江1 號’和‘中茶108’均無促進(jìn)作用(圖5)。

    2.4 不同土壤處理方式對插穗3 種酶活性的影響

    研究表明,IAAO 能夠氧化內(nèi)源IAA,IAAO 活性越高,IAA 含量越低[12]。采取石灰氮與威百畝處理,‘鄂茶1 號’和‘靖江1 號’扦插30 d 時(shí)IAAO 酶活性均高于對照,而3 個(gè)品種扦插土壤采取棉隆處理的都低于對照,說明土壤采用棉隆處理對促進(jìn)生根效果差;3 種消毒劑處理,‘中茶108’的IAAO酶活性均低于對照,這也能解釋其生根率較低的原因。扦插90 d 時(shí),采取棉隆和威百畝處理,‘靖江1 號’IAAO 酶活性顯著高于對照,結(jié)果‘靖江1 號’最先生根,其余處理IAAO 酶活性均低于對照。POD 能夠氧化IAA[10],消除體內(nèi)過多的內(nèi)源IAA。扦插90 d 時(shí)3 種消毒處理方式對應(yīng)插穗的POD 酶都顯著高于對照(圖6)。PPO 酶活性與生根呈正相關(guān),高含量的PPO 催化IAA 與酚類物質(zhì)形成不定根生成輔助因子“IAA-酚酸復(fù)合物”,促進(jìn)插穗生根[13]。

    圖6 不同土壤處理方式對酶活性的影響Figure 6 Effect of different soil treatment methods on enzyme activity

    土壤施用復(fù)合肥,‘靖江1 號’與‘中茶108’扦插90 d 時(shí)IAAO 酶活性均高于對照,‘鄂茶1 號’IAAO 酶活性則低于對照,而3 個(gè)品種的POD 和PPO 酶活性則均高于對照。結(jié)合存活率、生根率與病葉率情況,復(fù)合肥處理對‘鄂茶1 號’效果最差,對‘靖江1 號’效果最好。

    土壤深耕處理,‘鄂茶1 號’與‘中茶108’的IAAO 酶活性低于對照,POD 酶活性高于對照;PPO酶活性3個(gè)品種均高于對照。(圖6)結(jié)合生根率結(jié)果,土壤深耕處理只對‘鄂茶1 號’存在明顯促進(jìn)作用。

    3 討論

    3.1 土壤消毒對茶樹露地?zé)o心土扦插的影響

    茶樹無心土扦插,土壤采取威百畝和棉隆消毒處理,‘靖江1 號’生根最快,同時(shí)威百畝處理的存活率高、病葉率低、3 種酶活性高,因此使用威百畝對土壤消毒處理效果最好,其次是石灰氮,最后是棉隆。威百畝是二硫代氨基甲酸酯類殺線蟲劑,在土壤中降解成異硫氰酸甲酯發(fā)揮熏蒸作用,從而有效殺滅結(jié)線蟲與雜草等有害生物。石灰氮是常用土壤消毒試劑,具有殺菌滅蟲等作用,適用于酸性土壤,可用于基肥。棉隆是一種廣譜性農(nóng)藥,在土壤中分解成異硫氰酸酯、甲醛、硫化氫等殺滅線蟲。棉隆還能去除馬鈴薯絲核菌等真菌、殺滅地下害蟲以及抑制雜草生長等[14]。本試驗(yàn)使用棉隆進(jìn)行土壤消毒的作用不明顯且效果與對照相比更差,原因可能是棉隆不僅消滅了土壤中有害生物,還消滅了部分有益生物或者對插穗產(chǎn)生一定的毒害。威百畝和石灰氮處理可以有效提高插穗的存活率,降低病葉率??梢?,對土壤消毒處理在一定程度上對茶樹露地?zé)o心土扦插有正向影響。

    3.2 復(fù)合肥對茶樹露地?zé)o心土扦插的影響

    本試驗(yàn)結(jié)果表明施用復(fù)合肥處理的效果最好,存活率高、病葉率低且生根速度相對較快。由于土壤的長期使用,部分元素過多積累會(huì)抑制插穗生長,土壤中養(yǎng)分不均易導(dǎo)致插穗產(chǎn)生缺素癥狀。施用復(fù)合肥可緩解土壤養(yǎng)分不足與不均等狀況,改善土壤的環(huán)境,提高土壤中微生物的活性。從插穗存活率和病葉率來看,采取施用復(fù)合肥,插穗的存活率升高,病葉率降低,出現(xiàn)生根。從酶活性變化來看,扦插90 d 時(shí)的‘靖江1 號’與‘中茶108’的IAAO 酶活性均高于對照,POD 和PPO 酶活性3 個(gè)品種均高于對照,有利于插穗生根。表明施用復(fù)合肥對茶樹露地?zé)o心土扦插有正向影響。

    3.3 深耕對茶樹露地?zé)o心土扦插的影響

    深耕可在一定程度上改變土壤性質(zhì),疏松土壤,消除雜草和防病蟲害。本試驗(yàn)結(jié)果顯示土壤深耕可降低插穗的病葉率,提高存活率。3 個(gè)品種的病葉率都低于對照,存活率都高于對照,但在生根率方面則只對‘鄂茶1 號’具有正向促進(jìn)作用。整體來看,深耕效果沒有施用復(fù)合肥和土壤消毒處理好,但是在扦插之前對土壤進(jìn)行深耕是有益的。

    4 結(jié)論

    ‘靖江1 號’作為秭歸縣當(dāng)?shù)仄贩N適應(yīng)性更強(qiáng),扦插表現(xiàn)最好。3 種處理方式都具有正向促進(jìn)作用,其中土壤施用復(fù)合肥處理效果最好,其次是土壤消毒處理,最后是深耕處理。消毒處理中以威百畝的效果最好,其次是石灰氮,最后是棉隆。復(fù)合肥處理對‘靖江1 號’最好,對‘鄂茶1 號’促進(jìn)效果最差。深耕處理在生根率方面僅對‘鄂茶1 號’具有促進(jìn)作用,但均能提高插穗的存活率,降低病葉率。

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