• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    白藜蘆醇對小鼠甲狀腺乳頭癌細(xì)胞移植瘤的抑制作用及機(jī)制研究

    2023-12-22 11:12:24毛姍李揚(yáng)丁韓夢趙永麗
    中國普通外科雜志 2023年11期
    關(guān)鍵詞:白藜蘆醇癌細(xì)胞甲狀腺癌

    毛姍,李揚(yáng),丁韓夢,趙永麗

    (1.南陽醫(yī)學(xué)高等??茖W(xué)校 藥學(xué)系,河南 南陽 473000;2. 南陽張仲景醫(yī)院 藥劑科,河南 南陽 473000)

    方法:將40 只裸鼠背部皮下接種甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞(TPC-1)懸液建立移植瘤模型后,隨機(jī)分為模型對照組和3 個不同劑量白藜蘆醇(2.5、5、10 mg/kg)治療組,每組10 只。白藜蘆醇各劑量組裸鼠分別腹腔注射相應(yīng)劑量的白藜蘆醇,模型對照組裸鼠腹腔注射等體積生理鹽水,1 次/d,連續(xù)21 d。記錄移植瘤的生長情況,繪制生長曲線。21 d 后處死各組小鼠,稱量腫瘤質(zhì)量,計算抑瘤率;行腫瘤組織HE 染色和TUNEL 染色檢測腫瘤細(xì)胞形態(tài)和凋亡情況;用qRT-PCR 法與Western blot 法分別檢測腫瘤組織中凋亡相關(guān)蛋白(caspase-3、Bax、Bcl-2)與上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)分子(E-cadherin、N-cadherin、vimentin)的mRNA 與蛋白表達(dá)。

    結(jié)果:與模型對照組比較,3 個劑量白藜蘆醇治療組的移植瘤生長速度均被抑制,21 d 后的移植瘤質(zhì)量均明顯減小,且抑瘤率隨白藜蘆醇劑量的增加而加大(均P<0.05)。HE 染色結(jié)果顯示,模型對照組腫瘤組織中癌細(xì)胞呈片狀,形態(tài)大小不一,胞漿豐富,核大,可見核分裂象,極性紊亂;3 個劑量白藜蘆醇治療組細(xì)胞數(shù)量均不同程度減少、細(xì)胞排列疏松、細(xì)胞核固縮、核分裂較少、不同程度片狀壞死。與模型對照組比較,3 個劑量白藜蘆醇治療組的腫瘤組織中腫瘤細(xì)胞凋亡增加;E-cadherin 和Bax mRNA 和蛋白表達(dá)量升高,N-cadherin、vimentin 和Bcl-2 mRNA 和蛋白表達(dá)量降低;caspase-3 mRNA水平降低,切割型caspase-3 蛋白表達(dá)量升高,且以上變化在3 個劑量白藜蘆醇治療組均呈劑量依賴性(均P<0.05)。

    結(jié)論:白藜蘆醇可促進(jìn)甲狀腺癌細(xì)胞凋亡從而抑制其在小鼠體內(nèi)的生長,其作用機(jī)制可能與逆轉(zhuǎn)EMT過程有關(guān)。

    甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)常見惡性腫瘤,其發(fā)病具有隱匿性,多數(shù)患者因無痛性頸部腫塊就診,部分患者伴有呼吸困難、聲音嘶啞等,且極易侵襲頸部淋巴結(jié),發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1-2]。目前全球范圍內(nèi)甲狀腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢,但是對其發(fā)病的具體機(jī)制尚不清楚,臨床上根據(jù)其病理類型主要分為乳頭狀癌、濾泡狀癌、未分化癌和髓樣癌,其中以乳頭狀癌最為常見[3-5]。因此,尋找有效治療甲狀腺癌的藥物具有重大意義。

    上皮- 間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮表型細(xì)胞在一定刺激因素下喪失上皮特性,逐漸獲得間質(zhì)細(xì)胞特性的現(xiàn)象,間質(zhì)細(xì)胞處于運(yùn)動狀態(tài),從而具有更強(qiáng)的遷移和侵襲能力,該過程具有一定可逆性,可能成為治療癌癥的重要機(jī)制[6-7]。研究[8]已證實,在甲狀腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的過程中,EMT 起到了十分重要的作用。

    白藜蘆醇是一種廣泛存在于植物中的多酚類化合物,具有抗炎、抗氧化以及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等多種藥理學(xué)作用[9-11]。研究[12-15]表明,白藜蘆醇在卵巢癌、口腔鱗狀細(xì)胞、宮頸癌以及乳腺癌等惡性腫瘤中均發(fā)揮抗癌作用。此外,白藜蘆醇在抑制甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移中的作用在近幾年偶有報道[16]。

    基于以上背景,本研究探討白藜蘆醇對甲狀腺癌移植瘤的抑制作用以及與EMT 過程的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料

    甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞系TPC-1 購自美國ATCC公司;SPF 級雌性BALB/c 裸鼠40 只,6~7 周齡,體質(zhì)量15~20 g,購自北京維通利華實驗動物科技有限公司(許可證號:SCXK(京)2021-0006);白藜蘆醇(純度≥98%)購自上海源葉生物科技有限公司;RPMI-1640 培養(yǎng)基購自美國Gibco 公司;蘇木素-伊紅染色(HE)染色和末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP 原位切口末端標(biāo)記(TUNEL)染色試劑盒購自上海碧云天生物科技有限公司;引物序列由廣州銳博生物科技有限公司合成;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量PCR 試劑盒以及TRIzol 試劑購自北京索萊寶生物科技有限公司;Varioskan LUX多功能酶標(biāo)儀購自賽默飛世爾科技;Z136115 型游標(biāo)卡尺購自西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司;QuantStudioTM 5 型熒光定量PCR 儀購自賽默飛世爾科技。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 移植瘤裸鼠模型構(gòu)建 TPC-1 細(xì)胞復(fù)蘇后培養(yǎng)于含10%胎牛血清、1%青鏈雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基中,置于37 ℃、5% CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中,每天更換1 次新鮮培養(yǎng)基,細(xì)胞融合度達(dá)到80%時進(jìn)行傳代。取對數(shù)期細(xì)胞消化,調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/mL。取0.2 mL 細(xì)胞懸液注射于小鼠背部皮下,注射5 d 后可見明顯腫塊視為模型制備成功。

    1.2.2 實驗分組與給藥 將模型制備成功裸鼠隨機(jī)分為模型對照組和低、中、高3 個不同劑量白藜蘆醇(2.5、5、10 mg/kg)治療組,每組10 只。3 個白藜蘆醇治療組分別腹腔注射1 mL 濃度為2.5、5、10 mg/kg 的白藜蘆醇,模型對照組給予等體積生理鹽水,1 次/d,連續(xù)21 d。

    1.2.3 腫瘤生長情況檢測 自接種后5 d 起,每隔3 d 使用游標(biāo)卡尺測量腫瘤長徑和短徑,計算腫瘤體積=長徑×短徑×短徑/2,并繪制腫瘤生長曲線。給藥結(jié)束后,頸椎脫臼法處死,切開背部皮膚,將腫瘤組織快速完整剝離下來,稱取腫瘤質(zhì)量,計算抑瘤率(%)=(模型對照組腫瘤質(zhì)量-各藥物組腫瘤質(zhì)量)/模型對照組腫瘤質(zhì)量×100%。

    1.2.4 腫瘤組織HE 染色 取一半腫瘤組織置于4%多聚甲醛中固定,常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片,進(jìn)行HE 染色,光學(xué)顯微鏡下觀察腫瘤組織形態(tài)學(xué)變化。

    1.2.5 腫瘤組織TUNEL 染色 取石蠟切片,組織上滴加蛋白酶K 工作液,孵育30 min,洗滌,滴加3%過氧化氫封閉液封閉,滴加TdT 酶反應(yīng)物置于濕盒中避光孵育1 h,HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素50 μL 避光孵育,DAB 顯色,蘇木素復(fù)染,中性樹膠封片,光學(xué)顯微鏡下觀察并計數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù),凋亡細(xì)胞呈棕黃色,計算凋亡指數(shù)(AI)=凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

    1.2.6 RT-PCR 法檢測腫瘤組織中EMT 和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白mRNA 表達(dá)水平 取100 mg 腫瘤組織置于EP 管中,剪碎,勻漿,TRIzol 試劑提取總RNA,紫外分光光度計測定RNA 濃度和純度。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,以cDNA 為模板,構(gòu)建熒光定量PCR 反應(yīng)體系,設(shè)置反應(yīng)條件為:95 ℃預(yù)變性30 s,95 ℃變性5 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸15 s,進(jìn)行35 個循環(huán),2-ΔΔCT法計算目的基因mRNA 水平,引物序列見表1。

    表1 引物序列Table 1 Primer sequences

    1.2.7 Western blot 檢測腫瘤組織中EMT 和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平 取100 mg 腫瘤組織剪碎,勻漿,裂解液裂解。4 ℃、12 000 r/min 離心10 min,吸取上清液提取蛋白,加入5×上樣緩沖液,裂解液調(diào)整蛋白濃度,煮沸變性。取50 μg 蛋白樣品用12%聚丙烯酰胺凝膠電泳,將蛋白濕轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯膜(PVDF)膜上,封閉,抗體(1∶1 000)4 ℃孵育過夜,二抗(1∶5 000)室溫孵育1 h,滴加發(fā)光液,凝膠成像分析儀顯影,Image J 分析條帶灰度值,計算蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參條帶灰度值。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

    用SPSS27.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多樣本間比較采用單因素方差分析,兩樣本間比較采用LSD-t檢驗,P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 白藜蘆醇對腫瘤生長的影響

    由移植瘤生長曲線可見,從接種腫瘤細(xì)胞的第10 天開始,4 組小鼠體內(nèi)的移植瘤生長速度有明顯差異。與模型對照組比較,3 個劑量白藜蘆醇治療組的移植瘤生長速度均被抑制,且呈劑量依賴趨勢(圖1)。在接種21 d 后,模型對照組與低、中、高劑量白藜蘆醇治療組的移植瘤質(zhì)量分別為(2.52±0.36) g、(2.03±0.21) g、(1.36±0.23) g、(1.01±0.20) g,各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05);3 個劑量白藜蘆醇治療組的抑瘤率隨著白藜蘆醇劑量的增加而升高(均P<0.05)(圖2)(表2)。

    圖1 各組小鼠移植瘤生長曲線Figure1 The growth curves of transplanted tumors in each group of mice

    圖2 各組移植瘤大體標(biāo)本Figure 2 Gross specimens of transplanted tumors in each group

    表2 各組腫瘤質(zhì)量和抑瘤率比較(n=10,±s)Table 2 Comparison of tumor mass and tumor inhibition rates among groups (n=10, ±s)

    表2 各組腫瘤質(zhì)量和抑瘤率比較(n=10,±s)Table 2 Comparison of tumor mass and tumor inhibition rates among groups (n=10, ±s)

    注:1)與模型對照組比較,P<0.05;2)與低劑量白藜蘆醇治療組比較,P<0.05;3)與中劑量白藜蘆醇治療組比較,P<0.05Note: 1) P<0.05 vs. model control group; 2) P<0.05 vs. low-dose resveratrol treatment group; 3) P<0.05 vs. medium-dose resveratrol treatment group

    抑瘤率(%)—31±3.22 41±3.192)55±4.442),3)組別模型對照組低劑量白藜蘆醇治療組中劑量白藜蘆醇治療組高劑量白藜蘆醇治療組腫瘤質(zhì)量(g)2.52±0.36 2.03±0.211)1.36±0.231),2)1.01±0.201),2),3)

    2.2 腫瘤組織病理染色結(jié)果

    模型對照組腫瘤組織中癌細(xì)胞呈片狀,形態(tài)大小不一,胞漿豐富,核大,可見核分裂象,極性紊亂;白藜蘆醇低、中和高劑量組細(xì)胞數(shù)量不同程度減少,細(xì)胞排列疏松,細(xì)胞核固縮,核分裂較少,不同程度片狀壞死(圖3)。

    2.3 腫瘤細(xì)胞AI檢測結(jié)果

    與模型對照組比較,3 個劑量的白藜蘆醇治療組的AI 均明顯升高,且在3 組間呈明顯的劑量依賴性(均P<0.05)(圖4)(表3)。

    圖4 腫瘤組織TUNEL染色(×200)Figure 4 TUNEL staining of tumor tissues (×200)

    表3 各組腫瘤組織中AI比較(%,n=10,±s)Table 3 Comparison of AI in tumor tissues among groups(%, n=10, ±s)

    表3 各組腫瘤組織中AI比較(%,n=10,±s)Table 3 Comparison of AI in tumor tissues among groups(%, n=10, ±s)

    注:1)與模型對照組比較,P<0.05;2)與低劑量白藜蘆醇治療組比較,P<0.05;3)與中劑量白藜蘆醇治療組比較,P<0.05Note: 1) P<0.05 vs. model control group; 2) P<0.05 vs. low-dose resveratrol treatment group; 3) P<0.05 vs. medium-dose resveratrol treatment group

    AI 9.20±0.75 18.37±2.331)29.66±6.081),2)41.73±9.951),2),3)組別模型對照組低劑量白藜蘆醇治療組中劑量白藜蘆醇治療組高劑量白藜蘆醇治療組

    2.4 qRT-PCR檢測結(jié)果

    與模型對照組比較,3 個劑量白藜蘆醇治療組的E-cadherin 和Bax mRNA 表達(dá)水平均明顯升高,而N-cadherin、vimentin、caspase-3 和Bcl-2 mRNA 表達(dá)水平均明顯降低,且呈明顯的劑量依賴性(均P<0.05)(表4)。

    表4 各組腫瘤組織中EMT和凋亡相關(guān)蛋白mRNA表達(dá)水平比較(n=10,±s)Table4 Comparison of mRNA expression levels of EMT and apoptosis-related proteins in tumor tissues among different groups (n=10, ±s)

    表4 各組腫瘤組織中EMT和凋亡相關(guān)蛋白mRNA表達(dá)水平比較(n=10,±s)Table4 Comparison of mRNA expression levels of EMT and apoptosis-related proteins in tumor tissues among different groups (n=10, ±s)

    注:1)與模型對照組比較,P<0.05;2)與低劑量白藜蘆醇治療組比較,P<0.05;3)與中劑量白藜蘆醇治療組比較,P<0.05Note: 1) P<0.05 vs. model control group; 2) P<0.05 vs. low-dose resveratrol treatment group; 3) P<0.05 vs. medium-dose resveratrol treatment group

    組別模型對照組低劑量白藜蘆醇治療組中劑量白藜蘆醇治療組高劑量白藜蘆醇治療組Bcl-2 1.03±0.15 0.82±0.061)0.70±0.041),2)0.57±0.051),2),3)E-cadherin 1.03±0.45 3.71±0.441)5.06±0.621),2)6.78±0.691),2),3)Bax 1.07±0.56 3.95±0.721)5.38±0.691),2)7.20±0.651),2),3)caspase-3 1.05±0.14 0.77±0.051)0.60±0.041),2)0.47±0.061),2),3)N-cadherin 1.08±0.27 0.78±0.031)0.62±0.041),2)0.51±0.061),2),3)vimentin 1.12±0.56 0.82±0.051)0.67±0.061),2)0.52±0.071),2),3)

    2.5 Western blot檢測結(jié)果

    與模型對照組比較,3 個劑量的白藜蘆醇治療組的E-cadherin、Bax 和切割型(cleaved) caspase-3蛋白表達(dá)量均明顯升高,而N-cadherin、vimentin和Bcl-2 蛋白表達(dá)量均明顯降低,且呈明顯的劑量依賴性(均P<0.05)(圖5)。

    圖5 各組腫瘤組織中EMT和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)量比較 1)與模型對照組比較,P<0.05;2)與低劑量白藜蘆醇治療組比較,P<0.05;3)與中劑量白藜蘆醇治療組比較,P<0.05Figure 5 Comparison of protein expression levels of EMT and apoptosis-related proteins in tumor tissues among different groups 1) P<0.05 vs. model control group; 2) P<0.05 vs. low-dose resveratrol treatment group; 3) P<0.05 vs. mediumdose resveratrol treatment group

    3 討 論

    女性甲狀腺癌發(fā)病率高于男性,其發(fā)病受輻射、空氣質(zhì)量、碘攝取異常、情緒、遺傳等多種因素的影響,而且年齡、腫瘤直徑、多發(fā)癌灶、腺外侵犯等多種因素可導(dǎo)致癌細(xì)胞發(fā)生頸區(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[17-18]。臨床上主要采用以手術(shù)切除為主的綜合治療手段,預(yù)后良好,但部分患者因身體條件、耐藥性等因素而未能達(dá)到令人滿意的預(yù)后效果[19-20]。近些年,中草藥因其來源廣、成本低、毒副作用小以及多靶點(diǎn)等優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用于腫瘤領(lǐng)域的研究。于彬等[21]報道扁蒴藤素可抑制肝癌細(xì)胞增殖和遷移,降低吉西他濱化療耐藥性。青藤堿可抑制胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲,發(fā)揮抗胰腺癌作用[22]。白藜蘆醇抗腫瘤特性被廣泛研究。本研究以甲狀腺最常見的病理類型乳頭狀甲狀腺癌移植瘤裸鼠為研究對象,探討白藜蘆醇對腫瘤生長的抑制作用及其具體機(jī)制。

    移植瘤裸鼠腹腔注射藥物21 d 后,3 個劑量白藜蘆醇治療組腫瘤體積均減小,具有顯著抑瘤率。模型對照組腫瘤組織中癌細(xì)胞呈片狀,形態(tài)大小不一,胞漿豐富,核大,可見核分裂象,極性紊亂;3 個劑量白藜蘆醇治療組細(xì)胞數(shù)量不同程度減少,排列疏松,細(xì)胞核固縮,核分裂較少,不同程度片狀壞死。此外,通過染色發(fā)現(xiàn)3 個劑量白藜蘆醇治療組腫瘤組織中凋亡細(xì)胞增多,AI 升高。以上結(jié)果提示,白藜蘆醇可抑制甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長,誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。此結(jié)果與Li 等[23]報道的白藜蘆醇可抑制前列腺癌移植瘤生長、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡具有一致性。惡性腫瘤的進(jìn)展與細(xì)胞凋亡異常失控具有必然聯(lián)系,細(xì)胞凋亡是多基因共同作用的結(jié)果,Bcl-2 家族是調(diào)控細(xì)胞凋亡的重要途徑之一。Bcl-2 可調(diào)節(jié)線粒體通透性保護(hù)細(xì)胞免受程序性細(xì)胞死亡,而該家族中的另一成員Bax 則發(fā)揮與Bcl-2 相反的作用,表現(xiàn)為促進(jìn)細(xì)胞凋亡[24-25]。caspase-3 家族是細(xì)胞凋亡信號網(wǎng)的重要節(jié)點(diǎn),在調(diào)控細(xì)胞凋亡的多途徑中扮演凋亡執(zhí)行者的角色,通過選擇性切割某些蛋白質(zhì)造成細(xì)胞凋亡[26]。在本研究中白藜蘆醇低、中和高劑量治療組裸鼠甲狀腺乳頭狀癌移植瘤組織中Bax 和caspase-3 mRNA 和蛋白表達(dá)水平高于模型對照組,Bcl-2 mRNA 和蛋白表達(dá)水平低于模型對照組,該結(jié)果提示白藜蘆醇在甲狀腺乳頭狀癌移植瘤中發(fā)揮促進(jìn)促凋亡蛋白表達(dá),抑制抗凋亡蛋白表達(dá)的作用。

    EMT 獲得的間質(zhì)細(xì)胞是惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移和侵襲的重要原因,逆轉(zhuǎn)EMT 過程或是降低惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要機(jī)制之一[27-28]。研究[29]發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇通過抑制TGF-β1 誘導(dǎo)的EMT 過程發(fā)揮抗胃癌作用。Yuan 等[30]報道稱白藜蘆醇可逆轉(zhuǎn)EMT過程抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移和侵襲。EMT 過程的明顯特征是E-cadherin 丟失, N-cadherin 和vimentin 的增加。因此在本研究中白藜蘆醇低、中和高劑量治療組裸鼠腫瘤組織中E-cadherin mRNA和蛋白表達(dá)較模型對照組升高,N-cadherin 和vimentin mRNA 和蛋白表達(dá)水平較模型對照組降低。此結(jié)果提示白藜蘆醇可逆轉(zhuǎn)EMT 過程。

    綜上所述,白藜蘆醇可抑制甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞移植瘤裸鼠腫瘤生長,誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡,其可能是通過逆轉(zhuǎn)EMT 過程、調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)發(fā)揮作用。以上結(jié)果為臨床治療甲狀腺癌提供理論依據(jù)。

    利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。

    作者貢獻(xiàn)聲明:毛姍負(fù)責(zé)課題設(shè)計,李揚(yáng)負(fù)責(zé)實驗操作,丁韓夢負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析,趙永麗負(fù)責(zé)撰寫文稿。

    猜你喜歡
    白藜蘆醇癌細(xì)胞甲狀腺癌
    白藜蘆醇研究進(jìn)展
    云南化工(2021年11期)2022-01-12 06:06:12
    分化型甲狀腺癌切除術(shù)后多發(fā)骨轉(zhuǎn)移一例
    分化型甲狀腺癌肺轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展
    癌細(xì)胞最怕LOVE
    假如吃下癌細(xì)胞
    癌細(xì)胞最怕Love
    奧秘(2017年5期)2017-07-05 11:09:30
    正常細(xì)胞為何會“叛變”? 一管血可測出早期癌細(xì)胞
    全甲狀腺切除術(shù)治療甲狀腺癌適應(yīng)證選擇及并發(fā)癥防治
    白藜蘆醇抑菌作用及抑菌機(jī)制研究進(jìn)展
    白藜蘆醇對紅色毛癬菌和煙曲霉菌抑菌作用比較
    国产免费视频播放在线视频| 国产福利在线免费观看视频| 欧美人与善性xxx| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲欧美一区二区三区国产| 美女内射精品一级片tv| 精品国产乱码久久久久久小说| 欧美成人精品欧美一级黄| 成人国语在线视频| 国产成人精品在线电影| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲国产欧美日韩在线播放| av卡一久久| 国产精品女同一区二区软件| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久久久久伊人网av| 日本与韩国留学比较| 久久免费观看电影| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产日韩欧美视频二区| 午夜老司机福利剧场| 中国国产av一级| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 在线免费观看不下载黄p国产| 丰满迷人的少妇在线观看| 女人精品久久久久毛片| 一区二区三区精品91| 国产男女超爽视频在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 乱人伦中国视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲情色 制服丝袜| 各种免费的搞黄视频| 18在线观看网站| 久久久久久久久久成人| 欧美 日韩 精品 国产| 日本爱情动作片www.在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久久久久久久久人人人人人人| 日韩视频在线欧美| 美女视频免费永久观看网站| 美女国产高潮福利片在线看| 国产av国产精品国产| 大码成人一级视频| 欧美bdsm另类| 日韩一本色道免费dvd| 国产av码专区亚洲av| 精品酒店卫生间| 亚洲,欧美精品.| 国产成人91sexporn| 国产成人精品一,二区| 熟女人妻精品中文字幕| 美国免费a级毛片| 亚洲av免费高清在线观看| 9191精品国产免费久久| 日韩欧美精品免费久久| 美女内射精品一级片tv| 国产亚洲精品久久久com| 一二三四中文在线观看免费高清| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 日韩一区二区视频免费看| 热99国产精品久久久久久7| 久久 成人 亚洲| 色哟哟·www| 看非洲黑人一级黄片| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日本与韩国留学比较| 午夜av观看不卡| 91aial.com中文字幕在线观看| 超色免费av| 超色免费av| 欧美bdsm另类| 国产精品不卡视频一区二区| 婷婷色av中文字幕| 看免费av毛片| 人人妻人人澡人人看| 波野结衣二区三区在线| 亚洲av在线观看美女高潮| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产片内射在线| 国产高清国产精品国产三级| 免费大片18禁| 精品少妇久久久久久888优播| 色视频在线一区二区三区| 久久97久久精品| 少妇的逼好多水| 亚洲av男天堂| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久婷婷青草| 亚洲伊人色综图| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美另类一区| 两性夫妻黄色片 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 国产免费又黄又爽又色| 一边摸一边做爽爽视频免费| 美女内射精品一级片tv| 亚洲av男天堂| 成人黄色视频免费在线看| 大香蕉久久成人网| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 大陆偷拍与自拍| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 18+在线观看网站| 秋霞伦理黄片| 男人添女人高潮全过程视频| 国产成人精品一,二区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产日韩欧美亚洲二区| av线在线观看网站| 欧美3d第一页| 国产精品国产三级国产专区5o| 51国产日韩欧美| 久久国产亚洲av麻豆专区| 各种免费的搞黄视频| 91aial.com中文字幕在线观看| av.在线天堂| 亚洲av日韩在线播放| av网站免费在线观看视频| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 亚洲欧洲国产日韩| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 精品国产露脸久久av麻豆| 精品人妻偷拍中文字幕| 永久免费av网站大全| 国产有黄有色有爽视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩av不卡免费在线播放| 人成视频在线观看免费观看| 一区二区三区精品91| 国产精品无大码| 日韩精品有码人妻一区| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲精品视频女| 国产片内射在线| 国产麻豆69| 2022亚洲国产成人精品| 国产在线免费精品| 成人午夜精彩视频在线观看| 伦精品一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 精品一区二区三卡| 久久av网站| 国产精品久久久久久久电影| 欧美精品一区二区大全| 波多野结衣一区麻豆| 精品一区二区免费观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日本av手机在线免费观看| 欧美另类一区| 国产精品欧美亚洲77777| 久久久国产一区二区| 激情五月婷婷亚洲| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久久久久久久久久久大奶| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲成人av在线免费| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久久久久久久免费av| 久久婷婷青草| 亚洲美女搞黄在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲精品国产av蜜桃| 在线观看www视频免费| 久久久精品区二区三区| 秋霞在线观看毛片| 激情视频va一区二区三区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 伊人久久国产一区二区| 国产免费又黄又爽又色| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 午夜免费观看性视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 最近中文字幕2019免费版| 欧美xxⅹ黑人| 高清视频免费观看一区二区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 在线观看人妻少妇| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲第一av免费看| 国产色婷婷99| 久久人人97超碰香蕉20202| 最近手机中文字幕大全| av女优亚洲男人天堂| 丝袜在线中文字幕| 天天影视国产精品| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美日韩综合久久久久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 大片电影免费在线观看免费| 久久精品久久精品一区二区三区| 美女福利国产在线| 嫩草影院入口| av电影中文网址| 99久国产av精品国产电影| av女优亚洲男人天堂| 韩国av在线不卡| 热re99久久精品国产66热6| 三上悠亚av全集在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲人成77777在线视频| 满18在线观看网站| 国产极品天堂在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 亚洲综合色惰| 午夜久久久在线观看| 中国国产av一级| 91精品伊人久久大香线蕉| 日本欧美国产在线视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日日啪夜夜爽| 久久婷婷青草| 国产在线视频一区二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产福利在线免费观看视频| 国产一区二区三区av在线| 26uuu在线亚洲综合色| 十分钟在线观看高清视频www| 国产精品免费大片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 一级毛片我不卡| 国产精品99久久99久久久不卡 | 伊人亚洲综合成人网| 午夜av观看不卡| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产男女内射视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产精品一国产av| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 丝袜人妻中文字幕| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日韩中文字幕视频在线看片| 久久久久人妻精品一区果冻| 在线观看免费高清a一片| 99久国产av精品国产电影| 国产精品国产三级国产专区5o| 青春草国产在线视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 十八禁高潮呻吟视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 男女下面插进去视频免费观看 | 在现免费观看毛片| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲欧美色中文字幕在线| 午夜视频国产福利| 性高湖久久久久久久久免费观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 97在线视频观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品99久久99久久久不卡 | 香蕉国产在线看| 婷婷色综合大香蕉| 黑人高潮一二区| 天堂8中文在线网| 水蜜桃什么品种好| 久久精品国产a三级三级三级| 少妇被粗大的猛进出69影院 | av免费观看日本| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲成人av在线免费| 亚洲精品,欧美精品| 各种免费的搞黄视频| 久久青草综合色| 女性被躁到高潮视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 精品人妻在线不人妻| 蜜臀久久99精品久久宅男| 欧美另类一区| 国产免费视频播放在线视频| 青春草国产在线视频| 另类亚洲欧美激情| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产 一区精品| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 一级黄片播放器| av在线app专区| 亚洲精品美女久久av网站| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 看非洲黑人一级黄片| 欧美精品av麻豆av| 婷婷色综合www| 999精品在线视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 两个人免费观看高清视频| 国产高清不卡午夜福利| av免费观看日本| 国产男女内射视频| 9191精品国产免费久久| 久热久热在线精品观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 性色av一级| 精品一区二区三卡| 亚洲人成77777在线视频| 男人操女人黄网站| 国产亚洲欧美精品永久| 一区二区三区乱码不卡18| 免费看av在线观看网站| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产激情久久老熟女| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产成人精品婷婷| 亚洲国产最新在线播放| 香蕉精品网在线| 亚洲国产看品久久| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 一边亲一边摸免费视频| 午夜福利影视在线免费观看| 国产深夜福利视频在线观看| 国产成人一区二区在线| 日韩av在线免费看完整版不卡| 最新中文字幕久久久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 99热这里只有是精品在线观看| 蜜桃在线观看..| 日韩一本色道免费dvd| 九色成人免费人妻av| 高清欧美精品videossex| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 青春草亚洲视频在线观看| 在现免费观看毛片| tube8黄色片| 大陆偷拍与自拍| 99热国产这里只有精品6| 国产成人av激情在线播放| 黄色视频在线播放观看不卡| 精品亚洲成国产av| 亚洲人成77777在线视频| 欧美bdsm另类| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 青春草国产在线视频| av在线播放精品| 99热这里只有是精品在线观看| 午夜免费观看性视频| freevideosex欧美| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久久久精品性色| 国产又爽黄色视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩大片免费观看网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久久久国产网址| 国产精品一国产av| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久热在线av| 丰满迷人的少妇在线观看| 婷婷色综合www| av在线老鸭窝| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 亚洲国产精品专区欧美| 成人无遮挡网站| 自线自在国产av| 插逼视频在线观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲国产精品国产精品| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲美女视频黄频| 美国免费a级毛片| av线在线观看网站| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲国产精品专区欧美| 一区二区三区乱码不卡18| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久久久久久久人人人人人人| 搡女人真爽免费视频火全软件| 免费观看无遮挡的男女| 内地一区二区视频在线| 伦理电影大哥的女人| 国产一区二区在线观看av| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 成年美女黄网站色视频大全免费| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲国产色片| 人妻 亚洲 视频| 最新的欧美精品一区二区| 久久热在线av| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产成人精品在线电影| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品久久久久成人av| 亚洲性久久影院| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国内精品宾馆在线| 在线观看免费视频网站a站| 国产黄色免费在线视频| 天堂8中文在线网| 国产爽快片一区二区三区| 99精国产麻豆久久婷婷| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久99蜜桃精品久久| 黄色毛片三级朝国网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲av日韩在线播放| 国产高清国产精品国产三级| 婷婷成人精品国产| 亚洲成色77777| 2018国产大陆天天弄谢| 99热全是精品| www.av在线官网国产| 成人国语在线视频| 水蜜桃什么品种好| 久久久久久久久久成人| 久久久久久伊人网av| a级毛片黄视频| 国产伦理片在线播放av一区| 最新中文字幕久久久久| 婷婷色综合www| 国产av一区二区精品久久| 91国产中文字幕| 丝袜美足系列| tube8黄色片| 亚洲一区二区三区欧美精品| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 高清毛片免费看| 成人毛片60女人毛片免费| 看免费av毛片| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 一本久久精品| 熟女av电影| 亚洲国产av影院在线观看| a级毛片黄视频| 91国产中文字幕| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美97在线视频| a 毛片基地| 午夜视频国产福利| 国产精品一国产av| 欧美人与性动交α欧美软件 | 亚洲国产欧美在线一区| 人妻系列 视频| 国产av精品麻豆| 黑人猛操日本美女一级片| 男人舔女人的私密视频| 欧美日韩视频精品一区| 一区二区三区乱码不卡18| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲国产av新网站| 国产精品99久久99久久久不卡 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 九九爱精品视频在线观看| 国产永久视频网站| 亚洲精品久久午夜乱码| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 午夜福利影视在线免费观看| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲内射少妇av| 久热久热在线精品观看| 国产福利在线免费观看视频| xxxhd国产人妻xxx| 日本欧美视频一区| 哪个播放器可以免费观看大片| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 激情视频va一区二区三区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产一区二区在线观看日韩| 狂野欧美激情性bbbbbb| 欧美最新免费一区二区三区| 两个人看的免费小视频| 一个人免费看片子| 日本午夜av视频| 一二三四在线观看免费中文在 | 美女主播在线视频| 丝袜脚勾引网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久热在线av| 国产淫语在线视频| 久久久久久伊人网av| 国产精品久久久久久精品古装| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 午夜91福利影院| 亚洲性久久影院| 日韩av免费高清视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日韩免费高清中文字幕av| 99re6热这里在线精品视频| 国产激情久久老熟女| av黄色大香蕉| 男人操女人黄网站| 亚洲五月色婷婷综合| 日本免费在线观看一区| 久久 成人 亚洲| 国产精品人妻久久久久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 热re99久久精品国产66热6| 在线看a的网站| 男男h啪啪无遮挡| 色5月婷婷丁香| 男女高潮啪啪啪动态图| 在线观看人妻少妇| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 天堂中文最新版在线下载| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产一区二区激情短视频 | 国产精品人妻久久久久久| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲图色成人| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品一二三区在线看| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产精品久久久久成人av| 国产精品.久久久| 人人澡人人妻人| 美女中出高潮动态图| 亚洲av.av天堂| 男人舔女人的私密视频| 香蕉国产在线看| 男人爽女人下面视频在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜福利,免费看| 亚洲欧洲日产国产| 天天影视国产精品| 国产麻豆69| 久久久久久久国产电影| 免费观看a级毛片全部| 妹子高潮喷水视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产 精品1| 满18在线观看网站| 亚洲精品国产av成人精品| 五月开心婷婷网| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久精品国产自在天天线| 在线观看www视频免费| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲经典国产精华液单| av国产精品久久久久影院| 欧美激情国产日韩精品一区| 两个人看的免费小视频| 免费看不卡的av| 成人影院久久| 考比视频在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 国产色爽女视频免费观看| 久久久久久伊人网av| 亚洲伊人色综图| 日本wwww免费看| 亚洲美女搞黄在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 婷婷成人精品国产| 日本av免费视频播放| 欧美亚洲日本最大视频资源| 街头女战士在线观看网站| 婷婷色av中文字幕| 69精品国产乱码久久久| 香蕉精品网在线| 男人操女人黄网站| 欧美日韩亚洲高清精品| 美女主播在线视频| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲天堂av无毛| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲熟女精品中文字幕| 秋霞在线观看毛片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产69精品久久久久777片| 街头女战士在线观看网站| 欧美3d第一页| 哪个播放器可以免费观看大片| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久久久精品久久久久真实原创| 高清毛片免费看| 日韩精品有码人妻一区| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 99热网站在线观看| 天天影视国产精品| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日韩视频在线欧美| 97在线视频观看| 久久亚洲国产成人精品v| 午夜免费鲁丝| 国产精品一区二区在线观看99| 人妻人人澡人人爽人人| 永久网站在线| 国产精品99久久99久久久不卡 | 女性被躁到高潮视频|