• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    紫草素調(diào)節(jié)Notch信號(hào)通路對(duì)肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)活性的影響

    2023-12-22 12:02:00吳德建楊秋謝桂丹彭鑫
    天津醫(yī)藥 2023年12期
    關(guān)鍵詞:遷移率細(xì)胞周期肝癌

    吳德建,楊秋,謝桂丹,彭鑫△

    肝癌是常見的惡性腫瘤,肝細(xì)胞癌(HCC)是肝癌的主要組織學(xué)亞型,約占原發(fā)性肝癌的90%,是癌癥相關(guān)死亡的第二大原因[1]。盡管對(duì)肝癌手術(shù)治療和分子靶向治療的研究已有較多報(bào)道[2],但由于該病復(fù)發(fā)率高、轉(zhuǎn)移率高、預(yù)后差,近30年的生存率仍然相對(duì)較低[3]。因此,迫切需要尋找新的肝癌治療靶點(diǎn)并探索可能的相關(guān)分子機(jī)制。紫草素(SHI)是一種天然萘醌,富含于中草藥紫草中,對(duì)癌癥的治療有積極效果[4]。Bao 等[5]研究顯示,SHI 可以通過抑制癌細(xì)胞侵襲、遷移以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)來抑制三陰性乳腺癌的發(fā)展。SHI還可抑制宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移[6]。近期研究發(fā)現(xiàn)SHI 治療HCC 有積極作用[7]。Notch 信號(hào)傳導(dǎo)在肝臟穩(wěn)態(tài)和肝癌發(fā)生中起關(guān)鍵作用,Notch信號(hào)的持續(xù)失調(diào)會(huì)對(duì)肝臟炎癥和腫瘤發(fā)展產(chǎn)生重要影響[8]。Shi 等[9]研究發(fā)現(xiàn),抑制Notch信號(hào)通路可以促進(jìn)肝卵圓細(xì)胞分化為肝細(xì)胞,進(jìn)而減輕肝損傷。Xu等[6]的研究表明抑制Notch 信號(hào)通路中hairy相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(HEY)1的表達(dá)可以抑制肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。本研究旨在探討SHI是否可以通過抑制Notch信號(hào)通路,降低肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)活性,進(jìn)而發(fā)揮抗癌作用。

    1 材料與方法

    1.1 組織標(biāo)本 收集2018 年1 月—2022 年1 月在儋州市人民醫(yī)接受腹腔鏡精準(zhǔn)切除術(shù)的20例肝癌患者的癌組織及癌旁組織標(biāo)本,所有患者均有慢性乙型肝炎病史,術(shù)前均未接受經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞術(shù)、免疫治療或靶向抗癌治療。本研究取得患者及其家屬同意,且經(jīng)我院倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)(批號(hào):2017-10-007)。

    1.2 細(xì)胞及主要材料 SHI 購自南京賽泓瑞生物科技有限公司;CCK-8試劑盒購自上海廣銳生物科技有限公司;Notch通路激活劑丙戊酸(VPA)、Notch 信號(hào)抑制劑DAPT 均購自MedChemExpress LLC;正常肝細(xì)胞HL-7702 細(xì)胞及肝癌HepG2、Hep3B、HCCLM3、Huh-7、SMMC-7721 細(xì)胞均購自上海名勁生物科技有限公司;Notch、內(nèi)參蛋白GAPDH 兔抗人一抗、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔IgG 二抗購自英國Abcam 公司;發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子-1(HES1)兔抗人一抗購自NSJ Bioreagents;HEY1兔抗人一抗購自Biotrend;B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)、鈣黏蛋白E(E-Cadherin)、神經(jīng)性鈣黏素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)兔抗人一抗購自Cell Signaling Technology;NovoCyte 流式細(xì)胞儀購自廣州柏賽柯生物技術(shù)有限公司;Transwell小室購自北京達(dá)科為生物技術(shù)有限公司。

    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 將肝癌細(xì)胞(HepG2、Hep3B、HCCLM3、Huh-7、SMMC-7721)及正常肝細(xì)胞(HL-7702)用含有10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素混合物的DMEM培養(yǎng)基(37 ℃,5%CO2)培養(yǎng)。將Notch、HES1及HEY1蛋白表達(dá)最高的肝癌細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),分為對(duì)照組(未做任何處理)、LSHI 組(1 μmol/L SHI 處理)、M-SHI 組(2 μmol/L SHI 處理)、H-SHI 組(4 μmol/L SHI 處理)[10]、DAPT 組(50 μmol/L DAPT 處理[11])、H-SHI+VPA 組(4 μmol/L SHI 和8 mmol/L VPA[12]共同處理),培養(yǎng)48 h。

    1.4 Western blot 檢測(cè)Notch、EMT 相關(guān)蛋白、凋亡蛋白表達(dá) 將組織或各組肝癌細(xì)胞與裂解液混合,30 min后抽取蛋白通過BCA法定量,隨后加入緩沖液進(jìn)行SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)膜,成功后用脫脂牛奶封閉,加入一抗Bcl-2(1∶1 000)、Bax(1∶1 000)、cleaved-Caspase-3(1∶2 000)、Notch(1∶2 000)、(1∶2 000)、HEY1(1∶2 000)、E-cadherin(1∶2 000)、Ncadherin(1∶1 000)、Vimentin(1∶1 000)和GAPDH(1∶1 000),4 ℃下孵育過夜,加入二抗(1∶1 000),ECL試劑染色后,對(duì)目的條帶拍照,以GAPDH 作為內(nèi)參,用Image J 軟件分析蛋白質(zhì)條帶。

    1.5 CCK-8法檢測(cè)Huh-7細(xì)胞增殖以及平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成能力 將Huh-7 細(xì)胞按5×103個(gè)/孔的密度接種在96 孔板,培養(yǎng)2 d 后,將Huh-7 細(xì)胞與10 μL CCK8 一起孵育2 h。使用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處的光密度(OD)值。

    將Huh-7 細(xì)胞以1×105個(gè)/孔的密度接種到6 孔板中,培養(yǎng)15 d 后,磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌,用4%多聚甲醛固定20 min,結(jié)晶紫染色后在顯微鏡下觀察菌落。

    1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Huh-7 細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期 收集Huh-7 細(xì)胞,用PBS 沖洗2 次后,將Huh-7 細(xì)胞置于預(yù)冷的70%乙醇中固定2 h,隨后以1 000×g離心5 min,與25 μL PI和10 μL RNase A避光孵育30 min,使用NovoCyte流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期分析。將肝癌細(xì)胞配置成2.5×105個(gè)/mL懸浮液,取100 μL 細(xì)胞懸液與5 μL Annexin V-FITC、10 μL PI 孵育,使用NovoCyte流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

    1.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)Huh-7細(xì)胞遷移和侵襲情況 (1)遷移。取各組肝癌細(xì)胞接種在6孔板,在37 ℃、5%CO2環(huán)境下培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%,用移液器槍頭制造人工劃痕,隨后加入無血清培養(yǎng)基,培養(yǎng)0、12 h置于顯微鏡下拍照。用Image J軟件分析遷移率,遷移率(%)=[(0 h劃痕面積-12 h劃痕面積)/0 h劃痕面積]×100%。(2)侵襲。用無血清培養(yǎng)基將肝癌細(xì)胞調(diào)整為5×104個(gè)/mL,Transwell 下室加入600 μL DMEM 培養(yǎng)基(含10%胎牛血清),Transwell上室先鋪滿基質(zhì)膠,再加入200 μL無血清細(xì)胞懸液,Transwell小室置于37 ℃,5%CO2環(huán)境下培養(yǎng)24 h后用4%多聚甲醛固定,結(jié)晶紫染色,PBS洗滌后,擦拭上室未侵襲的肝癌細(xì)胞,于顯微鏡下計(jì)算穿膜細(xì)胞數(shù)。

    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0 軟件處理數(shù)據(jù),計(jì)量數(shù)據(jù)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)后以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,2組間比較用t檢驗(yàn),多組間比較用單因素方差分析,組間多重比較采用SNK-q檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 Notch、HES1、HEY1 在組織和細(xì)胞中的表達(dá) 癌組織較癌旁組織Notch、HES1、HEY1 蛋白水平均升高(P<0.01);與HL-7702細(xì)胞相比,HepG2、Hep3B、HCCLM3、Huh-7、SMMC-7721 細(xì)胞中Notch、HES1、HEY1 蛋白水平均升高(P<0.05),且Huh-7細(xì)胞升高最明顯,見表1、2,圖1、2。以Huh-7細(xì)胞為研究對(duì)象。

    Fig.1 Western blot detection of Notch,HES1 and HEY1 protein expression in liver cancer tissue and adjacent tissue圖1 Western blot檢測(cè)肝癌組織及癌旁組織中Notch、HES1、HEY1蛋白表達(dá)

    Fig.2 Western blot detection of Notch,HES1 and HEY1 protein levels in normal hepatocytes and hepatoma cells圖2 Western blot檢測(cè)正常肝細(xì)胞及肝癌細(xì)胞中Notch、HES1、HEY1蛋白水平

    Tab.1 Expression of Notch,HES1 and HEY1 proteins in liver cancer tissue and adjacent tissue表1 Notch、HES1、HEY1蛋白在癌組織及癌旁組織中的表達(dá)(n=20,±s)

    Tab.1 Expression of Notch,HES1 and HEY1 proteins in liver cancer tissue and adjacent tissue表1 Notch、HES1、HEY1蛋白在癌組織及癌旁組織中的表達(dá)(n=20,±s)

    **P<0.01。

    組別癌旁組織癌組織t Notch 0.78±0.09 1.41±0.13 17.819**HES1 0.63±0.07 1.24±0.11 10.633**HEY1 0.39±0.05 1.37±0.14 29.481**

    Tab.2 Expression of Notch,HES1 and HEY1 proteins in normal liver cells and liver cancer cells表2 Notch、HES1、HEY1蛋白在正常肝細(xì)胞及肝癌細(xì)胞中的表達(dá)(n=6,±s)

    Tab.2 Expression of Notch,HES1 and HEY1 proteins in normal liver cells and liver cancer cells表2 Notch、HES1、HEY1蛋白在正常肝細(xì)胞及肝癌細(xì)胞中的表達(dá)(n=6,±s)

    **P<0.01;a與HL-7702細(xì)胞比較,P<0.05。

    組別HL-7702細(xì)胞HepG2細(xì)胞Hep3B細(xì)胞HCCLM3細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞Huh-7細(xì)胞F Notch 0.60±0.06 1.41±0.13a 1.33±0.12a 1.35±0.14a 1.37±0.15a 1.60±0.17a 67.663**HES1 0.51±0.05 1.05±0.09a 1.13±0.12a 1.07±0.11a 1.09±0.13a 1.23±0.14a 52.880**HEY1 0.35±0.04 1.16±0.12a 1.22±0.13a 1.26±0.14a 1.24±0.16a 1.42±0.17a 81.609**

    2.2 SHI 對(duì)Huh-7 細(xì)胞中Notch、HES1、HEY1 蛋白表達(dá)的影響 與對(duì)照組相比,L-SHI 組、M-SHI 組、H-SHI 組、DAPT 組Notch、HES1、HEY1 蛋白表達(dá)水平下調(diào)(P<0.05),且SHI 的作用效果呈現(xiàn)劑量依賴性;H-SHI+VPA 組較H-SHI 組Notch、HES1、HEY1蛋白表達(dá)水平上調(diào)(P<0.05),見圖3、表3。

    Fig.3 Western blot detection of effects of SHI on Notch,HES1 and HEY1 proteins in Huh-7 cells圖3 Western blot檢測(cè)SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞中Notch、HES1、HEY1蛋白的影響

    Tab.3 Effects of SHI on Notch,HES1 and HEY1 proteins in Huh-7 cells表3 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞中Notch、HES1、HEY1蛋白表達(dá)的影響(n=6,±s)

    Tab.3 Effects of SHI on Notch,HES1 and HEY1 proteins in Huh-7 cells表3 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞中Notch、HES1、HEY1蛋白表達(dá)的影響(n=6,±s)

    **P<0.01;a與對(duì)照組比較,b與L-SHI組比較,c與M-SHI組比較,d與H-SHI組比較,P<0.05;表4—8同。

    組別對(duì)照組L-SHI組M-SHI組H-SHI組DAPT組H-SHI+VPA組F Notch 1.63±0.19 1.31±0.15a 0.98±0.10ab 0.64±0.06abc 0.72±0.07a 1.39±0.14d 96.630**HES1 1.26±0.14 1.03±0.12a 0.80±0.09ab 0.63±0.08abc 0.39±0.03a 1.11±0.14d 91.860**HEY1 1.48±0.17 1.15±0.13a 0.79±0.09ab 0.38±0.04abc 0.89±0.09a 1.27±0.15d 106.778**

    2.3 SHI 對(duì)Huh-7 細(xì)胞增殖的影響 與對(duì)照組相比,L-SHI 組、M-SHI 組、H-SHI 組、DAPT 組OD450值及克隆數(shù)均降低(P<0.05),且SHI 的作用效果呈現(xiàn)劑量依賴性;H-SHI+VPA 組較H-SHI 組OD450值及克隆數(shù)升高(P<0.05),見圖4、表4。

    Fig.4 Effects of SHI on the formation of Huh-7 cell clone圖4 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞克隆形成的影響

    Tab.4 Effects of SHI on OD450 value and clone number of Huh-7 cells表4 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞OD450值及克隆數(shù)的影響(n=6,±s)

    Tab.4 Effects of SHI on OD450 value and clone number of Huh-7 cells表4 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞OD450值及克隆數(shù)的影響(n=6,±s)

    組別對(duì)照組L-SHI組M-SHI組H-SHI組DAPT組H-SHI+VPA組F OD450值1.33±0.14 1.12±0.11a 0.89±0.09ab 0.67±0.07abc 0.70±0.06a 1.18±0.12d 69.795**克隆數(shù)/個(gè)56.76±5.94 44.83±5.54a 35.37±4.65ab 24.16±2.21abc 26.73±2.02a 45.17±5.47d 32.725**

    2.4 SHI 對(duì)Huh-7 細(xì)胞凋亡的影響 與對(duì)照組相比,L-SHI 組、M-SHI 組、H-SHI 組、DAPT 組G1/G0期細(xì)胞比例升高,S 期和G2/M 期細(xì)胞比例降低,凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3 均升高,Bcl-2 蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05),且SHI 的作用效果呈現(xiàn)劑量依賴性;H-SHI+VPA 組較H-SHI組G1/G0期細(xì)胞比例、凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3 均降低(P<0.05),S期和G2/M期細(xì)胞比例、Bcl-2蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05),見圖5—7,表5、6。

    Fig.5 Effects of SHI on cell cycle of Huh-7 cells by flow cytometry圖5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞細(xì)胞周期的影響

    Fig.6 Detection of Huh-7 cell apoptosis by flow cytometry圖6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Huh-7細(xì)胞凋亡

    Fig.7 Effects of SHI on Bcl-2,Bax,cleaved-Caspase-3 protein levels in Huh-7 cells圖7 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞中Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平的影響

    Tab.5 Effects of SHI on cell cycle of Huh-7 cells表5 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞細(xì)胞周期的影響(n=6,%,±s)

    Tab.5 Effects of SHI on cell cycle of Huh-7 cells表5 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞細(xì)胞周期的影響(n=6,%,±s)

    組別對(duì)照組L-SHI組M-SHI組H-SHI組DAPT組H-SHI+VPA組F細(xì)胞周期分布G1/G0 44.13±4.27 51.01±5.53a 52.89±5.76a 58.34±5.65a 57.23±5.34a 50.78±5.56d 9.124**S 38.45±3.56 33.65±3.16a 31.92±3.03a 26.53±2.45a 27.96±2.67a 33.12±3.32d 20.200**G2/M 17.42±1.69 15.34±1.79a 15.19±1.57a 15.13±1.35a 14.81±1.23a 16.10±1.37d 7.609**

    Tab.6 Effects of SHI on apoptosis rate and apoptoticprotein of Huh-7 cells表6 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞凋亡率和凋亡蛋白的影響(n=6,±s)

    Tab.6 Effects of SHI on apoptosis rate and apoptoticprotein of Huh-7 cells表6 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞凋亡率和凋亡蛋白的影響(n=6,±s)

    組別對(duì)照組L-SHI組M-SHI組H-SHI組DAPT組H-SHI+VPA組F凋亡率/%2.43±0.27 5.35±0.52a 8.65±0.98ab 11.65±1.23abc 9.97±0.96a 4.78±0.46d Bcl-2 1.45±0.17 1.11±0.12a 0.82±0.09ab 0.53±0.05abc 0.46±0.04a 1.17±0.12d Bax 0.32±0.02 0.73±0.06a 1.04±0.11ab 1.36±0.14abc 1.30±0.13a 0.67±0.07d cleaved-Caspase-3 0.33±0.03 0.69±0.07a 0.99±0.09ab 1.37±0.14abc 1.28±0.12a 0.57±0.06d 187.108**129.293**168.904**197.238**

    2.5 SHI 對(duì)Huh-7 細(xì)胞侵襲、遷移以及EMT 相關(guān)蛋白的影響 與對(duì)照組相比,L-SHI 組、M-SHI 組、HSHI 組、DAPT 組遷移率、侵襲細(xì)胞數(shù)目以及Ncadherin、Vimentin 水平降低(P<0.05),E-cadherin水平升高(P<0.05),且SHI 的作用效果呈現(xiàn)劑量依賴性;H-SHI+VPA 組較H-SHI 組遷移率、侵襲細(xì)胞數(shù)目以及N-cadherin、Vimentin水平升高(P<0.05),E-cadherin水平降低(P<0.05),見圖8—10,表7、8。

    Fig.8 Effects of SHI on the number of invasive cells of Huh-7 cells(×200)圖8 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)量的影響(×200)

    Fig.9 Effects of SHI on the migration rate of Huh-7 cells圖9 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞遷移率的影響

    Fig.10 Western blot detection of E-cadherin,N-cadherin and Vimentin protein levels in Huh-7 cells圖10 Western blot檢測(cè)Huh-7細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白水平

    Tab.7 Effects of SHI on migration rate and number of invasive cells of Huh-7 cells表7 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞遷移率和侵襲細(xì)胞數(shù)目的影響(n=6,±s)

    Tab.7 Effects of SHI on migration rate and number of invasive cells of Huh-7 cells表7 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞遷移率和侵襲細(xì)胞數(shù)目的影響(n=6,±s)

    組別對(duì)照組L-SHI組M-SHI組H-SHI組DAPT組H-SHI+VPA組F遷移率/%30.22±3.32 23.94±2.37a 16.74±1.70ab 10.86±1.23abc 12.13±1.26a 25.48±2.76d 121.414**侵襲細(xì)胞數(shù)目/(個(gè)/視野)205.43±20.25 183.35±19.48a 166.33±16.46ab 141.57±15.13abc 150.73±15.97a 199.87±20.42d 20.769**

    Tab.8 Effects of SHI on levels of E-cadherin,N-cadherin and Vimentin in Huh-7 cells表8 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表達(dá)水平的影響(n=6,±s)

    Tab.8 Effects of SHI on levels of E-cadherin,N-cadherin and Vimentin in Huh-7 cells表8 SHI對(duì)Huh-7細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表達(dá)水平的影響(n=6,±s)

    組別對(duì)照組L-SHI組M-SHI組H-SHI組DAPT組H-SHI+VPA組F E-cadherin 0.22±0.02 0.39±0.04a 0.57±0.06ab 0.78±0.09abc 0.72±0.07a 0.36±0.03d 148.635**N-cadherin 0.90±0.09 0.71±0.07a 0.52±0.05ab 0.30±0.02abc 0.35±0.03a 0.79±0.09d 143.108**Vimentin 1.18±0.21 0.98±0.09a 0.74±0.08ab 0.52±0.05abc 0.58±0.06a 1.04±0.13d 52.235**

    3 討論

    由于腫瘤復(fù)發(fā)率高且常發(fā)生轉(zhuǎn)移,HCC 患者的預(yù)后并不理想[13]。針對(duì)腫瘤細(xì)胞的惡性表型包括細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的治療是緩解HCC 進(jìn)展的重要策略。SHI 是細(xì)胞分裂周期25(Cdc25)磷酸酶的抑制劑,可誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯[3]。研究報(bào)道,SHI 可抑制多種人類癌細(xì)胞系的生長(zhǎng),可誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞發(fā)生壞死性凋亡,進(jìn)而抑制前列腺癌的發(fā)展[14]。Tsai 等[15]發(fā)現(xiàn)SHI可以誘導(dǎo)腎癌細(xì)胞程序性死亡。SHI 還可以促進(jìn)HCC 細(xì)胞凋亡,抑制其增殖[7]。Li 等[16]也發(fā)現(xiàn)SHI 可以誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞周期停滯,抑制細(xì)胞增殖,表明SHI 具有廣泛的抗癌作用。本研究發(fā)現(xiàn),SHI 處理后Huh-7 細(xì)胞活力、S 期和G2期細(xì)胞比例、Bcl-2蛋白水平均降低,G1/G0期細(xì)胞比例、細(xì)胞凋亡率、Bax 和cleaved-Caspase-3 蛋白水平升高,表明SHI 可能通過上調(diào)促凋亡基因(Bax、cleaved-Caspase-3),下調(diào)抗凋亡基因(Bcl-2),來調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,進(jìn)而加速Huh-7細(xì)胞凋亡。研究報(bào)道,EMT是肝癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵原因,上皮標(biāo)志物E-cadherin 表達(dá)量降低以及間充質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin表達(dá)量升高可以使肝癌細(xì)胞獲得間充質(zhì)細(xì)胞的特性,從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性,導(dǎo)致肝癌的發(fā)展[17]。本研究發(fā)現(xiàn)SHI處理后Huh-7細(xì)胞遷移和侵襲數(shù)目、N-cadherin、Vimentin 蛋白水平均降低,E-cadherin 蛋白水平升高,表明SHI 可能通過使肝癌上皮細(xì)胞保持上皮特征,阻止其獲得間質(zhì)表型,進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞擴(kuò)散到其他鄰近組織。

    Notch 信號(hào)通路在癌癥進(jìn)展中的作用已經(jīng)得到證實(shí)。Li 等[18]研究發(fā)現(xiàn)通過抑制結(jié)腸癌細(xì)胞中的Notch-HES1信號(hào)傳導(dǎo)可抑制EMT,進(jìn)而抑制結(jié)腸癌進(jìn)展。Zhang 等[19]發(fā)現(xiàn)上調(diào)Notch 可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移。Xiang 等[11]發(fā)現(xiàn)抑制Notch 信號(hào)可促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡,從而起到抗癌作用。本研究結(jié)果與Xiang 等[11]的研究一致。在本研究中,Notch、HES1、HEY1在肝癌組織和肝癌細(xì)胞中高表達(dá),且SHI處理后Huh-7 細(xì)胞中Notch、HES1、HEY1 蛋白表達(dá)水平下調(diào),提示SHI可能通過抑制Notch信號(hào)通路發(fā)揮降低肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的作用,為了進(jìn)一步證實(shí)該結(jié)論,本研究用Notch 信號(hào)抑制劑DAPT 處理Huh-7細(xì)胞,SHI和Notch通路激活劑VPA共同處理Huh-7 細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)DAPT 組效果與H-SHI 組相似,而VPA削弱了H-SHI抑制Huh-7細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的作用,進(jìn)一步證實(shí)SHI可能通過抑制Notch信號(hào)通路發(fā)揮抗肝癌作用。

    綜上所述,SHI 可能通過下調(diào)Notch 信號(hào)通路,抑制肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為,從而發(fā)揮抗肝癌作用,且SHI 的治療效果呈現(xiàn)劑量依賴性。本研究不足之處是未觀察其他與肝癌相關(guān)的通路是否也起到相同效果,后續(xù)將進(jìn)行通路比較,完善相關(guān)治療機(jī)制的研究。

    猜你喜歡
    遷移率細(xì)胞周期肝癌
    LCMT1在肝癌中的表達(dá)和預(yù)后的意義
    紅霉素聯(lián)合順鉑對(duì)A549細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡的影響
    SiC/SiO2界面形貌對(duì)SiC MOS器件溝道遷移率的影響
    NSCLC survivin表達(dá)特點(diǎn)及其與細(xì)胞周期的關(guān)系研究
    X線照射劑量率對(duì)A549肺癌細(xì)胞周期的影響
    濾棒吸阻和濾嘴長(zhǎng)度對(duì)卷煙煙氣中6種元素遷移率的影響
    煙草科技(2015年8期)2015-12-20 08:27:17
    microRNA在肝癌發(fā)生發(fā)展及診治中的作用
    熊果酸對(duì)肺癌細(xì)胞株A549及SPCA1細(xì)胞周期的抑制作用
    Rab27A和Rab27B在4種不同人肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)
    高遷移率族蛋白B1對(duì)16HBE細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)和分泌的影響
    日本爱情动作片www.在线观看 | 晚上一个人看的免费电影| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 精品熟女少妇av免费看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 午夜影院日韩av| 国产成人精品久久久久久| 天天一区二区日本电影三级| 成年女人毛片免费观看观看9| 成人无遮挡网站| 哪里可以看免费的av片| av天堂在线播放| 又黄又爽又免费观看的视频| 级片在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 99在线视频只有这里精品首页| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产成人91sexporn| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 精品人妻熟女av久视频| 欧美日韩乱码在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 成年女人看的毛片在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产单亲对白刺激| 国产精品嫩草影院av在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 日本免费a在线| 精品午夜福利在线看| 日日撸夜夜添| 一进一出好大好爽视频| 亚洲精品一区av在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 在线播放无遮挡| 免费观看精品视频网站| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 最近的中文字幕免费完整| 中国美女看黄片| 欧美一区二区亚洲| 中国国产av一级| 欧美精品国产亚洲| 国产不卡一卡二| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲av中文av极速乱| 国产爱豆传媒在线观看| 国产视频一区二区在线看| 伦精品一区二区三区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 男人狂女人下面高潮的视频| 三级毛片av免费| 午夜爱爱视频在线播放| 99热6这里只有精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一进一出好大好爽视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 免费观看在线日韩| 久久鲁丝午夜福利片| av专区在线播放| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 精品久久久久久久久久久久久| 成人二区视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 美女cb高潮喷水在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 免费大片18禁| 99九九线精品视频在线观看视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产成人福利小说| 一级毛片电影观看 | 亚洲精品日韩av片在线观看| 悠悠久久av| 国产爱豆传媒在线观看| 免费观看在线日韩| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产高清激情床上av| av天堂在线播放| 97碰自拍视频| 国产爱豆传媒在线观看| 永久网站在线| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久精品91蜜桃| 久久久色成人| 日韩av在线大香蕉| 日韩av在线大香蕉| 性插视频无遮挡在线免费观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 午夜影院日韩av| 此物有八面人人有两片| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产激情偷乱视频一区二区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 日本三级黄在线观看| 天堂影院成人在线观看| 内地一区二区视频在线| 亚洲久久久久久中文字幕| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲人成网站在线播| 成人二区视频| 日本黄色片子视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 校园春色视频在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| 少妇熟女欧美另类| 最近2019中文字幕mv第一页| 精品人妻熟女av久视频| 人妻少妇偷人精品九色| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品一区www在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 俺也久久电影网| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 网址你懂的国产日韩在线| av天堂中文字幕网| 欧美最新免费一区二区三区| av天堂中文字幕网| 成年女人看的毛片在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 国产免费一级a男人的天堂| 悠悠久久av| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 性色avwww在线观看| 毛片女人毛片| 国产麻豆成人av免费视频| 精品久久久久久久久久久久久| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 99热这里只有是精品50| 久久久精品欧美日韩精品| 在线观看午夜福利视频| 国产单亲对白刺激| 成人欧美大片| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 成人av一区二区三区在线看| 深夜精品福利| 毛片女人毛片| 黄色欧美视频在线观看| 在线观看66精品国产| av在线观看视频网站免费| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 成人无遮挡网站| 精品久久久久久久久久久久久| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 免费看a级黄色片| 久久久精品94久久精品| 99久久精品国产国产毛片| 国产在视频线在精品| av天堂中文字幕网| 一a级毛片在线观看| а√天堂www在线а√下载| 在现免费观看毛片| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲成人精品中文字幕电影| 哪里可以看免费的av片| 狠狠狠狠99中文字幕| а√天堂www在线а√下载| 99视频精品全部免费 在线| 一个人看的www免费观看视频| 日本黄大片高清| 少妇被粗大猛烈的视频| 五月玫瑰六月丁香| 日韩欧美免费精品| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲国产色片| 91精品国产九色| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产老妇女一区| 日本五十路高清| 国产精品无大码| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产亚洲精品久久久com| 在线看三级毛片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品久久久噜噜| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲在线观看片| 亚州av有码| 国产探花在线观看一区二区| 精品久久久久久成人av| 老女人水多毛片| 久久久久久久久久久丰满| 老司机福利观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 在线看三级毛片| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日本一本二区三区精品| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产单亲对白刺激| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久久a久久爽久久v久久| 国产色爽女视频免费观看| 欧美+日韩+精品| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 校园春色视频在线观看| 99久国产av精品| 一级av片app| 97超碰精品成人国产| 成人精品一区二区免费| 黄色欧美视频在线观看| 国产午夜精品论理片| 亚洲欧美精品自产自拍| 插逼视频在线观看| 欧美区成人在线视频| 大型黄色视频在线免费观看| 久久热精品热| 国产精品综合久久久久久久免费| 蜜臀久久99精品久久宅男| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲国产欧美人成| 麻豆久久精品国产亚洲av| 色噜噜av男人的天堂激情| 神马国产精品三级电影在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲美女黄片视频| 成年女人看的毛片在线观看| 九九在线视频观看精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 三级国产精品欧美在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 22中文网久久字幕| 国产精品嫩草影院av在线观看| 在线观看66精品国产| 五月玫瑰六月丁香| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 午夜亚洲福利在线播放| 高清日韩中文字幕在线| 久久精品国产自在天天线| 亚洲精品一区av在线观看| eeuss影院久久| 国产av在哪里看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产真实伦视频高清在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| eeuss影院久久| 色在线成人网| 一级a爱片免费观看的视频| 国产三级在线视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 草草在线视频免费看| 久久精品影院6| АⅤ资源中文在线天堂| 丝袜美腿在线中文| 久久九九热精品免费| 99在线视频只有这里精品首页| 成人二区视频| 性欧美人与动物交配| 免费在线观看成人毛片| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品伦人一区二区| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产v大片淫在线免费观看| 国产v大片淫在线免费观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 国产综合懂色| 直男gayav资源| 国产免费男女视频| 日韩精品中文字幕看吧| 黄色一级大片看看| 欧美最新免费一区二区三区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产精品综合久久久久久久免费| 我的老师免费观看完整版| 日韩制服骚丝袜av| 日本精品一区二区三区蜜桃| 九九热线精品视视频播放| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产成人freesex在线 | 日韩av不卡免费在线播放| 在线免费观看的www视频| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 一区二区三区四区激情视频 | 欧美成人免费av一区二区三区| 在线国产一区二区在线| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲经典国产精华液单| 天堂网av新在线| 午夜福利成人在线免费观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲四区av| 一级黄片播放器| 老女人水多毛片| 国产高清三级在线| 99热这里只有精品一区| 亚洲人成网站高清观看| 免费观看精品视频网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产在线男女| 在线观看av片永久免费下载| 国国产精品蜜臀av免费| 久久韩国三级中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产成人影院久久av| 亚洲美女搞黄在线观看 | 黄色欧美视频在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| .国产精品久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美日韩在线观看h| 国产三级在线视频| 长腿黑丝高跟| 日本免费a在线| 俺也久久电影网| 午夜爱爱视频在线播放| 国产乱人偷精品视频| 伦精品一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 舔av片在线| 亚洲国产欧美人成| 亚洲国产色片| 99久国产av精品| 国产 一区 欧美 日韩| 99热精品在线国产| 日本成人三级电影网站| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美日韩精品成人综合77777| 一夜夜www| 人妻少妇偷人精品九色| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 97超碰精品成人国产| 国产一级毛片七仙女欲春2| 婷婷六月久久综合丁香| 五月玫瑰六月丁香| 69人妻影院| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产激情偷乱视频一区二区| 成年版毛片免费区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久精品91蜜桃| 日韩欧美精品v在线| 99热只有精品国产| 波多野结衣高清作品| 国产精品女同一区二区软件| 色综合站精品国产| 最近在线观看免费完整版| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲av成人精品一区久久| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日本色播在线视频| 日韩强制内射视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 晚上一个人看的免费电影| 国内精品久久久久精免费| 欧美人与善性xxx| 悠悠久久av| 91久久精品国产一区二区三区| 六月丁香七月| 免费观看的影片在线观看| 极品教师在线视频| 黄色日韩在线| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久久久久久大精品| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产视频内射| 中国美白少妇内射xxxbb| 搡老岳熟女国产| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一级a爱片免费观看的视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 毛片女人毛片| 美女被艹到高潮喷水动态| 日本熟妇午夜| 国产精品无大码| 久久国产乱子免费精品| 六月丁香七月| 国产视频内射| 观看免费一级毛片| 小说图片视频综合网站| 国内揄拍国产精品人妻在线| 一级毛片我不卡| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲av不卡在线观看| 久久久欧美国产精品| 亚洲精品成人久久久久久| 观看美女的网站| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产精品久久久久久久电影| 精品一区二区三区人妻视频| 男女边吃奶边做爰视频| 成年免费大片在线观看| 联通29元200g的流量卡| 99国产极品粉嫩在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 国产日本99.免费观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 久久久午夜欧美精品| 淫秽高清视频在线观看| 成人av在线播放网站| 久久久久精品国产欧美久久久| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 国产高清视频在线观看网站| 干丝袜人妻中文字幕| 中文字幕久久专区| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲性夜色夜夜综合| 成人av在线播放网站| 日本在线视频免费播放| 欧美激情国产日韩精品一区| 精品国产三级普通话版| 观看美女的网站| 精品日产1卡2卡| 12—13女人毛片做爰片一| av免费在线看不卡| 在现免费观看毛片| 看黄色毛片网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 丰满乱子伦码专区| 亚洲图色成人| 黄色一级大片看看| 久久99热这里只有精品18| 乱系列少妇在线播放| 真实男女啪啪啪动态图| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 久久中文看片网| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 九九爱精品视频在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 3wmmmm亚洲av在线观看| 有码 亚洲区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 人人妻人人看人人澡| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 免费看美女性在线毛片视频| 99热全是精品| 国产成人一区二区在线| 久久久久久伊人网av| 久久久久九九精品影院| 又爽又黄无遮挡网站| 日本成人三级电影网站| 精品一区二区免费观看| 在线看三级毛片| 欧美高清成人免费视频www| 两个人的视频大全免费| 淫秽高清视频在线观看| 久久99热6这里只有精品| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 哪里可以看免费的av片| 国产人妻一区二区三区在| 99久久九九国产精品国产免费| 欧美bdsm另类| eeuss影院久久| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 久久久欧美国产精品| 身体一侧抽搐| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产成人影院久久av| 亚洲三级黄色毛片| 一区二区三区高清视频在线| 长腿黑丝高跟| 99热6这里只有精品| 永久网站在线| 草草在线视频免费看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 又爽又黄a免费视频| 免费看a级黄色片| 国产男人的电影天堂91| 嫩草影院入口| 国产探花极品一区二区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 乱人视频在线观看| 男女那种视频在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美丝袜亚洲另类| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 三级经典国产精品| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲五月天丁香| aaaaa片日本免费| 身体一侧抽搐| 中国国产av一级| 精品人妻熟女av久视频| 国产视频一区二区在线看| 国产精品久久久久久精品电影| 久久午夜福利片| 韩国av在线不卡| 久久久久久九九精品二区国产| 色哟哟·www| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 高清午夜精品一区二区三区 | 日韩av在线大香蕉| av专区在线播放| 22中文网久久字幕| 99久久精品国产国产毛片| 联通29元200g的流量卡| 22中文网久久字幕| 嫩草影院精品99| av专区在线播放| 亚洲自拍偷在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 特大巨黑吊av在线直播| 少妇高潮的动态图| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲不卡免费看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 一本久久中文字幕| .国产精品久久| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲国产精品合色在线| 日韩欧美精品v在线| 欧美成人a在线观看| av在线老鸭窝| 国产真实伦视频高清在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 麻豆一二三区av精品| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 免费大片18禁| 男女那种视频在线观看| 亚洲综合色惰| 日韩 亚洲 欧美在线| 波野结衣二区三区在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品一区二区三区四区久久| av女优亚洲男人天堂| 国产精品野战在线观看| 九色成人免费人妻av| 女人被狂操c到高潮| 蜜臀久久99精品久久宅男| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 免费无遮挡裸体视频| 日韩三级伦理在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 此物有八面人人有两片| 亚洲精品影视一区二区三区av| 伦理电影大哥的女人| 成人特级av手机在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 午夜福利在线在线| 99九九线精品视频在线观看视频| 老女人水多毛片| 色吧在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲性久久影院| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产真实乱freesex| 国产黄片美女视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲av成人精品一区久久| 国产免费男女视频| 国产黄色小视频在线观看| 丝袜喷水一区| 精品午夜福利在线看| 如何舔出高潮| 91狼人影院| 一夜夜www| 国产高清三级在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久久久国内视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 九色成人免费人妻av| 亚洲第一电影网av| 美女免费视频网站| 久久草成人影院| 日本黄大片高清| 精品一区二区三区视频在线| 大香蕉久久网| 久久韩国三级中文字幕| 美女被艹到高潮喷水动态| 色综合站精品国产| 性欧美人与动物交配| 国产欧美日韩精品一区二区| 美女大奶头视频| 精品一区二区三区视频在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 高清午夜精品一区二区三区 | 99久国产av精品| 久久久欧美国产精品| 亚洲综合色惰| 女人被狂操c到高潮| 精华霜和精华液先用哪个| 国内精品宾馆在线| 欧美日本视频| 97超视频在线观看视频| 韩国av在线不卡| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲在线观看片| 国产亚洲91精品色在线| 精品久久久久久久久久久久久| 在线免费观看的www视频| 免费看日本二区| av天堂在线播放| 好男人在线观看高清免费视频| 伦理电影大哥的女人| 我要搜黄色片| 欧美高清成人免费视频www|