復(fù)配添加劑對(duì)模擬運(yùn)輸斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)生化指標(biāo)和組織結(jié)構(gòu)的影響

李豪華，廖 濤，白 嬋，邱 亮，鉏曉艷，李海藍(lán)，陳麗萍，熊光權(quán)，王炬光

（1.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品冷鏈物流技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術(shù)研究所，湖北 武漢 430064；2.蘭州理工大學(xué)，生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730050；3.湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心農(nóng)產(chǎn)品加工研究分中心，湖北 武漢 430064；4.武漢市東西湖區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，湖北 武漢 430044）

斑點(diǎn)叉尾鮰（Ictalurus punctatus）隸屬鲇形目鮰科，是世界知名的淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)，也是我國(guó)主要的淡水經(jīng)濟(jì)魚(yú)品種之一[1]。斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)激反應(yīng)明顯，常導(dǎo)致其免疫力下降、造成皮膚黏液流失等損傷；且長(zhǎng)途運(yùn)輸過(guò)程中需要經(jīng)常換水來(lái)避免水質(zhì)惡化，這會(huì)造成水資源和時(shí)間成本浪費(fèi)[2]。

?；撬岵粌H促進(jìn)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)，還參與滲透調(diào)節(jié)、膜穩(wěn)定性和抗氧化防御系統(tǒng)等[3]。維生素C（VC）能夠影響不飽和脂肪酸的過(guò)氧化，促進(jìn)膽固醇代謝，并降低皮質(zhì)醇的含量[4]。維生素E（VE）有著較高的生物活性，具有調(diào)節(jié)魚(yú)類(lèi)新陳代謝的能力[5]。谷氨酰胺被可為生物體（包括魚(yú)類(lèi)）提供碳源和氮源[6,7]。谷氨酸鈉溶于水后解離成的鈉離子和谷氨酸，不僅可以為魚(yú)類(lèi)調(diào)節(jié)滲透壓，而且谷氨酸能與血漿中的氨結(jié)合生成谷酰胺，緩解氨中毒[8]。上述五種水溶性化合物常被添加到養(yǎng)殖飼料中來(lái)改善魚(yú)類(lèi)的健康[9-13]，但目前將其作為運(yùn)輸水中添加劑用于提高魚(yú)類(lèi)運(yùn)輸抗應(yīng)激能力的研究報(bào)道較少。本研究通過(guò)向運(yùn)輸水體添加不同體積分?jǐn)?shù)的復(fù)配水溶性添加劑，通過(guò)測(cè)定模擬運(yùn)輸水質(zhì)，幼魚(yú)應(yīng)激、抗氧化能力和組織形態(tài)（皮膚、鰓）等指標(biāo)，探討復(fù)配水溶性添加劑對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)運(yùn)輸應(yīng)激的影響，驗(yàn)證添加劑使用是否能夠減少換水時(shí)間、提高魚(yú)類(lèi)抗運(yùn)輸應(yīng)激能力，以期在實(shí)際運(yùn)輸中縮短時(shí)間成本，為提高斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)運(yùn)輸質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)體質(zhì)量（16.22 ± 0.82）g，體長(zhǎng)（13.40±0.35）cm，購(gòu)于嘉魚(yú)縣三湖漁業(yè)有限責(zé)任公司。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，幼魚(yú)被放置在直徑1.5 m、高1.3 m的圓柱形塑料循環(huán)缸組成的循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行為期2 周的適應(yīng)，養(yǎng)殖水為經(jīng)過(guò)2 d 曝氣的自來(lái)水，養(yǎng)殖密度為8.33 g/L，溫度為（23.0±0.5）℃，氨氮質(zhì)量濃度＜0.02 mg/L，溶解氧質(zhì)量濃度＞6 mg/L，pH為7.12 ± 0.21，保持12 h/12 h 的明暗周期并每天監(jiān)測(cè)幼魚(yú)健康狀況，以2%幼魚(yú)體質(zhì)量的用量飼喂斑點(diǎn)叉尾鮰專(zhuān)用商品飼料（購(gòu)自通威股份有限公司），每日2 次（9:00 和16:00）。正式實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前禁飼24 h，以清空幼魚(yú)消化道。

1.2 復(fù)配添加劑配制

根據(jù)文獻(xiàn)[14-18]及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定復(fù)配水溶性添加劑溶液由70 mg/L ?；撬?、40 mg/L VC、18 mg/L VE納米乳液、20 mg/L 谷氨酰胺和0.6 mg/L 谷氨酸鈉混合制成。其中，由于VE是脂溶性維生素，需先參考馬愈迪等[19]方法制備納米乳液，具體配制方法為VE（1.17 g）、吐溫80（0.7 g）、無(wú)水乙醇（3.3 g）、水（7.8 g），以800 r/min 的轉(zhuǎn)速攪拌30 min，即得到復(fù)合維生素E納米乳液。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)置6 個(gè)實(shí)驗(yàn)組，按照復(fù)配水溶性添加劑的不同體積分?jǐn)?shù)（20%、40%、60%、80%、100%）分別為復(fù)配添加劑組，即F-20%組、F-40%組、F-60%組、F-80%組、F-100%組。以不進(jìn)行任何添加劑處理的為對(duì)照組（Control）。將復(fù)配添加劑組和對(duì)照組進(jìn)行模擬運(yùn)輸。參考企業(yè)運(yùn)輸魚(yú)水質(zhì)量比m魚(yú)∶m水=1∶4密度進(jìn)行模擬近、中、遠(yuǎn)3 個(gè)業(yè)內(nèi)典型時(shí)長(zhǎng)（5、9、14 h）運(yùn)輸；每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)置3 個(gè)平行，共12 組。實(shí)驗(yàn)采用塑料盒（21 cm×13.9 cm×8.5 cm）開(kāi)放式充氧的運(yùn)輸方式，每個(gè)盒子中注入曝氣水1 L，使用空氣泵持續(xù)供氧以模擬裝箱開(kāi)放式運(yùn)輸，模擬運(yùn)輸溫度為20 ℃。暫養(yǎng)結(jié)束后，取規(guī)格相同的3 尾魚(yú)根據(jù)比m魚(yú)∶m水=1∶4的密度放置在含有不同濃度的復(fù)配添加劑運(yùn)輸水體中作為靜息組（BT)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將各運(yùn)輸組幼魚(yú)分別置于不同水族箱中，監(jiān)測(cè)其72 h死亡率。

1.4 樣品采集與測(cè)定

1.4.1 水質(zhì)指標(biāo) 在模擬運(yùn)輸前靜息狀態(tài)時(shí)（BT）和不同模擬運(yùn)輸時(shí)間段（0、5、9、14 h）分別取200 mL水樣，使用HQ40哈希HACH 多參數(shù)數(shù)字化分析儀（上海哈希水質(zhì)分析儀器有限公司）測(cè)定溶解氧（DO）和溫度（℃），PHS-25 pH計(jì)（鞏義市子華儀器有限責(zé)任公司）測(cè)定pH，按照HJ 535—2009《水質(zhì)氨氮的測(cè)定納氏試劑分光光度法》進(jìn)行總氨氮濃度的測(cè)定。

1.4.2 生化指標(biāo) 在每個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)用漁網(wǎng)捕撈3 尾斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)，用1 mL 一次性無(wú)菌注射器采用尾部靜脈取血的方式收集血液。然后將血液在冷凍離心機(jī)中以3 000 r/min 在4 ℃條件下離心10 min，將上清液（血清）移入1.5 mL 離心管中并保存于-80 ℃冰箱直至分析。血清中皮質(zhì)醇和葡萄糖含量測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

每個(gè)處理組取3 尾魚(yú)，收集（1.1±0.5）g 肝臟組織放入15 mL 離心管中，按照m組織∶m生理鹽水=1∶9 的比例（質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.9%的生理鹽水）在冰上使用勻漿機(jī)進(jìn)行勻質(zhì)，后在4 ℃、10 000 r/min 條件下離心10 min，收集上清液，保存于-80 ℃待分析。肝臟中過(guò)氧化氫酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）濃度、總抗氧化能力（T-AOC）均采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.4.3 組織切片 取新鮮的鰓、皮膚，大小在1 cm2以?xún)?nèi)，固定在質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的多聚甲醛中備用。用體積分?jǐn)?shù)70%～100%的乙醇溶液以體積分?jǐn)?shù)10%的增加量進(jìn)行梯度脫水處理。使用二甲苯進(jìn)行透明處理，石蠟包埋，切片機(jī)進(jìn)行連續(xù)切片，厚度約5 μm，通過(guò)蘇木精-伊紅染色后脫水，最終封片，置于顯微鏡下觀察并記錄。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

通過(guò)SPSS 19.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，結(jié)果以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用誤差正態(tài)性（偏度-峰度檢驗(yàn)法）和方差齊性檢驗(yàn)（Levene's test）后，對(duì)復(fù)配添加劑濃度和運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)進(jìn)行雙因素方差分析（Two-way ANOVA），對(duì)于交互作用顯著的因素進(jìn)行簡(jiǎn)單效應(yīng)分析（One-way ANOVA），并采用鄧肯（Duncan's）事后檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性比較。各組之間的顯著性水平α=0.05。使用GraphPad Prism 9.0軟件繪制相關(guān)圖表。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)配添加劑對(duì)幼魚(yú)模擬運(yùn)輸存活率的影響

所有參與實(shí)驗(yàn)的斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)在模擬運(yùn)輸14 h和實(shí)驗(yàn)結(jié)束72 h后無(wú)死亡記錄。

2.2 復(fù)配添加劑對(duì)幼魚(yú)模擬運(yùn)輸水質(zhì)的影響

實(shí)驗(yàn)組水質(zhì)參數(shù)如表1 所示，不同實(shí)驗(yàn)組的總氨氮水平經(jīng)過(guò)14 h 的模擬運(yùn)輸后顯著上升（P＜0.05），在模擬運(yùn)輸5 h、9 h 時(shí)，F(xiàn)-60%組和F-100%組的總氨氮水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。在整個(gè)模擬運(yùn)輸過(guò)程中，F(xiàn)-40%組的復(fù)配添加劑組總氨氮水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。隨著模擬運(yùn)輸時(shí)間的增長(zhǎng)，不同實(shí)驗(yàn)組的pH 值顯著下降（P＜0.05），但經(jīng)過(guò)模擬運(yùn)輸14 h 后，各復(fù)配添加劑組的pH值都高于對(duì)照組，其中F-40%組pH值最高。

表1 不同濃度的復(fù)配添加劑下斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)模擬運(yùn)輸過(guò)程中水質(zhì)變化Table 1 Changes in water quality during simulated transport of juvenile Ictalurus punctatus under different concentrations of compound additive

2.3 復(fù)配添加劑對(duì)幼魚(yú)模擬運(yùn)輸應(yīng)激指標(biāo)的影響

復(fù)配添加劑實(shí)驗(yàn)血清皮質(zhì)醇（COR）變化如圖1(A)所示，在整個(gè)模擬運(yùn)輸過(guò)程中，各實(shí)驗(yàn)組的血清COR 含量與運(yùn)輸前相比顯著上升（P＜0.05），復(fù)配添加劑組血清COR 含量低于對(duì)照組。在模擬運(yùn)輸結(jié)束后，F(xiàn)-40%組的復(fù)配添加劑組COR 質(zhì)量濃度最低（112.71 ng/mL），較運(yùn)輸前上升34.25%。圖1(B)表示不同實(shí)驗(yàn)組血清葡萄糖（GLU）含量變化情況，運(yùn)輸5 h，對(duì)照組組、F-20 組、F-60 組和F-100 組GLU含量均顯著上升，F(xiàn)-40組較其他各運(yùn)輸組GLU含量顯著降低（P＜0.05），在模擬運(yùn)輸9 h 時(shí)各實(shí)驗(yàn)組GLU 含量達(dá)到最低。經(jīng)過(guò)14 h 的模擬運(yùn)輸，對(duì)照組、F-20 組、F-60 組和F-100 組較運(yùn)輸9 h 時(shí)GLU 含量顯著上升（P＜0.05），F(xiàn)-40%組和F-80%復(fù)配組血清GLU含量顯著低于其他實(shí)驗(yàn)組（P＜0.05）。

2.4 復(fù)配添加劑對(duì)幼魚(yú)模擬運(yùn)輸抗氧化指標(biāo)的影響

不同復(fù)配添加劑組模擬運(yùn)輸過(guò)程中CAT 活性如圖2(A)所示，隨著模擬運(yùn)輸時(shí)間的增加，對(duì)照組肝臟中CAT 活性顯著上升（P＜0.05），并始終高于不同復(fù)配添加劑組。模擬運(yùn)輸5 h，F(xiàn)-20%組復(fù)配組肝臟CAT 活性顯著低于其他實(shí)驗(yàn)組（P＜0.05）。模擬運(yùn)輸結(jié)束14 h，F(xiàn)-40%組復(fù)配組肝臟CAT 活性最低。由圖2(B)可知復(fù)配在模擬運(yùn)輸5 h，對(duì)照組MDA含量顯著高于不同復(fù)配添加劑（P＜0.05），而各復(fù)配添加劑組MDA含量無(wú)顯著差別。在整個(gè)模擬運(yùn)輸過(guò)程中，與靜息BT組相比，各運(yùn)輸組MDA含量顯著上升（P＜0.05）。經(jīng)過(guò)14 h 的模擬運(yùn)輸，F(xiàn)-40%組MDA含量最低。如圖2(C)所示，與靜息BT組相比，各運(yùn)輸組經(jīng)過(guò)14 h模擬運(yùn)輸其肝臟組織中T-AOC水平顯著上升（P＜0.05）。在模擬運(yùn)輸14 h 時(shí)，F(xiàn)-40%組的T-AOC水平顯著低于其他實(shí)驗(yàn)組（P＜0.05）。

圖2 復(fù)配添加劑對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)模擬運(yùn)輸抗氧化指標(biāo)的影響Fig.2 Effects of compound additive on antioxidant indices of juvenile Ictalurus punctatus during simulated transport

2.5 復(fù)配添加劑對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)鰓、皮膚組織結(jié)構(gòu)的影響

組織學(xué)結(jié)果顯示，靜息BT 組幼魚(yú)的鰓、皮膚結(jié)構(gòu)正常，而運(yùn)輸組幼魚(yú)的鰓、皮膚出現(xiàn)不同程度的損傷。如圖3 所示，F(xiàn)-20%組鰓小片排列方向左右不一致，且發(fā)生了彎曲現(xiàn)象。F-40%組鰓小片結(jié)構(gòu)完整，但鰓絲內(nèi)出現(xiàn)了細(xì)胞增生現(xiàn)象。F-80%組鰓小片中血細(xì)胞出現(xiàn)了不同程度的空泡化現(xiàn)象，鰓絲內(nèi)黏液細(xì)胞腫脹。F-100%組鰓絲內(nèi)出現(xiàn)了嚴(yán)重的細(xì)胞增生現(xiàn)象，黏液細(xì)胞出現(xiàn)了一定程度腫脹。各復(fù)配添加劑組鰓組織雖然出現(xiàn)了破損現(xiàn)象，但損傷程度都低于對(duì)照組。

圖3 不同復(fù)配添加劑組經(jīng)過(guò)14 h模擬運(yùn)輸斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)鰓的形態(tài)Fig 3 Gills morphological changes of juvenile Ictalurus punctatus of different treatment groups after 14 h simulated transport

如圖4所示，靜息BT組幼魚(yú)的皮膚結(jié)構(gòu)完整，經(jīng)過(guò)14 h模擬運(yùn)輸后，對(duì)照組表皮糜爛、上皮細(xì)胞嚴(yán)重脫落，黏液細(xì)胞大量分泌，上表皮層變薄。F-20%、F-60%和F-100%組的表皮都出現(xiàn)了脫落變薄現(xiàn)象。F-80%組皮膚結(jié)構(gòu)完整，但出現(xiàn)了一定程度的黏液細(xì)胞肥大現(xiàn)象。F-40%組皮膚結(jié)構(gòu)完整，黏液細(xì)胞數(shù)量增多。

圖4 不同復(fù)配添加劑組經(jīng)過(guò)14 h模擬運(yùn)輸斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)皮膚的形態(tài)Fig.4 Morphological changes of skin of juvenile Ictalurus punctatus of different treatment groups after 14 h simulated transport

3 討論

3.1 復(fù)配添加劑對(duì)幼魚(yú)模擬運(yùn)輸水質(zhì)的影響

溶解氧、溫度、pH值、總氨氮等參數(shù)是評(píng)估水質(zhì)的最常用、最有效標(biāo)準(zhǔn)[[20]。魚(yú)類(lèi)運(yùn)輸過(guò)程中一般均處在一個(gè)較為封閉的環(huán)境，水質(zhì)易朝壞的方向發(fā)展，最終水質(zhì)惡化導(dǎo)致魚(yú)體發(fā)生應(yīng)激[21]。魚(yú)類(lèi)氧呼吸作用產(chǎn)生的二氧化碳會(huì)溶解到水中，導(dǎo)致運(yùn)輸水體酸化并降低pH值[22]。本研究結(jié)果顯示，運(yùn)輸導(dǎo)致各實(shí)驗(yàn)組的總氨氮水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而升高。F-20%組、F-40%組和F-80%組水體中總氨氮水平在整個(gè)運(yùn)輸期間顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），而F-100%組水體中總氨氮水平高于對(duì)照組，表明一定濃度的復(fù)配添加劑可以降低幼魚(yú)的新陳代謝，從而減少氨類(lèi)物質(zhì)的排泄，過(guò)高濃度的復(fù)配添加劑可能會(huì)影響水質(zhì)，導(dǎo)致幼魚(yú)代謝速率加快，釋放大量氨類(lèi)物質(zhì)到水中，最終導(dǎo)致水中氨氮含量增加。然而，pH 值則呈現(xiàn)出相反的趨勢(shì)，這可能是因?yàn)橐欢舛鹊膹?fù)配添加劑能夠降低幼魚(yú)的應(yīng)激水平，使代謝水平升高速率減緩，相對(duì)減少二氧化碳在水中的積累。Biswal 等[23]也發(fā)現(xiàn)使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2%葡萄糖使南亞野鯪（Labeo rohita）幼魚(yú)在運(yùn)輸過(guò)程中的氨排泄減少，同時(shí)運(yùn)輸水質(zhì)的pH 值降低減緩。本研究也發(fā)現(xiàn)，通過(guò)向水中加入添加劑可以減少魚(yú)體在運(yùn)輸過(guò)程中氨氮、二氧化碳等代謝廢物的排泄，能夠達(dá)到在減少或取消中途換水操作的同時(shí)，還能將水質(zhì)維持在較好水平的目標(biāo)。目前常規(guī)魚(yú)苗實(shí)際運(yùn)輸中一般需要進(jìn)行數(shù)次換水，每換水一次耗時(shí)0.5～1.0 h，而通過(guò)本研究復(fù)配水添加后對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)進(jìn)行14 h 長(zhǎng)距離運(yùn)輸時(shí)，可免除換水操作，縮短運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)1～2 h。

3.2 復(fù)配添加劑對(duì)幼魚(yú)模擬運(yùn)輸應(yīng)激指標(biāo)的影響

魚(yú)類(lèi)應(yīng)激程度指數(shù)可以通過(guò)皮質(zhì)醇的增加和持續(xù)時(shí)間來(lái)表示[24]，皮質(zhì)醇含量是常用來(lái)評(píng)估運(yùn)輸初級(jí)應(yīng)激的一個(gè)重要生理指標(biāo)[25]。在本研究中，經(jīng)過(guò)14 h 模擬運(yùn)輸，各實(shí)驗(yàn)組的皮質(zhì)醇含量顯著上升，這與大蓋巨脂鯉（Colossoma macropomum）的研究結(jié)果相似[26]。本研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，通過(guò)使用復(fù)配添加劑可以減少運(yùn)輸過(guò)程中幼魚(yú)血清皮質(zhì)醇的產(chǎn)生，提高抗應(yīng)激能力。血清葡萄糖常用來(lái)評(píng)估魚(yú)類(lèi)次級(jí)應(yīng)激參數(shù)[27]，血清葡萄糖的變化主要由神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)節(jié)，是魚(yú)類(lèi)代謝活動(dòng)的重要功能物質(zhì)[28]。本研究結(jié)果表明，在模擬運(yùn)輸初始階段（0～5 h），對(duì)照組血清葡萄糖含量顯著上升，而復(fù)配添加劑組血清葡萄糖含量低于對(duì)照組，這說(shuō)明運(yùn)輸應(yīng)激導(dǎo)致幼魚(yú)代謝水平紊亂，復(fù)配添加劑減小了幼魚(yú)的運(yùn)輸應(yīng)激，緩解了體內(nèi)能量代謝的失衡。在模擬運(yùn)輸中后期（5～9 h），長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸應(yīng)激導(dǎo)致幼魚(yú)消耗大量能量，致使對(duì)照組血清葡萄糖含量降低。但添加劑的使用提高了幼魚(yú)的抗應(yīng)激能力，在整個(gè)模擬運(yùn)輸過(guò)程中其血清葡萄糖變化趨勢(shì)低于對(duì)照組，這與WANG 等[29]對(duì)團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）的研究結(jié)果類(lèi)似。

3.3 復(fù)配添加劑對(duì)幼魚(yú)模擬運(yùn)輸抗氧化指標(biāo)的影響

運(yùn)輸已被證明可誘發(fā)魚(yú)類(lèi)的氧化應(yīng)激，使機(jī)體內(nèi)迅速產(chǎn)生大量氧化自由基（ROS）破壞細(xì)胞的正常生理活動(dòng)[30]。CAT是生物抗氧化防御系統(tǒng)中的一種關(guān)鍵酶，通過(guò)清除ROS，產(chǎn)生無(wú)毒的分子氧和水[31]。機(jī)體內(nèi)ROS 會(huì)與生物膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)（LPO），而LPO 的最終產(chǎn)物MDA 是魚(yú)類(lèi)體內(nèi)抗氧化能力的重要指標(biāo)[32]。T-AOC 是生物體整體抗氧化能力，可以較為全面地衡量生物體的抗氧化能力[33]。本研究中，斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)的CAT 活性和MDA 含量隨著運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著增加，可能是水中總氨氮水平升高、pH值下降以及長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸應(yīng)激，導(dǎo)致幼魚(yú)產(chǎn)生過(guò)多的ROS，通過(guò)激活體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)，誘導(dǎo)負(fù)反饋機(jī)制調(diào)節(jié)額外CAT 的分泌和提高LPO 生成更多的MDA，來(lái)清除體內(nèi)產(chǎn)生的過(guò)多ROS 以維持體內(nèi)氧化還原平衡。?；撬?、VC、VE和谷氨酰胺均有抗氧化作用，能夠清除機(jī)體內(nèi)過(guò)量的ROS，從而緩解氧化應(yīng)激[15,34-36]。谷氨酸鈉雖然是魚(yú)類(lèi)非必需氨基酸，但其分解產(chǎn)生的谷氨酸可以促進(jìn)谷胱甘肽的合成。谷胱甘肽具有清除ROS的能力，因此谷氨酸鈉可以間接提高魚(yú)類(lèi)的抗氧化能力[37]。在整個(gè)運(yùn)輸過(guò)程中，復(fù)配添加劑組的CAT 活性和MDA 含量低于對(duì)照組，表明復(fù)配添加劑添加能夠提高幼魚(yú)的抗氧化能力。對(duì)照組T-AOC 經(jīng)過(guò)14 h 的模擬運(yùn)輸顯著升高，表明通過(guò)向運(yùn)輸水中加入適當(dāng)濃度的復(fù)配添加劑，可以緩解幼魚(yú)的運(yùn)輸應(yīng)激，減少過(guò)量活性氧的生成，進(jìn)而降低魚(yú)體T-AOC 水平。應(yīng)激條件改變能量消耗和氧需求，從而影響氧化狀態(tài)，本研究結(jié)果表明，通過(guò)向水中加入含牛磺酸、VC、VE納米乳液和谷氨酰胺和谷氨酸鈉的復(fù)配添加劑可以提高斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)的抗氧化應(yīng)激能力，而F-40%組的CAT 活性、T-AOC最低，說(shuō)明該濃度添加劑對(duì)幼魚(yú)抗氧化應(yīng)激?；钚Ч罴眩藯l件下幼魚(yú)體內(nèi)生成的ROS 較少或能夠被及時(shí)清除，進(jìn)而受到的氧化損傷較小。

3.4 復(fù)配添加劑對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)鰓、皮膚組織結(jié)構(gòu)的影響

魚(yú)類(lèi)的鰓組織參與許多重要的生理活動(dòng)，如有氧呼吸、滲透調(diào)節(jié)、氮廢物排泄和pH 調(diào)節(jié)等[38]。水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中魚(yú)類(lèi)會(huì)受到某些環(huán)境因子引起的脅迫，會(huì)產(chǎn)生活性氧和含氮物，誘導(dǎo)鰓組織發(fā)生生理和形態(tài)改變[39]。在本研究中，經(jīng)過(guò)14 h運(yùn)輸，各實(shí)驗(yàn)組幼魚(yú)的鰓組織發(fā)生了不同程度的損傷，且對(duì)照組損傷最為嚴(yán)重。這可能是因?yàn)閺?fù)配添加劑具有抗氧化能力，減少了氧化自由基的產(chǎn)生，提高了幼魚(yú)在運(yùn)輸過(guò)程中的抗應(yīng)激能力。

魚(yú)類(lèi)皮膚在自身免疫方面具有重要的作用，皮膚表面分泌的黏液是抵御外來(lái)病原體入侵的第一道防線[40]。本研究結(jié)果顯示，運(yùn)輸應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致幼魚(yú)皮膚結(jié)構(gòu)發(fā)生一定的破壞，對(duì)照組皮膚表面變薄，可能是由于碰撞、顛簸等不利環(huán)境引起的運(yùn)輸應(yīng)激所導(dǎo)致的。復(fù)配添加劑組的皮膚結(jié)構(gòu)較為完整，損傷程度低于對(duì)照組，表明復(fù)配添加劑可以有效緩解運(yùn)輸應(yīng)激。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各添加劑組在運(yùn)輸過(guò)程中肝臟抗氧化指標(biāo)（CAT 活性、MDA 含量）低于對(duì)照組，皮膚和鰓組織結(jié)構(gòu)較為完整，說(shuō)明向運(yùn)輸水中加入復(fù)配添加劑能夠維持幼魚(yú)在運(yùn)輸過(guò)程中體內(nèi)氧化還原反應(yīng)的動(dòng)態(tài)平衡，緩解了無(wú)氧代謝水平以及減少氧自由基的產(chǎn)生，減輕運(yùn)輸脅迫對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)的損傷。其中F-40%組可有效緩解運(yùn)輸脅迫導(dǎo)致的水體總氨氮、血清COR、GLU 含量的升高及水體pH值的降低。

綜上，復(fù)配添加劑能夠提高斑點(diǎn)叉尾鮰幼魚(yú)有水運(yùn)輸過(guò)程中的抗應(yīng)激能力，減少甚至免除換水操作，縮短運(yùn)輸時(shí)間且維持幼魚(yú)的健康狀態(tài)，這為魚(yú)類(lèi)長(zhǎng)途運(yùn)輸提供新思路。