一例鴨1 型圓環(huán)病毒與大腸桿菌共感染的診斷

鄭小蘭 程龍飛 江南松 黃 瑜 傅光華 陳紅梅

（福建省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所/福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心/福建省禽病防治重點實驗室 福州 350013）

鴨圓環(huán)病毒為圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬成員，基因組為單鏈環(huán)狀DNA，是目前較為關(guān)注的禽類病毒之一。 早在2003 年由德國學者Hattermann 等從體格消瘦、 羽毛松亂的患鴨法氏囊中發(fā)現(xiàn)并測定了它的全基因組序列[1]，2008 年傅光華等首次在我國大陸地區(qū)鴨群中檢測到鴨圓環(huán)病毒感染[2]。 隨后，國內(nèi)外學者陸續(xù)報道了該病毒的感染情況[3-4]。 禽大腸桿菌能引起家禽全身或局部感染， 其引起的典型癥狀有敗血癥、 呼吸道感染和腹膜炎等病型。 現(xiàn)將2023 年6 月廣西某櫻桃谷鴨場20 多日齡鴨發(fā)生鴨圓環(huán)病毒與禽大腸桿菌共感染的診斷報道如下。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

2023 年6 月， 廣西某櫻桃谷鴨場20 多日齡鴨出現(xiàn)發(fā)呆，咳嗽，打噴嚏，發(fā)熱，共濟失調(diào)，患鴨排黃色、綠色和白色糞便。

2 剖檢病變

剖檢病死鴨，主要表現(xiàn)心包炎，肝周炎，氣囊炎，脾臟腫大，腎臟出血等。無菌采集病死鴨頭、肝臟、脾臟和腎臟等臟器進行實驗室檢查。

3 實驗室病原檢測及診斷

3.1 病毒檢測 將無菌采集的病死鴨肝臟、脾臟及腎臟等臟器剪碎后制備成混懸液，于8 000 r/min 離心5 min 后取200 uL 上清，按照全式金公司的病毒DNA/RNA 抽提試劑盒使用說明書提取樣品中的核酸。 以獲得的核酸作為模板，開展鴨甲肝病毒、鴨圓環(huán)病毒和鴨星狀病毒等鴨常感染的病毒病核酸檢測。 （RT-）PCR 擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠進行電泳。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用針對以上3 種病毒的（RT-）PCR檢測技術(shù)從樣品中檢測到疑似鴨圓環(huán)病毒 （見圖1），其余病原均呈陰性。將擴增產(chǎn)物送至福州尚亞生物科技有限公司測序， 獲得序列經(jīng)NCBI blast 在線比對發(fā)現(xiàn)，所獲得的基因擴增片段與GenBank 數(shù)據(jù)庫中鴨1 型圓環(huán)病毒的核苷酸序列同源性100%。

圖1 病毒（RT-）PCR 擴增產(chǎn)物電泳圖

3.2 細菌分離鑒定及藥敏試驗 無菌采集患鴨腦組織分別接種于含血清的馬丁瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板上，其中馬丁瓊脂平板置蠟燭罐中37 ℃恒溫過夜培養(yǎng)。次日發(fā)現(xiàn)麥康凱瓊脂平板上長出圓形、邊緣整齊、扁平、鮮紅色菌落。 馬丁瓊脂平板上則長出均勻一致的圓形、半透明、邊緣整齊菌落。 分別從麥康凱瓊脂平板中挑取單個菌落接種于馬丁肉湯，37 ℃、150 r/min 振蕩培養(yǎng)20 h 獲得純培養(yǎng)物，取培養(yǎng)物作為模板分別開展大腸桿菌和沙門氏菌的核酸檢測。 PCR 擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果顯示目的條帶單一且位于700 bp 左右，大小符合大腸桿菌的擴增片段（見圖2）。取分離菌按常規(guī)紙片法進行藥敏試驗， 藥敏試驗判定參照中國藥檢所制定的標準。結(jié)果顯示，該分離菌對壯觀霉素高度敏感，對丁胺卡那、慶大霉素和氟苯尼考等抗生素耐藥（見表1）。

表1 分離菌株的藥敏試驗結(jié)果

圖2 分離菌的PCR 擴增產(chǎn)物電泳圖

3.3 診斷 根據(jù)實驗室病原檢測和分離鑒定結(jié)果，并結(jié)合發(fā)病鴨臨床癥狀及剖檢病變， 確定該鴨群發(fā)病是由鴨1 型圓環(huán)病毒與大腸桿菌共感染引起。

4 討論與體會

1）隨著我國禽業(yè)養(yǎng)殖的迅速發(fā)展，養(yǎng)禽業(yè)逐漸成為畜牧業(yè)中的支柱產(chǎn)業(yè)之一[5]。 然而各種類型的疫病嚴重制約著養(yǎng)禽業(yè)高質(zhì)量發(fā)展， 其中免疫抑制病是一類重要的疫病。 免疫抑制病能破壞家禽的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致免疫應(yīng)答能力下降，常繼發(fā)其他病毒和細菌等病原感染，造成巨大的經(jīng)濟損失。鴨圓環(huán)病毒病作為一種由圓環(huán)病毒引起的免疫抑制病， 不僅影響各品種鴨的生長發(fā)育， 還會直接侵害它們的免疫器官，降低其免疫功能，增加感染其他病原的概率，如感染圓環(huán)的患鴨還共感染鴨3 型腺病毒、 鴨疫里默氏菌或巴氏桿菌等病原[6-7]。 發(fā)病鴨臨床上往往表現(xiàn)為發(fā)育遲緩、食欲減退等癥狀，嚴重的還會出現(xiàn)營養(yǎng)不良、生產(chǎn)性能降低甚至死亡。病理上發(fā)病鴨的免疫組織受損，主要表現(xiàn)為法氏囊壞死等[8]。

2）根據(jù)發(fā)病鴨臨床癥狀及病理表現(xiàn)，再結(jié)合實驗室檢查， 確診該病例為鴨1 型圓環(huán)病毒與大腸桿菌共感染。通常大腸桿菌極易產(chǎn)生耐藥性，因此在臨床治療時， 應(yīng)根據(jù)分離菌的藥敏試驗結(jié)果優(yōu)先選擇高敏藥物，病愈后應(yīng)及時停止使用以防耐藥性產(chǎn)生，才能收到較好的效果。 根據(jù)該病例分離菌的藥敏試驗結(jié)果建議選擇壯觀霉素來治療， 特別注意要定期更換用藥或交替使用幾種藥物。此外，改善鴨舍的衛(wèi)生條件和保持合適的飼養(yǎng)密度有利于大腸桿菌病的控制。