LncRNA FAM83A-AS1通過(guò)miR-150/HMGA2軸對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響

周小平 彭正武 陳書(shū)揚(yáng) 劉茹 田濤 歐玉侖

郴州市第一人民醫(yī)院眼科（湖南郴州 423000）

視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（retinoblastoma，RB）是兒童最常見(jiàn)的原發(fā)性眼內(nèi)惡性腫瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因（Rb1）的丟失或突變可導(dǎo)致視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的發(fā)生［1］。RB 的治療包括局部靶向治療、放射治療和化學(xué)療法。盡管有多種治療選擇，但其具有一定的副作用和并發(fā)癥，包括多藥耐藥和化療不敏感，嚴(yán)重影響治療效果［2］。因此，明確RB 發(fā)展的基本機(jī)制，探索RB 治療的生物標(biāo)志物和新靶點(diǎn)是當(dāng)務(wù)之急。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNAs，lncRNAs）是一類(lèi)長(zhǎng)度超過(guò)200 nt，沒(méi)有蛋白質(zhì)編碼功能的轉(zhuǎn)錄本。大量研究［3-4］證實(shí)，lncRNAs參與多種生物學(xué)過(guò)程的調(diào)控，包括細(xì)胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移和基因組穩(wěn)定性。近年來(lái)的研究［5］表明，lncRNAs的異常表達(dá)與RB的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。例如，lncRNA H19 通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-17-92 抑制RB 細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。LncRNA HOXA11-AS通過(guò)海綿化miR-506-3p 增強(qiáng)Rb 進(jìn)程［6］。最近的一項(xiàng)研究［7］發(fā)現(xiàn)lncRNA 序列相似家族83 成員A-反義核糖核酸1（family with sequence similarity 83 member A antisense RNA 1，F(xiàn)AM83A-AS1）作為致癌基因，促進(jìn)肺腺癌的進(jìn)展。然而，F(xiàn)AM83A-AS1 在RB 癌變過(guò)程中的生物學(xué)功能及潛在的分子機(jī)制尚未明確。miRNAs 是研究最廣泛的非編碼RNA，可以直接與lncRNAs 相互作用并調(diào)節(jié)細(xì)胞過(guò)程，包括個(gè)體發(fā)育、機(jī)體代謝和腫瘤發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AM83A-AS1 通過(guò)調(diào)控miRNA 在許多腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮致癌作用。例如，F(xiàn)AM83A-AS1 通過(guò)靶向miR-150 促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲［8］。然而，RB 中FAM83A-AS1 與miR-150 之間的相關(guān)性尚不清楚。因此，本研究旨在探討lncRNA FAM83AAS1 在RB 進(jìn)展中的作用及其潛在的分子機(jī)制，研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SORB50 和HXO-RB44）和人正常視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞（ARPE-19）均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)；MTT試劑盒、雙熒光素酶報(bào)告基因試劑盒均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；SYBR Premix Ex TaqⅡ購(gòu)自日本TaKaRa 公司；miRNA 熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司；高遷移率族蛋白A2（high-mobility group protein A2，HMGA2）抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司；Annexin VFITC/PI雙染試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；Vector、pcDNA-FAM83A-AS1、NC-siRNA、FAM83AAS1-siRNA、NC mimic、miR-150 mimic 質(zhì)粒均購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司。多功能酶標(biāo)儀購(gòu)自德國(guó)BMG LABTECH 公司；7300 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀購(gòu)自美國(guó)ABI 公司；流式細(xì)胞儀購(gòu)自德國(guó)PARTEC 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染將人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SO-RB50、HXO-RB44和Y79）和人正常視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞（ARPE-19）在含10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和0.1 mg/mL 鏈霉素的RPMI-1640 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，置于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中。將SO-RB50細(xì)胞（1 × 105）接種至6 孔板中，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)，根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)使用Lipofectamine 2000 試劑將Vector、pcDNA-FAM83A-AS1、NCsiRNA、FAM83A-AS1-siRNA、AM83A-AS1-siRNA+NC inhibitor、FAM83A-AS1-siRNA+miR-150 inhibitor、NC mimic、miR-150 mimic、miR-150 mimic+Vector、miR-150 mimic+pcDNA-HMGA2 分別轉(zhuǎn)染至SO-RB50 細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48 h 后，收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）實(shí)驗(yàn)使用Trizol 試劑從細(xì)胞中提取總RNA。隨后使用PrimeScript RT 試劑盒將mRNA、lncRNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，使用miRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒將miRNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用SYBR Premix Ex TaqⅡ或miRNA 熒光定量RT-PCR 檢測(cè)試劑盒在7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR 系統(tǒng)中進(jìn)行PCR 反應(yīng)以檢測(cè)mRNA、lncRNA 或miRNA 的相對(duì)表達(dá)。反應(yīng)條件為：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 45 s，72 ℃ 30 min，共40 個(gè)循環(huán)。GAPDH 用作檢測(cè)mRNA 和lncRNA的內(nèi)部對(duì)照，U6 用作檢測(cè)miRNA 的內(nèi)部對(duì)照。根據(jù)2-ΔΔCt法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 MTT 實(shí)驗(yàn)使用MTT 試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞置于96 孔板中常規(guī)培養(yǎng)，24 h 后每孔加入10 μL MTT 溶液并孵育4 h。PBS 沖洗后，每孔加入100 μL DMSO 溶液，靜置2 h。最后使用酶標(biāo)儀測(cè)量在450 nm 波長(zhǎng)處的吸光度（A）值。

1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)使用Annexin V-FITC/PI 雙染試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡。首先用預(yù)冷PBS 沖洗處理過(guò)的細(xì)胞，懸浮在密度為1 × 106個(gè)細(xì)胞/mL 的結(jié)合緩沖液中。將100 μL 細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至5 mL 離心管中，并與5 μL Annexin V 和10 μL PI 避光孵育15 min。最后，在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

1.2.5 Western blot使用含蛋白酶抑制劑的RIPA緩沖液裂解處理后的細(xì)胞提取總蛋白。然后用10% SDS-PAGE 凝膠電泳分離等量的蛋白質(zhì)樣品并轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上。PVDF 膜在室溫下用5%脫脂牛奶封閉1 h 后，與一抗在4 ℃下孵育過(guò)夜。隨后，加入相應(yīng)的二抗并在室溫下孵育1 h。使用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法將蛋白條帶可視化。GAPDH 用作檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)的內(nèi)部對(duì)照。

1.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)使用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證FAM83A-AS1和miR-150以及miR-150 和HMGA2 之間的靶向關(guān)系。將FAM83AAS1 或HMGA2 的野生型（WT）或突變型（MUT）3'-UTR 分別克隆到熒光素酶載體pGL3 中。接下來(lái)，通過(guò)Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染試劑將熒光素酶載體和miR-150 mimic/NC mimic 共轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，培養(yǎng)48 h。最后，收集細(xì)胞，使用雙熒光素酶報(bào)告基因試劑盒在酶標(biāo)儀上檢測(cè)熒光素酶活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。數(shù)據(jù)采用Studentt檢驗(yàn)或單因素方差分析進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。以P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FAM83A-AS1 在RB 細(xì)胞系中的表達(dá)RTqPCR 結(jié)果顯示，F(xiàn)AM83A-AS1 在人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SO-RB50、HXO-RB44 和Y79）和人正常視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞（ARPE-19）中的表達(dá)分別為（2.85 ±0.21）、（3.07 ± 0.27）、（3.54 ± 0.32）和（1.00 ± 0.09），與人正常視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞（ARPE-19）比較，人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SO-RB50、HXO-RB44 和Y79）中FAM83A-AS1的表達(dá)均顯著升高（t= 14.043、12.598、13.235，P＜ 0.05），并且在Y79 細(xì)胞中FAM83A-AS1表達(dá)水平最高。因此，本研究選擇Y79 細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)（圖1）。

圖1 FAM83A-AS1 在RB 細(xì)胞系中的表達(dá)Fig.1 Expression of FAM83A-AS1 in RB cell line

2.2 過(guò)表達(dá)或敲低FAM83A-AS1對(duì)RB細(xì)胞增殖和凋亡的影響RT-qPCR結(jié)果顯示，pcDNA-FAM83AAS1 組細(xì)胞中FAM83A-AS1 的表達(dá)顯著高于Vector組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。FAM83A-AS1-siRNA 組細(xì)胞中FAM83A-AS1 的表達(dá)顯著低于NC-siRNA 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與Vector 組比較，pcDNA-FAM83A-AS1 組細(xì)胞增殖能力顯著升高，細(xì)胞凋亡率顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與NC-siRNA組比較，F(xiàn)AM83A-AS1-siRNA 組細(xì)胞增殖能力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05，表1）。

表1 各組細(xì)胞中FAM83A-AS1 水平、細(xì)胞增生值和細(xì)胞凋亡率的比較Tab.1 Comparison of FAM83A-AS1， cell proliferation value and cell apoptosis rate in each group ±s

表1 各組細(xì)胞中FAM83A-AS1 水平、細(xì)胞增生值和細(xì)胞凋亡率的比較Tab.1 Comparison of FAM83A-AS1， cell proliferation value and cell apoptosis rate in each group ±s

注：與Vector組比較，aP ＜ 0.05；與NC-siRNA組比較，bP ＜ 0.05

組別Vector組pcDNA-FAM83A-AS1組NC-siRNA組FAM83A-AS1-siRNA組F值P值凋亡率（%）12.53 ± 1.14 6.04 ± 0.52a 11.28 ± 1.37 26.15 ± 2.08b 113.487＜ 0.05例數(shù)3 3 3 3 FAM83A-AS1 1.00 ± 0.08 3.11 ± 0.29a 0.98 ± 0.09 0.45 ± 0.04b 166.151＜ 0.05細(xì)胞增生值（A）0.58 ± 0.05 0.87 ± 0.07a 0.61 ± 0.04 0.29 ± 0.03b 68.232＜ 0.05

2.3 FAM83A-AS1靶向并調(diào)控miR-150的表達(dá)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示，miR-150 過(guò)表達(dá)降低了WT-FAM83A-AS1 的熒光素酶活性（t=10.262，P＜ 0.05），但其對(duì)MUT-FAM83A-AS1 熒光素酶活性沒(méi)有影響（t= 0.287，P＞0.05）。pcDNAFAM83A-AS1 組細(xì)胞中miR-150 的表達(dá)顯著低于Vector 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 10.904，P＜ 0.05，圖2）。

圖2 FAM83A-AS1 靶向并調(diào)控miR-150 的表達(dá)Fig.2 FAM83A-AS1 targets and regulates the expression of miR-150

2.4 FAM83A-AS1通過(guò)靶向miR-150對(duì)RB細(xì)胞增殖和凋亡的影響與NC-siRNA 組比較，F(xiàn)AM83AAS1-siRNA 組RB 細(xì)胞中miR-150 水平顯著升高，細(xì)胞增殖能力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高；與FAM83A-AS1-siRNA+NC inhibitor 組比較，F(xiàn)AM83AAS1-siRNA+miR-150 inhibitor 組RB 細(xì)胞中miR-150水平顯著降低，細(xì)胞增殖能力顯著升高，細(xì)胞凋亡率顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05，表2）。

表2 各組細(xì)胞中miR-150 水平、細(xì)胞增生值和細(xì)胞凋亡率的比較Tab.2 Comparison of miR-150 level， cell proliferation value and cell apoptosis rate in each group ±s

表2 各組細(xì)胞中miR-150 水平、細(xì)胞增生值和細(xì)胞凋亡率的比較Tab.2 Comparison of miR-150 level， cell proliferation value and cell apoptosis rate in each group ±s

注：與NC-siRNA組比較，aP ＜ 0.05；與FAM83A-AS1-siRNA+NC inhibitor組比較，bP ＜ 0.05

組別NC-siRNA組FAM83A-AS1-siRNA組FAM83A-AS1-siRNA+NC inhibitor組FAM83A-AS1-siRNA+miR-150 inhibitor組F值P值凋亡率（%）9.06 ± 0.61 21.43 ± 1.82a 20.11 ± 1.63 11.56 ± 0.96b 62.457＜ 0.05例數(shù)3 3 3 3 miR-150 1.00 ± 0.08 3.06 ± 0.26a 3.14 ± 0.33 1.58 ± 0.14b 44.689＜ 0.05細(xì)胞增生值（A）0.66 ± 0.06 0.29 ± 0.03a 0.32 ± 0.04 0.51 ± 0.05b 27.501＜ 0.05

2.5 miR-150 靶向并調(diào)控HMGA2 的表達(dá)通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-150 和HMGA2 之間的結(jié)合位點(diǎn)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示，miR-150 mimic 顯著降低了WT-HMGA2 的熒光素酶活性（t= 9.488，P＜ 0.05），但其對(duì)MUT-HMGA2熒光素酶活性沒(méi)有影響（t= 0.405，P＞0.05）。miR-150 mimic 組細(xì)胞中HMGA2 mRNA 水平的表達(dá)均顯著低于NC mimic 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 12.199，P＜ 0.05）。miR-150 inhibitor 組細(xì)胞中HMGA2 mRNA水平的表達(dá)均顯著高于NC inhibitor組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 12.847，P＜ 0.05，圖3）。

圖3 miR-150 靶向并調(diào)控HMGA2 的表達(dá)Fig.3 miR-150 targets and regulates the expression of HMGA2

2.6 miR-150 通過(guò)靶向HMGA2 對(duì)RB 細(xì)胞增殖和凋亡的影響與NC mimic 組比較，miR-150 mimic 組RB 細(xì)胞中HMGA2 mRNA 和蛋白水平顯著降低，細(xì)胞增殖能力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高；與miR-150 mimic+Vector 組比較，miR-150 mimic+pcDNA-HMGA2 組RB 細(xì)胞中HMGA2 mRNA和蛋白水平顯著升高，細(xì)胞增殖能力顯著升高，細(xì)胞凋亡率顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表3）。

表3 各組細(xì)胞中HMGA2 mRNA、蛋白水平、細(xì)胞增生值和細(xì)胞凋亡率的比較Tab.3 Comparison of HMGA2 mRNA， protein levels， cell proliferation value and cell apoptosis rate in each group ±s

表3 各組細(xì)胞中HMGA2 mRNA、蛋白水平、細(xì)胞增生值和細(xì)胞凋亡率的比較Tab.3 Comparison of HMGA2 mRNA， protein levels， cell proliferation value and cell apoptosis rate in each group ±s

注：與NC mimic組比較，aP ＜ 0.05；與miR-150 mimic+Vector組比較，bP ＜ 0.05

組別NC mimic組miR-150 mimic組miR-150 mimic+Vector組miR-150 mimic+pcDNA-HMGA2組F值P值凋亡率（%）8.12 ± 0.53 18.47 ± 1.24a 19.35 ± 1.36 11.56 ± 0.71b 55.724＜ 0.05例數(shù)3 3 3 3 HMGA2 mRNA 1.00 ± 0.09 0.37 ± 0.04a 0.39 ± 0.03 0.88 ± 0.08b 49.566＜ 0.05 HMGA2蛋白0.61 ± 0.08 0.28 ± 0.03a 0.29 ± 0.06 0.51 ± 0.05b 15.803＜ 0.05細(xì)胞增生值（A）0.71 ± 0.07 0.34 ± 0.03a 0.36 ± 0.05 0.59 ± 0.08b 17.392＜ 0.05

3 討論

越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，許多l(xiāng)ncRNA 與各種生物學(xué)過(guò)程和疾病相關(guān)，包括癌癥的進(jìn)展。先前的證據(jù)也證明lncRNAs 的表達(dá)在多種癌癥中存在失調(diào)，這些異常的lncRNAs 可能參與了癌癥的進(jìn)展［9-10］。研究［11-12發(fā)現(xiàn)，一些lncRNAs 作為致癌基因或抑癌基因在RB 的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用］。例如，LncRNA ELFN1-AS1通過(guò)調(diào)控miR-4270/SBK1 軸促進(jìn)RB 細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲［13］。沉默LEF1-AS1 可通過(guò)調(diào)控Wnt/β-catenin 通路抑制RB細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲［14］。然而，F(xiàn)AM83A-AS1在RB 中的作用鮮有報(bào)道。本研究深入研究了FAM83A-AS1 在RB 中的作用和機(jī)制。首先，本研究評(píng)估了FAM83A-AS1 在RB 細(xì)胞系SO-RB50、HXO-RB44和Y79細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SO-RB50、HXO-RB44 和Y79）中FAM83A-AS1 的表達(dá)均顯著高于人正常視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞，且FAM83A-AS1 在Y79 細(xì)胞中表達(dá)最高。該發(fā)現(xiàn)與以往研究結(jié)果［15-16］類(lèi)似，即FAM83A-AS1在胰腺癌中均較正常組織明顯上調(diào)，F(xiàn)AM83A-AS1的高表達(dá)與胰腺癌不良預(yù)后呈正相關(guān)，F(xiàn)AM83AAS1 可促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲。本研究選取Y79 細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步功能實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)FAM83A-AS1 可顯著促進(jìn)RB 細(xì)胞增殖能力，抑制RB 細(xì)胞凋亡，而敲低FAM83A-AS1 可顯著抑制RB 細(xì)胞增殖能力，促進(jìn)RB 細(xì)胞凋亡。以上研究結(jié)果表明FAM83A-AS1 敲低在RB 中具有抗腫瘤作用。因此，F(xiàn)AM83A-AS1 可能成為一種新的治療RB 的生物標(biāo)志物和潛在的治療靶點(diǎn)。

大量證據(jù)［17-19］表明，lncRNAs 可通過(guò)調(diào)節(jié)miRNAs 的表達(dá)發(fā)揮促癌或抑癌作用。其中，F(xiàn)AM83AAS1 可能通過(guò)調(diào)控不同的miRNAs 在不同的腫瘤中發(fā)揮其抗腫瘤作用。例如，lncRNA FAM83AAS1 通過(guò)與miR-495-3p 靶向結(jié)合，加重食管癌的惡性發(fā)展［20］。LncRNA FAM83A-AS1通過(guò)靶向miR-141-3p 促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)程［21-22］。本研究通過(guò)生物信息學(xué)和雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明，F(xiàn)AM83A-AS1 靶向并負(fù)調(diào)控miR-150 的表達(dá)。本研究通過(guò)挽救實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，抑制miR-150 可逆轉(zhuǎn)FAM83A-AS1 沉默對(duì)RB 細(xì)胞增殖和凋亡的作用。以上結(jié)果表明，沉默F(xiàn)AM83A-AS1 可靶向miR-150 并發(fā)揮其抗腫瘤作用，可能為RB 的治療提供了新的思路。

有學(xué)者研究［23］顯示，miRNAs 在視網(wǎng)膜的生理功能以及疾病發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，提示我們可以通過(guò)調(diào)控眼組織miRNAs 的表達(dá)來(lái)治療并控制眼部疾病的發(fā)生、發(fā)展。然而，關(guān)于miR-150在RB 中的功能研究較少。有許多研究［24］表明miR-150 可作為腫瘤抑制因子參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，例如，miR-150 通過(guò)靶向Gli1 抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，研究［25］發(fā)現(xiàn)miR-150-5p 通過(guò)靶向PYCR1 表達(dá)來(lái)抑制鼻咽癌的進(jìn)展。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)miR-150 顯著抑制RB 細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。以上數(shù)據(jù)表明，miR-150 在RB的進(jìn)展中發(fā)揮了抗腫瘤作用。為了進(jìn)一步闡明miR-150 對(duì)RB 進(jìn)展的作用機(jī)制，本研究通過(guò)生物信息學(xué)軟件和雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)預(yù)測(cè)和驗(yàn)證HMGA2 是miR-150 的靶基因。HMGA2 是高遷移率組蛋白家族成員之一，是一種染色質(zhì)重塑因子，與DNA 中at 富集區(qū)域結(jié)合。HMGA2 的上調(diào)被認(rèn)為是RB 患者臨床預(yù)后較差的生物標(biāo)志物，并且HMGA2 表達(dá)上調(diào)與RB 患者的不良預(yù)后相關(guān)［26］。本研究證明了miR-150 過(guò)表達(dá)抑制了RB 細(xì)胞中HMGA2 mRNA 和蛋白的表達(dá)。更重要的是，HMGA2 過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-150 對(duì)RB 細(xì)胞進(jìn)展的作用，提示miR-150 可能通過(guò)調(diào)控HMGA2 在RB中發(fā)揮抗腫瘤作用。

綜上所述，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)FAM83A-AS1 在RB 細(xì)胞中上調(diào)。敲低FAM83A-AS1 可抑制RB 細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)RB 細(xì)胞凋亡。FAM83A-AS1 作為RB的致癌基因，其機(jī)制可能是通過(guò)靶向miR-150/HMGA2 軸參與RB 細(xì)胞的進(jìn)展，提示FAM83A-AS1是RB 細(xì)胞中一種新的致癌lncRNA，是RB 診斷、預(yù)后和治療的一種有前景的生物標(biāo)志物。

【Author contributions】ZHOU Xiaoping： collected data and drafted the article； PENG Zhengwu， CHEN Shuyang： statistical analysis and technical support； LIU Ru， TIAN Tao， OU Yulun： designed the experiment and drafted the article.All of the authors declare that there is no conflict of interest.All authors read and approved the final manuscript as submitted.