油畫婚禮紫露草組培快繁技術(shù)研究

莊偉婷 簡(jiǎn)麗觀 康清柄 李雪

摘要：【目的】為探究油畫婚禮紫露草組培快繁技術(shù)?！痉椒ā恳阅矍o為外植體，對(duì)其進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)、繼代增殖、生根及生根苗移栽的研究。主要采用正交試驗(yàn)法探究基礎(chǔ)培養(yǎng)基、6-BA、NAA對(duì)增殖的影響，并探究基礎(chǔ)培養(yǎng)基、IBA對(duì)生根的影響?！窘Y(jié)果】油畫婚禮紫露草組培快繁適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA + 50 mg/L Vc +0.2 mg/L NAA +30 g/L蔗糖+6.0 g/L卡拉膠，pH值6.0；適宜的增殖培養(yǎng)基為1/2MS+3.0 mg/L 6-BA +50 mg/L Vc + 0.1 mg/L NAA +30 g/L蔗糖+6.0 g/L卡拉膠，pH值6.0；適宜的生根培養(yǎng)基為WPM+0.5 mg/L IBA +20 g/L蔗糖+6.5 g/L卡拉膠，pH值6.0。組培苗種植成活率達(dá)到96.00%。【結(jié)論】油畫婚禮紫露草組培快繁技術(shù)能夠應(yīng)用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：油畫婚禮紫露草；組培快繁；培養(yǎng)基

中圖分類號(hào)：S682.194? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào)：2095-5774（2023）03-0211-06

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation Techniques of Tradescantia cerinthoides‘Nanouk

Zhuang Weiting，Jian Liguan，Kang Qingbing，Li Xue*

（Sunshine Horticulture Company，Quanzhou，F(xiàn)ujian 362012，China）

Abstract：【Objective】The paper aimed at exploring tissue culture and rapid propagation techniques of Tradescantia cerinthoides‘Nanouk. 【Method】This study took the tender stem of Tradescantia cerinthoides‘Nanoukas explants，and studied its adventitious bud induction，subculture proliferation，rooting and rooting seedling transplanting. The effects of basic medium，6-BA and NAA on proliferation were investigated by orthogonal experiment. The effects of basic medium and IBA on plant rooting were also investigated.【Result】The results indicated that the suitable induction medium was consisted of 1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+50 mg/L Vc+0.2 mg/L NAA +30 g/L sucrose+6.0 g/L carrageenan，and pH 6.0；The suitable proliferation medium was consisted of 1/2 MS+3.0 mg/L 6-BA+50 mg/L Vc+0.1 mg/L NAA +30 g/L sucrose+6.0 g/L carrageenan，and pH 6.0；The suitable rooting medium was consisted of WPM+0.5 mg/L IBA+20 g/L sucrose+6.0 g/L carrageenan，and pH 6.0. The survival rate of tissue-cultured seedlings reached 96.00%. 【Conclusion】The tissue culture and rapid propagation techniques of Tradescantia cerinthoides‘Nanoukcan be applied to industrial production.

Key words： Tradescantia cerinthoides‘Nanouk；Tissue culture and rapid propagation；Culture medium

油畫婚禮紫露草（Tradescantia cerinthoides ‘Nanouk）又名油畫婚禮吊蘭，是鴨跖草科紫露草屬毛花紫露草的變種，屬多年生草本，葉長(zhǎng)橢圓形，上有白色、粉色、紅色斑紋，葉背為紫紅色，色彩豐富且獨(dú)特［1］?？煞胖糜谑覂?nèi)作盆栽觀葉，亦可懸掛于花架、走廊等，讓其自然生長(zhǎng)的枝葉延盆垂吊而下，觀賞性強(qiáng)；也可作為園林綠化中的地被植物，既能用于觀賞又能吸附粉塵、凈化空氣等，管理簡(jiǎn)單，抗逆性強(qiáng)，覆蓋能力強(qiáng)［2-5］；還可用于環(huán)境污染監(jiān)測(cè)，已廣泛用于工業(yè)廢水、河流、湖泊、海洋等水質(zhì)監(jiān)測(cè)［6-11］；同時(shí)它還具有清熱瀉火解毒，緩解感冒發(fā)熱、熱病煩渴、癰腫疔毒等功效［12］。因人工種植油畫婚禮紫露草較難產(chǎn)生種子，生產(chǎn)中多采用扦插和分株繁殖［13］，但存在繁殖效率低等問題，難以滿足市場(chǎng)需求。因此，開展油畫婚禮紫露草組培快繁研究，以期為種苗量產(chǎn)提供技術(shù)支持。

1? 材料與方法

1.1 材料

供試材料來自漳州百花村市場(chǎng)。植株生長(zhǎng)健壯，株型緊湊，葉片上有淡紫色、紫色、灰綠色和綠色相間的斑紋，具3～5支分枝，且進(jìn)入開花期，每株約3～5朵花完全開放。

1.2 方法

1.2.1 外植體消毒

剪取長(zhǎng)勢(shì)一致的嫩莖，去除莖上的外苞葉片及根眼，切成25～30 mm帶腋芽的莖段，先用自來水沖洗10 min，后在超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸泡震蕩消毒10～20 s，再用2%次氯酸鈉振蕩消毒

5～20 min，最后用無菌水沖洗4～5次，每次2～3 min。2%次氯酸鈉消毒共設(shè)6個(gè)處理，每個(gè)處理接種30個(gè)外植體到誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每瓶接種1個(gè)，培養(yǎng)基參照陳寶鑫等［13］白花紫露草誘導(dǎo)設(shè)計(jì)略有改動(dòng)，即1/2 MS + 0.5 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L NAA + 30 g/L蔗糖+6.0 g/L卡拉膠，pH值6.0。每瓶接種一個(gè)外植體，培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)污染數(shù)、死亡數(shù)、褐化數(shù)、成活數(shù)。

1.2.2 不定芽誘導(dǎo)

以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖和6.0 g/L卡拉膠，pH值6.0，設(shè)計(jì)不同濃度6-BA（0.5、1.0、2.0 mg/L）、Vc（0.50、100 mg/L）進(jìn)行梯度測(cè)試，每個(gè)處理接種30個(gè)外植體，30 d后統(tǒng)計(jì)不定芽的萌動(dòng)數(shù)和生長(zhǎng)高度，計(jì)算平均株高。

1.2.3 不定芽增殖

以培養(yǎng)基（因素A）、6-BA（因素B）、NAA（因素C）等3因子對(duì)不定芽開展增殖培養(yǎng)試驗(yàn)，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)共9個(gè)處理（表1）。培養(yǎng)基均添加50 mg/L Vc、30 g/L蔗糖和6.0 g/L卡拉膠，pH值6.0。以含2個(gè)節(jié)、長(zhǎng)1.5～2.0 cm的節(jié)段為增殖單位分別接種，每個(gè)處理40～50個(gè)增殖單位，3次重復(fù)，30 d后目測(cè)統(tǒng)計(jì)不定芽增殖芽數(shù)，計(jì)算增殖率。

1.2.4 生根

生根培養(yǎng)試驗(yàn)共設(shè)3種基礎(chǔ)培養(yǎng)基（WPM、MS、1/2 MS）、4種濃度（0、0.5、1.0、1.5 mg/L）IBA，各培養(yǎng)基均添加20 g/L蔗糖和6.5 g/L卡拉膠，pH值6.0。切取長(zhǎng)勢(shì)基本一致的單芽為1個(gè)單位，株高25～30 mm，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基里，每個(gè)處理50株，3次重復(fù)，培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)生根株數(shù)，計(jì)算生根率。選擇生根合格的組培苗種植測(cè)試，使用基質(zhì)為泥炭土：珍珠巖=31，排水及透氣性良好，種植溫度20～24℃，遮陰，散射光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度60～100 μmol/（m2·s），相對(duì)濕度RH為70%～85%，統(tǒng)計(jì)成活株數(shù)，計(jì)算成活率。

1.2.5 組培苗培養(yǎng)

組培苗的培養(yǎng)溫度24±1℃，LED植物組培燈紅白比23；光強(qiáng)35～65 μmol/（m2·s），光照12 h/d，相對(duì)濕度RH為40%～60%。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel、SPSS 19軟件分析。

2結(jié)果與分析

2.1? 不定芽誘導(dǎo)的影響因素

2.1.1? 不同消毒時(shí)間對(duì)外植體存活的影響

2%次氯酸鈉不同消毒時(shí)間對(duì)外植體存活的影響如表2所示。隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng)，外植體的污染率降低，死亡率增加，存活率呈先升后降的趨勢(shì)；培養(yǎng)30 d后褐化率27%～33%，各處理間差異不大。因此，2%次氯酸鈉對(duì)外植體的消毒時(shí)間以10～12 min較佳，可獲得更多的無菌材料。

2.1.2? 不同培養(yǎng)基對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響

不同濃度6-BA和Vc組合對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響如表3所示，培養(yǎng)30 d后不定芽誘導(dǎo)的萌動(dòng)率為86.67%～96.67%。不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)萌動(dòng)率的影響較小，而對(duì)平均株高的影響較大，隨著6-BA濃度的增加，株高呈先升后降趨勢(shì)，以濃度為1.0 mg/L時(shí)較優(yōu)；Vc添加量為50 mg/L時(shí)的株高最高，而未添加Vc的培養(yǎng)基中，不定芽的株高最小，長(zhǎng)勢(shì)差。綜合結(jié)果表明，1.0 mg/L 6-BA+50 mg/L Vc時(shí)，誘導(dǎo)的芽長(zhǎng)勢(shì)最佳（圖1），適宜不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+50 mg/L Vc+0.2 mg/L NAA +30 g/L蔗糖和6.0 g/L卡拉膠，pH值6.0。

2.2? 不同處理對(duì)不定芽增殖培養(yǎng)的影響

極差分析結(jié)果如表4所示，比較R值可知，3種因素對(duì)不定芽增殖率影響的主要程度依次為6-BA（因素B）＞基礎(chǔ)培養(yǎng)基（因素A）＞NAA（因素C）。比較3種因素水平下增殖率的總和（K值）或平均值（k值）可知，對(duì)不定芽增殖率影響的優(yōu)劣排序依次為A3＞A2＞A1、B3＞B2＞B1、C2＞C1＞C3；增殖率直觀分析結(jié)果表明，最優(yōu)組合為處理9（A3B3C2），與增殖率最高組合一致，長(zhǎng)勢(shì)見圖2。

進(jìn)一步的方差檢驗(yàn)分析結(jié)果如表5所示，6-BA極顯著影響油畫婚禮紫露草組培苗的增殖率，基礎(chǔ)培養(yǎng)基影響顯著，而NAA的影響不顯著，這與極差分析結(jié)果一致。綜上，篩選出適宜的增殖培養(yǎng)基為1/2 MS+3.0 mg/L 6-BA +50 mg/L Vc +0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖和6.0 g/L卡拉膠，pH值6.0。對(duì)最優(yōu)組合進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，其增殖率為（198.67±2.31%）與處理9（A3B3C2）相近，說明該培養(yǎng)基適用。

2.3? 不同處理組合對(duì)生根的影響

生根培養(yǎng)結(jié)果如表6所示，未添加IBA時(shí)組培苗的生根率14.67%～20.00%，生根數(shù)1.3～1.5條，而添加不同濃度IBA后，生根率79.33%～94.00%，生根數(shù)3.1～4.5條，說明一定濃度的IBA有利于油畫婚禮紫露草的生根。在同一基礎(chǔ)培養(yǎng)基下，生根率隨IBA的濃度變化呈先增后降的趨勢(shì)，當(dāng)IBA濃度為0.5～1.0 mg/L時(shí)，生根率較佳。對(duì)比3種不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基，生根率的優(yōu)劣排序?yàn)閃PM＞1/2 MS＞MS，說明過高的營(yíng)養(yǎng)反而不利于油畫婚禮紫露草的生根。結(jié)合植株長(zhǎng)勢(shì)及生根情況，篩選出WPM為較佳基礎(chǔ)培養(yǎng)基，植株長(zhǎng)勢(shì)見圖3。

進(jìn)一步對(duì)最優(yōu)組合的生根苗進(jìn)行移栽，移栽50 d后組培苗成活率96.00%以上，長(zhǎng)勢(shì)良好（圖4）。因此，油畫婚禮紫露草適宜的生根培養(yǎng)基為WPM+0.5 mg/L IBA+20 g/L蔗糖和6.5 g/L卡拉膠，pH值6.0。

3 結(jié)論與討論

綜合比較得出，油畫婚禮紫露草組培快繁適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+ 50 mg/L Vc +0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖和6.0 g/L卡拉膠，增殖培養(yǎng)基為1/2 MS+3.0 mg/L 6-BA +50 mg/L Vc +0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖和6.0 g/L卡拉膠，生根培養(yǎng)基WPM+0.5 mg/L IBA+20 g/L蔗糖和6.5 g/L卡拉膠，pH值均為6.0。采用此再生體系，生根種植成活率達(dá)到96.00%。油畫婚禮紫露草組培快繁技術(shù)與陳寶鑫等［13］白花紫露草的組織培養(yǎng)技術(shù)相似，但又存在差異，可能是品種不同的原因。白花紫露草是通過誘導(dǎo)愈傷組織及愈傷組織不定芽分化獲得再生植株，而油畫婚禮紫露草直接通過外植體誘導(dǎo)不定芽，再以不定芽增殖的培養(yǎng)方式獲得再生植株，確保了組培苗性狀的穩(wěn)定，同時(shí)降低變異率。

誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)基中添加Vc可有效改善油畫婚禮紫露草增殖培養(yǎng)材料存在的褐化死亡問題，與陳小強(qiáng)等［14］在非洲紫羅蘭研究結(jié)果相似，尤其在誘導(dǎo)、增殖階段非常重要；6-BA較大影響了油畫婚禮紫露草不定芽誘導(dǎo)及繼代增殖的增殖率；不同營(yíng)養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)繼代增殖材料的長(zhǎng)勢(shì)、性狀及誘導(dǎo)生根的生根率都有一定的影響；IBA則對(duì)誘導(dǎo)生根的生根率影響較大。培養(yǎng)過程使用LED植物組培燈紅白比23其可使葉色穩(wěn)定，但光照對(duì)其性狀的影響有待進(jìn)一步研究。

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（責(zé)任編輯：馮新）