有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)青年期小鼠海馬體Cdc42及DNA損傷反應(yīng)相關(guān)因子的短期和長(zhǎng)期影響*

駱遠(yuǎn)， 宋詩語， 趙格，3， 彭爽， 李良鳴△， 劉淑靖△

（1廣州體育學(xué)院，廣東 廣州 510500；2廣州理工學(xué)院，廣東 廣州 510540；3廣東科技學(xué)院，廣東 東莞 523083）

隨著生活水平的提高，人口老齡化已成為重要的社會(huì)問題。同時(shí)，隨著年齡的增長(zhǎng)與年齡相關(guān)的疾病患病率也會(huì)提高，如糖尿病、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病和腫瘤等［1-2］。衰老是宏觀的范疇，究其根本即細(xì)胞衰老。氧化應(yīng)激、DNA損傷、端?？s短和線粒體功能障礙等都參與細(xì)胞衰老過程［3-4］。DNA損傷反應(yīng)（DNA-damage response， DDR）和修復(fù)機(jī)制是DNA損傷積累、細(xì)胞衰老和生物體衰老的關(guān)鍵機(jī)制。近年研究顯示，細(xì)胞分裂周期蛋白42（cell division cycle protein 42， Cdc42）參與DDR和修復(fù)機(jī)制，其在維持基因組穩(wěn)定及衰老過程中發(fā)揮重要作用［5-6］。Cdc42過度激活可引起基因組不穩(wěn)定和過早衰老的表型［7］；抑制Cdc42表達(dá)可使衰老的造血干細(xì)胞恢復(fù)到年輕時(shí)的狀態(tài)［8］。以上證據(jù)表明，Cdc42活性與衰老之間存在功能聯(lián)系。

海馬體是學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能的關(guān)鍵中樞，衰老可導(dǎo)致海馬體神經(jīng)元再生功能衰退，最終導(dǎo)致認(rèn)知功能減退及多種神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生［9-11］。研究表明，運(yùn)動(dòng)有抗衰老的作用，其可刺激大腦可塑性，改善認(rèn)知功能，避免多種神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生和進(jìn)展［12-13］。而青少年時(shí)期的定期身體鍛煉，在預(yù)防老年期認(rèn)知障礙、提高大腦自我修復(fù)能力等方面也發(fā)揮重要的有益作用［14-15］，但這種有益作用的機(jī)制尚未明確。因此，本研究構(gòu)建運(yùn)動(dòng)小鼠模型，分析長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)小鼠海馬體Cdc42及DDR相關(guān)因子的短期和長(zhǎng)期影響，探索運(yùn)動(dòng)引起Cdc42表達(dá)改變參與細(xì)胞衰老的機(jī)制，為青年期進(jìn)行長(zhǎng)期的體育鍛煉可維持老年期大腦健康提供參考資料。

材料和方法

1 小鼠模型建立及分組

40只8周齡SPF級(jí)C57BL/6J雄性小鼠，體重20~25 g，購自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（粵）2018-0002。實(shí)驗(yàn)小鼠在清潔級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)分籠飼養(yǎng)。動(dòng)物房溫度控制在20~24℃，相對(duì)濕度控制在40%~70%，自由飲水和攝食。動(dòng)物房?jī)?nèi)正常晝夜自然光照，定期觀察小鼠的生活和毛發(fā)狀況。本研究中動(dòng)物飼養(yǎng)的要求和操作規(guī)范都符合中華人民共和國(guó)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》相關(guān)規(guī)定，并獲得廣州體育學(xué)院動(dòng)物保護(hù)與使用專業(yè)委員會(huì)（2021DWLL-05）批準(zhǔn)。

將40只小鼠隨機(jī)分為安靜組和運(yùn)動(dòng)組，每組20只，均使用普通飼料喂養(yǎng)。運(yùn)動(dòng)組小鼠參考既往文獻(xiàn)造模方法［16］，進(jìn)行12周的中等強(qiáng)度（75% VO2max）跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，每周運(yùn)動(dòng)5 d，每天運(yùn)動(dòng)1 h；安靜組小鼠在不跑步的情況下暴露于跑步機(jī)噪聲和振動(dòng)中。12周訓(xùn)練結(jié)束后，從安靜組和和運(yùn)動(dòng)組中隨機(jī)選取小鼠各10只（5月齡），分別為安靜青年期小鼠（Sedyoung）組和運(yùn)動(dòng)青年期小鼠（Exe-young）組，于運(yùn)動(dòng)干預(yù)結(jié)束后3 d收集數(shù)據(jù)及海馬體組織；剩余的10只安靜組小鼠和10只運(yùn)動(dòng)組小鼠繼續(xù)喂養(yǎng)至老年期（18月齡）［17］，分別為安靜老年期小鼠（Sed-old）組和運(yùn)動(dòng)老年期小鼠（Exe-old）組，收集數(shù)據(jù)及海馬體組織。

2 方法

2.1 小鼠體成分及Y迷宮測(cè)試 使用Echo MRI動(dòng)物體成分儀（EchoMRI-500H）獲取和分析小鼠體成分，包括體重、瘦體重和體脂率等，其應(yīng)用原理為核磁共振（NMR）技術(shù)。

Y迷宮可評(píng)估小鼠的學(xué)習(xí)和空間記憶能力，而自主交替行為是衡量小鼠空間記憶能力的標(biāo)準(zhǔn)。參考既往文獻(xiàn)中的Y迷宮自主交替實(shí)驗(yàn)方法［18］，分析有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響：以起始臂為起點(diǎn)，逆時(shí)針方向分別標(biāo)記為A、B、C臂。調(diào)試Y迷宮周圍的光照，通過攝像頭可觀察到明顯的光暗對(duì)比度。測(cè)試原理：利用小鼠對(duì)新環(huán)境探索的天性，小鼠會(huì)進(jìn)入Y迷宮各臂探索，憑記憶做出正確的選擇可有效地評(píng)價(jià)其空間工作記憶能力。將小鼠從起始臂的末端（A臂）放入，記錄小鼠在10 min內(nèi)進(jìn)入各臂的總次數(shù)和順序。當(dāng)相鄰的三次進(jìn)臂順序不重復(fù)時(shí)（ABC， ACB， BAC， BCA， CAB， CBA）為完成一次正確的交替反應(yīng)。統(tǒng)計(jì)正確交替反應(yīng)次數(shù)，計(jì)算自主交替率（%）=［正確交替反應(yīng)次數(shù)/（N-2）］×100%，N=進(jìn)臂次數(shù)的總和。每只小鼠測(cè)試結(jié)束后，應(yīng)將小鼠殘留在Y迷宮內(nèi)的糞便和尿液處理干凈，使用毛巾擦拭Y迷宮清除小鼠殘留的氣味，避免對(duì)下一只小鼠的測(cè)試造成干擾。

2.2 Western blot 將小鼠的海馬體放入含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑（Beyotime Biotechnology）的RIPA裂解液（100 mmol/L NaCl， 20 mmol/L Tris， pH 8.0， 1 mmol/L EDTA， pH 8.0， 0.5% Triton X-100，and 0.5% Nonidet P-40）中，在冰上勻漿裂解。使用BCA蛋白檢測(cè)試劑盒（Pierce）對(duì)海馬組織進(jìn)行定量。經(jīng)蛋白變性后，將等量的蛋白在12%的SDS-PAGE進(jìn)行電泳并將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，然后用5%的脫脂牛奶進(jìn)行封閉。封閉結(jié)束后用Cdc42抗體（Cat#： 21010， NewEast Biosciences， CN）和β-actin抗體（Cat#： 60008-1-Ig， ProteinTech Group）在4 ℃條件下孵育。與Ⅱ抗（Peroxidase-conjugated Affinipure Goat Anti Mouse IgG or Anti Rabbit IgG， ProteinTech Group）在室溫下孵育2 h。孵育結(jié)束后，化學(xué)發(fā)光法顯色，用ImageJ圖像分析軟件獲取定量數(shù)據(jù)。

2.3 RT-qPCR 使用HiPure Universal RNA Kit試劑盒（Magen）提取小鼠海馬體的總RNA。使用Nanodrop Lite（Thermo Fisher Scientific）儀器對(duì)提取的RNA進(jìn)行濃度檢測(cè)，采用SYBR法（TaKaRa）和Appllied Biosystems 7500 Real Time PCR System（Thermo Fisher Scientific）進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定。用β-actin對(duì)相對(duì)周期閾值（Ct）進(jìn)行歸一化。所用引物序列見表1。

2.4 Cdc42活性Pull-Down 實(shí)驗(yàn) 使用Cdc42活性Pull-Down試劑盒（Wuhan NewEast Biotechonology Co.Ltd）檢測(cè)小鼠海馬體Cdc42-GTP水平，分析Cdc42活性情況［19］。配制1×分析/裂解緩沖液：將5×原液簡(jiǎn)單混合，在去離子水中稀釋至1×，每1 mL 1×裂解液加入蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑各0.02 mL。往EP管中加入0.35 mL配好的1×裂解液。將取出的新鮮組織放入裂解液中充分研磨，結(jié)束后靜置10 min。靜置后以4 ℃、13 000×g條件下離心15 min。使用BCA試劑盒測(cè)出濃度，算出0.8 mg所需要的樣本量，然后用1 mL減去樣本量，得出需要加入的1×裂解液的量并定容至1 mL。在EP管中加入2 μL的Cdc42活性抗體，然后在4 ℃條件下裝在圓盤旋轉(zhuǎn)混勻儀上孵育90 min。孵育結(jié)束后，將A/G蛋白瓊脂糖珠漿混勻后加入0.02 mL至EP管中（每支試管在加入前都需要將A/G蛋白瓊脂糖珠漿混勻）。加入珠漿后繼續(xù)在4 ℃條件下的圓盤旋轉(zhuǎn)混勻儀上孵育90 min。孵育結(jié)束后在室溫5 000×g離心1 min，舍棄上清液，留下珠漿。加入0.5 mL的1×裂解液后在室溫5 000×g離心1 min，舍棄上清液，留下珠漿，重復(fù)3次。洗滌結(jié)束后舍棄上清液，將珠子轉(zhuǎn)移至0.025 mL的2×還原SDS-PAGE中以100 ℃條件變性8 min。在5 000×g條件下離心10 s，靜置2 min，吸取上清液至新的EP管中，上清液為Cdc42-GTP樣本。Western blot法測(cè)定Cdc42-GTP表達(dá)量。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)一用SPSS 25.0對(duì)所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)分布檢驗(yàn)，分析結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SEM）表示，組間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。制圖使用GraphPad Prism 9.0軟件。

結(jié)果

1 建模后小鼠體重及體成分的基本情況

對(duì)建模后的各組小鼠體重及體成分等基本情況進(jìn)行分析，結(jié)果可見，在普通飼料喂養(yǎng)的情況下青年期和老年期小鼠的體重和瘦體重?zé)o顯著差異（P>0.05），但有氧運(yùn)動(dòng)可有效降低青年期小鼠體內(nèi)脂肪量和體脂率（P<0.05），并且在停止運(yùn)動(dòng)干預(yù)后仍可維持至老年期（P<0.05或P<0.01），見圖1。

Figure 1. Changes in body weight and body composition in mice of each group. A： body composition was measured in Sed-young and Exe-young groups； B： body composition was measured in Sed-old and Exe-old groups. Mean± SEM. n=8. *P<0.05 vs Sedyoung group； #P<0.05， ##P<0.01 vs Sed-old group.圖1 各組小鼠體重、體成分變化

2 長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)提高小鼠學(xué)習(xí)和空間記憶能力

Y迷宮自主交替實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖2A），與安靜組相比，12周有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)可顯著提高所有運(yùn)動(dòng)組小鼠的Y迷宮自主交替正確率（P<0.05）；而把上述部分小鼠繼續(xù)喂養(yǎng)至老年期（18周齡）后，仍可觀察到運(yùn)動(dòng)老年期小鼠的Y迷宮自主交替正確率高于安靜老年期小鼠（P<0.05），見圖2B。

Figure 2. Comparison of the Y-maze spontaneous alternation in mice of each group. A： Y-maze of Sed-young and Exe-young groups （n=18）； B： Y-maze of Sed-old and Exe-old groups （n=9）. Mean±SEM. *P<0.05 vs Sedyoung group； #P<0.05 vs Sed-old group.圖2 各組小鼠Y迷宮自主交替率比較

3 長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)抑制小鼠海馬體Cdc42表達(dá)及活性

對(duì)運(yùn)動(dòng)干預(yù)后不同時(shí)期（青、老年）小鼠海馬體Cdc42表達(dá)水平分析顯示，與安靜青年期小鼠比較，運(yùn)動(dòng)青年期小鼠海馬體Cdc42表達(dá)顯著減少（P<0.01）；與安靜老年期小鼠比較，運(yùn)動(dòng)老年期小鼠海馬體Cdc42表達(dá)也顯著減少（P<0.01）。對(duì)運(yùn)動(dòng)干預(yù)后不同時(shí)期（青、老年）小鼠海馬體Cdc42活性分析顯示，運(yùn)動(dòng)青年期小鼠海馬體Cdc42-GTP水平顯著低于安靜青年期（P<0.05）；運(yùn)動(dòng)老年期小鼠海馬體Cdc42-GTP水平也顯著低于安靜老年期（P<0.05）。見圖3。

Figure 3. Comparison of Cdc42 protein levels and Cdc42 activity in mice of each group. A： Western blot of Cdc42 protein levels and pull-down assay of Cdc42-GTP in Sed-young and Exe-young groups； B： Western blot of Cdc42 protein levels and pull-down assay of Cdc42-GTP in Sed-old and Exe-old groups. The relative levels of Cdc42 and Cdc42-GTP were normalized to β-actin， and the relative protein levels in the Sed-young or Sed-old group were normalized as “1”. WB： Western blot. Mean±SEM. n=4~6. *P<0.05， **P<0.01 vs Sed-young group； #P<0.05， ##P<0.01 vs Sed-old group.圖3 各組小鼠Cdc42的表達(dá)量及活性比較

4 長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)抑制小鼠海馬體DDR相關(guān)因子的表達(dá)

對(duì)運(yùn)動(dòng)干預(yù)后不同時(shí)期（青、老年）小鼠海馬體Cdc42及DDR相關(guān)因子mRNA水平分析顯示，與安靜青年期小鼠相比，運(yùn)動(dòng)青年期小鼠海馬體Cdc42、Pak4、Pak5、Cofilin、Atm、Chk2和P53等基因轉(zhuǎn)錄水平降低（P<0.01）；與安靜老年期小鼠相比，運(yùn)動(dòng)老年期小鼠海馬體Cdc42、Pak4、Pak5和P53等基因轉(zhuǎn)錄水平降低（P<0.05或P<0.01），見圖4。

Figure 4. The mRNA expression of Cdc42 and DDR-related genes in mice of each group. A： RT-qPCR showed the mRNA expression of Cdc42 and DDR-related genes in Sed-young and Exe-young groups； B： RT-qPCR showed the mRNA expression of Cdc42 and DDR-related genes in Sed-old and Exe-old groups. The relative levels of these genes were normalized to β-actin， and the relative mRNA levels in the Sed-young or Sed-old group were normalized as “1”. Mean±SEM. n=6. **P<0.01 vs Sedyoung group； #P<0.05， ##P<0.01 vs Sed-old group.圖4 各組小鼠Cdc42及DDR相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄水平比較

討論

衰老是一個(gè)普遍且不可避免的、由遺傳和環(huán)境因素相互作用的生物學(xué)過程。盡管衰老及死亡不可避免，但目前已有大量文獻(xiàn)提出各種延緩衰老的干預(yù)措施。長(zhǎng)期身體活動(dòng)不足或久坐不動(dòng)的生活方式是引起健康問題的重要原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，積極參加體育鍛煉可促進(jìn)健康老齡化［20］。因此，運(yùn)動(dòng)是對(duì)抗衰老的有效手段之一。本研究通過構(gòu)建長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)小鼠模型，分析有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)青年期小鼠海馬體的短期和長(zhǎng)期影響。在普通飼料條件下，青年期小鼠通過長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)，可顯著降低小鼠體脂率，這與以往文獻(xiàn)報(bào)道一致［21］；但在停止運(yùn)動(dòng)干預(yù)后繼續(xù)喂養(yǎng)小鼠至老年期，可觀察到小鼠體脂率的改變并沒有隨著年齡的增長(zhǎng)而消失，表明運(yùn)動(dòng)對(duì)身體影響可能是終生的，或至少可維持一段較長(zhǎng)的時(shí)間。

近幾十年來，衰老機(jī)制的研究層面已從大體器官發(fā)展到細(xì)胞分子。Cdc42是真核細(xì)胞中的小分子Rho GTP酶，其功能包括肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重組、細(xì)胞極性和細(xì)胞生長(zhǎng)［22-23］。Cdc42有激活和失活兩種狀態(tài)，當(dāng)與GTP結(jié)合時(shí)為激活狀態(tài)，Cdc42活性可影響其功能的發(fā)揮。研究表明，隨著年齡的增長(zhǎng)，Cdc42在各個(gè)組織的表達(dá)和活性都會(huì)增加［7］，并參與年齡相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展［24-25］。此外，有證據(jù)表明，增加Cdc42表達(dá)可促進(jìn)神經(jīng)元突觸生長(zhǎng)［26］。在老化的造血干細(xì)胞中，通過抑制Cdc42的表達(dá)可使衰老的造血干細(xì)胞恢復(fù)到年輕時(shí)的狀態(tài)［8］；而運(yùn)動(dòng)也可促進(jìn)小鼠造血干細(xì)胞造血重建能力［27］。再如，通過短期的藥理學(xué)抑制Cdc42的活性可普遍延長(zhǎng)小鼠的平均壽命［28］；而運(yùn)動(dòng)干預(yù)后同樣能夠改變Cdc42的表達(dá)［29］。以上表明，Cdc42在各組織細(xì)胞中有不同作用，尤其在調(diào)控細(xì)胞衰老中發(fā)揮重要作用。與以往研究相似，在本研究中（圖3），青年時(shí)期的有氧運(yùn)動(dòng)可短期和長(zhǎng)期影響小鼠海馬體Cdc42的表達(dá)和活性，提示運(yùn)動(dòng)可能通過抑制Cdc42的表達(dá)和活性，參與抗衰老的過程。這預(yù)示著有氧運(yùn)動(dòng)的影響可能與Florian的藥理治療［28］有類似的效果，即早期對(duì)小鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)或藥物干預(yù)可對(duì)小鼠產(chǎn)生長(zhǎng)期的有利影響，甚至可能延長(zhǎng)小鼠的壽命。

DNA損傷是引起細(xì)胞衰老的重要因素。在正常情況下，DNA損傷會(huì)在24 h內(nèi)被修復(fù)，以確保功能失調(diào)的遺傳信息不會(huì)傳遞給后代細(xì)胞，因此基因組的完整性可以得到保護(hù)［30-31］；若DNA損傷病灶未被修復(fù)，細(xì)胞則會(huì)留下持久的DNA損傷焦點(diǎn)，這種沒有修復(fù)跡象的病灶是衰老表型的特征，也是衰老本身的原因［30］。而DDR和修復(fù)機(jī)制在DNA損傷引起細(xì)胞衰老的機(jī)制中發(fā)揮重要作用。Cdc42參與調(diào)控DDR和修復(fù)機(jī)制，其可激活DDR相關(guān)因子Pak4/5和Cofilin，調(diào)節(jié)Atm、Chk2和P53等蛋白的磷酸化狀態(tài)，從而影響DDR介導(dǎo)的DNA損傷信號(hào)傳導(dǎo)，在衰老過程中發(fā)揮重要作用［6］。但以上過程在Cdc42過度激活的狀態(tài)下可出現(xiàn)異常改變。

Pak4可作為Cdc42的效應(yīng)物在Cdc42介導(dǎo)的基因組不穩(wěn)定性反應(yīng)中發(fā)揮作用［32］。Pak5雖有報(bào)導(dǎo)可以減弱Chk2磷酸化，但具體機(jī)制尚不明確［33］。DNA損傷可誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白重組，進(jìn)而影響細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯。而Cofilin對(duì)DNA損傷修復(fù)的影響已經(jīng)被證實(shí)［34］。在DNA損傷后，通過Cofilin的磷酸化可調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白的動(dòng)力學(xué)，從而執(zhí)行細(xì)胞G2/M期停滯的功能［35］。DNA雙鏈斷裂后可募集并激活A(yù)tm，磷酸化的Atm進(jìn)而調(diào)節(jié)Chk2和P53，激活DNA修復(fù)過程，誘導(dǎo)細(xì)胞S、G1和G2期停滯［36］。此外，P53是衰老相關(guān)的標(biāo)志性蛋白，當(dāng)Chk2表達(dá)異常時(shí)也會(huì)導(dǎo)致P53的積累［37］。因此，任何原因引起上述DDR相關(guān)因子的過度表達(dá)，都可能導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯，影響細(xì)胞的復(fù)制壽命，誘導(dǎo)細(xì)胞衰老。在本研究中，經(jīng)過有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)的小鼠海馬體Cdc42表達(dá)及活性低于對(duì)照組，提示當(dāng)細(xì)胞面臨DNA損傷時(shí)，有氧運(yùn)動(dòng)可抑制Cdc42的過度激活，使Atm、Chk2、P53等因子響應(yīng)正常的DNA損傷修復(fù)過程，避免無效的修復(fù)及進(jìn)入衰老復(fù)制。再如，本研究經(jīng)過運(yùn)動(dòng)干預(yù)后可以降低小鼠海馬體P53基因的表達(dá)，且這種效果可維持至老年期，說明有氧運(yùn)動(dòng)可能通過減少DNA損傷或增強(qiáng)DNA修復(fù)的方式起抗衰老的作用。

運(yùn)動(dòng)可以改善腦認(rèn)知功能［38-39］。但值得注意的是，在不同時(shí)期進(jìn)行運(yùn)動(dòng)可對(duì)認(rèn)知能力、海馬體神經(jīng)元生長(zhǎng)和樹突棘的形成產(chǎn)生不同的影響。研究顯示，相比較成年后進(jìn)行運(yùn)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)鼠，青春期進(jìn)行運(yùn)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)鼠雖然Y迷宮自發(fā)交替率減少，但其海馬體神經(jīng)元和樹突棘的數(shù)量顯著增多［40］。在本實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)觀察中，有氧運(yùn)動(dòng)可顯著提高青年期小鼠的自主交替正確率，提高空間記憶能力。而在停止運(yùn)動(dòng)干預(yù)后將小鼠繼續(xù)喂養(yǎng)至老年期，對(duì)照組與運(yùn)動(dòng)組小鼠的自主交替正確率仍有差異，表明運(yùn)動(dòng)改善認(rèn)知功能的作用可從小鼠的青年期維持至老年期，并且可能通過延緩海馬體神經(jīng)元細(xì)胞衰老改善認(rèn)知功能。因此，早期進(jìn)行運(yùn)動(dòng)除了能產(chǎn)生長(zhǎng)期有益的影響外，越早進(jìn)行運(yùn)動(dòng)可能會(huì)帶來更好的效果，但需要更多的證據(jù)支持。

綜上所述，長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)可有效增強(qiáng)小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶，抑制海馬體Cdc42及DDR相關(guān)因子的表達(dá)，保護(hù)小鼠海馬體神經(jīng)元細(xì)胞免受DNA損傷而死亡或衰老直至老年期。因此，本研究主要從Cdc42參與調(diào)控DDR及修復(fù)機(jī)制方面探討青年期有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)對(duì)小鼠的短期和長(zhǎng)期影響，為運(yùn)動(dòng)延緩衰老提供了新證據(jù)。然而，Cdc42活性增強(qiáng)是否為衰老的誘導(dǎo)因素，運(yùn)動(dòng)延遲衰老的進(jìn)展是否通過抑制Cdc42的活性以及其具體機(jī)制如何，這在今后的研究中都是值得探討的。