蚯蚓液對(duì)13～43周齡蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、血清生化指標(biāo)和腸道健康的影響

劉珍妮 謝華亮 連 海 譚東海 成 笛 孔智偉 張 強(qiáng) 鐘云平 雷小文

(贛南科學(xué)院,贛州市畜牧水產(chǎn)研究所,贛州 341401)

隨著蛋雞養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展,蛋雞的健康問(wèn)題越來(lái)越受到關(guān)注,蛋雞機(jī)體健康狀態(tài)良好可以保證生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)。在蛋雞飼糧中添加天然無(wú)公害的飼料添加物也成為了當(dāng)下熱門(mén)研究。蚯蚓液為蚯蚓自身水解酶分解蚯蚓蛋白質(zhì)所獲得的產(chǎn)物,除18種氨基酸和少量短肽外,還包括有多種生物酶、抗菌肽等活性物質(zhì)[1]。朱才箭等[2]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加2%蚯蚓液能改善櫻桃谷鴨的肉品質(zhì)。金恒等[3]研究表明,飼糧添加1%、1.5%、2%蚯蚓液對(duì)櫻桃谷鴨的生長(zhǎng)性能均沒(méi)有顯著影響。雷小文等[4]研究發(fā)現(xiàn),蚯蚓液不僅能夠提高寧都黃雞的生長(zhǎng)性能,降低飼養(yǎng)成本,還能改善肌肉品質(zhì),且不影響寧都黃雞的產(chǎn)肉性能和正常生理機(jī)能。本課題組前期研究了飼糧中添加不同水平蚯蚓液對(duì)番鴨的影響,結(jié)果顯示,雖然飼糧添加1.5%蚯蚓液不能提高番鴨的生長(zhǎng)性能,但是添加2.5%蚯蚓液使番鴨的日增重提高了5.93%,70日齡體重升高了5.83%,料重比降低了0.88%[5];同時(shí),添加2.5%蚯蚓液還能夠改善番鴨肉質(zhì)[6]。此外,本課題組前期研究還發(fā)現(xiàn),飼糧添加2.5%蚯蚓液在促進(jìn)總抗氧化力與超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫酶活性提高與免疫球蛋白M、免疫球蛋白G含量增加的同時(shí),還能抑制丙二醛、白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素-17的表達(dá),具有提高番鴨抗氧化性能以及免疫功能的作用[7]。與此同時(shí),蚯蚓液對(duì)番鴨V4區(qū)腸道菌群的多樣性有顯著的改善作用[8]。本課題組前期將蚯蚓液應(yīng)用于育成期和初產(chǎn)期蛋雞的飼養(yǎng),結(jié)果發(fā)現(xiàn)蚯蚓液可以促進(jìn)蛋雞尿酸排泄,增強(qiáng)抗氧化能力和免疫能力[9]。為進(jìn)一步探究長(zhǎng)期使用蚯蚓液對(duì)蛋雞的影響,本試驗(yàn)以13～43周齡蛋雞為試驗(yàn)對(duì)象,探究飼糧中添加蚯蚓液對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能、血清生化指標(biāo)、腸黏膜形態(tài)和腸道微生物多樣性的影響,以期為蚯蚓液在蛋雞無(wú)抗養(yǎng)殖中的合理應(yīng)用提供理論和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)

飼養(yǎng)試驗(yàn)于2021年6月至2022年2月在江西省贛州市龍南宏昌蛋雞養(yǎng)殖有限公司養(yǎng)殖基地開(kāi)展完成,其余試驗(yàn)于2022年2—6月在贛州市畜牧水產(chǎn)研究所完成。

1.2 蚯蚓液的制備

試驗(yàn)所用蚯蚓選用經(jīng)牛糞養(yǎng)殖的健壯赤子愛(ài)勝蚓(Eiseniafoetida,購(gòu)于定南縣東山嘉禾現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司),并根據(jù)課題組建立的方法[1]制備蚯蚓液。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《飼料中粗蛋白的測(cè)定 凱氏定氮法》(GB/T 6432—2018)、《飼料中粗脂肪的測(cè)定》(GB/T 6433—2006)、《飼料中總磷的測(cè)定 分光光度法》(GB/T 6437—2018)、《飼料中粗灰分的測(cè)定》(GB/T 6438—2007)、《飼料中硒的測(cè)定》(GB/T 13883—2008)、《飼料中總砷的測(cè)定》(GB/T 13079—2006)、《飼料中汞的測(cè)定》(GB/T 13081—2006)、《飼料中鉻的測(cè)定》(GB/T 13088—2006)、《飼料中鎘的測(cè)定方法》(GB/T 13082—1991)、《飼料中鉛的測(cè)定 原子吸收光譜法》(GB/T 13080—2018)和《飼料中鈣、銅、鐵、鎂、錳、鉀、鈉和鋅含量的測(cè)定 原子吸收光譜法》(GB/T 13885—2017)、《飼料中氨基酸的測(cè)定》(GB/T 18246—2019)和《飼料中色氨酸的測(cè)定》(GB/T 15400—2018)對(duì)蚯蚓液中常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分、微量元素、氨基酸和重金屬的含量進(jìn)行測(cè)定。采用分光光度法測(cè)定蚯蚓液中蛋白酶(PG)、纖維素酶(CL)、脂肪酶(LPS)和過(guò)氧化物酶(POD)的活性。采用尿激酶瓊脂糖-纖維蛋白平板法測(cè)定蚯蚓液中蚓激酶(EFE)的活性。蚯蚓液中常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分、微量元素、氨基酸和重金屬含量以相關(guān)酶活性見(jiàn)表1。

表1 蚯蚓液中常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分、微量元素、氨基酸和重金屬含量以及相關(guān)酶活性 Table 1 Contents of routine nutrients, trace elements, amino acids, heavy metals and activities of related enzymes in earthworm hydrolysate

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取432只13周齡、體重接近、生長(zhǎng)發(fā)育良好的海蘭粉蛋雞,隨機(jī)分成4組,每組6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)18只。4組蛋雞分別飼喂添加0(對(duì)照組)、1%(1%蚯蚓液組)、2%(2%蚯蚓液組)和3%蚯蚓液(3%蚯蚓液組)的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期為30周。試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。因?yàn)轱暳显暇哂形?且本研究中的蚯蚓液添加水平較低,為使飼料原料與蚯蚓液混合均勻,采用逐級(jí)預(yù)混的方式進(jìn)行添加。試驗(yàn)飼糧中粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分、蛋氨酸、賴氨酸、鈣和磷含量測(cè)定方法同1.2中所述方法。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《飼料中粗纖維的含量測(cè)定 過(guò)濾法》(GB/T 6434—2006)測(cè)定飼糧中粗纖維含量。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《畜禽飼料有效性與安全性評(píng)價(jià) 強(qiáng)飼法測(cè)定雞飼料表觀代謝能技術(shù)規(guī)程》(GB/T 26437—2010)對(duì)飼糧的代謝能進(jìn)行測(cè)定。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束時(shí),每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取43周齡蛋雞的6枚雞蛋用于蛋品質(zhì)測(cè)定。此外,每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取6只禁食12 h的43周齡蛋雞,采集翅靜脈血液5 mL于促凝管內(nèi),靜置10 min,取上清液于離心管中,2 500 r/min離心10 min,分離血清用于后續(xù)試驗(yàn);每組隨機(jī)采集3只43周齡蛋雞的十二指腸,置于預(yù)先含有4%多聚甲醛的玻璃瓶?jī)?nèi)進(jìn)行固定,并采集盲腸內(nèi)容物于滅菌凍存管中,迅速置于液氮中保存,待測(cè)。

1.4.1 產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)測(cè)定

飼養(yǎng)試驗(yàn)期間,以重復(fù)為單位記錄每天的產(chǎn)蛋總數(shù)、蛋重和采食量。試驗(yàn)結(jié)束后,以重復(fù)為單位計(jì)算進(jìn)入產(chǎn)蛋期(產(chǎn)蛋率達(dá)50%)后的產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋數(shù)、平均日采食量、平均日產(chǎn)蛋重和料蛋比(平均日采食量/平均日產(chǎn)蛋重)。蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋黃質(zhì)量、蛋黃比率、哈氏單位、蛋黃顏色和蛋殼強(qiáng)度參照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量計(jì)算方法》(NY/T 823—2020)進(jìn)行測(cè)定。

1.4.2 血清生化指標(biāo)測(cè)定

血清生化指標(biāo)使用全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào)為日立7600)進(jìn)行檢測(cè)。

1.4.3 腸黏膜形態(tài)學(xué)觀察

取固定的十二指腸組織,按照常規(guī)方法制作組織切片。每個(gè)樣本隨機(jī)取5張腸道結(jié)構(gòu)完整且絨毛伸展情況良好的組織切片,每張組織切片選擇至少5個(gè)不同視野,用CaseViewer分析系統(tǒng)測(cè)量其絨毛高度、隱窩深度、絨毛寬度,計(jì)算絨腺比值(絨毛高度/隱窩深度)和絨毛表面積(2πrh;r為1/2的絨毛寬度,h為絨毛高度)。

1.4.4 腸道微生物擴(kuò)增子測(cè)序分析

選取蛋雞的盲腸內(nèi)容物進(jìn)行腸道微生物擴(kuò)增子測(cè)序分析。首先對(duì)盲腸內(nèi)容物進(jìn)行DNA提取,并使用Nanodrop檢測(cè)DNA樣品質(zhì)量;然后以16S rRNA-V4區(qū)為目標(biāo)片段進(jìn)行PCP擴(kuò)展,擴(kuò)增引物為515F(5′-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)。將樣本PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建,通過(guò)Illumina NovaSeq平臺(tái)測(cè)序及數(shù)據(jù)分析。隨后,使用QIIME軟件,對(duì)樣品alpha多樣性指數(shù)和beta多樣性進(jìn)行評(píng)估。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,并采用Duncan氏法多重比較組間差異顯著性,結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。以P<0.05為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn),以P<0.01為差異極顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 蚯蚓液對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)的影響

由表3可知,各組蛋雞在產(chǎn)蛋期的產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋數(shù)、平均日采食量、平均日產(chǎn)蛋量和料蛋比差異均不顯著(P>0.05)。

表3 蚯蚓液對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響Table 3 Effects of earthworm hydrolysate on laying performance of laying hens

由表4可知,1%蚯蚓液組的蛋殼厚度極顯著高于對(duì)照組(P<0.01),2%蚯蚓液組的蛋殼厚度顯著高于對(duì)照組(P<0.05);1%蚯蚓液組的蛋殼強(qiáng)度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

表4 蚯蚓液對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響Table 4 Effects of earthworm hydrolysate on egg quality of laying hens

2.2 蚯蚓液對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知,1%、2%和3%蚯蚓液組的血清肌酐含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01);3%蚯蚓液組的血清尿酸含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表5 蚯蚓液對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of earthworm hydrolysate on serum biochemical indices of laying hens

2.3 蚯蚓液對(duì)蛋雞腸黏膜形態(tài)的影響

由表6可知,各組蛋雞腸黏膜的絨毛高度、絨毛寬度、隱窩深度、絨腺比值、肌層厚度和絨毛表面積均差異不顯著(P>0.05)。

表6 蚯蚓液對(duì)蛋雞腸黏膜形態(tài)的影響Table 6 Effects of earthworm hydrolysate on intestinal mucosal morphology of laying hens

2.4 蚯蚓液對(duì)蛋雞盲腸微生物多樣性的影響

2.4.1 獲得數(shù)據(jù)總體情況

12個(gè)樣本測(cè)序共獲得1 014 743對(duì)Reads,雙端Reads質(zhì)控、拼接后共產(chǎn)生947 242條 Clean Reads,每個(gè)樣本至少產(chǎn)生71 961條Clean Reads,平均產(chǎn)生78 937條Clean Reads。

2.4.2 特有操作分類(lèi)單元(OTUs)分析

由圖1可知,4個(gè)組共有的OTUs數(shù)量為624個(gè),對(duì)照組以及1%、2%和3%蚯蚓液組特有的OTUs數(shù)量分別為5、15、22和10個(gè)。

多個(gè)顏色圖形之間交疊部分?jǐn)?shù)字為多個(gè)組之間共有的OTUs數(shù)量,非交疊部分為各組特有的OTUs數(shù)量。The number in each overlapped area stands for number of common OTUs in multiple color graphics, the number in each non-overlapped area stands for number of unique OTUs in multiple color graphics.圖1 各組蛋雞腸道微生物的特有OTUs變化情況Fig.1 Changes of special OTUs of intestinal microbiome of laying hens in each group

2.4.3 alpha多樣性

由圖2可知,2%蚯蚓液組蛋雞腸道微生物的ACE指數(shù)、Chao1指數(shù)、PD_whole_tree指數(shù)均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。屬水平物種累積曲線圖(圖3)顯示,在一定范圍內(nèi),隨著樣本量的加大,曲線趨于平緩,該結(jié)果表示本研究抽樣充分,樣品物種豐富,可以進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

“*”表示組間差異顯著(P<0.05)?！?” mean significant difference between groups (P<0.05).圖2 alpha多樣性指數(shù)組間差異柱狀圖Fig.2 Histogram of difference between groups for alpha diversity indexes

橫坐標(biāo)表示樣本量;縱坐標(biāo)表示抽樣后物種數(shù)目;紅色箱線組成累積曲線;綠色箱線組成共有量曲線。X-axis represents sample amount; Y-axis represents species number after sampling; red boxes form accumulation curve; green boxes form shared amount curve.圖3 屬水平物種累積曲線圖Fig.3 Accumulation curve chart of species at genus level

2.4.4 beta多樣性

圖4左圖為樣品聚類(lèi)樹(shù),根據(jù)圖中分支情況分析得到,各組組間差異大于組內(nèi)差異;圖4右圖為相對(duì)豐度排名前10的物種組成,圖中顯示,對(duì)照組和試驗(yàn)組(1%、2%和3%蚯蚓液組)腸道中的優(yōu)勢(shì)菌屬均為擬桿菌屬(Bacteroides)和糞桿菌屬(Faecalibacterium),且各組腸道微生物中相對(duì)豐度排名前10的菌屬相同。

C-1、C-2和C-3為對(duì)照組的3個(gè)樣本,T1-1、T1-2和T1-3為1%蚯蚓液組的3個(gè)樣本,T2-1、T2-2和T2-3為2%蚯蚓液組的3個(gè)樣本,T3-1、T3-2和T3-3為3%蚯蚓液組的3個(gè)樣本。右上方圖注代表相對(duì)豐度排名前10的物種,排名在前10之外的物種歸為其他,未注釋到的物種歸為未分類(lèi)。C-1, C-2 and C-3 are 3 samples from control group, T1-1, T1-2 and T1-3 are 3 samples from 1% EH group, T2-1, T2-2 and T2-3 are 3 samples from 2% EH group, and T3-1, T3-2 and T3-3 are 3 samples from 3% EH group. The legend in the top right represents the top 10 species in relative abundance. Species outside the top 10 are classified as Others. Unannotated species are classified as Unclassified.圖4 各組蛋雞腸道微生物的聚類(lèi)樹(shù)與柱狀圖組合圖Fig.4 Combining diagram of clustering tree and histogram of intestinal microbiome of laying hens in each group

2.4.5 腸道微生物相對(duì)豐度

根據(jù)微生物測(cè)序結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì),對(duì)照組與試驗(yàn)組在門(mén)、目、科、屬、種水平上均存在不同程度的差異。如表7所示,與對(duì)照組相比,在門(mén)水平上,1%、2%和3%蚯蚓液組蛋雞的脫硫菌門(mén)(Desulfobacterota)、梭桿菌門(mén)(Fusobacteriota)相對(duì)豐度顯著或極顯著降低(P<0.05或P<0.01),2%蚯蚓液組蛋雞的廣古菌門(mén)(Euryarchaeota)相對(duì)豐度顯著升高(P<0.05);在綱水平上,1%、2%和3%蚯蚓液組蛋雞的梭桿菌綱(Fusobacteria)和甲烷桿菌綱(Methanobacteria)相對(duì)豐度顯著或極顯著降低(P<0.05或P<0.01);在目水平上,1%、2%和3%蚯蚓液組蛋雞的脫硫弧菌目(Desulfovibrionales)、梭桿菌目(Fusobacteriales)、甲烷桿菌目(Methanobacteriales)相對(duì)豐度顯著或極顯著降低(P<0.05或P<0.01),1%和3%蚯蚓液組蛋雞的RF39目極顯著降低(P<0.01);在科水平上,2%蚯蚓液蛋雞的巴恩斯氏菌科(Barnesiellaceae)相對(duì)豐度顯著降低(P<0.05),1%、2%和3%蚯蚓液組蛋雞的脫硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)、梭桿菌科(Fusobacteriaceae)、甲烷桿菌科(Methanobacteriaceae)相對(duì)豐度顯著或極顯著降低(P<0.05或P<0.01),2%和3%蚯蚓液組蛋雞的理研菌科(Rikenellaceae)相對(duì)豐度顯著或極顯著升高(P<0.05或P<0.01);在屬水平上,1%、2%和3%蚯蚓液組蛋雞脫硫弧菌屬(Desulfovibrio)、梭桿菌屬(Fusobacterium)和甲烷短桿菌屬(Methanobrevibacter)相對(duì)豐度顯著或極顯著降低(P<0.05或P<0.01);在種水平上,2%蚯蚓液組蛋雞的Bacteroidescaecicola、糞居擬桿菌(Bacteroidescoprocola)和Megasphaerastantonii相對(duì)豐度均極顯著上升(P<0.01),2%和3%蚯蚓液組蛋雞的Desulfovibrio_bacterium_New_Zealand_D相對(duì)豐度極顯著降低(P<0.01)。

表7 各組蛋雞腸道微生物相對(duì)豐度的變化情況Table 7 Changes of intestinal microbial relative abundance of laying hens in each group

3 討 論

3.1 蚯蚓液對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)的影響

2021年,本課題組將蚯蚓液應(yīng)用于105～175日齡的蛋雞養(yǎng)殖,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加蚯蚓液對(duì)蛋雞的產(chǎn)蛋性能無(wú)不良影響[9]。在課題組前期研究的基礎(chǔ)上,本研究將蚯蚓液應(yīng)用于13周齡蛋雞的養(yǎng)殖,連續(xù)飼喂30周,檢測(cè)其產(chǎn)蛋性能后發(fā)現(xiàn),飼喂添加0、1%、2%和3%蚯蚓液飼糧的蛋雞分別于131、131、128和130日齡開(kāi)始產(chǎn)蛋,進(jìn)入開(kāi)產(chǎn)期;分別于144、145、143和142日齡產(chǎn)蛋率達(dá)50%,進(jìn)入產(chǎn)蛋期;分別于157、151、153和154日齡產(chǎn)蛋率達(dá)90%,進(jìn)入產(chǎn)蛋高峰期。由此可知,使用含蚯蚓液飼糧飼喂蛋雞后,可使蛋雞的開(kāi)產(chǎn)期和產(chǎn)蛋高峰期提前,且不影響蛋雞的產(chǎn)蛋率。綜上可得,蚯蚓液在不影響蛋雞產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋數(shù)、平均日采食量、平均日產(chǎn)蛋重和料蛋比的前提下,可使蛋雞的產(chǎn)蛋期和產(chǎn)蛋高峰期提前,有效增強(qiáng)產(chǎn)蛋性能。

蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度對(duì)于雞蛋的包裝運(yùn)輸、孵化和食用安全等有重要意義[10]。本研究發(fā)現(xiàn),蚯蚓液有助于蛋雞蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度的增加,該結(jié)果表明蚯蚓液提高了雞蛋的蛋品質(zhì)。

3.2 蚯蚓液對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

血清中的肌酐是機(jī)體肌肉代謝的產(chǎn)物,由磷酸肌酸代謝生成,是衡量腎臟過(guò)濾功能的常用指標(biāo),其含量越高,通常提示腎功能越差[11]。本研究中,使用蚯蚓液后蛋雞的血清肌酐含量極顯著下降,該結(jié)果表明,蚯蚓液可降低腎臟損傷,提高腎功能。蛋雞痛風(fēng)是一種代謝性疾病,主要由體內(nèi)尿酸代謝異常引起,雛雞、青年雞和成年雞均可發(fā)病,對(duì)養(yǎng)雞業(yè)可造成嚴(yán)重影響[12]。而本研究發(fā)現(xiàn),飼糧中添加不同水平的蚯蚓液可使蛋雞的血清尿酸含量有不同程度的下降,且以添加3%蚯蚓液時(shí)效果最佳,該結(jié)果表明,蚯蚓液可能可以用于蛋雞痛風(fēng)病的預(yù)防,降低患病風(fēng)險(xiǎn),然而其具體機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。

3.3 蚯蚓液對(duì)蛋雞腸道健康的影響

雞腸道結(jié)構(gòu)和功能的完整對(duì)其健康具有重要意義。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),各組之間腸黏膜絨毛高度、絨毛寬度、隱窩深度、絨腺比值、肌層厚度和絨毛表面積均差異均不顯著,該結(jié)果表明蚯蚓液對(duì)蛋雞腸道結(jié)構(gòu)無(wú)不利影響。

蛋雞盲腸中存在著大量的微生物,其對(duì)于維持家禽腸道微生態(tài)的穩(wěn)定、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收發(fā)揮著非常重要的作用[13]。脫硫菌門(mén)是細(xì)菌門(mén)之一,屬于有害菌[14]。脫硫弧菌目作為一種環(huán)境調(diào)節(jié)劑,可通過(guò)影響膽汁酸和膽固醇代謝來(lái)促進(jìn)膽結(jié)石的形成[15]。脫硫弧菌屬,屬于脫硫弧菌科,也被稱(chēng)為硫酸鹽還原菌(SRB),可產(chǎn)生硫化氫(H2S),被認(rèn)為會(huì)對(duì)腸道上皮具產(chǎn)生毒性,導(dǎo)致胃腸道疾病[16]。本研究發(fā)現(xiàn),給蛋雞飼喂添加1%、2%或3%蚯蚓液的飼糧可使腸道中脫硫菌門(mén)、脫硫弧菌目、脫硫弧菌科和脫硫弧菌屬的相對(duì)豐度均顯著或極顯著下降,該結(jié)果表明,蚯蚓液有降低膽結(jié)石患病風(fēng)險(xiǎn),減少胃腸道疾病的作用。梭桿菌門(mén)與炎癥性腸病(IBD)和腸道感染有關(guān)[17]。一些研究發(fā)現(xiàn),梭桿菌門(mén)在結(jié)腸腺瘤組織中的含量明顯高于正常組織[18]。梭桿菌目為梭桿菌綱的唯一目細(xì)菌,與結(jié)腸直腸癌有關(guān)[19]。梭桿菌科與機(jī)體的炎癥性腸病-克羅恩病有關(guān)[20]。梭桿菌屬是梭桿菌科的一個(gè)屬,也與結(jié)腸直腸癌致病性相關(guān)[21]。本研究結(jié)果顯示,給蛋雞飼喂添加1%、2%或3%蚯蚓液的飼糧可使腸道中梭桿菌門(mén)、梭桿菌目、梭桿菌科和梭桿菌屬的相對(duì)豐度顯著或極顯著下降,表明蚯蚓液有降低蛋雞腸道炎性病、腸道感染以及直腸癌的潛在作用。甲烷短桿菌屬屬于廣古菌門(mén)甲烷桿菌綱甲烷桿菌目下的甲烷桿菌科,是一種在厭氧條件下以甲烷為特異代謝產(chǎn)物的細(xì)菌[22],其代謝產(chǎn)物為甲烷和二氧化碳,是多種疾病重要指標(biāo)[23]。本研究結(jié)果顯示,給蛋雞飼喂添加1%、2%或3%蚯蚓液的飼糧可使腸道中甲烷短桿菌屬的相對(duì)豐度顯著或極顯著下降。綜上可知,蚯蚓液有降低蛋雞患病風(fēng)險(xiǎn)的作用。

理研菌科是一類(lèi)重要的微生物,其具有廣泛的生物學(xué)作用。首先,理研菌科中的一些物種可以產(chǎn)生抗生素,用于治療疾病[24];其次,理研菌科中的另一些物種可以促進(jìn)農(nóng)業(yè)生產(chǎn),例如促進(jìn)植物生長(zhǎng)和保護(hù)作物免受病害侵襲[25]。Bacteroidescaecicola可用于提高雞腸道免疫力,具有顯著的效果,可以在防治腹瀉過(guò)程中減少保健用抗生素的使用量[26]。Megasphaerastantonii是一種從健康雞盲腸中分離出的產(chǎn)丁酸鹽細(xì)菌[27]。丁酸是腸道微生物發(fā)酵難消化碳水化合物生成的一種短鏈脂肪酸,是動(dòng)物后段腸道上皮生長(zhǎng)的主要能源物質(zhì)[28]。研究顯示,丁酸能促進(jìn)腸系膜淋巴結(jié)發(fā)育,調(diào)節(jié)抗炎信號(hào)通路,改善腸道上皮屏障功能[29]。本研究發(fā)現(xiàn),2%蚯蚓液組蛋雞腸道中理研菌科、Bacteroidescaecicola和Megasphaerastantonii的相對(duì)豐度均顯著或極顯著上升,該結(jié)果表明,適量的蚯蚓液具有提高蛋雞腸道免疫力的作用,有一定的替抗?jié)摿Α?/p>

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下,在13～43周齡蛋雞飼糧中添加1%或2%的蚯蚓液能夠顯著增加蛋殼厚度,提高蛋品質(zhì);添加1%、2%或3%的蚯蚓液能夠極顯著降低蛋雞血清肌酐含量,有提高腎功能的作用。此外,在不影響蛋雞十二指腸形態(tài)學(xué)指標(biāo)的前提下,蚯蚓液能夠調(diào)節(jié)腸道菌群,降低脫硫弧菌門(mén)、脫硫弧菌目、脫硫弧菌科、脫硫弧菌屬、梭桿菌門(mén)、梭桿菌目、梭桿菌科、梭桿菌屬、廣古菌門(mén)、甲烷桿菌綱、甲烷桿菌目、甲烷桿菌科、甲烷短桿菌屬等有害菌的相對(duì)豐度,并提高理研菌科、Bacteroidescaecicola和Megasphaerastantonii等有益菌的相對(duì)豐度。