鐵莧菜粉對黃羽肉雞生長性能、炎癥因子水平、抗氧化能力、腸道形態(tài)及微生物群落的影響

張世忠 陳秀琴* 藍豪杰 吳建耀 陳盛星 王全溪 高炳輝 江 斌 黃梅清 王隆柏** 劉 景**

(1.福建省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所,福州 350013;2.中鯊動物保健品(廈門)有限公司,廈門 361028;3.福建農林大學動物科學學院(蜂學學院),福州 350002)

近年來,隨著我國畜牧業(yè)“雙減”政策的實施,以及畜禽生產中全面開展減少抗生素使用的全球化行動的進行,越來越多的科研和實踐驗證:只要解決好畜禽腸道健康問題,就可以在保證畜禽機體健康和生產性能的基礎上減少抗生素的使用?？股亻L期以來都被廣泛應用于解決畜禽的腸道健康問題,保障食品安全的基礎就是要找到抗生素替代品來改善畜禽的腸道健康。

鐵莧菜(AcalyphaaustralisL.,AAL)是我國傳統(tǒng)中藥,分布廣泛、價格低廉,且具有較廣的抗菌譜,對致病菌引起的腹瀉、血便等疾病具有突出療效,是極具開發(fā)前景的抗菌中草藥[1]。鐵莧菜為大戟科植物,其干燥全草主要含黃酮、生物堿及鞣質等化學成分[2]。研究發(fā)現(xiàn),鐵莧菜全草通過超微粉碎工藝處理后可作為畜禽腸道抗菌藥物使用,能夠抑制畜禽腸道致病菌的生長,有助于改善畜禽腸道健康[3]。在飼糧中添加適量的鐵莧菜可提高畜禽的生長性能,提高動物抗炎癥因子水平,增強機體抗氧化能力,抑制腸道有害菌的繁殖,有利于保障動物的腸道健康[3-5]。目前,鐵莧菜粉對黃羽肉雞生產影響的研究甚少。因此,本研究通過在黃羽肉雞飼糧中添加鐵莧菜粉,研究其對黃羽肉雞生長性能、炎癥因子水平、抗氧化能力、腸道形態(tài)及微生物群落的影響,為鐵莧菜在家禽飼糧中的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本試驗所用鐵莧菜120目粉由某動物保健品有限公司提供,其有效成分及含量見表1。

表1 鐵莧菜粉有效成分及含量Table 1 Effective components and contents in Acalypha australis L. powder μg/g

1.2 試驗設計

選取320只1日齡健康雄性快大型黃羽肉雞(莆田溫氏家禽有限公司提供),隨機分為5組,每組8個重復,每個重復8只雞;各組和各重復之間體重相近(P>0.05)。各組分別飼喂基礎飼糧(對照組,AAL0組)、基礎飼糧+100 g/t硫酸黏菌素(抗生素組,AAL0+K組)、基礎飼糧+1 000 mg/kg鐵莧菜粉(AAL1000組)、基礎飼糧+2 000 mg/kg鐵莧菜粉(AAL2000組)以及基礎飼糧+3 000 mg/kg鐵莧菜粉(AAL3000組)。試驗期63 d,分為1～21日齡、22～42日齡和43～63日齡3個階段?；A飼糧參照NRC(1994)和《黃羽肉雞營養(yǎng)需要量》(NY/T 3645—2020)配制,由福建閩科飼料有限公司生產加工,其組成及營養(yǎng)水平見表2。

表2 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) %

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗在福建省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所動物營養(yǎng)試驗場肉雞舍進行。采用單層平鋪式籠養(yǎng),雞籠(長95 cm×寬60 cm×高65 cm)為不銹鋼材質,每籠8只雞,每組8個籠隨機排布。肉雞全程粉料飼喂,自由采食和飲水,全日燈光光照。每日上午定時清理糞便和打掃雞舍衛(wèi)生,每周帶雞噴霧消毒2次。試驗期間按肉雞免疫程序進行常規(guī)免疫。

1.4 樣品采集

分別于試驗第32天和第64天,每個重復隨機選取3只體重接近平均體重的肉雞進行屠宰取樣,宰殺前12 h空腹禁食、自由飲水。肉雞剖殺后取適量盲腸內容物分別置于2 mL高壓滅菌離心管中,用滅菌錫箔紙包好,并迅速放置于液氮中保存,然后于-80 ℃冰箱凍存。

1.5 測定指標及方法

1.5.1 生長性能

試驗各階段結束前1天20:00斷料供水,次日08:00以重復為單位稱重,統(tǒng)計耗料量,計算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

1.5.2 血清炎癥因子含量

分別于試驗第32天和第64天,每個重復隨機選取1只雞,空腹翅靜脈采血5 mL于離心管中,37 ℃靜置30 min后,室溫3 000 r/min離心10 min,取上清液分裝于1.5 mL離心管中,于-20 ℃保存待測。血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-10(IL-10)和白細胞介素-1β(IL-1β)含量采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELLSA)試劑盒測定,測定儀器為全功能酶標儀(美國伯騰儀器有限公司),試劑盒由武漢普奈斯生物科技有限公司提供。

1.5.3 血清抗氧化指標

分別于試驗第32天和第64天,每個重復隨機選取1只雞,翅靜脈采血5 mL于離心管中,室溫靜置2 h,3 000 r/min離心10 min,分離得到血清,于-20 ℃冰箱保存待測。血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性及總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定。

1.5.4 腸道形態(tài)結構

肉雞分別于試驗第32天和第64天屠宰后,取1 cm左右空腸末端腸段,放入10%福爾馬林中固定。取固定24 h后的腸段樣品,經過沖水、梯度酒精脫水、二苯透明和石蠟包埋等處理后,以6 μm厚度的切片進行常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色,最后進行中性樹脂封片。在生物顯微鏡下觀察腸道形態(tài)結構變化,選取5處完整且走向平直的絨毛,測定絨毛高度和隱窩深度,并計算絨毛高度/隱窩深度(V/C)值。

1.5.5 盲腸微生物宏基因組檢測

稱取每份盲腸內容物樣品(200±10) mg置于2 mL滅菌離心管中,并用鋁薄紙包好置于液氮罐中待檢。利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測抽提盲腸中的基因組DNA,使用超聲破碎儀Covaris M220使DNA樣品隨機打斷為400 bp左右。取一定量的DNA樣品加入到核酸打斷管中并用TE緩沖液定容至65 μL,設置超聲破碎儀Covaris M220工作時間、循環(huán)數(shù)等參數(shù)。按試劑盒NEXTFLEXTMRapid DNA-Seq Kit操作步驟回收PCR產物構建PE文庫,利用試劑盒NovaSeq Reagent Kits/HiSeq X Reagent Kits進行橋式PCR后上機測序。

樣品送上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進行宏基因測序和分析,包括樣品的測序數(shù)據質控、序列組裝和基因豐度計算、物種注釋及差異分析和功能注釋及差異分析等。

1.6 數(shù)據統(tǒng)計分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據進行單因素方差分析(one-way ANOVA),并采用Duncan氏法進行組間的多重比較,結果以“平均值±標準差(mean±SD)”形式表示,P<0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞生長性能的影響

由表3可知,1～21日齡,與對照組(AAL0組)和抗生素組(AAL0+K組)相比,AAL2000組和AAL3000組F/G顯著降低(P<0.05)。22～42日齡,與對照組相比,AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組ADG顯著提高(P<0.05),F/G顯著降低(P<0.05);與抗生素組相比,AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組ADG顯著提高(P<0.05)。43～64日齡,與對照組相比,AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組ADG顯著提高(P<0.05),AAL2000組F/G顯著降低(P<0.05)。1～64日齡,與對照組相比,AAL1000組和AAL2000組ADG顯著提高(P<0.05),AAL2000組和AAL3000組F/G顯著降低(P<0.05)。

表3 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞生長性能的影響Table 3 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on growth performance of yellow-feathered broilers

2.2 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞血清炎癥因子含量的影響

由表4可知,試驗第32天,與對照組相比,抗生素組和AAL3000組血清TNF-α含量顯著降低(P<0.05);與對照組和抗生素組相比,AAL2000組和AAL3000組血清IL-6含量顯著降低(P<0.05),AAL1000組和AAL3000組血清IL-10含量顯著降低(P<0.05);與對照組相比,抗生素組、AAL2000組和AAL3000組血清IL-1β含量顯著降低(P<0.05),且抗生素組血清IL-1β含量顯著低于AAL2000組和AAL3000組(P<0.05)。

表4 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞血清炎癥因子含量的影響Table 4 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on serum inflammatory factor contents of yellow-feathered broilers pg/mL

試驗第64天,與對照組相比,抗生素組和AAL3000組血清TNF-α含量顯著降低(P<0.05);抗生素組和AAL3000組血清IL-6含量顯著低于其余各組(P<0.05);與對照組和抗生素組相比,AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組血清IL-10含量顯著提高(P<0.05);與對照組相比,抗生素組、AAL2000組和AAL3000組血清IL-1β含量顯著降低(P<0.05)。

2.3 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞血清抗氧化指標的影響

由表5可知,試驗第32天,與對照組相比,AAL2000組和AAL3000組血清T-AOC和MDA含量均顯著降低(P<0.05);與對照組和抗生素組相比,AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組血清SOD活性顯著提高(P<0.05);各組間血清GSH-Px活性無顯著差異(P>0.05)。

表5 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞血清抗氧化指標的影響Table 5 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on serum antioxidant indices of yellow-feathered broilers

試驗第64天,與對照組和抗生素組相比,AAL2000組和AAL3000組血清SOD活性顯著提高(P<0.05);與對照組相比,AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組血清GSH-Px活性顯著提高(P<0.05);各組間血清T-AOC和MDA含量均無顯著差異(P>0.05)。

2.4 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞腸道形態(tài)結構的影響

由表6可知,試驗第32天,與對照組相比,抗生素組和AAL2000組空腸絨毛高度顯著提高(P<0.05),抗生素組、AAL1000組和AAL2000組空腸V/C值顯著提高(P<0.05);各組間空腸隱窩深度無顯著差異(P>0.05)。

表6 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞腸道形態(tài)結構的影響Table 6 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on intestinal morphology and structure of yellow-feathered broilers

試驗第64天,與對照組相比,抗生素組、AAL2000組和AAL3000組空腸絨毛高度顯著提高(P<0.05),AAL2000組和AAL3000組空腸V/C值顯著提高(P<0.05);各組間空腸隱窩深度無顯著差異(P>0.05)。試驗第32天和第64天黃羽肉雞空腸組織切片分別見圖1和圖2。

圖a～圖e分別代表對照組(AAL0組)、抗生素組(AAL0+K組)、AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組。圖2同。Fig.a to Fig.e represented control group (AAL0 group), antibiotic group (ALL0+K group), AAL1000 group, AAL2000 group and AAL3000 group, respectively. The same as Fig.2.圖1 飼糧添加鐵莧菜粉對第32天黃羽肉雞回腸形態(tài)的影響Fig.1 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on ileum morphology of yellow-feathered broilers on day 32 (100×)

圖2 飼糧添加鐵莧菜粉對第64天黃羽肉雞回腸形態(tài)的影響Fig.2 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on ileum morphology of yellow-feathered broilers on day 64 (100×)

2.5 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落的影響

2.5.1 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落物種多樣性的影響

2.5.1.1 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落alpha多樣性的影響

如圖3所示,試驗第32天(圖3-A)和第64天(圖3-B),各組間Shannon指數(shù)均無顯著差異(P>0.05),表明飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落alpha多樣性無顯著影響。

A:第32天 day 32;B:第64天 day 64。圖3 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落alpha多樣性的影響Fig.3 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on alpha diversity of microbial community in cecum of yellow-feathered broilers

2.5.1.2 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落beta多樣性的影響

主坐標分析(PCoA)是一種對不同類型的數(shù)據進行分析的一種可視化技術,利用PCoA可以看出不同組間的差異。如圖4-A所示,第1主坐標(PC1)對樣本的影響為61.59%,第2坐標對樣本的影響為18.50%;如圖4-B所示,PC1對樣本的影響為39.62%,PC2對樣本的影響為34.17%。試驗第32天和第64天,各組間盲腸微生物群落未發(fā)生明顯的分離,表明飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落beta多樣性無明顯影響。

A:第32天 day 32;B:第64天 day 64。圖4 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落beta多樣性的影響Fig.4 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on beta diversity of microbial community in cecum of yellow-feathered broilers

2.5.2 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落相對豐度的影響

2.5.2.1 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落在門水平上相對豐度的影響

如圖5所示,試驗第32天,各組盲腸微生物群落相對豐度最高的前3個菌門依次為厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)和Uroviricota,其中以厚壁菌門和擬桿菌門為優(yōu)勢菌門,約占90%以上。由表7可知,與對照組和抗生素組相比,AAL2000組和AAL3000組擬桿菌門相對豐度顯著提高(P<0.05);與抗生素組相比,對照組、AAL1000組和AAL3000組Uroviricota相對豐度顯著提高(P<0.05);與對照組相比,抗生素組、AAL2000組和AAL3000組變形菌門(Proteobacteria)相對豐度顯著降低(P<0.05),各試驗組放線菌門(Actinobacteria)相對豐度顯著降低(P<0.05),而各試驗組軟壁菌門(Tenericutes)相對豐度顯著提高(P<0.05)。

圖5 飼糧添加鐵莧菜粉對第32天黃羽肉雞盲腸微生物群落在門水平上相對豐度的影響Fig.5 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on relative abundance of microbial community at phylum level in cecum of yellow-feathered broilers on day 32

表7 飼糧添加鐵莧菜粉對第32天黃羽肉雞盲腸微生物群落在門水平上相對豐度的影響Table 7 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on relative abundance of microbial community at phylum level in cecum of yellow-feathered broilers on day 32

如圖6所示,試驗第64天,各組盲腸微生物群落相對豐度最高的前4個菌門為厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門和Uroviricota。由表8可知,與對照組和抗生素組相比,AAL2000組和AAL3000組擬桿菌門相對豐度顯著提高(P<0.05);與抗生素組相比,其他各組變形菌門相對豐度顯著降低(P<0.05);與對照組相比,AAL1000組和AAL3000組Uroviricota相對豐度顯著提高(P<0.05)。

圖6 飼糧添加鐵莧菜粉對第64天黃羽肉雞盲腸微生物群落在門水平上相對豐度的影響Fig.6 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on relative abundance of microbial community at phylum level in cecum of yellow-feathered broilers on day 64

表8 飼糧添加鐵莧菜粉對第64天黃羽肉雞盲腸微生物群落在門水平上相對豐度的影響Table 8 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on relative abundance of microbial community at phylum level in cecum of yellow-feathered broilers on day 64

2.5.2.2 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落在屬水平上相對豐度的影響

如圖7所示,試驗第32天,各組盲腸微生物群落主要含有擬桿菌屬(Bacteroides)、Mediterraneibacter、布勞特氏菌屬(Blautia)、Phocaeicola、Lachnoclostridium、芽殖菌屬(Gemmiger)、未分類_o_真細菌目(unclassified_o_Eubacteriales)、Flavonifractor、糞桿菌屬(Faecalibacterium)和未分類_f_毛螺菌科(unclassified_f_Lachnospiraceae)。由表9可知,與抗生素組相比,對照組和其他各試驗組擬桿菌屬相對豐度均顯著降低(P<0.05);與抗生素組相比,對照組、AAL1000組和AAL2000組Phocaeicola相對豐度顯著提高(P<0.05),且AAL1000組顯著高于其他各組(P<0.05);與對照組和抗生素組相比,AAL2000組和AAL3000組芽殖菌屬相對豐度顯著提高(P<0.05);與抗生素組相比,AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組糞桿菌屬相對豐度顯著提高(P<0.05)。

圖7 飼糧添加鐵莧菜粉對第32天黃羽肉雞盲腸微生物群落在屬水平上相對豐度的影響Fig.7 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on relative abundance of microbial community at genus level in cecum of yellow-feathered broilers on day 32

表9 飼糧添加鐵莧菜粉對第32天黃羽肉雞盲腸微生物群落在屬水平上相對豐度的影響Fig.9 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on relative abundance of microbial community at genus level in cecum of yellow-feathered broilers on day 32

如圖8所示,試驗第64天,各組盲腸微生物群落主要含有另枝菌屬(Alistipes)、巴恩斯氏菌屬(Barnesiella)、擬桿菌屬、糞桿菌屬、梭菌屬(Clostridium)、未分類_o_真細菌目、Mediterraneibacter、Phocaeicola、Candidatus_Enerousia和未分類_f_長尾噬菌體科(unclassified_f_Siphoviridae)。由表10可知,與對照組相比,各試驗組另枝菌屬菌相對豐度均有提高,且抗生素組和AAL3000組差異顯著(P<0.05);抗生素組和AAL2000組巴恩斯氏菌屬相對豐度顯著低于其他各組(P<0.05);與對照組相比,各試驗組擬桿菌屬菌相對豐度均顯著降低(P<0.05),AAL2000組和AAL3000組Candidatus_Enterousia相對豐度顯著降低(P<0.05),AAL1000組和ALL3000組未分類_f_長尾噬菌體科相對豐度顯著提高(P<0.05)。

圖8 飼糧添加鐵莧菜粉對第64天黃羽肉雞盲腸微生物群落在屬水平上相對豐度的影響Fig.8 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on relative abundance of microbial community at genus level in cecum of yellow-feathered broilers on day 64

表10 飼糧添加鐵莧菜粉對第64天黃羽肉雞盲腸微生物群落在屬水平上相對豐度的影響Fig.10 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on relative abundance of microbial community at genus level in cecum of yellow-feathered broilers on day 32

2.5.3 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落組成差異分析

利用Wilcoxon秩和檢驗分析盲腸微生物群落組成的差異性,如圖9所示,試驗第32天,用鐵莧菜粉處理后導致盲腸中Candidatus_Neoanaerotignum和雙芽孢桿菌(Amphibacillus)相對豐度顯著降低(P<0.05),而Candidatus_Limihabitans相對豐度顯著提高(P<0.05);如圖10所示,試驗第64天,用鐵莧菜粉處理后導致盲腸中副擬桿菌屬(Parabacteroides)相對豐度顯著提高(P<0.05),而嗜膽菌屬(Bilophila)和Candidatus_Galloscillo相對豐度顯著降低(P<0.05)。在種水平上進一步分析腸道菌群組成的差異性,發(fā)現(xiàn)有重要參考價值的菌群差異均不顯著(P>0.05)。

圖9 飼糧添加鐵莧菜粉對第32天黃羽肉雞盲腸微生物群落在屬水平上差異顯著物種分布的影響Fig.9 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on species distribution of microbial community at genus level in cecum of yellow-feathered broilers on day 32

圖10 飼糧添加鐵莧菜粉對第64天黃羽肉雞盲腸微生物群落在屬水平上差異顯著物種分布的影響Fig.10 Effects of dietary Acalypha australis L. powder on species distribution of microbial community at genus level in cecum of yellow-feathered broilers on day 64

3 討 論

3.1 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞生長性能的影響

鐵莧菜粉中含有14.25 μg/g的沒食子酸。蔡龍等[6]報道,在肉雞和仔豬飼糧中添加適量沒食子酸,可促進動物生長并提高飼料轉化率。本試驗結果表明,與對照組相比,飼糧添加2 000 mg/kg鐵莧菜粉提高了黃羽肉雞ADG(1～21日齡除外),降低F/G,提示在黃羽肉雞飼糧中添加適量的鐵莧菜粉可提高肉雞生長性能。本試驗與林忠寧等[7]研究得出的鐵莧菜提取物對仔豬有明顯的促生長和增強免疫作用,對仔豬腹瀉有明顯的防治效果,且促生長和防治腹瀉的效果與飼用金霉素相近的結論有相似之處。

3.2 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞血清炎癥因子含量的影響

鐵莧菜中含有蘆丁等黃酮類物質。蘆丁可通過抑制環(huán)加氧酶和脂加氧酶的活性,從而減少炎癥的發(fā)生[8]。因此,蘆丁具有良好的抗炎特性,可以作為飼用添加劑進行生產使用,減少動物炎癥損傷帶來的危害。動物在炎癥發(fā)生時,機體會產生許多炎癥因子,常見的炎癥因子有TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-10等。本試驗結果表明,與對照組相比,飼糧添加3 000 mg/kg鐵莧菜粉顯著降低試驗第32天黃羽肉雞血清TNF-α、IL-6、IL-10和IL-1β含量;顯著降低試驗第64天血清TNF-α、IL-6和IL-1β含量,而顯著提高血清IL-10含量。錢沿等[9]研究表明,鐵莧菜水提取液能顯著降低模型組大鼠血清腫瘤壞死因子(TNF)和白細胞介素-8(IL-8)含量,顯著提高血清IL-10含量,從而提高機體抗炎能力并起到保護腸道黏膜完整的作用,這與本試驗結果相一致。

3.3 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞血清抗氧化指標的影響

李蘭柱等[10]報道,黃酮類化合物具有抗炎、抗自由基及保護心腦血管系統(tǒng)等多種生物學功能,蘆丁作為黃酮類化合物的典型代表,因其重要的生物學功能受到了廣泛關注。鐵莧菜粉中富含黃酮類物質蘆丁和柚皮素。鄧莉[11]研究發(fā)現(xiàn),用鐵莧菜灌胃治療后的大鼠,結腸組織中抗氧化酶SOD和GSH-Px活性顯著提高,而結腸組織中MDA含量顯著降低,由此證明鐵莧菜具有抗氧化的作用。本試驗結果表明,與對照組和抗生素組相比,AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組試驗第32天血清SOD活性顯著提高,試驗第64天AAL2000組和AAL3000組血清SOD活性顯著提高;與對照組相比,AAL2000組和AAL3000組試驗第32天血清MDA含量顯著降低,AAL1000組、AAL2000組和AAL3000組試驗第64天血清GSH-Px活性顯著提高,這與上述研究結果相一致。崔明筠[5]通過小鼠灌胃鐵莧菜黃酮發(fā)現(xiàn),小鼠血清、心臟、肝臟和腎臟SOD、GSH-Px和過氧化氫酶(CAT)活性均顯著提高,與本試驗結果也基本一致。

3.4 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞腸道形態(tài)結構的影響

林忠寧等[7]研究發(fā)現(xiàn),鐵莧菜提取物對仔豬腹瀉有明顯的防治效果,促生長和防治腹瀉的效果與飼用金霉素相近。動物的腸道健康主要反映在小腸的絨毛高度和腸道絨毛的完整性。因為小腸絨毛是直接執(zhí)行吸收功能的部位,絨毛高度與細胞數(shù)量顯著相關[12]。V/C值則綜合反映腸道絨毛的吸收功能,V/C值降低,表示腸道消化吸收功能下降,常伴隨腹瀉的發(fā)生;而V/C值提高,則表明消化吸收功能增強,腹瀉率下降。本試驗中,與對照組相比,飼糧添加2 000 mg/kg鐵莧菜粉顯著提高了黃羽肉雞空腸絨毛高度和V/C值,這表明在飼糧中添加一定劑量的鐵莧菜粉可一定程度改善黃羽肉雞腸道形態(tài),有利于改善黃羽肉雞的腸道健康。在民間,鐵莧菜水煮液常常被用來治療胃腸道疾病,特別是感染性腹瀉[13]。

3.5 飼糧添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落的影響

鐵莧菜常用于止血、止痢和止瀉,且研究發(fā)現(xiàn)鐵莧菜對治療慢性結腸炎具有較好的效果[14-15]。據報道,鐵莧菜治療慢性結腸炎病人總有效率達到96.4%[5]。目前,關于在基礎飼糧中添加鐵莧菜粉對黃羽肉雞腸道菌群組成的影響的國內報道甚少,本試驗在黃羽肉雞的基礎飼糧中添加不同劑量的鐵莧菜粉,研究鐵莧菜粉對黃羽肉雞盲腸微生物群落多樣性和物種組成的影響。

本試驗通過在黃羽肉雞飼糧中添加鐵莧菜粉采集32和64日齡盲腸糞便進行宏基因組測序,通過alpha多樣性分析發(fā)現(xiàn),32和64日齡各組盲腸微生物群落的Shannon指數(shù)差異均不顯著;通過beta多樣性分析發(fā)現(xiàn),32和64日齡各組間盲腸微生物群落相似度較高,表明飼糧添加鐵莧菜粉不影響黃羽肉雞盲腸微生物群落的多樣性。

腸道微生物群落組成是機體腸道健康的重要標志之一,微生物分類水平有界、門、綱、目、科、屬和種。本試驗分別從門、屬水平對在飼糧中添加不同劑量鐵莧菜粉的黃羽肉雞盲腸微生物群落組成進行分析發(fā)現(xiàn),在門水平,5個組盲腸微生物群落主要由厚壁菌門、擬桿菌門、Uroviricota和變形菌門組成,其中相對豐度最高的是厚壁菌門,其次是擬桿菌門,這與郝永勝等[16]的研究結果一致。本試驗結果表明,與對照組和抗生素組相比,AAL2000組和AAL3000組試驗第32天和第64天盲腸擬桿菌門相對豐度均顯著提高,擬桿菌門的豐度通常與能量攝入和肥胖呈負相關,而厚壁菌門的豐度通常與肥胖呈正相關[17-18]。高厚壁菌門/擬桿菌門(F/B)值通?？梢宰鳛榉逝职l(fā)生的一個標志物,F/B值過低則表現(xiàn)為炎癥性腸炎病[19-20],本試驗中,試驗第32天,5個組F/B值分別為4.53、4.18、3.81、2.49和2.12;試驗第64天5個組F/B值分別為1.71、1.47、1.57、1.27和1.24,這與本試驗中飼糧添加鐵莧菜粉改善了黃羽肉雞血清炎癥因子含量和腸道形態(tài)結構的結果以及與Sun等[20]的研究結果相反,是否與鐵莧菜粉中含有黃酮、生物堿及有機酸等物質在機體中相互協(xié)同有關,有待進一步研究。在屬水平上,與對照組相比,飼糧添加2 000和3 000 mg/kg鐵莧菜粉顯著提高了試驗第32天黃羽肉雞盲腸菌群中有益菌芽殖菌屬的相對豐度,飼糧添加3 000 mg/kg鐵莧菜粉顯著提高改善試驗第64天盲腸另枝菌屬的相對豐度。芽殖菌屬是主要產丁酸鹽的細菌,可以通過減少結腸細胞炎癥因子合成和增加抗炎細胞因子的分泌來發(fā)揮抗炎癥作用。另枝菌屬是短鏈脂肪酸乙酸和丙酸的主要生產者,乙酸、丙酸和丁酸是腸道中含量最多的3種短鏈脂肪酸,占總短鏈脂肪酸的90%以上。短鏈脂肪酸對機體能量代謝、腸道炎癥反應以及免疫功能都具有調節(jié)作用[21]。Parker等[22]研究發(fā)現(xiàn),另枝菌屬可能對一些疾病有保護作用,包括肝纖維化、結腸炎、腫瘤免疫治療和心血管疾病。這也進一步驗證了在飼糧中添加鐵莧菜粉可改善腸道形態(tài)結構和提高有益菌相對豐度,從而改善腸道健康。

4 結 論

① 飼糧添加2 000 mg/kg鐵莧菜粉能夠提高黃羽肉雞ADG,降低F/G,有利于提高肉雞生長性能。

② 飼糧添加3 000 mg/kg鐵莧菜粉能夠降低黃羽肉雞血清TNF-α、IL-6和IL-1β含量,提高血清IL-10含量,提高機體抗炎能力。

③ 飼糧添加2 000和3 000 mg/kg鐵莧菜粉能夠提高黃羽肉雞機體抗氧化能力。

④ 飼糧添加2 000 mg/kg鐵莧菜粉能夠提高黃羽肉雞空腸絨毛高度和V/C值,改善腸道形態(tài)結構。

⑤ 飼糧添加適量鐵莧菜粉能夠降低盲腸F/B值,前期提高芽殖菌屬相對豐度,后期改善另枝菌屬相對豐度,促進有益菌屬在腸道的定植,保障腸道健康。

綜上所述,在黃羽肉雞飼糧中添加適量鐵莧菜粉,有利于提高黃羽肉雞生長性能,改善機體炎癥因子水平和抗氧化能力,提升腸道形態(tài)結構,維持腸道健康。