原發(fā)性舍格倫綜合征患者血清ADAM17表達(dá)水平及其與病情程度的相關(guān)性研究

楊彩紅，蕭韻健，袁 飛，莫偉平

（東莞市人民醫(yī)院a.風(fēng)濕科；b.檢驗(yàn)科，廣東東莞 523126）

原發(fā)性舍格倫綜合征（primary Sjogren syndrome，PSS）是全身性自身免疫疾病，機(jī)體會產(chǎn)生多種自身抗體以及外分泌腺淋巴結(jié)細(xì)胞高度浸潤，導(dǎo)致分泌功能發(fā)生障礙，臨床表現(xiàn)為干燥、疼痛和疲勞等癥狀[1-2]。PSS多發(fā)于絕經(jīng)女性及老年人，可從輕度癥狀逐漸延伸成為嚴(yán)重全身性疾病，對于其治療有很大困難[3]。因此，研究PSS病理機(jī)制，篩選可用于疾病診斷以及療效評估的生物標(biāo)記物十分重要。解聚素金屬蛋白酶17（a disintegrin and metalloprotease 17，ADAM17）作為一種糖蛋白，其介導(dǎo)黏附因子、細(xì)胞以及生長因子等多種膜分子水解脫落，參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)節(jié)危害機(jī)體細(xì)胞發(fā)生發(fā)展過程以及轉(zhuǎn)移途徑[4]。研究發(fā)現(xiàn)，ADAM17在PSS炎癥上皮中顯著升高[5]，但其與病情程度關(guān)系尚不清楚。因此，本研究主要探討ADAM17在PSS患者血清中的表達(dá)及其與病情程度關(guān)系，為臨床治療PSS患者提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取東莞市人民醫(yī)院風(fēng)濕科2022年2月1～10月1日收治的86例PSS患者（PSS組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①PSS符合《原發(fā)性干燥綜合征診療規(guī)范》[7]；②患者臨床病理檢測資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①并發(fā)其他血液系統(tǒng)疾??；②年齡＞80歲；③并發(fā)嚴(yán)重肝腎功能障礙者；④并發(fā)全身急慢性感染性疾病者；⑤并發(fā)原發(fā)性精神障礙者；⑥并發(fā)惡性腫瘤者。舍格倫綜合征疾病活動指數(shù)（Sjogren’s syndrome disease activity index，SSDAI）評分[6]共包括11個檢查項(xiàng)目和加權(quán)臨床表現(xiàn)，評分為0～21分，根據(jù)SSDAI評分將PSS患者分為活動期（≥5分）45例（活動期組），其中男性17例，女性28例，平均年齡50.53±11.51歲，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）22.49±2.51kg/m2；吸煙24例，飲酒22例，高血壓14例，糖尿病15例；穩(wěn)定期（＜5分）41例（穩(wěn)定期組），其中男性14例，女性27例，平均年齡50.39±11.48歲，BMI 22.37±2.46kg/m2；吸煙20例，飲酒21例，高血壓12例，糖尿病11例。同時選取同期健康體檢者43例作為對照組，其中男性19例，女性24例，平均年齡50.34±11.46歲，BMI 22.43±2.41kg/m2；吸煙21例，飲酒18例，高血壓5例，糖尿病6例。三組的性別、年齡、BMI，吸煙、飲酒、高血壓以及糖尿病之間的比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2/F=0.919,0.003,0.026,0.240,0.809,1.757,4.559,均P＞0.05）。本研究所有患者均簽署知情同意書，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 儀器與試劑 血清ADAM17試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）；抗SSA抗體和抗SSB抗體試劑盒（廣東固康生物科技有限公司）；腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6），白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10），白細(xì)胞介素-17（interleukin-17，IL-17）試劑盒（上海酶研生物科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集：所有研究對象均抽取清晨空腹靜脈血5 ml，離心（4 000 r/min，10 min）提取上層血清，置于-80 ℃冰箱中儲存待檢。

1.3.2 觀察指標(biāo)檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清ADAM17水平，具體操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。采用免疫雙擴(kuò)散法檢測血清抗SSA抗體、抗SSB抗體；采用流式細(xì)胞法檢測血清炎癥因子TNF-α，IL-6，IL-10，IL-17的水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 25.0分析本研究數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；采用Logistic回歸分析PSS的影響因素；采用Pearson法分析血清ADAM17與PSS患者生化指標(biāo)的相關(guān)性，采用spearman分析血清ADAM17與SSDAI評分的相關(guān)性；采用多元線性回歸分析影響SSDAI評分的因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對照組、穩(wěn)定期組、活動期組間各項(xiàng)指標(biāo)的比較 見表1。穩(wěn)定期組、活動期組抗SSA抗體陽性率、抗SSB抗體陽性率、TNF-α，IL-6，IL-17，ADAM17水平高于對照組，IL-10水平低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.288,28.586,16.824,53.030,t=5.019,13.425,7.525,12.624,19.169;33.081,13.899,19.398,4.860,14.943,均P＜0.05）；活動期組抗SSA抗體、抗SSB抗體陽性率、TNF-α，IL-6，IL-17，ADAM17，SSDAI評分高于穩(wěn)定期組，IL-10水平低于穩(wěn)定期組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.764，13.936，t=8.186,4.862,13.295,5.108,9.846,14.901,6.099,均P＜0.05）。

表1 對照組、穩(wěn)定期組、活動期組間各項(xiàng)指標(biāo)的比較[n（%），（±s）]

表1 對照組、穩(wěn)定期組、活動期組間各項(xiàng)指標(biāo)的比較[n（%），（±s）]

項(xiàng)目對照組（n=43）穩(wěn)定期組（n=41）活動期組（n=45）F/χ2/t值P值抗SSA抗體（陽性）8（18.60）16（39.02）34（75.56）29.676＜0.001抗SSB抗體（陽性）3（6.98）19（46.34）38（84.44）53.043＜0.001 TNF-α（μg/L）80.59±15.6596.62±19.74122.48±25.2646.005＜0.001 IL-6（μg/L）45.38±8.5366.74±15.3580.39±26.1740.338＜0.001 IL-10（μg/L）89.47±12.2659.82±9.7239.48±7.63275.910＜0.001 IL-17（μg/L）55.73±9.9286.35±14.3797.48±17.3799.970＜0.001 ADAM17（pg/ml）57.31±9.0568.13±14.3389.81±18.1962.363＜0.001 SSDAI評分（分）——4.35±0.4114.45±4.3214.901＜0.001

2.2 多因素Logistic回歸分析發(fā)生PSS的影響因素以是否發(fā)生PSS為因變量（是=1，否=0），以ADAM17，抗SSA抗體、抗SSB抗體、TNF-α，IL-6，IL-10和IL-17為自變量，各自變量賦值見表2，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。多因素Logistic回歸分析表明，高水平ADAM17，抗SSA抗體陽性、抗SSB抗體陽性、高水平TNF-α，高水平IL-6，低水平IL-10，高水平IL-17是影響PSS發(fā)生的危險(xiǎn)因素（均P＜0.05）。見表3。

表2 各自變量賦值方式

表3 Logistic回歸分析發(fā)生PSS的影響因素

2.3 PSS患者血清ADAM17水平與炎癥指標(biāo)、SSDAI評分的相關(guān)性 根據(jù)Pearson相關(guān)性分析得知，PSS患者血清ADAM17水平與TNF-α，IL-6，IL-17水平呈正相關(guān)（r=0.543，0.582，0.578，均P＜0.05），與IL-10水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.572，P＜0.05）。根據(jù)spearman相關(guān)性分析得知，血清ADAM17水平與SSDAI評分呈正相關(guān)（r=0.603，P＜0.05）。

2.5 影響SSDAI評分的因素（多元線性回歸分析）以SSDAI評分為因變量（≥5=1，＜5=0），以ADAM17，抗SSA抗體、抗SSB抗體、TNF-α，IL-6，IL-10，IL-17為自變量，各自變量賦值見表4，進(jìn)行多元線性回歸分析。結(jié)果表明，高水平ADAM17，抗SSA抗體陽性、抗SSB抗體陽性、高水平TNF-α，高水平IL-6，低水平IL-10，高水平IL-17是影響SSDAI評分的危險(xiǎn)因素（均P＜0.05）。見表5。

表4 各自變量賦值方式

表5 影響SSDAI評分的因素

3 討論

原發(fā)性舍格倫綜合征（PSS）是以侵犯外分泌腺體的系統(tǒng)性自身免疫病，病理上表現(xiàn)為外分泌腺體中大量淋巴細(xì)胞浸潤內(nèi)臟器官，導(dǎo)致多種器官和系統(tǒng)損傷，其中唾液腺和淚腺進(jìn)行性淋巴細(xì)胞浸潤會產(chǎn)生抗SSA抗體、抗SSB抗體或其他外分泌腺特異性抗體，導(dǎo)致外分泌腺分泌功能受損[8]。患者有干渴感、眼睛干澀、渾身乏力、有酸痛感[9]。PSS主要是T淋巴細(xì)胞亞群活化產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子IL-6，TNF-α等，從而引發(fā)炎癥環(huán)境[10]，體液因子、環(huán)境和遺傳等因素都會導(dǎo)致炎癥發(fā)生[11]。PSS發(fā)病率呈逐漸上升趨勢，大多以女性和老年人為主要發(fā)病群體，因其主要發(fā)病機(jī)制尚不明確，在臨床上患者癥狀多樣化，所以會出現(xiàn)漏診現(xiàn)象。因此，尋找敏感生物標(biāo)記物，能夠早期發(fā)現(xiàn)PSS并正確判斷病情嚴(yán)重程度，采取合理治療方案對于改善患者健康尤為關(guān)鍵。

解聚素金屬蛋白酶17（ADAM17）被稱為腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶（TACE），是ADAM家族一員，主要是由824個氨基酸組成，是具有多個結(jié)構(gòu)域的I型跨膜蛋白，在細(xì)胞黏附、蛋白水解以及細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起著關(guān)鍵作用，廣泛存在于哺乳動物中[12]。ADAM17底物包括多種細(xì)胞因子、黏附分子和其相關(guān)受體，因此，ADAM17在機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫系統(tǒng)中起著重要調(diào)節(jié)作用，主要通過剪切各種底物參與癌癥和機(jī)體自身免疫性疾病[13]。ADAM17作為一種機(jī)體潛在標(biāo)志物，在多種實(shí)體腫瘤如乳腺癌和卵巢癌中呈現(xiàn)高表達(dá)[14]。此外ADAM17在結(jié)直腸癌中陽性表達(dá)率顯著高于正常組織，可能與結(jié)直腸癌侵襲有關(guān)，可作為結(jié)直腸癌患者臨床診斷[15]。還有研究發(fā)現(xiàn)，miR-146a-5p靶向并負(fù)調(diào)控膜mIL-23 R的外胚層脫落酶ADAM17，從而減少膜mIL-23 R外胚層脫落，為治療PSS提供一種新方法[16]。在本研究中，活動期組和穩(wěn)定期組血清ADAM17水平均升高，說明ADAM17與PSS的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

檢查抗SSA抗體和抗SSB抗體對于診斷PSS臨床價值具有重要意義，因?yàn)樵摽贵w具有高效特異性[17]。有研究發(fā)現(xiàn)引起PSS關(guān)鍵的因素還有炎癥因子，如IL-10是抑制炎癥反應(yīng)因子，而TNF-α，IL-6，IL-17是促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子，TNF-α也是反映疾病嚴(yán)重程度的標(biāo)志，IL-6主要由機(jī)體中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞分泌，還會誘導(dǎo)合成其他炎癥因子，IL-17會促進(jìn)中性粒細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞分泌，加快其成熟和趨化過程，可以促進(jìn)病情發(fā)展[18]。在本研究中，穩(wěn)定期組和活動期組抗SSA抗體陽性率、抗SSB抗體陽性率、TNF-α，IL-6，IL-17表達(dá)均升高，穩(wěn)定期組和活動期組IL-10表達(dá)水平降低，說明PSS患者免疫功能明顯下降，加速病情發(fā)展。ADAM17可以水解TNF-α，IL-6等膜蛋白細(xì)胞外的功能區(qū)并導(dǎo)致脫落，促使配體的形成，通過旁分泌或自分泌從而結(jié)合相應(yīng)的受體，協(xié)調(diào)NFkB，Notch信號通路、EGFR-PI3K-Akt途徑等轉(zhuǎn)移信號，參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、血管生成等過程[19]。根據(jù)Pearson相關(guān)性分析得知，PSS患者血清ADAM17水平與TNF-α，IL-6，IL-17表達(dá)水平呈正相關(guān)，與IL-10表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。說明ADAM17對機(jī)體免疫應(yīng)答起著正向調(diào)控作用。

有研究報(bào)道，SSDAI評分越高，病變程度越高，病情越嚴(yán)重[20]。根據(jù)相關(guān)性分析得知血清ADAM17水平與SSDAI評分呈正相關(guān)，說明血清ADAM17與患者病情程度有關(guān)，Logistic回歸分析得知，高水平ADAM17，抗SSA抗體陽性、抗SSB抗體陽性、TNF-α，IL-6，IL-17以及低水平IL-10是影響PSS發(fā)生的危險(xiǎn)因素。多元線性回歸分析得知，高水平ADAM17，抗SSA抗體陽性、抗SSB抗體陽性、高水平TNF-α，高水平IL-6，低水平IL-10，高水平IL-17是影響SSDAI評分的危險(xiǎn)因素，說明血清ADAM17水平與PSS的病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，臨床檢測血清ADAM17可評估患者病情嚴(yán)重程度。

綜上所述，PSS患者血清ADAM17水平顯著升高，其與患者的病情嚴(yán)重程度相關(guān)，其表達(dá)水平隨著病情嚴(yán)重程度增加而增加。本研究尚存在局限性，如未探究ADAM17在PSS中的具體調(diào)控機(jī)制，樣本量不足等，后續(xù)將會增加細(xì)胞和動物實(shí)驗(yàn)，擴(kuò)大樣本量對本研究進(jìn)行驗(yàn)證。