子宮內(nèi)膜癌組織中TMIGD2，TIGIT的表達(dá)及其與臨床病理特征的相關(guān)性研究

柴 靜，張家弘，李夢雪（唐山市婦幼保健院婦科，河北唐山 063000）

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma）是一種位于子宮內(nèi)膜上皮的惡性腫瘤，有子宮內(nèi)膜樣癌、漿液性癌、透明細(xì)胞癌、子宮癌肉瘤等幾種組織學(xué)亞型，臨床表現(xiàn)無特異性，導(dǎo)致大多數(shù)患者無法在早期確診，進而發(fā)展到癌癥中晚期，且預(yù)后容易復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響女性的生命安全[1-2]。因此，尋找與子宮內(nèi)膜癌病理類型以及患者預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志物有助于臨床盡早對患者進行治療，保障患者的生命健康。免疫檢查點是一類免疫細(xì)胞上具有抑制免疫活性的分子，能夠誘導(dǎo)腫瘤特異性T細(xì)胞凋亡，減輕抗腫瘤免疫反應(yīng)，促進腫瘤免疫耐受，在臨床癌癥治療中具有重要作用[3-5]?？缒ず兔庖咔虻鞍捉Y(jié)構(gòu)域2（transmembrane and immunoglobulin domain containing 2，TMIGD2）、T細(xì)胞免疫球蛋白和免疫受體酪氨酸抑制基序結(jié)構(gòu)域（T cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif domain，TIGIT）作為免疫檢查點，能夠阻礙癌癥中免疫循環(huán)，在口腔鱗狀細(xì)胞癌、血液惡性腫瘤等腫瘤中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[6-7]。但在子宮內(nèi)膜癌病理類型以及患者預(yù)后分析中仍不明確，本研究通過檢測子宮內(nèi)膜癌患者組織中TMIGD2，TIGIT的表達(dá)情況，探討與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，以期為評估和治療子宮內(nèi)膜癌提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2016年1月～2018年1月唐山市婦幼保健院診治的160例子宮內(nèi)膜癌患者為研究對象，收集患者術(shù)中切除的癌組織及癌旁正常組織（距離癌組織＞5 cm）?；颊咂骄挲g55.35±8.55歲；＜55歲79例，≥55歲81例；病理類型：子宮內(nèi)膜樣腺癌60例，透明細(xì)胞癌40例，漿液性癌35例，子宮癌肉瘤25例；未絕經(jīng)70例，絕經(jīng)90例；腫瘤直徑：≤3 cm 95例，＞3 cm 65例；中高分化85例，低分化75例；FIGO分期：I+II期82例，III+IV期78例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移62例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移98例；肌層浸潤程度：淺表100例，深層60例。納入標(biāo)準(zhǔn):①子宮內(nèi)膜癌患者經(jīng)臨床病理確診，符合子宮內(nèi)膜癌分期標(biāo)準(zhǔn)[8]；②患者入院前未進行過手術(shù)、放療、化療等治療；③年齡＞18周歲，自愿簽署同意書；④臨床資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有其他部位惡性腫瘤者；②伴有心肝腎等重要內(nèi)臟功能障礙者；③全身感染性疾病者；④處于妊娠狀態(tài)者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

表1 子宮內(nèi)膜癌組織和癌旁正常組織TMIGD2，TIGIT表達(dá)比較[n（%）]

1.2 儀器與試劑 TMIGD2兔多抗（貨號：13820-T16），TIGIT兔多抗（貨號：50939-T16，北京義翹神州科技股份有限公司）；二抗羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）抗體（貨號：WBB23204，上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)法檢測子宮內(nèi)膜癌組織和癌旁正常組織TMIGD2和TIGIT表達(dá)：將術(shù)中切除的子宮內(nèi)膜癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本進行10g/dl甲醛固定，24h后進行常規(guī)切片5 μm，脫蠟。嚴(yán)格按照免疫組織化學(xué)法操作步驟，利用TMIGD2兔多抗、TIGIT兔多抗、二抗羊抗兔IgG對樣本中TMIGD2和TIGIT表達(dá)進行檢測。陽性細(xì)胞百分比及陽性細(xì)胞染色強度乘積為總評分，低表達(dá)：總評分≤4分，高表達(dá)：總評分＞4分。其中，①根據(jù)陽性細(xì)胞百分比進行評分，0%～5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分；②根據(jù)陽性細(xì)胞顯色強度進行評分，0分為無著色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。

1.3.2 隨訪：主要以電話及門診復(fù)查的方式對所有子宮內(nèi)膜癌患者進行為期五年的隨訪，患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)或癌因死亡時則隨訪結(jié)束，患者隨訪率為100%。生存時間為術(shù)后至患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)或癌因死亡時間或最終隨訪截止時間。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 SPSS 25.0對數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗；對子宮內(nèi)膜癌組織TMIGD2與TIGIT表達(dá)的相關(guān)性進行Spearman法分析；Kaplan-Meier法分析子宮內(nèi)膜癌組織TMIGD2，TIGIT表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系；COX回歸分析影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TMIGD2，TIGIT在子宮內(nèi)膜癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況及相關(guān)性 見表1。經(jīng)兩組間χ2檢驗，子宮內(nèi)膜癌組織中TMIGD2（67.50%）和TIGIT（72.50%）高表達(dá)率均高于癌旁正常組織（21.25%，17.50%），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=69.327，97.778，均P＜0.01）。經(jīng)Spearman法分析，子宮內(nèi)膜癌組織中TMIGD2與TIGIT表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.422，P＜0.01）。

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織中TMIGD2，TIGIT表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表2。經(jīng)兩組或多組間χ2檢驗，TMIGD2和TIGIT表達(dá)水平均與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤程度有關(guān)；且FIGO分期為III+IV期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深層肌層浸潤的子宮內(nèi)膜癌組織TMIGD2，TIGIT高表達(dá)率均高于FIGO分期為I+II期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淺表肌層浸潤子宮內(nèi)膜癌組織TMIGD2，TIGIT的高表達(dá)率，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.565～20.323，均P＜0.05）。

表2 子宮內(nèi)膜癌組織中TMIGD2，TIGIT表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織中TMIGD2和TIGIT表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 見圖1，2。五年隨訪結(jié)果顯示，160例子宮內(nèi)膜癌患者中有85例生存，75例死亡，總生存率為53.13%。TMIGD2低表達(dá)組生存43例（82.69%），高表達(dá)組生存42例（38.89%）；TIGIT低表達(dá)組生存38例（86.36%），高表達(dá)組生存47例（40.52%）。Kaplan-Meier生存曲線分析表明，TMIGD2，TIGTT低表達(dá)組患者生存率均高于高表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=27.045，26.925，均P＜0.01）。

圖1 子宮內(nèi)膜癌組織中TMIGD2表達(dá)與患者5年生存率的關(guān)系

圖2 子宮內(nèi)膜癌組織中TIGIT表達(dá)與患者5年生存率的關(guān)系

2.4 COX回歸分析影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的因素 見表3。以子宮內(nèi)膜癌患者是否死亡為因變量，以FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤程度、TMIGD2，TIGIT為自變量進行COX回歸分析。單因素分析表明，F(xiàn)IGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤程度、TMIGD2，TIGIT表達(dá)是影響患者預(yù)后的因素；多因素COX回歸分析表明，F(xiàn)IGO分期（95%CI：1.071～6.838）、TMIGD2（95%CI：1.097～1.574），TIGIT（95%CI：1.106～16.869）是子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的危險因素（均P＜0.05）。

表3 COX回歸分析影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的因素

3 討論

子宮內(nèi)膜癌主要表現(xiàn)為絕經(jīng)后出血，多發(fā)于中老年女性，發(fā)病率逐漸增長，且死亡率居高不下，嚴(yán)重危害女性的健康[9-10]。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤免疫微環(huán)境在腫瘤發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色，子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境可以調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，造成免疫失調(diào)，逃避免疫應(yīng)答[11-12]，一些免疫檢查點如T細(xì)胞活化的V結(jié)構(gòu)域Ig抑制因子、淋巴細(xì)胞活化基因-3、程序性死亡配體1等[13-15]能夠抑制T細(xì)胞功能，造成子宮內(nèi)膜癌逃脫免疫攻擊，在患者治療和預(yù)后評估中發(fā)揮重要作用。因此，尋找有助于評估子宮內(nèi)膜癌患者病理特征及預(yù)后的生物標(biāo)志物，及時加以干預(yù)，以便在臨床醫(yī)療中對患者進行及時的治療。

免疫細(xì)胞可通過識別和消除癌細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤特異性抗原和腫瘤相關(guān)抗原，而腫瘤通過多種免疫逃逸機制能夠逃避免疫介導(dǎo)的識別?？缒ず兔庖咔虻鞍捉Y(jié)構(gòu)域2（TMIGD2）是一種跨膜蛋白，由幼稚T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和記憶T細(xì)胞表達(dá)，在活化的T細(xì)胞中丟失，與人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒-H長末端重復(fù)序列結(jié)合蛋白2結(jié)合，影響細(xì)胞間相互作用、細(xì)胞遷移和血管生成，幫助腫瘤細(xì)胞逃逸免疫，促進腫瘤的發(fā)展[16]。T細(xì)胞免疫球蛋白和免疫受體酪氨酸抑制基序結(jié)構(gòu)域（TIGIT）作為T細(xì)胞功能負(fù)調(diào)節(jié)因子，在活化T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞亞群上表達(dá)受限，能夠誘導(dǎo)免疫抑制，參與抑制性受體的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，在多種腫瘤中異常表達(dá)，在調(diào)節(jié)慢性病毒感染和癌癥的適應(yīng)性免疫和先天免疫方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，TMIGD2和TIGIT與子宮內(nèi)膜癌具有一定的關(guān)系，與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤程度有關(guān)。子宮內(nèi)膜癌組織中TMIGD2與TIGIT表達(dá)呈正相關(guān)。提示TMIGD2與TIGIT之間可通過調(diào)控關(guān)系參與免疫抑制作用，影響免疫功能，對子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生影響。GUO等[18]研究發(fā)現(xiàn)，TMIGD2過度表達(dá)可以激活JAK/STAT信號通路，抑制T細(xì)胞增殖和活化，促進肝細(xì)胞癌細(xì)胞的免疫耐受。符圓圓等[19]研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組織中TMIGD2高表達(dá)與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，對患者預(yù)后具有一定的預(yù)測作用。WU等[20]研究發(fā)現(xiàn)，TIGIT參與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中髓系衍生抑制細(xì)胞免疫抑制，造成浸潤T細(xì)胞的耗竭，影響患者總體生存率。吳潔瓊等[21]研究發(fā)現(xiàn)，TIGIT與肺癌的惡性程度有關(guān)，通過抑制免疫功能改變腫瘤微環(huán)境，對患者預(yù)后生存情況產(chǎn)生影響。本研究進一步分析了160例子宮內(nèi)膜癌患者五年隨訪資料發(fā)現(xiàn)，TMIGD2，TIGIT與患者預(yù)后具有密切的關(guān)系，TMIGD2和TIGIT低表達(dá)組患者生存率顯著高于高表達(dá)組，且MIGD2和TIGIT是影響患者預(yù)后的危險因素。推測高水平的TMIGD2和TIGIT能夠參與免疫調(diào)控，抑制T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)免疫抑制，改變腫瘤微環(huán)境，靶向腫瘤微環(huán)境中的多條免疫抑制通路，造成免疫沉默，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃避凋亡，促進子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和遷移，影響患者預(yù)后。

綜上，子宮內(nèi)膜癌組織中TMIGD2和TIGIT均高表達(dá)，與臨床病理特征及預(yù)后有密切聯(lián)系。檢測二者表達(dá)在醫(yī)生對患者臨床評估、預(yù)后改善中具有較大的幫助，但仍需大規(guī)模數(shù)據(jù)對免疫檢查點TMIGD2和TIGIT表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者病理類型及預(yù)后的關(guān)系進行進一步驗證。