磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測乙型肝炎血清標(biāo)志物的臨床研究

劉曉倩 王輝 揭勤琴

基金項(xiàng)目：撫州市社會(huì)發(fā)展指導(dǎo)性科技計(jì)劃項(xiàng)目（133）

作者簡介：劉曉倩，女，本科，主管技師。

【摘要】 目的 探討磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測乙型肝炎血清標(biāo)志物的臨床價(jià)值。方法 選取2021年3月—2022年1月廣昌縣人民醫(yī)院收治的100例乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染患者作為觀察組，同期健康體檢者100名作為對(duì)照組。所有入選對(duì)象均于清晨采集6 mL空腹血，離心處理后將血清標(biāo)本分成2份，分別采用酶聯(lián)免疫吸附法與磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測血清內(nèi)乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙型肝炎核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）、乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙型肝炎e抗體（hepatitis B e antibody，HBeAb）及前S1抗原（Pre-S1 antigen，Pre-S1Ag）。比較2種方法檢測HBV陽性檢出率、血清標(biāo)志物陽性率及診斷效能。結(jié)果 磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測在觀察組中HBV感染陽性檢出率高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.348，P=0.037）；2種檢測方法在對(duì)照組中陽性檢出率相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.592，P=0.442）；磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測HBsAb陽性率、HBcAb陽性率高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測靈敏度、準(zhǔn)確度較酶聯(lián)免疫吸附法高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 2種方法檢測乙型肝炎血清標(biāo)志物均具有良好價(jià)值，但磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測陽性檢出率、靈敏度、準(zhǔn)確度更高，利于提高HBV感染診斷效能，為臨床后續(xù)治療工作開展提供參考。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎；磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法；酶聯(lián)免疫吸附法；血清標(biāo)志物

中圖分類號(hào)：R446.6? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-1721（2023）31-0096-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.31.032

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）持續(xù)感染所致，早期肝損傷尚不嚴(yán)重，無明顯癥狀。隨著乙型肝炎病情進(jìn)展，可反復(fù)出現(xiàn)乏力、食欲減退、頭暈等癥狀，甚至可誘發(fā)肝脾腫大、肝掌等體征變化，若不及時(shí)救治，進(jìn)展至肝硬化失代償期可嚴(yán)重?fù)p害肝功能[1-2]。同時(shí)，乙型肝炎具有較強(qiáng)的傳染性，可通過血液、母嬰及性接觸等多種途徑進(jìn)行傳播，故早期明確診斷并予以規(guī)范化治療，對(duì)控制疾病進(jìn)展及防控感染病傳播尤為重要。乙型肝炎的確診主要依賴于血清標(biāo)志物檢測，包括乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎核心抗體（HBcAb）等，通過檢測上述標(biāo)志物定量情況，能為乙型肝炎定性診斷提供充足依據(jù)。酶聯(lián)免疫吸附法為當(dāng)前檢測常用方法，具有操作簡單、靈敏、快速、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)勢，可及時(shí)明確血清標(biāo)志物檢出情況，但長期應(yīng)用發(fā)現(xiàn)該方法仍存在一定漏診風(fēng)險(xiǎn)，不利于乙型肝炎精準(zhǔn)防治[3-4]。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法則為新一代檢測方法，該技術(shù)將免疫反應(yīng)體系、免疫磁珠體系等結(jié)合，不僅靈敏度高，還兼顧檢測快、操作簡便等特點(diǎn)，易于自動(dòng)化操作[5-6]。但磁微粒化學(xué)發(fā)光法在乙型肝炎中的具體檢測效果尚未明確，仍需深入研究。鑒于此，本研究旨在分析磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測乙型肝炎血清標(biāo)志物的臨床價(jià)值，報(bào)告如下。

1? ?資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年3月—2022年1月廣昌縣人民醫(yī)院收治的100例HBV感染患者作為觀察組，同期健康體檢者100名作為對(duì)照組。觀察組男性59例，女性41例；年齡28～67歲，平均年齡（43.85±4.39）歲；對(duì)照組男性56名，女性44名；年齡29～68歲，平均年齡（44.05±4.46）歲。2組患者一般資料對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)以HBV-DNA確診；精神狀態(tài)正常；臨床資料完整；患者及其家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他肝臟疾病者；惡性腫瘤者；妊娠或哺乳期女性。

1.2 方法 儀器采用酶標(biāo)儀Elx-800（美國BIOTek）、全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀Wan200+（廈門優(yōu)邁科醫(yī)學(xué)儀器有限公司）、水浴箱420-A（江蘇新康醫(yī)療器械有限公司）、洗板機(jī)DNX-9620（北京普朗新技術(shù)有限公司）、離心機(jī)TDZ5-WS（上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。酶聯(lián)免疫吸附法試劑由中山生物工程有限公司及武漢康珠生物技術(shù)有限公司提供，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法試劑由廈門萬泰凱瑞生物技術(shù)有限公司提供。

所有入選對(duì)象均于清晨采集6 mL空腹血，以

3 000 r/min速度離心10 min，離心半徑10 cm，獲得血清后將其均分為2份，分別以酶聯(lián)免疫吸附法與磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測血清內(nèi)HBsAg、HBsAb、HBcAb、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗體（HBeAb）及前S1抗原（Pre-S1Ag）水平。

酶聯(lián)免疫吸附法：先進(jìn)行準(zhǔn)備工作，將試劑盒取出后室溫下平衡30 min，并將濃縮洗滌液稀釋20倍，之后設(shè)置空白對(duì)照1孔，陽性、陰性對(duì)照各2孔，每組待測標(biāo)本1份（50 μL）；進(jìn)行加酶處理，除空白對(duì)照外，每孔各加酶標(biāo)溶液50 μL，混勻后封板，于37 ℃水浴箱內(nèi)溫育30 min；洗滌處理，將洗滌液注滿各孔，靜置5～10 s，去除洗滌液，重復(fù)4次，末次在吸水紙上拍干；行顯色處理，每孔加底物A、B各50 μL，混勻后，置于37 ℃環(huán)境下避光15 min，每孔加50 μL終止液輕拍混勻進(jìn)行終止處理，最后以酶標(biāo)儀讀數(shù)處理，單波長450 nm，空白孔校零后，讀取各孔光密度（optical density，OD）值；結(jié)果判斷，以O(shè)D值/臨界OD值為參考，OD值/臨界OD值≥1.00，則HBsAb、HBsAg、HBeAg為陽性，OD值/臨界OD值＜1.00，則HBeAb、HBcAb為陽性。

磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法：先進(jìn)行儀器準(zhǔn)備，將配套的反應(yīng)杯、洗液、吸頭等置于預(yù)定位置，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%酒精棉球?qū)⒃噭┽槻料锤蓛簦z查儀器是否處于良好運(yùn)行狀態(tài)，之后將配套試劑置于儀器試劑倉內(nèi)，儀器可自動(dòng)對(duì)試劑盒上條碼信息進(jìn)行讀?。粯?biāo)本準(zhǔn)備，吸取800 μL標(biāo)本于專用樣品杯，以試劑盒內(nèi)附帶

2瓶定標(biāo)液校正出廠時(shí)反應(yīng)曲線，測定待測樣本；結(jié)果判斷，HBsAg陽性為≥0.05 U/mL，HBsAb陽性為≥

10 mU/mL，HBcAb陽性為≥0.35 U/mL，HBeAg陽性為≥0.1 PEU/mL，HBeAb≥0.15 PEU/mL，Pre-S1陽性為≥1 COI。

1.3 觀察指標(biāo) （1）2種方法檢測HBV陽性檢出率。比較磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測與酶聯(lián)免疫吸附法檢測在觀察組、對(duì)照組中HBV感染陽性檢出率。（2）2種方法檢測血清標(biāo)志物陽性檢出率。比較磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測與酶聯(lián)免疫吸附法檢測在觀察組中HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb、Pre-S1Ag陽性檢出情況。（3）2種方法診斷效能。以HBV-DNA診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，分析磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙型肝炎的靈敏度、特異度，靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%，特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%，準(zhǔn)確度=（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/（真陰性例數(shù)+真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? ?結(jié)果

2.1 2種方法檢測HBV感染陽性檢出率 磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測在觀察組中HBV感染陽性檢出率高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.348，P=0.037）；2種檢測方法在對(duì)照組中陽性率相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.592，P=0.442），見表1。

2.2 2種方法檢測血清標(biāo)志物陽性檢出率 磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測HBsAb陽性率、HBcAb陽性率等均高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

2.3 2種方法檢測診斷效能 磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測靈敏度、準(zhǔn)確度較酶聯(lián)免疫吸附法高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3、表4。

3? ?討論

HBV屬于嗜肝性病毒，進(jìn)入人體后可迅速于肝臟部位大量復(fù)制，并與機(jī)體免疫反應(yīng)相互作用，促使肝臟發(fā)生慢性炎癥反應(yīng)，造成大量肝細(xì)胞損害，引起肝功能障礙[7-8]。HBV持續(xù)復(fù)制還可引起肝臟組織纖維結(jié)締增生，導(dǎo)致大量細(xì)胞外基質(zhì)沉積，最終形成肝纖維化，甚至增加肝癌風(fēng)險(xiǎn)，威脅患者生命。同時(shí)，HBV感染后存在較強(qiáng)傳染性，若未能及時(shí)治療，還可增加傳播風(fēng)險(xiǎn)，加重社會(huì)負(fù)擔(dān)。目前，臨床對(duì)于乙型肝炎多以早確診、早治療為原則，以降低患者體內(nèi)HBV病毒載量，減輕肝臟損傷，并降低傳播風(fēng)險(xiǎn)。

HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb及Pre-S1為乙型肝炎常見血清標(biāo)志物，其表達(dá)與HBV感染及病情活躍程度存在明顯相關(guān)性，故通過檢測上述指標(biāo)變化，有助于HBV感染的確診，并評(píng)估病情嚴(yán)重程度。酶聯(lián)免疫吸附法為當(dāng)前血清標(biāo)志物的常見檢測方法，具有操作簡單、檢測迅速、價(jià)格低廉等特點(diǎn)，通過連接酶與待檢測物引起特異性反應(yīng)，從而檢出陽性標(biāo)本，便于疾病早期治療[9-10]。但酶聯(lián)免疫吸附法試劑受保存方法、制作工藝等方面的影響，穩(wěn)定性相對(duì)較差，加之病原體侵襲機(jī)體到出現(xiàn)免疫反應(yīng)存在一定窗口期，使得酶聯(lián)免疫吸附法存在一定漏診、誤診風(fēng)險(xiǎn)，仍需尋找更為精確的檢測方式，提高HBV感染檢出率。本研究結(jié)果顯示，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測在觀察組中HBV感染陽性檢出率高于酶聯(lián)免疫吸附法，磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測HBsAb陽性率、HBcAb陽性率高于酶聯(lián)免疫吸附法，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測診斷HBV感染靈敏度、準(zhǔn)確度高于酶聯(lián)免疫吸附法。提示磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法在檢測乙型肝炎血清標(biāo)志物中具有較高應(yīng)用價(jià)值，能提高HBV感染診斷靈敏度、準(zhǔn)確度，值得廣泛應(yīng)用。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法是新一代診斷技術(shù)基礎(chǔ)平臺(tái)，在檢測過程中能將待測抗原、堿性磷酸酶標(biāo)記抗體等形成復(fù)合物，并借助熒光素抗體的磁性微粒分離復(fù)合物、未結(jié)合物質(zhì)，清洗沉淀復(fù)合物后再加入酶促化學(xué)發(fā)光底物，在酶的作用下促使底物裂解成激發(fā)態(tài)中間體，之后回到基態(tài)過程內(nèi)產(chǎn)生發(fā)光反應(yīng)，即可通過儀器檢測發(fā)光強(qiáng)度，進(jìn)而獲得檢測結(jié)果[11-12]。相較于酶聯(lián)免疫吸附法，該技術(shù)下免疫磁珠表面質(zhì)量比高，可與更多抗體相結(jié)合參與免疫反應(yīng)，且免疫磁珠表面通過共價(jià)鍵結(jié)合抗體，吸附性更堅(jiān)固。免疫磁珠粒徑小，在溫育中能于反應(yīng)液內(nèi)均勻分散，近似于均相反應(yīng)，故具有反應(yīng)迅速、高均一性等特點(diǎn)，檢測結(jié)果更為準(zhǔn)確。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法試劑均為原裝配套試劑，儀器檢測過程中可自動(dòng)進(jìn)樣，不僅能降低工作強(qiáng)度，還可減少人為因素所致的誤差，進(jìn)一步提高診斷準(zhǔn)確率。

綜上所述，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測血清標(biāo)志物在乙型肝炎診斷中應(yīng)用價(jià)值高，能提高診斷靈敏度、準(zhǔn)確度，利于盡早明確診斷，及時(shí)予以針對(duì)性治療，為乙型肝炎防治工作開展提供依據(jù)。

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