H-FABP在早期心肌梗死中的診斷價(jià)值的臨床觀察

單 霞，余劍波，苑 姍，吳 燕

（1.北京大學(xué)人民醫(yī)院青島醫(yī)院急診內(nèi)科，山東 青島 266111；2.北京大學(xué)人民醫(yī)院急診內(nèi)科，北京 100044；3.青島市第三人民醫(yī)院心內(nèi)科，山東 青島 266000）

H-FABP具有15KD的低分子量，是廣泛存在于心肌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的脂肪酸攜帶蛋白。研究表明，它能夠調(diào)節(jié)心臟細(xì)胞中的線粒體β-氧化系統(tǒng)，約為心肌細(xì)胞胞質(zhì)蛋白的10%，并可以在心臟損傷時(shí)被迅速釋放出來(lái)。H-FABP通常被認(rèn)為是AMI早期診斷，急性心肌損傷和不良臨床事件的一個(gè)有前途的預(yù)測(cè)因子[1]。與其他心臟標(biāo)志物例如cTnI或者CK-MB比較，H-FABP指標(biāo)可以在心臟損傷后一個(gè)小時(shí)后被檢測(cè)出表達(dá)水平，這為用作最早的血漿生物標(biāo)志物提供了很大的潛力。此外，H-FABP被研究發(fā)現(xiàn)具有較高的免疫特異性，其在心肌中的表達(dá)顯著多于在其他組織中[2]。有研究[3]表明，對(duì)于患者的ACS的診斷，H-FABP是比MYO和cTn更可靠的生物標(biāo)志物，使得這一塊的研究不再空白，然而，由于高靈敏度的肌鈣蛋白（high sensitive troponin，hs TnT）檢測(cè)是可行的，因此H-FABP作為心肌梗死的診斷工具是否仍有價(jià)值是值得懷疑的[4]。本研究探究H-FABP水平與常見(jiàn)心肌受損指標(biāo)MYO，CK-MB，cTnI相關(guān)性，及其作為診斷早期AMI中的臨床應(yīng)用價(jià)值，旨在為AMI患者的早期診斷與治療及預(yù)后能夠提供一個(gè)良好參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取由于突然發(fā)作且持續(xù)胸悶、胸痛大于20 min未得到緩解并診斷為心肌梗死的患者合計(jì)70例為心肌梗死組，其中男39例，女31例，年齡42～83歲，平均（58.16±6.95）歲；另外選擇同期體檢者的健康63例納入為健康對(duì)照組，其中男31例，女32例，年齡45～79歲，平均（58.98± 6.40）歲。1）納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合急性心肌梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；年齡＜85歲。2）排除標(biāo)準(zhǔn)：存在免疫系統(tǒng)疾??；伴隨重度心律失?；蛐墓δ懿蝗颊撸徊l(fā)其他惡性腫瘤患者；存在嚴(yán)重感染者以及收集的臨床資料不全面患者。2組的性別、年齡、心率、血壓、飲酒史、吸煙史及基礎(chǔ)疾?。òǜ哐獕?、代謝病、高血脂）等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具有可比性。醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)已對(duì)本研究進(jìn)行審核且本研究已獲得批準(zhǔn)（倫理批號(hào)：QFELL-YJ-2023-171）。所有患者家屬均自愿參與配合本研究所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，并簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本采集 采集患者入院即刻的靜脈血，每次采集分別為凝血管與生化管2管血液，待其凝固后，使用提前預(yù)冷4 ℃的離心機(jī)，以每分鐘3 000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速離心5～10 min，使得血清分離，小心吸取上層血清并保存于-80℃冰箱且嚴(yán)格控溫避免反復(fù)凍融，待檢。

1.2.2 H-FABP、MYO、CK-MB、cTnI表達(dá)水平檢測(cè) 1）對(duì)于血清H-FABP，采用南京嵐煜生物科技有限公司的LS-2100型干式熒光免疫分析儀，檢測(cè)方法為免疫熒光雙抗體夾心法定量檢測(cè) H-FABP 的含量。以 2株高特異性、高敏感性的單克隆抗體，其中H-FABP鼠單抗1為捕獲抗體，包被于硝酸纖維膜上測(cè)試區(qū)，H-FABP鼠單抗2標(biāo)記成熒光微球，固定于結(jié)合墊。樣本中的抗原與結(jié)合墊中的H-FABP鼠單抗2標(biāo)記的熒光微球結(jié)合，復(fù)合物隨后被固定在測(cè)試區(qū)上的H-FABP鼠單抗1捕獲，形成熒光微球三明治結(jié)構(gòu)；結(jié)合墊中雞IgY標(biāo)記的熒光顆粒復(fù)合物與固定在硝酸纖維素膜質(zhì)控區(qū)上的羊抗雞IgY結(jié)合，形成質(zhì)控區(qū)。通過(guò)配套儀器對(duì)該復(fù)合物進(jìn)行測(cè)量和分析，可定量檢測(cè)人血中H-FABP的含量；對(duì)于血清MYO水平，使用山東濟(jì)南童鑫生物科技有限公司的全自動(dòng)生化分析儀，采用免疫散射比濁法的原理進(jìn)行測(cè)定；對(duì)于血清CK-MB水平，使用南京貝登醫(yī)療股份有限公司的半自動(dòng)生化儀，采用肌酸顯色法的原理進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)于血清cTnl檢測(cè)，則采用微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法檢測(cè)原理檢測(cè)，其線性范圍是0.01～100 ng·mL-1，臨界值是0.04 ng·mL-1。以上試劑盒均購(gòu)于上海斐凡信息技術(shù)有限公司，所有操作均按照各個(gè)試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格在對(duì)應(yīng)溫度要求下執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用美國(guó)SPSS公司的IBM SPSS.19軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)結(jié)果處理，而統(tǒng)計(jì)圖繪制則通過(guò)美國(guó)GraphPad Software公司的GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行。所有符合正態(tài)分布存在正態(tài)性的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，2組間比較采用t檢驗(yàn)。當(dāng)數(shù)據(jù)單位以例、率（%）表示時(shí)，數(shù)據(jù)采用χ2進(jìn)行檢驗(yàn)。采用皮爾遜相關(guān)分析（Pearson correlation analysis）心肌梗死患者H-FABP的表達(dá)與MYO、CK-MB、cTnI表達(dá)的相關(guān)性。采用工作特征曲線（ROC）工具[6]解析所有納入患者的血清中的H-FABP水平對(duì)AMI患者早期診斷的預(yù)測(cè)價(jià)值，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組血清MYO、CK-MB、cTnI水平比較

見(jiàn)表1。

表1 2組血清MYO、CK-MB、cTnI水平比較（±s）ng·mL-1

表1 2組血清MYO、CK-MB、cTnI水平比較（±s）ng·mL-1

注：與健康對(duì)照組比較，# P＜0.05

組別例數(shù)MYO水平CK-MB水平cTnI水平心肌梗死組7068.46±6.84#14.93±4.64#6.27±1.55#健康對(duì)照組6324.19±7.31 5.38±1.871.42±0.97

2.2 2組血清H-FABP表達(dá)水平比較

見(jiàn)表2。

表2 2組血清H-FABP表達(dá)水平比較（±s ） ng·mL-1

表2 2組血清H-FABP表達(dá)水平比較（±s ） ng·mL-1

注：與健康對(duì)照組比較，### P＜0.001

組別例數(shù)H-FABP水平心肌梗死組70 54.13±5.61###健康對(duì)照組63 2.23±0.63

表3 心肌梗死組血清H-FABP表達(dá)水平與MYO、CK-MB、cTnI的相關(guān)性

2.3 心肌梗死組血清H-FABP表達(dá)水平與MYO、CK-MB、cTnI的相關(guān)性

通過(guò)Shapiro-Wilk法進(jìn)行各標(biāo)記物表達(dá)水平的正態(tài)檢驗(yàn)后得到所有標(biāo)記物表達(dá)均符合正態(tài)性，通過(guò)Pearson分析來(lái)統(tǒng)計(jì)血液中H-FABP表達(dá)水平與MYO、CK-MB、cTnI的相關(guān)性。皮爾遜的分析的數(shù)據(jù)結(jié)果如表4顯示，AMI患者血清H-FABP表達(dá)水平與MYO、CK-MB、cTnI水平之間顯現(xiàn)出正相關(guān)性（P＜0.05）。

2.4 血清H-FABP在早期心肌梗死中的診斷價(jià)值

臨床診斷結(jié)果繪制ROC曲線結(jié)果如圖1所示，分析得出血清H-FABP、cTnI、MYO、CK-MB診斷的曲線下面積（Area Under Curve，AUC）分別為0.904（95%CI：0.844-0.964）、0.839（95%CI：0.763-0.916）、0.842（95%CI：0.766-0.919）、0.728（95%CI：0.631-0.826），其中H-FABP相較下利用它的水平在早期AMI診斷中，其靈敏度、特異度均高于其他任意單個(gè)生物標(biāo)志物。

圖1 H-FABP、MYO、CK-MB以及cTnI在早期心肌梗死中的診斷價(jià)值ROC曲線

3 討論

根據(jù)醫(yī)學(xué)技術(shù)水平以及醫(yī)療裝置配備的不斷快速變遷發(fā)展，不同的血液生物標(biāo)記被認(rèn)為是方便經(jīng)濟(jì)客觀的結(jié)果預(yù)測(cè)工具[7]。心肌肌鈣蛋白的主要亞型之一的cTnI的半壽期大約為2 h，并且損傷發(fā)生時(shí)，cTnI在血液中的水平能夠保持較長(zhǎng)時(shí)間的處于升高狀態(tài)，因此以其具有診斷窗口期長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)作為AMI的診斷標(biāo)志物之一[8]。在心肌組織和亞細(xì)胞中有大量的CK-MB，近似于占血清中肌酸磷酸激酶（creatine kinase，CK）總量的5%以下，通常在cTnI升高后升高，特異度相對(duì)較高[9]。僅存在于心肌/橫紋肌/骨骼肌內(nèi)的MYO正常人含量很少，其具有儲(chǔ)備和運(yùn)轉(zhuǎn)肌細(xì)胞的作用，而當(dāng)心肌存在障礙時(shí)，細(xì)胞中的MYO會(huì)彌漫出來(lái)進(jìn)入血液循環(huán)，因此當(dāng)患者發(fā)生AMI時(shí)，血清中便會(huì)檢測(cè)出MYO指標(biāo)變化[10]?；谝陨媳尘?，本研究檢測(cè)了患者的這幾大特征性重要指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)以上幾種主要標(biāo)志物的表達(dá)在心肌梗死患者血液中顯著上升（P＜0.05），但近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，這些指標(biāo)在其他疾病患者中也會(huì)增高。因此，尋找更加具體的標(biāo)志物來(lái)聯(lián)合評(píng)估AMI病人的預(yù)后具有重要意義。

目前，H-FABP的表達(dá)是檢測(cè)早期和/或亞臨床心臟缺血以及炎癥水平的一個(gè)可能應(yīng)用。血清H-FABP水平與ST段抬高AMI患者的梗死面積密切相關(guān)，由于這個(gè)原因它已潛在被視為心肌損傷加重的早期診斷生物標(biāo)志物[11]。H-FABP的測(cè)量可以使血運(yùn)重建手術(shù)及時(shí)進(jìn)行，由于H-FABP和cTnI顯示不同的釋放動(dòng)力學(xué)[12]，使得急診科對(duì)H-FABP的應(yīng)用補(bǔ)充了cTnI在排除早期胸痛患者的ACS中的使用[13]。H-FABP的表達(dá)由微小RNA miR-1調(diào)節(jié)[14]。在健康個(gè)體中，H-FABP的血清水平在個(gè)位數(shù)（ng·mL-1）的范圍內(nèi)[15]。在發(fā)生心肌損傷時(shí)，肌細(xì)胞里小分子量的H-FABP能夠精準(zhǔn)定位游離的細(xì)胞質(zhì)，并且利用最快的速度將自己釋放到體循環(huán)中，引起短暫的肌膜通透性增加，并發(fā)揮其關(guān)鍵作用，具備顯著的特異性。H-FABP在腎臟進(jìn)行消化代謝以至最終徹底清除，這解釋了腎功能正常的患者的診斷窗較短[16]，正如KLEINE等[17]報(bào)道，在AMI患者出現(xiàn)癥狀后20 h內(nèi)，H-FABP血漿水平恢復(fù)到基線水平，因此從長(zhǎng)遠(yuǎn)來(lái)看，其表達(dá)甚至可以對(duì)患有其他疾病（如心力衰竭和急性肺栓塞）的患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分層。本研究檢測(cè)結(jié)果顯示，H-FABP水平與MYO，CK-MB，cTnI呈現(xiàn)正相關(guān)性（P＜0.05），能夠作為一個(gè)可行的標(biāo)志物為臨床早期診斷與治療提供切實(shí)有效的支持依據(jù)。